Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Abstrak:Kekhawatiran yang berkembang untuk kesehatan secara keseluruhan mendorong pasar global bahan-bahan alami tidak hanya di industri makanan tetapi juga di bidang kosmetik. Dalam penelitian ini, penyaringan pada aplikasi kosmetik potensial dari ekstrak air dari tiga Islandiarumput lauts dihasilkan oleh medan listrik berdenyut (PEF) dilakukan. Ekstrak yang dihasilkan oleh PEF dari Ulva lactuca, Alaria esculenta dan Palmaria palmata dibandingkan dengan ekstraksi air panas tradisional dalam hal kandungan polifenol, flavonoid dan karbohidrat. Lebih-lebih lagi,antioksidansifat dan aktivitas penghambatan enzim dievaluasi dengan menggunakan uji in vitro. PEF menunjukkan hasil yang mirip dengan metode tradisional, menunjukkan beberapa keuntungan seperti sifat non-termal dan waktu ekstraksi yang lebih singkat. Di antara tiga spesies Islandia, Alaria esculenta menunjukkan kandungan fenolik tertinggi (nilai rata-rata 8869,7 g GAE/g dw) dan flavonoid (nilai rata-rata 8869,7 g GAE/g dw) nilai 12.098,7 g QE/g dw) senyawa, juga menunjukkan yang tertinggiantioksidankapasitas. Selain itu, ekstrak Alaria esculenta menunjukkan aktivitas anti-enzim yang sangat baik (76.9, 72.8, 93.0 dan 100 persen untuk kolagenase, elastase,tirosinaseandhyaluronidase) untuk penggunaannya dalam produk pemutih kulit dan anti-penuaan. Dengan demikian, studi pendahuluan kami menunjukkan bahwa ekstrak berbasis Islandia Alaria esculenta yang diproduksi oleh PEF dapat digunakan sebagai bahan potensial untuk formulasi kosmetik dan kosmetik alami.

Kata kunci:makroalga; Ulva laktuka; Alaria esculenta; Palmaria palmata; Ekstraksi berbantuan PEF; senyawa bioaktif; ekstraksi hijau; bahan alami; kosmetika

cistanche adalah bahan pemutih alami

1. Perkenalan

Dalam beberapa tahun terakhir, permintaan senyawa bioaktif baru dengan potensi manfaat kesehatan telah mengalami peningkatan yang substansial. Banyak kelompok penelitian telah menekankan penelitian pada organisme laut, seperti makroalga, untuk menemukan sumber baru dan berkelanjutan dari senyawa alami untuk aplikasi dalam industri pangan pertanian, farmakologi, makanan dan, baru-baru ini, di bidang kosmetik [1,2] . Makroalga adalah kelompok organisme fotosintetik yang besar dan heterogen yang dicirikan oleh keanekaragaman hayati yang besar dan komposisi biokimia yang kompleks. Menurut struktur kimia dan kandungan pigmennya, makroalga dapat dibagi menjadi tiga garis keturunan termasuk ganggang coklat (Phaeophyceae), ganggang merah (Rhodophyta) dan ganggang hijau (Viridiplantae). Senyawa alga disimpan di dalam sitoplasma sel atau terikat pada membran sel; dengan demikian, gangguan sel sangat penting untuk valorisasi biomassa alga. Selain itu, komposisi dinding sel sangat bervariasi antara spesies alga mulai dari membran kecil hingga struktur kompleks berlapis-lapis, membuat pemulihan produk alga menjadi tantangan [3]. Secara umum, rumput laut merupakan sumber yang sangat baik dari polisakarida, protein, lipid, dan berbagai macam metabolit sekunder seperti senyawa fenolik, terpenoid, karotenoid, pigmen dan turunan nitrogen [4-6]. Meskipun metabolit primer memiliki kepentingan yang sangat penting, data terbaru menunjukkan bahwa kandungan metabolit sekunder menentukan aktivitas biologisrumput lautekstrak [7].

Kekhawatiran yang berkembang untuk kesehatan dan kesejahteraan secara keseluruhan, serta kesadaran akan bahan kimia berbahaya dalam produk sehari-hari, mendorong pasar global bahan alami dan organik [8]. Selama beberapa tahun terakhir, kesadaran konsumen terhadap preferensi bahan alami dan produk ramah lingkungan telah meluas dari industri makanan ke industri kosmetik dan perawatan pribadi [9]. Lebih jauh lagi, dalam konteks pemanasan global dan isu-isu ekologi saat ini, telah terjadi peningkatan kesadaran publik akan isu-isu lingkungan. Mengingat keprihatinan saat ini, konsumen telah mengalihkan minat mereka terhadap produk-produk hijau, sehat dan bebas bahan kimia. Akibatnya, industri kosmetik saat ini mengganti bahan kimia beracun dan bahan berbahaya dengan senyawa baru dan alami yang bernilai tinggi untuk menghasilkan produk kecantikan yang "bersih secara kimia" [10].

Kosmetik secara tradisional didefinisikan sebagai produk yang diterapkan pada tubuh manusia untuk membersihkan, mempercantik, atau meningkatkan daya tarik tanpa mempengaruhi struktur atau fungsi tubuh. Namun, tren baru dan permintaan konsumen baru-baru ini telah mendorong pengembangan produk baru yang memberikan banyak manfaat dengan sedikit usaha. Istilah cosmeceutical sekarang sering digunakan untuk menggambarkan produk kosmetik dengan bahan bioaktif yang diklaim memiliki manfaat medis atau seperti obat [11]. Cosmeceuticals biasanya mengandung bahan fungsional seperti vitamin, fitokimia, enzim,antioksidandan/atau minyak atsiri [12]. Karena berbagai senyawa bioaktif ini telah ditemukan di makroalga, penyelidikan barurumput lauts dan ekstrak alga laut telah terbukti menjadi bidang studi kosmetik dan kosmetik yang menjanjikan [13,14].

Sejumlah metabolit sekunder yang berasal darirumput lauts dikenal karena efek menguntungkan kesehatannya yang berharga pada kulit, seperti pelindung foto, pelembab,antioksidan, anti-inflamasi dan sifat regeneratif [15]. Berdasarkan efek menguntungkan tersebut, alga dimasukkan ke dalam produk kosmetika seperti tabir surya, produk anti penuaan, serta untuk pencegahan hiperpigmentasi, sedangkan polisakarida digunakan untuk menjaga kelembapan kulit dan mencegah kekeringan [16]. Selama penuaan, protein matriks ekstraseluler rentan terhadap aktivitas berlebihan dari enzim proteolitik seperti kolagenase dan elastase, yang mengakibatkan perubahan yang terlihat pada kulit, seperti kerutan atau hilangnya elastisitas kulit. Pendekatan yang menjanjikan untuk mencegah penuaan kulit ekstrinsik adalah penghambatan aktivitas kolagenase dan elastase oleh senyawa alami. Ekstrak tumbuhan telah banyak diteliti dan ditemukan memiliki aktivitas anti-kolagenase dan anti-elastase [17]. Namun, masih sedikit informasi tentang aktivitas enzimatik penghambatan ekstrak rumput laut.

Metode ekstraksi yang paling sering diterapkan untuk isolasi bioaktif dari rumput laut didasarkan pada teknik konvensional. Namun demikian, pemanfaatan metode tradisional memiliki beberapa kelemahan, seperti penggunaan volume pelarut organik yang tinggi, waktu ekstraksi yang lebih lama, suhu tinggi, masalah selektivitas, kebutuhan energi yang tinggi, dan koekstraksi senyawa yang tidak ditargetkan atau mengganggu [18]. Oleh karena itu, teknik ekstraksi baru berdasarkan prinsip kimia hijau memiliki minat potensial [19].

Medan listrik berdenyut (PEF) adalah teknologi pengolahan makanan yang muncul, nonthermal dan hemat energi [20]. PEF melibatkan penerapan pulsa medan listrik biasanya pada tegangan tinggi (kisaran kV) dan durasi pendek (mikro atau nano-detik) untuk produk ditempatkan antara dua elektroda [21]. Penerapan pulsa listrik menghasilkan pembentukan pori-pori reversibel atau ireversibel dalam membran sel, yang didefinisikan sebagai elektroporasi atau elektro-permeabilisasi, yang akibatnya memfasilitasi difusi cepat pelarut dan peningkatan perpindahan massa senyawa intraseluler [22]. Aplikasi terbaru telah berfokus pada penggunaan energi listrik berdenyut sebagai teknik ekstraksi (ekstraksi berbantuan PEF) dari bio-, makanan, dan produk pertanian [23]. Dengan perlakuan PEF dapat diperoleh ekstrak dengan kemurnian yang lebih tinggi, meningkatkan laju ekstraksi senyawa bioaktif seperti polifenol, karotenoid, atau antosianin, serta menghilangkan penggunaan pelarut organik dan mempersingkat waktu ekstraksi [24,25]. Perawatan PEF telah berhasil diterapkan untuk ekstraksi senyawa berharga dari sumber laut yang berbeda, seperti protein [26-28], karbohidrat [29,30], lipid [31,32] dan pigmen seperti karotenoid, klorofil atau phycocyanin [22,33] ,34] dari mikroalga dan rumput laut.

