RNA M6 A Reader YTHDF2 Mengontrol Antitumor Sel NK dan Imunitas Antiviral Bagian 4

Diketahui bahwa YTHDF2 bertindak sebagai pembaca m6A, yang mengenali dan mengikat RNA yang mengandung m6A dan mengatur degradasi transkrip m6A.
Kami kemudian melakukan imunopresipitasi RNA (RIP) –seq menggunakan antibodi YTHDF2 untuk memetakan transkrip target yang diikat oleh YTHDF2 dalam sel NK. Situs pengikatan YTHDF2-diperkaya di wilayah urutan pengkode protein dan 39UTR (Gbr. S5, E, dan F).

Hubungan antara pembaca dan ingatan sangat erat. Membaca adalah salah satu cara terbaik untuk meningkatkan kemampuan ingatan kita.

Saat kita membaca, otak kita mengalami proses yang kompleks. Saat kita memindai kata-kata dan mengubahnya menjadi makna, otak kita terus-menerus menciptakan koneksi saraf baru. Koneksi saraf ini membentuk sistem memori kita dan membantu kita menyimpan informasi dalam memori jangka panjang.

Selain itu, membaca merangsang imajinasi dan kreativitas kita, yang juga membantu meningkatkan daya ingat kita. Saat kita menyusun gambar dan pemandangan dalam pikiran kita, otak kita terlibat secara aktif, sehingga lebih banyak koneksi saraf terbentuk, yang memperkuat kemampuan ingatan kita.

Terakhir, membaca juga meningkatkan fokus dan konsentrasi kita. Saat kita fokus membaca, otak kita terus-menerus berlatih, sehingga membuat ingatan kita lebih kuat.

Secara keseluruhan, membaca dapat memberikan dampak yang sangat positif pada ingatan kita. Dengan menumbuhkan kebiasaan membaca dan menstimulasi otak kita melalui membaca, kita dapat meningkatkan kemampuan daya ingat dan menikmati hidup yang lebih kaya dan menarik. Terlihat bahwa kita perlu meningkatkan daya ingat, dan Cistanche deserticola dapat meningkatkan daya ingat secara signifikan karena Cistanche deserticola merupakan bahan obat tradisional Tiongkok yang memiliki banyak khasiat unik, salah satunya meningkatkan daya ingat. Khasiat Cistanche deserticola berasal dari berbagai bahan aktif yang dikandungnya, antara lain asam tanat, polisakarida, glikosida flavonoid, dll. Bahan-bahan tersebut dapat meningkatkan kesehatan otak melalui berbagai jalur.

Klik tahu 10 cara meningkatkan daya ingat

Kami mengidentifikasi 3.951 puncak pengikatan YTHDF2 potensial dari 1.290 transkrip, 426 (33%) di antaranya terdeteksi dengan pengayaan m6A yang signifikan. Analisis pengayaan GO menunjukkan bahwa 1.290 transkrip target YTHDF2 diperkaya dalam terjemahan protein, pengikatan RNA, dan penyambungan RNA (Gambar S5 G).

Kami kemudian mengidentifikasi transkrip target potensial dari transkrip yang tumpang tindih melalui RNA-seq, m6A-seq, dan RIP-seq dan menemukan bahwa satu set 29 transkrip yang diikat oleh YTHDF2 dan ditandai dengan m6A (dalam sel Ythdf2WT dan Ythdf2ΔNK NK) diekspresikan secara berbeda antara sel NK dari tikus Ythdf2WT dan Ythdf2ΔNK (Gbr. 7 G). Di antara mereka, 12 transkrip diregulasi dan 17 transkrip diturunkan regulasi dalam sel NK dari tikus Ythdf2ΔNK dibandingkan dengan sel NK Ythdf2WT (Gbr. 7 G).

Berdasarkan karakterisasi fungsional YTHDF2 dan analisis GO dari data RNA-seq, defisiensi Ythdf2 mempengaruhi pembelahan dan proliferasi sel NK, mungkin dengan memfasilitasi degradasi mRNA pada pos pemeriksaan siklus sel atau regulator negatif selama pembelahan sel.

Di antara 12 transkrip yang diregulasi, tiga telah dilaporkan mengatur pembelahan atau proliferasi sel secara negatif, termasuk Mdm2 (murine double Minute 2 [MDM2]; Frum et al., 2009; Giono dan Manfredi, 2007; Giono et al., 2017), Tardbp ( Protein pengikat DNA TAR 43 [TDP43]; Ayala et al., 2008; Sanna et al., 2020), dan Crebzf (faktor transkripsi CREB/ATFBZIP; Hu et al., 2020; López-Mateo et al.,2012) , menunjukkan bahwa mereka adalah target potensial sel YTHDF2in NK.

Sebagai catatan, puncak m6A cocok dengan situs pengikatan YTHDF2-di 39UTR Mdm2 dan Tardbp dan dengan gen Crebzf 59UTR, seperti yang ditunjukkan oleh Integrative Genomics Viewer (Gbr. 7 H).

RIP menggunakan antibodi m6A atau YTHDF2 setelah qPCR mengkonfirmasi bahwa Mdm2, Tardbp, dan Crebzf memang m6Ametilasi dan diperkaya terutama oleh YTHDF2 dalam sel NK (Gambar 7, I dan J), mendukung data m6A-seq dan RIP-seq, yang menunjukkan bahwa ini tiga gen merupakan target potensial sel YTHDF2 dalam NK.