Dengan demikian, tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk menilai aplikasi kosmetik potensial ekstrak PEF dari tiga spesies makroalga yang tumbuh di Islandia: U. lactuca (makroalga hijau), A. esculenta (makroalga coklat) dan P. palmata (makroalga merah) . Dalam upaya untuk mengembangkan bahan organik dan alami untuk formulasi hijau, ekstraksi berbantuan PEF diusulkan sebagai alternatif ramah lingkungan untuk ekstraksi pelarut organik tradisional. Setelah proses ekstraksi, airrumput lautekstrak dikarakterisasi berdasarkan kandungan polifenol, flavonoid, dan karbohidrat. Lebih-lebih lagi,antioksidansifat dan aktivitas penghambatan enzim dievaluasi dengan menggunakan uji aktivitas in vitro. Hasil yang dilaporkan di sini akan memberikan dasar untuk meningkatkan pemahaman makroalga coklat, merah, dan hijau untuk menghasilkan bahan aktif untuk formulasi inovatif dalam produk kosmetik yang mengandung senyawa aktif biologis yang diisolasi dari sumber alami dan berkelanjutan.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Ekstraksi Berbantuan PEF untuk Pengolahan Biomassa Rumput Laut Islandia

Hasil penelitian menunjukkan bahwa konduktivitas listrik tertinggi pada suspensi yang dibuat dari A. esculenta diikuti oleh P. palmata dan U. lactuca (p < {{0}}.05)="" (tabel="" 1).="" namun,="" pengaruh="" jenis="" pengobatan="" tidak="" diidentifikasi="" secara="" signifikan="" (p=""> 0,05). Pengukuran konduktivitas listrik telah berhasil digunakan oleh penulis lain untuk mengevaluasi kemanjuran pengobatan PEF dalam jaringan biologis untuk pelepasan zat ion intraseluler, sebagai akibat dari peningkatan permeabilisasi membran sel [35-37].

Dalam penelitian kami, hasilnya tidak menunjukkan pelepasan yang lebih kuat dari zat-zat ini oleh PEF, karena perubahan konduktivitas yang disebabkan oleh perlakuan ekstraksi cenderung tertinggi dalam suspensi HW. Studi sebelumnya telah menyimpulkan bahwa konduktivitas awal media ekstraseluler mempengaruhi efikasi elektroporasi tetapi ada kekurangan kesepakatan apakah ada hubungan positif atau negatif antara kedua faktor [38]. Variasi konduktivitas dan karakteristik bahan dapat membuat perbandingan menjadi rumit. Dalam penelitian kami, ada perbedaan besar antara konduktivitas suspensi A. esculenta dan dua spesies lainnya, yang tidak tercermin dalam tingkat perubahan konduktivitas selama perlakuan ekstraksi. Telah dinyatakan bahwa kadar abu rumput laut coklat dapat mencapai lebih dari 50 persen dari berat keringnya [39], sebagian besar terdiri dari ion, yang sebagian dapat menjelaskan konduktivitas tinggi dalam suspensi A. esculenta dibandingkan dengan dua spesies lainnya.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa pH dalam suspensi U. lactuca lebih rendah daripada dua spesies lainnya, tetapi tidak ada efek yang jelas dari jenis ekstraksi yang dihasilkan. Suhu dinaikkan dari 22 ± 1◦C sebelum perlakuan, menjadi 95 C dengan HW (untuk semua spesies), menjadi 36.0 ± 1.0 C, 46,3 ± 0. 6 C dan 51.0 ± 1◦C oleh PEF, dalam A. esculenta, P. palmata dan U. lactucasuspensions. Kecenderungan yang sama terlihat pada kelompok yang diberi PEF, yang kemudian dipanaskan lebih lanjut dengan HW. Kenaikan suhu disebabkan oleh konversi energi listrik menjadi energi panas (pemanasan ohmik), dalam suspensi selama perlakuan PEF. Tingkat kenaikan suhu diketahui sebanding dengan arus yang diberikan tetapi berbanding terbalik dengan konduktivitas. Hal ini dapat menjelaskan mengapa P. palmata dan U. lactuca mencapai suhu yang lebih tinggi selama perawatan PEF meskipun mereka memiliki konduktivitas lebih rendah dari A. esculenta.

2.2. Spektrum Penyerapan UV-VIS dari Ekstrak Rumput Laut Islandia

Rumput laut yang diteliti berbeda dalam profil spektral (Gambar 1), menunjukkan bahwa komposisi dan potensi serapan UV bervariasi antar spesies. Namun, jenis teknik ekstraksi tidak menunjukkan efek yang luar biasa dalam spektrum penyerapan UV; ekstrak rumput laut menunjukkan profil penyerapan yang sama terlepas dari metode ekstraksi.

Spektrum serapan UV alga hijau U. lactuca menunjukkan puncak yang menonjol pada kisaran UV-B (280-320 nm) (Gambar 1a), sedangkan ekstrak dari alga coklat A. esculenta tidak menunjukkan pembentukan zona serapan yang jelas (Gambar 1c ). Namun, hasil menunjukkan absorbansi yang lebih kuat pada 220 nm dalam ekstrak A. esculenta dibandingkan dengan U. lactuca dan P. palmata yang diduga hasil dari kandungan senyawa fenolik yang tinggi dalam A. esculenta (Tabel 2). Penyerapan maksimum dalam kisaran ini telah dikaitkan dengan hubungan antara senyawa fenolik dan alginat. Hubungan ini dianggap mempertahankan kemampuan penyerapan UV senyawa fenolik dari waktu ke waktu [40].

Temuan yang lebih menarik adalah bahwa hasil yang diperoleh untuk ekstrak alga merah, P. palmata menyerap sebagian radiasi UV-A (320-400 nm). Diketahui bahwa alga merah mengakumulasi senyawa fotoprotektif dengan kemampuan penyerapan radiasi ultraviolet seperti asam amino mirip mikosporin (MAA), yang menyerap di wilayah UV spesifik ini [41]. P. palmata unggul dalam spektrum serapan UV dengan puncak yang menonjol antara 320 dan 340 nm sesuai dengan adanya MAA yang menyerap dalam kisaran ini [42], seperti palythinol (puncak serapan pada 332 nm), asterina-330 (puncak serapan pada 332 nm), 330 nm), porfira-334 (penyerapan puncak pada 334 nm) dan lain-lain [43]. Karena kondisi ekstraksi, seperti jenis pelarut, diketahui mempengaruhi efisiensi ekstraksi, hasil penelitian ini dibandingkan dengan penelitian sebelumnya pada ekstraksi MAAs dengan air dari P. palmata. Dalam studi ini, puncak penyerapan maksimum terdeteksi pada 325-330 nm [44], seperti dalam penelitian ini. Oleh karena itu, dapat diasumsikan bahwa puncak yang diamati antara 320 dan 340 nm mungkin disebabkan oleh adanya MAA.

Perbedaan spektrum serapan antara 350 dan 700 nm telah dijelaskan oleh adanya pigmen aksesori yang berbeda di masing-masing fotosistem makroalga hijau, coklat, dan merah, klorofil-b (450-500 nm), fucoxanthin (400-500 nm) dan fikoeritrin. (600-650 nm) masing-masing [45]. Konsentrasi senyawa yang larut dalam air dalam ekstrak memiliki efek yang lebih kuat. Akibatnya, pola yang mencerminkan perbedaan pigmen antara spesies alga tidak terlihat dalam penelitian ini.

2.3. Kandungan Total Fenolik, Flavonoid dan Karbohidrat Ekstrak Rumput Laut Islandia

Kandungan total fenol dalamrumput lauts berkisar antara 1592 hingga 9368 g GAE/g dw (Tabel 2). Alga coklat A. esculenta menunjukkan jumlah tertinggi (p < 0.05)="" senyawa="" fenolik="" (nilai="" rata-rata="" 8869,7="" g="" gae/g="" dw),="" diikuti="" oleh="" p.="" palmata="" (nilai="" rata-rata="" 1806,2="" g="" gae/g="" dw)="" dan="" u.="" lactuca="" (nilai="" rata-rata="" 1750,7="" g="" gae/g="" dw)="" (tidak="" ada="" perbedaan="" yang="" signifikan="" antara="" ekstrak="" p.="" palmata="" dan="" u.="" lactuca)).="" untuk="" masing-masing="" spesies="" rumput="" laut,="" kandungan="" polifenol="" tidak="" berbeda="" antar="" metode="" ekstraksi="" kecuali="" u.="" lactuca,="" yang="" hasilnya="" menunjukkan="" bahwa="" teknik="" hw="" merupakan="" teknik="" yang="" paling="" efisien="" (p="">< 0,05).="" namun,="" keuntungan="" pef="" termasuk="" sifatnya="" yang="" non-termal,="" waktu="" ekstraksi="" yang="" lebih="" pendek="" (10="" menit="" vs.45="" menit)="" dan="" proses="" hijau="" harus="">

Di antara ketiga kelompok alga, makroalga coklat mengandung jumlah polifenol yang lebih tinggi daripada makroalga merah dan hijau. Hasilnya sesuai dengan studi awal [46,47] yang melaporkan bahwa spesies alga coklat (misalnya, A. esculenta dan Saccharina latissma) memiliki kandungan fenolik yang lebih tinggi daripada spesies merah (P. palmata) dan hijau (misalnya, U. lactuca). Hal ini didukung oleh penulis lain [48] yang menyimpulkan bahwa rata-rata kandungan polifenol adalah spesifik spesies (A. esculenta > S. latissma > P. palmata) dan kandungan fenolik tiga kali lebih tinggi pada A. esculenta daripada spesies lain ( A. esculenta: 37 mgphloroglucinol ekuivalen (PGE)/g dw; S. latissma: 8 mg PGE/g dw; P. palmata: 5 mgGAE/g dw). Selanjutnya, dalam studi yang sama, penulis melaporkan bahwa kandungan polifenol bervariasi menurut musim, sedangkan variasi spasial (ganggang yang dipanen di Norwegia, Prancis, dan Islandia) menunjukkan efek marginal. Misalnya, Gager et al. (2020) menemukan bahwa terdapat pengaruh yang signifikan dari variasi musiman dalam kandungan polifenol A. esculenta, dengan lebih dari 300 mg GAE/g DW di musim gugur dibandingkan dengan di bawah 20 mg GAE/g DW pada musim semi. Phlorotannins dari tujuh rumput laut coklat yang dipanen secara komersial di Brittany (Prancis) terdeteksi oleh 1 H NMR dan uji in vitro: variasi temporal dan potensi valorisasi dalam aplikasi kosmetik. Sampel kami dikumpulkan pada bulan Juli (U. lactuca dan A. esculenta) dan pada bulan November (P. palmata). Dalam penelitian Roleda [48], kandungan rata-rata dalam A. esculenta dari Trondheim, Norwegia (tidak dikumpulkan di Islandia) di musim panas adalah 40 mg PGE/g dw dan P. palmata dari Islandia tetapi 4 mg GAE/g dw di musim gugur. Nilai yang lebih tinggi yang dilaporkan dibandingkan dengan penelitian kami dapat dijelaskan oleh media ekstraksi yang digunakan (80:20 aseton: air), kemungkinan menghasilkan hasil ekstraksi yang lebih tinggi. Kandungan polifenol yang lebih tinggi juga ditemukan untuk ekstrak A. esculenta menggunakan campuran etanol dan air (50:50) dengan ultrasound [49]. Namun, menggunakan media ekstraksi yang sama dan ekstraksi pelarut klasik, A. esculenta dilaporkan mengandung 44,1 mg GAE/100 g dw ekstrak tidak berair [50], relatif mirip dengan yang diamati dalam penelitian ini.

Rata-rata kandungan flavonoid adalah spesifik spesies (A. esculenta > U. lactuca > P. palmata;(p < 0.{{10}}5) (Tabel 2). flavonoid diamati untuk ekstrak A. esculenta (nilai rata-rata 12098,7 g QE/g dw), sedangkan kandungan yang lebih rendah ditemukan untuk U. lactuca (nilai rata-rata 4152,4 g QE/g dw), dan kandungan minimum ditentukan untuk ekstrak P. palmata ( nilai rata-rata 905.8 g QE/g dw.Serupa dengan perilaku yang ditemukan untuk kandungan fenolik total, jenis teknologi ekstraksi tidak memiliki pengaruh yang signifikan terhadap kandungan flavonoid (p > 0,05), kecuali U. lactuca.Hasil menunjukkan bahwa HW dan kombinasi kedua teknik (PEF plus HW) adalah teknik yang paling efisien untuk ekstraksi flavonoid dalam U. lactuca (p <0,05).

Ada banyak penelitian tentang kandungan flavonoid pada tanaman terestrial, tetapi studi kandungan flavonoid pada alga masih jarang [51] dan terutama pada spesies yang dipelajari dalam penelitian ini. Yakni, penelitian Ummat dkk. [49] melaporkan bahwa ekstraksi berbantuan ultrasound meningkatkan pemulihan flavonoid di semua 11rumput lauts diselidiki (termasuk A. esculenta) dibandingkan dengan ekstraksi pelarut konvensional menggunakan campuran etanol 50 persen. Dalam studi lain, flavonoid diukur dalam ekstrak metanol dari empat spesies Ulva (Ulva clathrata, Ulva linza, Ulva flexuosa dan Ulva intestinalis) tumbuh di berbagai bagian pantai utara Teluk Persia di selatan Iran; kandungan flavonoid ekstrak alga bervariasi 8-33 mg RE/g dw [52]. Namun, penelitian sebelumnya oleh kelompok penelitian yang sama menemukan perubahan yang nyata dalam konstituen kimia dengan perubahan musim dan kondisi lingkungan [53]. Dengan demikian, agak sulit untuk mendapatkan gambaran lengkap tentang bibliografi senyawa bioaktif ini dalamrumput lauts, karena kurangnya penelitian yang dipublikasikan, tetapi juga karena perubahan kandungan flavonoid yang dipengaruhi oleh kondisi tumbuh dan lokasi geografis.

Mean carbohydrate content of produced extracts was also species-specific (P. palmata >U. lactuca > A. esculenta; p < 0.05)="" (tabel="" 2).="" isi="" berkisar="" dari="" 44,8="" hingga="" 510="" mg="" glue/gdw="" tergantung="" pada="" spesies="" alga.="" rumput="" laut="" mengandung="" sejumlah="" besar="" polisakarida="" dengan="" fungsi="" penting="" untuk="" sel="" makroalga="" termasuk="" dukungan="" struktural="" dan="" penyimpanan="" energi.="" misalnya,="" bagian="" utama="" dari="" dinding="" sel="" rumput="" laut="" merah="" dan="" coklat="" diwakili="" oleh="" galaktan="" sulfat,="" yang="" dikenal="" sebagai="" agar,="" alginat,="" dan="" karagenan="" [54].="" p.="" palmata="" redalga="" menunjukkan="" jumlah="" kandungan="" karbohidrat="" tertinggi="" (nilai="" rata-rata="" 441="" mgglue/g="" dw).="" hasil="" sesuai="" dengan="" penelitian="" sebelumnya="" yang="" melaporkan="" konsentrasi="" polisakarida="" tertinggi="" pada="" spesies="" palmaria="" [55].="" selain="" itu,="" mutripah="" dkk.="" [56]="" menggambarkan="" kandungan="" karbohidrat="" total="" p.="" palmata="" sebesar="" 469="" mg/g="" rumput="" laut="" kering,="" relatif="" sama="" dengan="" yang="" diamati="" dalam="" penelitian="">

Makroalga hijau U. lactuca menunjukkan kandungan hingga 249,5 mg GluE/g dwtergantung pada teknik ekstraksi yang digunakan (Tabel 2). Berdasarkan literatur, U. lactucah merupakan selulosa yang larut dalam air dan tidak larut yang sesuai dengan polisakarida struktural dengan komponen utama yang disebut ulvan, yang berkontribusi dari 9 hingga 36 persen berat kering biomassa [57]. Ulvan terutama terdiri dari rhamnose sulfat, asam uronat (asam glukuronat dan asam iduronat) dan xilosa. Karena sifatnya yang polar, kelarutan larutan ulvan dalam air ditingkatkan dengan ekstraksi pada suhu tinggi (80–90 C) [58]. Suhu ekstraksi bisa menjadi alasan mengapa kandungan karbohidrat total ekstrak U. lactuca yang dihasilkan oleh ekstraksi air panas tradisional dan kombinasi keduanya (PEF plus HW) lebih tinggi (p <0,05) daripada="" konten="" yang="" dicapai="" hanya="" dengan="">

Di sisi lain, penulis lain menyoroti pentingnya variasi musiman dalam kandungan polisakarida. Misalnya, Schiener et al., mengklaim untuk mengidentifikasi variasi musiman dan memprediksi waktu panen terbaik untuk rumput laut. Analisis komposisi musiman A. esculenta menunjukkan bahwa nilai maksimum karbohidrat bertepatan dengan penurunan konsentrasi protein, abu, polifenol dan kelembaban [39]. Menurut penulis, hubungan ini, yang bervariasi antara musim dan spesies, dapat digunakan oleh industri untuk memaksimalkan hasil panen yang ditargetkan.rumput lautkomponen.

2.4. Kapasitas Antioksidan Ekstrak Rumput Laut Islandia

A. esculenta memiliki aktivitas pemulungan DPPH terkuat di antara ekstrak kasar ketiga spesies alga (p < {{{0}}.05),="" dengan="" efek="" pemulungan="" lebih="" tinggi="" dari="" 90="" persen="" (tabel="" 3).="" larutan="" standar,="" a.="" esculenta="" menunjukkan="" aktivitas="" pemulungan="" yang="" sebanding="" dengan="" 100="" g/ml="" asam="" askorbat="" (87,9="" persen),="" asam="" galat="" (91,0="" persen)="" dan="" -tokoferol="" (87,9="" persen).="" hasil="" kami="" sesuai="" dengan="" penelitian="" terbaru="" [50],="" yang="" juga="" dilaporkan="">antioksidanaktivitas ekstrak A. esculenta. Anehnya, tidak ada perbedaan yang signifikan dalamantioksidanaktivitas diamati antara berbagai metode ekstraksi yang diuji (p > 0.05). Ekstrak PEF diharapkan akan menunjukkan nilai antioksidan yang lebih baik daripada ekstrak yang dihasilkan dengan ekstraksi tradisional panas karena penelitian lain telah menunjukkan bahwa teknik hijau (seperti ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro atau ekstraksi enzimatik) dapat secara efektif menghindari dekomposisi senyawa bioaktif, menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih tinggi [59 ,60].

Kemampuan darirumput lautekstrak untuk mereduksi besi (Fe3 plus ) menjadi ion besi (Fe2 plus ) dan kemampuan untuk mengais radikal ABTS juga dipelajari, masing-masing dengan metode FRAP dan ABTS. Hasil FRAP menunjukkan tren yang mirip dengan DPPH, menunjukkan A. esculenta memiliki kemampuan paling kuat untuk mereduksi ion besi (Fe3 plus ) menjadi ion besi (Fe2 plus ) di antara ekstrak kasar ketiga spesies alga (p < 0.{{6}="" }5).="" namun,="" perilaku="" yang="" berbeda="" ditemukan="" untuk="" abts.="" semua="" ekstrak="" rumput="" laut="" menunjukkan="" kemampuan="" yang="" sama="" untuk="" mengais="" radikal="" abts="" (p=""> 0,05), menunjukkan bahwa spesies ini mungkin mengandung beberapa senyawa efisien yang bertanggung jawab untuk aktivitas pemulungannya.