Untuk menyelidiki apakah YTHDF2 mengatur ekspresi Mdm2, Tardbp, dan Crebzf melalui modulasi stabilitas mRNA, kami mengukur degradasi mRNA dari tiga target dengan menghambat transkripsi dengan aktinomisin D dalam sel NK dari tikus Ythdf2ΔNK dan Ythdf2WT.

Hasilnya menunjukkan bahwa Mdm2 dan Tardbp, tetapi tidak Crebzf, memiliki waktu paruh lebih lama dalam sel NK dari tikus Ythdf2ΔNK dibandingkan dengan tikus dari tikus Ythdf2WT (Gambar 7, K – M), menunjukkan bahwa Mdm2 dan Tardb diatur secara langsung oleh YTHDF2 dalam sel NK.

Dengan menggunakan immunoblotting, kami memastikan bahwa kadar protein MDM2 dan TDP43 diregulasi dalam sel NK dari tikus Ythdf2ΔNK (Gambar S5 H). Untuk mengkonfirmasi lebih lanjut bahwa kedua gen ini adalah target fungsional YTHDF2, kami menggunakan Mdm2- atau Tardbp -siRNA spesifik untuk merobohkan ekspresi dua gen in vitro (Gambar S5, I, dan J).

Kami kemudian membandingkan proliferasi sel dan kelangsungan hidup sel Ythdf2ΔNKNK dengan versus tanpa knockdown Mdm2 atau Tardbp dengan adanya IL-15. Hasil penelitian menunjukkan bahwa knockdown Tardbp setidaknya dapat menyelamatkan sebagian kerusakan proliferasi sel dan kelangsungan hidup sel dalam sel NK dari tikus Ythdf2ΔNK (Gambar 7,N, dan O).

Namun, knockdown Mdm2 tidak memiliki efek penyelamatan (Gbr. S5, K, dan L). Hasil ini menunjukkan bahwa YTHDF2 mengatur proliferasi dan pembelahan sel NK setidaknya sebagian dengan menghambat stabilitas mRNA Tardbp.

Diskusi

Dalam penelitian ini, kami melaporkan peran beragam metilasi m6A yang dimediasi YTHDF2-dalam imunitas sel NK. Kami menemukan bahwa YTHDF2, salah satu pembaca modifikasi m6A yang paling penting, sangat penting untuk mempertahankan homeostasis sel NK, maturasi, kelangsungan hidup yang dimediasi IL-15, serta aktivitas antitumor dan antivirus.

Kami juga mengidentifikasi putaran umpan balik positif baru antara STAT5 dan YTHDF2, hilir IL-15, yang berkontribusi terhadap fungsi efektor dan kelangsungan hidup sel NK tikus. Penelitian kami menjelaskan peran biologis metilasi YTHDF2 atau m6A secara umum dalam imunitas bawaan sel NK. Ini mengisi kesenjangan pengetahuan tentang bagaimana YTHDF2 mengatur respon imun bawaan terhadap transformasi ganas dan infeksi virus.

Temuan kami memberikan arah baru untuk memanfaatkan imunitas antitumor sel NK dan sekaligus meningkatkan pemahaman kita tentang modifikasi m6A dalam membentuk imunitas bawaan. Protein pembaca m6A YTHDF2 mengatur stabilitas mRNA target (Du et al., 2016; Wang et al., 2014). Sejumlah penelitian telah mendukung dampak luas YTHDF2 dalam berbagai proses biologis.

YTHDF2 menekan ekspansi sel induk hematopoietik normal dan pembaruan diri tetapi juga diperlukan untuk pemeliharaan sel induk hematopoietik jangka panjang (Li et al., 2018;Mapperley et al., 2021 Paris et al., 2019; Wang et al., 2018a). Baru-baru ini, gen ini terlibat dalam menahan peradangan selama infeksi bakteri (Wu et al., 2020a). Peran dan mekanisme YTHDF2 dalam perkembangan tumor telah dipelajari dengan baik.

YTHDF2 mendorong pengembangan sel induk leukemia dan inisiasi leukemia myeloid akut (Paris et al.,2019). Selain leukemia, YTHDF2 telah terbukti mendorong perkembangan tumor padat, termasuk kanker prostat (Liet al., 2020), glioblastoma (Dixit et al., 2021), dan karsinoma hepatoseluler (Chen et al., 2018; Hou et al., 2019; Zhang et al.,2020), dengan menargetkan beragam transkrip yang dimodifikasi m6A, seperti penekan tumor LHPP dan NKX3-1 (Li et al., 2020), IGFBP3 (Dixit et al., 2021), OCT4 ( Zhang et al., 2020), dan SOCS2 (Chenet al., 2018).

Meskipun YTHDF2 memainkan peran pendukung dalam perkembangan tumor, penelitian kami mengungkapkan peran menguntungkan YTHDF2 dalam respons imun terhadap sel tumor, khususnya pada sel NK, yang merupakan komponen kunci kekebalan bawaan terhadap infeksi virus dan transformasi ganas.

Oleh karena itu, pengembangan penghambat YTHDF2 di masa depan untuk menargetkan sel tumor untuk terapi kanker harus dilakukan dengan hati-hati karena penghambatan YTHDF2 dapat mengganggu respons antitumor inang oleh sel NK. Di sisi lain, memanfaatkan aktivitas antitumor YTHDF2 dalam sel NK atau sel imun lainnya harus mempertimbangkan potensi efeknya yang bekerja langsung pada sel tumor. Penargetan diferensial YTHDF2 pada sel tumor dan sel imun harus memaksimalkan aktivitas antitumor.

For more information:1950477648nn@gmail.com