Secara umum, ganggang coklat diketahui hadir lebih tinggiantioksidanpotensi dibandingkan dengan keluarga merah dan hijau [61]. Hasil kami juga menunjukkan bahwa ekstrak air dari A. esculenta menunjukkan aktivitas antioksidan yang efektif berkaitan dengan pemulungan radikal bebas dan mengurangi daya, menunjukkan bahwa A. esculenta berpotensi menjadi sumber daya untuk antioksidan alami. Aktivitas antioksidan tinggi yang diamati untuk ekstrak A. esculenta dapat dikaitkan dengan kandungan tinggi senyawa fenolik yang ditentukan dalam ekstrak alga coklat. Dalam banyak penelitian,antioksidanaktivitas ekstrak alga telah dianggap berasal dari senyawa fenolik, menunjukkan korelasi positif antara kandungan fenolik dan kapasitas scavenging sebagian besar dengan DPPH [62,63]. Hasil korelasi serupa ditemukan dalam penelitian saat ini untuk ekstrak A. esculenta (lihat diskusi yang lebih baik di Bagian 2.6. Korelasi antara senyawa kimia dan sifat bioaktif).

2.5. Aktivitas Penghambatan Enzimatik Ekstrak Rumput Laut Islandia

Islandiarumput lautEkstrak s menunjukkan efek penghambatan positif terhadap semua enzim yang diuji (Tabel 4), membuka jalan baru untuk eksploitasi penghambat enzimatik alami dari sumber alga. Sepengetahuan kami, ini adalah pertama kalinya aktivitas penghambatan enzimatik Islandiarumput lautekstrak yang dihasilkan oleh PEF telah diuji.

2.5.1. Aktivitas Penghambatan Kolagenase

Ekstrak A. esculenta menunjukkan penghambatan kolagenase positif berkisar antara 68 hingga 91 persen, sedangkan ekstrak P. palmaria dan U. lactuca menunjukkan aktivitas penghambatan yang tidak signifikan terhadap kolagenase (Tabel 4). Ekstrak air panas A. esculenta menunjukkan aktivitas penghambatan kolagenase 71,1 persen, yang lebih tinggi dari larutan standar epigallocatechin-3-gallate (EGCG) (63,2 persen ) dan sebanding dengan standar positif yang disediakan oleh kit enzimatik komersial (74,9 persen ). temuannya adalah bahwa ekstrak A. esculenta yang dihasilkan oleh PEF menunjukkan penghambatan acollagenase sebesar 91 persen, menunjukkan aktivitas yang bahkan lebih tinggi daripada penghambat yang disediakan oleh kit komersial. Perlu digarisbawahi bahwa aktivitas ini hanya diamati pada ekstrak air yang dihasilkan oleh PEF dan bukan oleh kombinasi PEF plus HW. Perilaku ini dapat dijelaskan dengan kemungkinan bahwa proses air panas dapat memiliki efek negatif pada senyawa yang bertanggung jawab untuk menghambat aktivitas kolagenase. Namun, studi tambahan diperlukan untuk menjelaskan hasil ini karena kompleksitas ekstrak alga mentah. Kelompok penelitian yang disebutkan di atas saat ini sedang mengerjakan identifikasi molekul penghambat dalam ekstrak A. esculenta untuk lebih memahami efek positif yang dihasilkan oleh PEF ini.

Hasil mengenai penghambatan kolagenase oleh ekstrak A. esculenta sesuai dengan data sebelumnya, di mana A. esculenta digunakan dalam ekstrak komersial karena efek antipenuaannya. Degradasi kolagen terjadi seiring bertambahnya usia akibat aktivitas kolagenase, yang mengakibatkan kerutan pada kulit. Penghambatan kolagenase oleh senyawa alami merupakan peluang menarik untuk produk anti-penuaan. Misalnya, SEPPIC, pemasok bahan untuk industri kosmetik, menawarkan ekstrak lipofilik A. esculenta (Kalpariane® AD) [64].

2.5.2. Aktivitas Penghambatan Elastase

Hanya ekstrak kasar A. esculenta yang menghambat elastase, menunjukkan aktivitas penghambatan lebih tinggi dari 70 (Tabel 4). Namun, aktivitas anti-elastase ekstrak A. esculenta tidak berbeda secara statistik di antara metode ekstraksi (p > 0.05). Dibandingkan dengan larutan kuersetin, penghambat elastase terkenal yang menunjukkan penghambatan 100 persen pada 1 mM dan 58,7 persen pada 0,5 mM, kinerja ekstrak dari A. esculenta tinggi.

Elastase adalah enzim proteinase yang dapat mereduksi elastin dengan memutus ikatan peptida tertentu. Akibatnya, penghambatan aktivitas elastase pada lapisan dermis dapat digunakan untuk menjaga elastisitas kulit [65]. Banyak ekstrak tumbuhan telah diidentifikasi sebagai elastaseinhibitor [17]; Namun, beberapa penyelidikan telah dilakukan pada penghambatan elastase dari sumber alga. Menurut data literatur, polifenol yang diekstraksi dari tanaman diketahui sebagai penghambat elastase dan hialuronidase yang kuat [66]. Sebuah studi baru-baru ini melaporkan bahwa florotanin, jenis tanin dalam alga coklat, ekstrak rumput laut Eisenia bicyclis dan alga coklat Ecklonia cava, bermanfaat bagi kulit dengan mengurangi aktivitas elastase secara signifikan [67]. Ekstrak A. esculenta yang dihasilkan dalam penelitian ini menunjukkan Nilai TPC dan TFC tertinggi dibandingkan dengan spesies lain yang diteliti (Tabel 4), sehingga ini bisa menjadi alasan mengapa ekstrak air dari P. palmaria dan U. lactuca tidak menunjukkan aktivitas anti-elastase. Untuk mengkonfirmasi hipotesis ini, analisis korelasi Pearson dilakukan, menunjukkan bahwa aktivitas anti-enzimatik berkorelasi positif dengan kandungan zat fenolik (lihat diskusi lebih lanjut di Bagian 2.6. Korelasi antara senyawa kimia dan sifat bioaktif).

2.5.3. Aktivitas Penghambatan Tirosinase

Ekstrak A. esculenta menunjukkan hasil positiftirosinasepenghambatan lebih tinggi dari 90 persen untuk semua metode ekstraksi yang digunakan, sedangkan ekstrak P. palmaria dan U. lactuca tidak menunjukkan efek penghambatan tirosinase (Tabel 4). Namun, aktivitas anti-tirosinase ekstrak A. esculenta tidak berbeda (p < 0.05)="" dengan="" metode="" ekstraksi.="" membandingkan="" efek="" ekstrak="" a.="" esculenta="" dengan="" larutan="" kuersetin="" yang="" diuji,="" ekstrak="" kasar="" ganggang="" coklat="" menunjukkan="" aktivitas="" penghambatan="" yang="" lebih="" baik="" daripada="" larutan="" ini="" (88="" dan="" 75="" persen="" untuk="" larutan="" kuersetin="" 0,5="" dan="" 1="" mm,="" masing-masing).="" berdasarkan="" literatur,="" aktivitas="" anti-tirosinase="" tanaman,="" bakteri="" dan="" jamur="" telah="" dilaporkan="" oleh="" beberapa="" peneliti="" [68].="" namun,="" meskipun="" penelitian="" yang="" berbeda="" menunjukkan="" bahwa="" senyawa="" bioaktif="" yang="" berasal="" dari="" alga="" laut="" memiliki="" potensi="" yang="" baik="" untuk="" dimanfaatkan="" sebagai="" agen="" pemutih="" kulit="" [13],="" ini="" masih="" merupakan="" domain="" yang="" belum="" dieksplorasi="" dan="" hanya="" beberapa="" penelitian="" yang="" telah="" dilakukan.="" sebagian="" besar="" penelitian="" yang="" dilakukan="" di="" daerah="" ini="" telah="" difokuskan="" pada="" ganggang="" coklat,="" sesuai="" dengan="" hasil="" penelitian="" ini="" di="" mana="" ekstrak="" a.="" esculenta="" menunjukkan="" aktivitas="" anti-tirosinase="" terbaik.="" misalnya,="" turunan="" phloroglucinol="" dan="" phlorotannins,="" metabolit="" sekunder="" yang="" umum="" ditemukan="" dalam="" alga="" coklat,="" telah="" menunjukkan="" aktivitas="" penghambatan="" terhadap="" tirosinase="" karena="" kemampuannya="" untuk="" mengkelat="" tembaga="" [69].="" dalam="" sebuah="" penelitian="" baru-baru="" ini,="" ekstrak="" alga="" coklat="" lessonia="" trabeculate="" yang="" dihasilkan="" oleh="" ekstraksi="" berbantuan="" gelombang="" mikro="" menghambat="" aktivitas="" tirosinase="" sebesar="" 33,73="" persen="" [60].="" dalam="" studi="" lain,="" ekstrak="" alga="" coklat="" turbinaria="" conoides="" menunjukkan="" aktivitas="">antioksidandantirosinaseinhibitor, namun dalam hal ini, etanol digunakan sebagai pelarut [70]. Korelasi yang signifikan antara daya hambat polifenol yang diekstraksi dari tanaman pada jamurtirosinasetelah dilaporkan dalam penelitian sebelumnya [68]. Demikian pula, hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan terhadap tirosinase berkorelasi positif dengan kandungan flavonoid dan fenolik (lihat Bagian 2.6. Korelasi antara senyawa kimia dan sifat bioaktif).

Tirosinase memainkan peran penting dalam biosintesis pigmen melanin di kulit. Melanin bertanggung jawab untuk perlindungan terhadap radiasi ultraviolet yang berbahaya, yang dapat menyebabkan beberapa kondisi patologis [71]. Selain itu, dapat menimbulkan masalah estetika ketika melanin terakumulasi sebagai bintik hiperpigmentasi [72]. Dengan demikian, memasukkan inhibitor tirosinase dalam produk kosmetik dapat menarik karena efek pemutih dan atau pencerah.

cistanche dapat menghambat tirosinase

2.5.4. Aktivitas Penghambatan Hyaluronidase

Semuarumput lautekstrak menunjukkan aktivitas anti-hialuronidase yang sangat tinggi (Tabel 4), menunjukkan hasil yang sebanding dengan larutan asam tanat (penghambat hyaluronidase yang terkenal). Secara khusus, ekstrak A. esculenta menunjukkan 100 persen penghambatan untuk semua metode yang diuji. Selain itu, ekstrak U. lactuca menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih tinggi dari 90 persen, di mana penghambatan ekstrak yang dihasilkan oleh PEF (96,8 persen) dan kombinasi PEF plus HW (97,3 persen) lebih tinggi daripada penghambatan yang dihasilkan oleh metode air panas tradisional 93,4 persen ) (p < 0,05).="" semua="" ekstrak="" p.="" palmaria="" menunjukkan="" aktivitas="" yang="" sama="" (p=""><0,05), penghambatan="" ekstrak="" yang="" dihasilkan="" oleh="" pef="" adalah="" (91,9="" persen)="" dan="" kombinasi="" pef="" ditambah="" hw="" (89,5="" persen)="" dan="" metode="" air="" panas="" tradisional="" (91,8="">

Penulis lain juga menggambarkan aktivitas anti-hialuronidase dari berbagairumput lauts ekstrak, terutama untuk ekstrak kaya florotanin dari ganggang coklat [73,74]. Namun, sejauh pengetahuan kami, ini adalah pertama kalinya aktivitas penghambatan hyaluronidase dari ekstrak P. palmata dan U. lactuca yang diproduksi oleh PEF telah dilaporkan.

Asam hialuronat adalah komponen utama dari dermis, di mana ia terlibat dalam perbaikan jaringan, rusak dengan penuaan, menyebabkan kerutan dan hilangnya kekencangan kulit. Dalam hal ini, inhibitor hialuronidase meningkatkan kadar asam hialuronat dari matriks ekstraseluler dermal untuk memperbaiki penampilan kulit wajah yang menua [13]. Oleh karena itu, hasil penelitian ini dapat membuka jalan baru untuk eksploitasi inhibitor hyaluronidase alami dari sumber alga dengan potensi penggunaan dalam produk kosmetik.

Singkatnya, data yang dikumpulkan memungkinkan kami untuk menyimpulkan bahwa ekstrak A. esculenta menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih baik secara keseluruhan daripada P. palmaria dan U. lactuca terhadap enzim yang diuji. Dengan demikian, menjadi spesies rumput laut yang paling menjanjikan dengan aktivitas anti-enzimatik yang sangat baik dan oleh karena itu dipilih untuk penelitian lebih lanjut di laboratorium kami. Meskipun ekstrak kasar dari A. esculenta tampaknya menjadi kandidat yang baik dalam percobaan in vitro, penelitian lebih lanjut perlu dilakukan untuk menjelaskan identitas metabolit yang bertanggung jawab atas efek biologis ini.

ekstrak cistanche: anti-oksidasi

2.6. Korelasi antara Senyawa Kimia dan Sifat Bioaktif

Hasil dari analisis komponen utama (PCA), menunjukkan bahwa pemisahan utama kelompok ditentukan oleh PC1 dan PC2, yang masing-masing menyumbang 71,9 persen dan 14,5 persen dari varians dalam data (Gambar 2). Ekstrak A. esculenta dicirikan oleh kandungan flavonoid dan senyawa fenolik yang lebih tinggi, efek penghambatan pada enzim (kolagenase, tirosinase dan elastase), dan nilai DPPH dan FRAP, dibandingkan spesies lain, P. palmata dan U. lactuca. Di sisi lain, A. esculenta memiliki kandungan karbohidrat yang lebih rendah, terutama dibandingkan dengan P. palmata (yang terletak di sisi berlawanan dari PC1). Variasi data di sepanjang PC2 terutama terkait dengan penghambatan ABTS dan hyaluronidase. Seperti yang ditunjukkan oleh lokasi di plot, P. palmata memiliki korelasi yang lebih kuat dengan ABTS sedangkan U. lactuca lebih terkait dengan efek penghambatan hyaluronidase, dibandingkan kedua spesies ini.

Korelasi positif yang tinggi dan signifikan antara TPC, TFC, DPPH, FRAP, dan efek penghambatan pada kolagenase, elastase dantirosinaseditunjukkan oleh analisis korelasi Pearson (Tabel 5).

Ini sesuai dengan penelitian sebelumnya, melaporkan bahwa senyawa fenolik (termasuk flavonoid) adalah kontributor utama aktivitas antioksidan berbagairumput laut[75-77]. Aktivitas antioksidan yang tinggi dari ekstrak makroalga coklat telah dikaitkan dengan kelompok polifenol, florotanin, dan struktur molekulnya yang unik. Phlorotannis dari ganggang coklat dilaporkan memiliki hingga delapan phenolrings saling berhubungan yang bertindak sebagai perangkap elektron [78,79]. Diharapkan bahwa ABT akan berkorelasi dengan TPC, lainnyaantioksidanparameter. Alasan yang mungkin adalah bahwa metode tersebut didasarkan pada kondisi reaksi yang berbeda dan bahwa reaktivitasnya berbeda dalam hal waktu dan jangkauan komponen. Misalnya, reagen ABTS bereaksi dengan rentang yang lebih luas dariantioksidandaripada radikal DPPH [80]. Di sisi lain, salah satu batasan yang disebutkan untuk ABT adalah reaksi yang panjang dan waktu reaksi umum mungkin tidak memungkinkan mencapai titik akhir.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat korelasi positif yang tinggi antara TPC dan TFC terhadap aktivitas penghambatan kolagenase, elastase dan tirosinase ({{0}}.93–0.99), sedangkan hubungannya dengan penghambatan hyaluronidase tidak sekuat (r=0 0,42 dan 0,54, masing-masing). Hal ini menunjukkan bahwa komponen lain mungkin telah berkontribusi pada efek penghambatan ekstrak. Studi lain telah melaporkan bahwa polisakarida memiliki aktivitas penghambatan hyaluronidase, misalnya, asam alginat dalam ganggang coklat [81,82]. Studi lebih lanjut tentang komposisi kimia spesies makroalga untuk efek senyawa terisolasi pada enzim diperlukan untuk mengevaluasi kontribusi masing-masing komponen kimia karena dalam penelitian ini fokusnya adalah pada ekstrak kasar.

Temuan ini selaras dengan penelitian sebelumnya, yang menyatakan bahwa komposisi kimia dan tingkat bioaktivitas ekstrak bervariasi secara signifikan antara tiga garis keturunan (alga merah, hijau dan coklat) dan antara spesies berbeda yang termasuk dalam filum yang sama dipengaruhi oleh usia dan jaringan. Tipe. Selanjutnya, komposisi dan karakteristiknya tergantung pada banyak faktor lingkungan yang mempengaruhi distribusi dan pertumbuhan makroalga. Misalnya, cahaya (radiasi UV), suhu, ketersediaan nutrisi, paparan udara, gerakan air, paparan gelombang dan salinitas. Suhu telah digambarkan sebagai faktor yang memiliki efek terkuat pada pembentukan pigmen dan konsentrasi nutrisi, salinitas, dan radiasi UV sebagai faktor yang mempengaruhi konsentrasi TPC [83].

Distribusi spesies makroalga yang berbeda bervariasi dengan kedalaman air. Posisi yang lebih tinggi di pantai di zona intertidal atau littoral lebih stres karena spesies yang tumbuh di sana, harus tahan terhadap berbagai perubahan faktor abiotik akibat perubahan pasang surut. Misalnya, efek pengeringan udara, radiasi matahari yang tinggi (saat air surut), perubahan salinitas dan suhu dan, dalam kondisi suhu udara rendah, termasuk pembekuan. Di bawah tanda air rendah, peningkatan kedalaman menghasilkan penurunan intensitas cahaya yang sangat cepat dan paparan radiasi yang lebih sedikit.

Alga yang tumbuh di daerah pasang surut memiliki sensitivitas yang lebih rendah terhadap Radiasi UV dan pulih lebih cepat dari tekanan matahari. Sedangkan alga yang tumbuh di zona sublittoral lebih sensitif terhadap radiasi UV dan memiliki pemulihan yang lebih rendah dari stres matahari [84]. Pada saat yang sama, kolom air memberikan perlindungan. Dalam penelitian ini paparan sinar matahari diduga lebih kuat untuk P. palmata, dibandingkan dengan spesies lain. Studi lain menunjukkan bahwa pembentukan MAA secara langsung berhubungan dengan sinar matahari [85], melindungi organisme terhadap radiasi UV-A dan UV-B. Selain itu, ditunjukkan bahwa jumlah spesifik MAA menurun dengan meningkatnya kedalaman pengumpulan. Kelps seperti A. esculenta, diketahui tumbuh di zona sublittoral atas tetapi juga meluas ke intertidal terendah tepat di atas tanda air rendah. Artinya kolom air memberikan perlindungan yang lebih kuat daripada P. palmata. Selain itu, karakteristik morfologinya berbeda, bilah A. esculenta lebih tebal dibandingkan dengan dua spesies lainnya. U. lactuca, tumbuh terutama di sublittoral intertidaland mampu berfotosintesis dan tumbuh di bawah radiasi yang sangat rendah. Paparan sinar UVB telah dinyatakan untuk mempercepat pemulihan parameter fotosintesis U. lactuca dari efek negatif sinar UVA. Lebih kecil, strukturnya lebih sederhana, dan berumur lebih pendek (3 bulan) dibandingkan A. esculenta (5–7 tahun) dan P. palmata yang tumbuh baru setiap tahun.

Singkatnya, asumsi dapat ditarik bahwa perbedaan utama dalam sifat-sifat ekstrak adalah variasi dalam rentang hidup, karakteristik morfologi dan kondisi pertumbuhan spesies alga.

3. Bahan dan Metode

3.1. Bahan:

Islandiarumput lauts U. lactuca (ganggang hijau), A. esculenta (ganggang coklat) dan P. palmata (ganggang merah) disediakan oleh Kerang Biru Islandia danRumput laut, yang memanen rumput laut di Breidafjordur (Islandia Barat). Setelah panen, rumput laut dikeringkan (sampai sekitar 90 persen bahan kering), digiling dan dikirim dalam kemasan vakum. Sampel disimpan di tempat yang kering dan gelap pada suhu kamar sampai digunakan.

Tirosinasedari jamur, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), elastase dari pankreas babi, asam askorbat, N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN), hyaluronidase dari testis sapi , kuersetin, -tokoferol, asam tanat, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), 2,4,6-Tripyridil-s-Triazin (TPTZ), Trolox, Folin-Ciocalteu reagen, asam galat dan alat uji kolorimetri aktivitas kolagenase (MAK293) dibeli dari Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA). Garam natrium asam hialuronat dibeli dariMakingCosmetics (Redmond, WA, USA). Semua bahan kimia dan reagen lain yang digunakan adalah kelas analitis dan diperoleh dari VWR International, LLC. Air deionisasi (Elix® Essential, Merck, Darmstadt, Jerman) digunakan untuk ekstraksi dan persiapan larutan berbasis air.

3.2. Desain eksperimental

Desain faktorial digunakan untuk mengevaluasi efek spesies rumput laut Islandia (U. lactuca, A. esculenta, P. palmata) dan perlakuan ekstraksi (ekstraksi air panas (HW, 95 C)), ekstraksi PEFassisted (PEF) dan kombinasi keduanya teknik (PEF plus HW), pada ekstrakkomposisi dan bioaktivitas (Tabel 6). Ekstraksi dilakukan dalam rangkap tiga untuk setiap kelompok dan setiap ekstrak ulangan dianalisis dalam rangkap tiga.

3.3. Ekstraksi Bioaktif dari Rumput Laut Islandia

Eksploitasi biomassa makroalga pada tingkat yang berbeda telah memotivasi para ilmuwan untuk mengeksplorasi teknik ekstraksi yang lebih ramah lingkungan, efisien, dan hemat biaya, berdasarkan pendekatan ekstraksi hijau. Dalam karya ini, ekstraksi berbantuan PEF dievaluasi sebagai metode baru dan hijau untuk menghasilkan ekstrak fungsional, sedangkan ekstraksi air panas tradisional digunakan untuk perbandingan. Selain itu, efek dari kombinasi kedua teknik, perlakuan PEF makroalga diikuti dengan ekstraksi air panas tradisional, pada pemulihan bioaktif dipelajari. Karena elektroporasi yang diharapkan dihasilkan di membran sel setelah perlakuan fisik, ekstraksi berikut dengan air panas dapat lebih memfasilitasi pelepasan bahan intraseluler [86], meningkatkan hasil ekstraksi. Diperlukan waktu setelah perawatan untuk bahan untuk berdifusi keluar dari sel [87,88], dan dalam percobaan ini suspensi menunggu semalaman sampai pemisahan cairan (ekstrak) dari pulp.

Mengenai media ekstraksi, air suling digunakan untuk menghasilkanrumput lautekstrak untuk mengatasi keterbatasan mengenai penggunaan racun dan pelarut organik. Air terbukti menjadi pelarut yang baik untuk ekstraksi beberapa senyawa bioaktif darirumput lauts [46,89-91] dan ramah lingkungan. Selain itu, air biasanya digunakan untuk ekstraksi berbantuan PEF karena merupakan penghantar listrik yang baik.

3.3.1. Prosedur Ekstraksi

Untuk setiap ulangan di setiap kelompok,rumput lauts (15 g) direndam semalam pada suhu kamar (22 C) dalam air deionisasi (300 mL). Kemudian, suspensi diperlakukan dengan PEF (PEF), dipanaskan (HW) atau keduanya diperlakukan dengan PEF dan dipanaskan (PEF ditambah HW). Suspensi disimpan semalaman di lemari es diikuti dengan penyaringan dengan kertas saring kasar (20 m). Kemudian filtrat (ekstrak) disimpan pada suhu 4 C sampai dianalisis.

Ekstraksi berbantuan medan listrik berdenyut dilakukan dengan menggunakan generator pulsa yang dibangun di rumah. Itu memiliki kapasitor FuGHCK-200-2000 (FuG Elektronik GmbH, Rosenheim, Jerman) dan celah percikan (18,5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelectronics, GMBH, Wiese baden, Jerman). Peralatan PEF menghasilkan pulsa peluruhan eksponensial dengan lebar 0,96 s dan amplitudo 18 kV. Ruang perawatan kaca plexiglass dengan dimensi (L × H × W) 20 × 8 × 2,5 cm, dengan jarak terpendek antara elektroda pelat digunakan memperlakukan suspensi dengan medan listrik 8 kV/cm pada 1,2 Hz selama 10 menit.

Ekstrak HW dibuat dengan memanaskan suspensi dalam gelas kimia dalam penangas air termostatik dan disimpan pada suhu 95 C selama 45 menit. Untuk medan listrik berdenyut gabungan dan perlakuan pemanasan, suspensi diperlakukan PEF dan kemudian ditempatkan dalam gelas kimia, dipanaskan dalam penangas air, dan disimpan pada 95 C selama 45 menit.

3.3.2. Pengukuran Konduktivitas, pH dan Suhu

Konduktivitas listrik dan pH suspensi rumput laut diukur setelah perendaman dan setelah perlakuan ekstraksi, pada suhu kamar, menggunakan pH meter (OrionStar™ A215 pH/Conductivity Benchtop Meter, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) yang dilengkapi dengan sensor konduktivitas dan Elektroda kombinasi trioda pH/ARC. Selanjutnya, perubahan suhu akibat perlakuan dicatat.

3.4. Profil Spektral Ekstrak Rumput Laut

Spektrum serapan UV-VIS dari ekstrak rumput laut yang berbeda diukur untuk kisaran 200 sampai 450 nm menggunakan sinar ganda Thermo Scientific Evolution 350 Spektrofotometer UV Vis (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) dengan kuarsa kuarsa 1 cm. Tiga scan dilakukan untuk setiap ekstrak rumput laut.

3.5. Penentuan Kandungan Polifenol Total

Kandungan total fenolik (TPC) dalamrumput lautekstrak ditentukan dengan menggunakan reagen Folin-Ciocalteu mengikuti metode yang sedikit dimodifikasi dijelaskan oleh Zhang [92] menggunakan Multiskan Sky Microplate Spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA,USA). Sebuah volume 20 L darirumput lautekstrak atau larutan standar serial dicampur dengan 100 L reagen Folin-Ciocalteu (10 persen dalam air suling). Setelah 5 menit, 80 L larutan natrium karbonat 7,5 persen (v/b) ditambahkan. Campuran reaksi diinkubasi pada suhu kamar dan kegelapan selama 30 menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 760 nm. Air suling digunakan sebagai blanko. Kurva standar asam galat digunakan untuk menentukan kandungan fenolik total dan dinyatakan sebagai g setara asam galat (GAE) per gram bahan kering (µg GAE/g dw).

3.6. Penentuan Kandungan Flavonoid Total

Kandungan flavonoid total (TFC) dalamrumput lautekstrak ditentukan dengan metode yang dijelaskan oleh Kamtekar [93] dan disesuaikan dengan 96-pelat mikro sumur. Secara singkat, volume 25 Lof ekstrak rumput laut atau larutan standar serial dicampur dengan 100 L natrium nitrit (0,375 persen b/v). Setelah 5 menit, 25 L aluminium klorida (3 persen b/v) ditambahkan ke dalam campuran dan diinkubasi selama 6 menit pada suhu kamar. Kemudian, 100 L natrium hidroksida (2 persen b/v) ditambahkan ke dalam campuran dan dicampur. Segera, absorbansi diukur pada panjang gelombang 510 nm. Air suling dan etanol digunakan sebagai blanko. Kurva standar kuersetin (dilarutkan dalam etanol) digunakan untuk menentukan kandungan fenolik total dan dinyatakan sebagai g ekuivalen kuersetin (QE) per gram bahan kering (µg QE/g dw).

3.7. Penentuan Kandungan Karbohidrat

Kandungan gula bebas diukur menurut metode yang dijelaskan oleh [94], dengan sedikit modifikasi. Sebuah 50 L larutan fenol (4 persen) dan 250 L asam sulfat (96 persen) ditambahkan ke 100 L sampel atau larutan standar. Setelah 10 menit inkubasi pada suhu kamar, absorbansi campuran dibaca pada 490 nm. Kurva standar glukosa digunakan untuk menentukan kandungan karbohidrat total dan dinyatakan sebagai mg ekuivalen glukosa (GluE) per gram bahan kering (mg GluE/g dw).

3.8. Sifat Antioksidan Ekstrak Rumput Laut

3.8.1. 2,2 Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) Uji Pemulung Radikal Bebas

Ituantioksidankegiatan (DPPH) darirumput lautekstrak ditentukan mengikuti metodologi yang dijelaskan sebelumnya [94] dengan beberapa modifikasi. Secara singkat, 200 Lof 10.825 × 10−5 M larutan DPPH ditambahkan ke 100 L sampel (1:1 dalam metanol) dalam 96-pelat sumur. Volume yang sama DPPH dicampur dengan 50 L standar ditambah 50 L metanol. Kemudian sampel dan standar diinkubasi di tempat gelap pada suhu kamar selama 30 menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 517 nm. Air suling digunakan sebagai blanko. Kemampuan untuk mengais radikal DPPH dihitung dengan menggunakan persamaan berikut:

Efek scavenging ( persen )=(1 (Sampel Sampel kosong)/(Kontrol Kosong amethanol)) × 100 (1)

dimana Akontrol adalah absorbansi kontrol (larutan DPPH tanpa sampel), sampel A adalah absorbansi sampel uji (larutan DPPH ditambah sampel uji), blanko sampel A adalah absorbansi sampel saja (sampel tanpa larutan DPPH) danAmethanol blank adalah absorbansi methanol saja. Komersialantioksidans (asam askorbat, asam galat dan -tokoferol) digunakan sebagai kontrol positif.

cistanche adalah antioksidan

3.8.2. Uji Daya Antioksidan Pengurang Ion Besi (FRAP)

Aktivitas FRAP diukur menurut metode Benzie and Strain [95]. Secara singkat, buffer asetat (300 mM, pH 3,6), 2,4,6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ) 10 mM dalam 40 mM HCl, dan FeCl3·6H2O (20 mM) dicampur dengan perbandingan 10:1:1 untuk mendapatkan FRAPreagent yang berfungsi. Campuran reaksi diinkubasi pada suhu 37 C selama 10 menit. Sebuah sampel 50 L dari setiap ekstrak dicampur dengan 150 L larutan FRAP bekerja selama 8 menit pada suhu kamar. Absorbansi produk berwarna, Ferrous-TPTZ diukur pada panjang gelombang 593 nm. nilai FRAP darirumput lauts ekstrak dinyatakan sebagai M setara trolox (TE) per gram bahan kering.

3.8.3. 2,2 Uji Azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS)

Analisis dilakukan dengan menggunakan protokol dekolorisasi ABTS [76] dengan beberapa modifikasi. Kation radikal ABTS (ABTS. plus ) dihasilkan dengan mereaksikan ABTS (66 mg) dengan 10 mL larutan kalium persulfat (2,45 mM). Campuran dibiarkan dalam suhu kamar gelap selama 12-16 jam sebelum digunakan. ABTS. larutan plus diencerkan dengan air hingga absorbansi 0,700 pada 734 nm. Campuran reaksi (200 ul) dipindahkan ke pelat mikro, 50 L sampel ditambahkan dan kemudian 150 L larutan reagen. Pelat dikocok selama 10 detik dengan kecepatan sedang, dan absorbansi diukur pada 734 nm setelah 5 menit inkubasi pada suhu kamar. Kurva standar disiapkan dengan memplot penghambatan A734nm standar Trolox sebagai fungsi dari konsentrasinya. Setara dengan TroloxantioksidanNilai kapasitas (TEAC) sampel dihitung menggunakan persamaan yang diperoleh dari regresi linier kurva standar yang disubstitusi nilai A734nm untuk setiap sampel:

TEAC (µM)=(penghambatan sampel A734nm intersep)/kemiringan (2)

Ituantioksidanaktivitas dinyatakan dalam konsentrasi TEAC, mol/g ganggang berat kering.

3.9. Aktivitas Anti-Enzimatik Ekstrak Rumput Laut

3.9.1. Uji Penghambatan Kolagenase

Kit uji kolorimetri aktivitas kolagenase (MAK293), dibeli dari Sigma Aldrich, digunakan untuk menentukan penghambatan kolagenase darirumput lautekstrak. Aktivitas kolagenase yang diukur menggunakan peptida sintetis (FALGPA) yang meniru struktur kolagen. Prosedur dilakukan sesuai dengan instruksi kit.

3.9.2. Uji Penghambatan Elastase

penghambatan elastase darirumput lautekstrak s diselidiki dalam larutan buffer TRIS dengan metode yang dimodifikasi seperti yang dijelaskan sebelumnya [96]. Secara singkat, 100 L larutan buffer TRIS 0,1 M (pH 8,0), 25 L elastase (1 U/mL dalam buffer TRIS) dan 25 L ekstrak sampel dicampur dan diinkubasi selama 15 menit pada 30 C sebelum menambahkan substrat untuk memulai reaksi. Setelah waktu inkubasi, 50 L larutan AAAPVN 2 mM ditambahkan. Kemudian, absorbansi pada 420 nm dipantau selama 20 menit menggunakan pembaca lempeng mikro di bawah suhu konstan 30 C. Akhirnya, penghambatan elastase dihitung dalam persentase menggunakan persamaan:

persen Inhibisi=[(∆Abs/min control Abs/min control)/∆Abs/mincontrol] × 100 (3)

di mana Abscontrol adalah absorbansi pengujian menggunakan buffer sebagai pengganti inhibitor (sampel) dan sampel Abs adalah absorbansi ekstrak sampel. Quercetin digunakan sebagai kontrol positif. Buffer TRIS digunakan sebagai blanko.

efek dariekstrak cistanche:anti penuaan

3.9.3. Uji Penghambatan Tirosinase

Tirosinaseuji penghambatan dilakukan sesuai dengan metode yang dijelaskan sebelumnya oleh [66] menggunakan L-DOPA sebagai substrat. 20 L sampel, 10 L jamurtirosinaselarutan (50 U/mL dalam buffer fosfat) dan 80 L buffer fosfat (pH=6.8) dicampur dalam lempeng mikro dan diinkubasi pada 37 C selama 5 menit. Kemudian, 90 L L-DOPA (2 mg/mL) ditambahkan. Pembentukan dopakrom segera dipantau selama 20 menit pada 475 nm dalam pembaca lempeng mikro di bawah suhu konstan 37 C. Persen inhibisi daritirosinaseenzim dihitung menggunakan persamaan:

persen Inhibisi=[(∆Abs/mincontrol Abs/min control)/∆Abs/mincontrol] × 100 (4)

di mana kontrol Abs adalah absorbansi pengujian menggunakan buffer sebagai pengganti inhibitor (sampel) dan sampel Abs adalah absorbansi ekstrak sampel. Quercetin digunakan sebagai kontrol positif. Buffer fosfat digunakan sebagai blanko.

3.9.4. Uji Penghambatan Hyaluronidase

Aktivitas penghambatan Hyaluronidase diukur seperti yang dijelaskan sebelumnya oleh [66] dengan sedikit modifikasi. Volume 100 l tipe-1-S bovine testes hyaluronidase (2100 U/mL)dilarutkan dalam 0. Buffer asetat 1 M (pH 3,5) dicampur dengan 100 L ekstrak dan diinkubasi pada suhu 37 C selama 20 menit. Sebuah volume 200 L 6 mM kalsium klorida ditambahkan ke campuran reaksi, dan kemudian campuran diinkubasi pada 37 C selama 20 menit. Ca2 plus hyaluronidase teraktivasi ini diperlakukan dengan 250 L sodium hyaluronate (1,2 mg/mL) yang dilarutkan dalam 0,1 M buffer asetat (pH 3,5), dan kemudian diinkubasi dalam penangas air pada suhu 37 C selama 40 menit. 50 L natrium hidroksida 0,9 M dan 100 L natrium borat 0,2 M ditambahkan ke dalam campuran reaksi dan kemudian diinkubasi dalam penangas air mendidih selama 5 menit. Setelah didinginkan hingga suhu kamar, 250 L larutan -dimetilaminobenzaldehida (DAMB) ditambahkan ke dalam campuran reaksi. Larutan DAMB dibuat dengan melarutkan 0,25 gof DAMB dalam 21,88 mL asam asetat 100 persen dan 3,12 mL asam klorida 10N. Kelompok kontrol diperlakukan dengan 100 L 5 persen air, bukan ekstrak. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 585 nm setelah 45 menit. Persentase penghambatan enzim dihitung menggunakan persamaan berikut:

persen penghambatan=[(Abskontrol Abssample)/Abskontrol] × 100 (5)

di mana kontrol Abs adalah absorbansi pengujian menggunakan buffer sebagai pengganti inhibitor (sampel) dan sampel Abs adalah absorbansi ekstrak sampel. Asam tanat digunakan sebagai standar acuan.

3.10. Analisis statistik

Rata-rata dari analisis rangkap tiga dari setiap ekstrak dihitung dan digunakan untuk mencari nilai rata-rata dan simpangan baku untuk setiap kelompok (n {{0}}). Model linier umum (GLM) untuk faktor tetap diterapkan untuk mengevaluasi efek utama dan interaksi dua arah dari faktor eksperimental (spesies dan metode ekstraksi) pada variabel yang diukur. Selanjutnya, ANOVA dan uji Tukey-Kramer digunakan untuk mengidentifikasi perbedaan yang signifikan (p <0,05) antara="" kelompok.="" korelasi="" pearson="" digunakan="" untuk="" mengevaluasi="" hubungan="" linier="" antar="" variabel.="" analisis="" komponen="" utama="" (pca)="" digunakan="" untuk="" mendeteksi="" struktur="" dalam="" hubungan="" antara="" variabel="" yang="" diukur="" dan="" faktor="" eksperimental.="" pca="" mereduksi="" data="" yang="" banyak="" menjadi="" sekumpulan="" kecil="" kombinasi="" linear="" dari="" variabel="" terkait="" (yaitu,="" faktor)="" berdasarkan="" pola="" korelasi="" di="" antara="" variabel="" asli.="" kombinasi="" atribut="" linier="" yang="" dihasilkan="" dapat="" digunakan="" untuk="" membuat="" profil="" karakteristik="" produk="" tertentu="" berdasarkan="" variabel="" yang="" diteliti.="" semua="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ncss="" 2020="" statisticalsoftware="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

ekstrak cistanche anti-penuaan

4. Kesimpulan

Hasil dari percobaan penyaringan pertama ini menunjukkan potensi tiga Islandiarumput lautspesies dengan memberikan efek menguntungkan yang efektif melalui beberapa jalur. Pendekatan hijau yang dikembangkan menggunakan medan listrik berdenyut berair menunjukkan hasil yang serupa dengan ekstraksi air panas tradisional, menunjukkan beberapa keuntungan seperti sifatnya yang non-termal dan waktu ekstraksi yang lebih pendek (10 menit vs. 45 menit). Di antara ketiga spesies alga tersebut, makroalga coklat A. esculenta menunjukkan kandungan TPC tertinggi dan TFC juga menunjukkan kandungan terbesar.antioksidanSelain itu, ekstrak air A. esculenta menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih baik daripada P. palmaria dan U. lactuca terhadap kolagenase, elastase, tirosinase dan hyaluronidase yang paling menjanjikan.rumput lautspesies dengan aktivitas anti-enzimatik yang sangat baik untuk digunakan dalam pemutihan kulit,anti penuaandan kesehatan kulit. Menariknya, siA. ekstrak esculenta yang diproduksi dengan metode PEF menunjukkan penghambatan kolagenase sebesar 91 persen, lebih tinggi dari aktivitas penghambatan yang ditunjukkan oleh ekstraksi air panas tradisional dan bahkan lebih tinggi dari penghambat yang disediakan oleh kit komersial. Sebagai kesimpulan, studi pendahuluan kami menunjukkan bahwa bahasa Islandiarumput lautekstrak berbasis air, terutama ekstrak dari makroalga coklat A. esculenta, yang diproduksi oleh ekstraksi berair berbantuan medan listrik merupakan bahan fungsional yang dapat digunakan sebagai senyawa aktif untuk formulasi kosmetik dan kosmetik dalam waktu dekat.

Referensi

1. Ariede, MB; Candido, TM; Jacom, ALM; Velasco, MVR; de Carvalho, JCM; Baby, AR Atribut kosmetik alga—Areview. Alga Res. 2017, 25, 483–487. [CrossRef]

2. Makkah, HPS; Trans, G.; Heuzé, V.; Giger-Reverdin, S.; Lessire, M.; Lebas, F.; Ankers, P. Rumput laut untuk pakan ternak: Sebuah review.Anim. Ilmu Pakan. teknologi. 2016, 212, 1–17. [CrossRef]

3. O'Connor, J.; Meaney, S.; Williams, GA; Hayes, M. Ekstraksi Protein dari Empat Rumput Laut Berbeda Menggunakan Tiga Strategi Pra-Perlakuan Fisik yang Berbeda. Molekul 2020, 25, 2005. [CrossRef]

4. Maximo, P.; Ferreira, LM; Branco, P.; Lima, P.; Lourenço, A. Metabolit Sekunder dan Aktivitas Biologis Makroalga Invasif Eropa Selatan. Mar. Narkoba 2018, 16, 265. [CrossRef]

5. Barkia, saya.; Saari, N.; Manning, SR Mikroalga untuk Produk Bernilai Tinggi terhadap Kesehatan dan Gizi Manusia. Mar. Narkoba 2019,17, 304. [CrossRef]

6. Gomez-Zavaglia, A.; Prieto Lage, MA; Jimenez-Lopez, C.; Mejuto, JC; Simal-Gandara, J. Potensi Rumput Laut Sebagai Sumber Bahan Fungsional Bernilai Prebiotik dan Antioksidan. Antioksidan 2019, 8, 406. [CrossRef] [PubMed]

7. Salehi, B.; Sharifi-Rad, J.; Seca, AML; Pinto, DCGA; Michalak, saya.; Trikonon, A.; Misra, AP; Nigam, M.; Zam, W.; Martins, N. Tren Terkini pada Rumput Laut: Melihat Komposisi Kimia, Fitofarmakologi, dan Aplikasi Kosmetik. Molekul2019, 24, 4182. [CrossRef]

8. Ghazali, E.; Segera, PC; Mutum, DS; Nguyen, B. Kesehatan dan kosmetik: Menyelidiki nilai konsumen untuk membeli produk perawatan pribadi organik. J. Eceran. Konsumsi. melayani 2017, 39, 154-163. [CrossRef]

9. Amberg, N.; Fogarassy, ​​C. Perilaku Konsumen Hijau di Pasar Kosmetik. Sumber daya 2019, 8, 137. [CrossRef]

10. Pereira, L. Rumput Laut sebagai Sumber Zat Bioaktif dan Terapi Perawatan Kulit—Cosmeceuticals, Algotheraphy, dan Thalassotherapy. Kosmetik 2018, 5, 68. [CrossRef]

11. Martins, A.; Vieira, H.; Gaspar, H.; Santos, S. Memasarkan produk alam laut di industri farmasi dan kosmetik: Kiat untuk sukses. Mar. Narkoba 2014, 12, 1066-1101. [CrossRef] [PubMed]

12. Agatonovic-Kustrin, S.; Morton, D. Cosmeceuticals berasal dari zat bioaktif yang ditemukan di alga laut. Oseanografi 2013,1, 106.

13. Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.S. Menggali potensi penggunaan alga dalam kosmetik. Bioresour. teknologi. 2015,184, 355–362. [CrossRef]

14. Jahan, A.; Ahmad, IZ; Fatima, N.; Ansari, VA; Akhtar, senyawa bioaktif J. Alga dalam industri kosmetik: Tinjauan. Phycologia 2017, 56, 410–422. [CrossRef]

15. Morone, J.; Alfeus, A.; Vasconcelos, V.; Martins, R. Mengungkap potensi cyanobacteria dalam kosmetik dan kosmetik—pendekatan bioaktif baru. Alga Res. 2019, 41, 101541. [CrossRef]

16. Cikoš, A.-M.; Jerkovic, saya.; Molnar, M.; ubari´c, D.; Joki´c, S. Tren baru untuk aplikasi produk alami makroalga. Nat. Prod.Res. 2019, 37, 1–12. [CrossRef]

17. Tali, TS; Hili, P.; Naughton, DP Anti-collagenase, anti-elastase dan aktivitas anti-oksidan ekstrak dari 21 tanaman. Pelengkap BMC. Alternatif Med. 2009, 9, 27. [CrossRef]

18. Jacobsen, C.; Srensen, AM; Tahan, SL; Akoh, CC; Hermund, Sumber DB, Ekstraksi, Karakterisasi, dan Aplikasi Antioksidan Baru dari Rumput Laut. annu. Pdt. Ilmu Pangan. teknologi. 2019, 10, 541-568. [CrossRef]

19. Castejon, N.; Señoráns, FJ Ekstraksi simultan dan fraksinasi omega-3 asilgliserol dan glikolipid dari biomassa mikroalga basah Nannochloropsis gaditana menggunakan cairan bertekanan. Alga Res. 2019, 37, 74–82. [CrossRef]

20. Muhammad, MEA; Eissa, AHA Medan listrik berdenyut untuk teknologi pengolahan makanan. Struktur. Fungsi. Makanan Eng. 2012, 11, 275–306.

21. Geada, P.; Rodrigues, R.; Loureiro, L.; Pereira, R.; Fernandes, B.; Teixeira, JA; Vasconcelos, V.; Vicente, AA Electrotechnologies diterapkan pada bioteknologi mikroalga—Aplikasi, teknik, dan tren masa depan. Memperbarui. Mempertahankan. Energi Rev. 2018, 94, 656–668.[CrossRef]

22. Poojary, MM; Barba, FJ; Aliakbarian, B.; Donso, F.; Pataro, G.; Dias, DA; Juliano, P. Teknologi alternatif inovatif untuk mengekstrak karotenoid dari mikroalga dan rumput laut. Mar. Narkoba 2016, 14, 214. [CrossRef] [PubMed]

23. Vorobiev, E.; Lebovka, N. 2—Ekstraksi dari Makanan dan Biomaterial yang Ditingkatkan oleh Energi Listrik Berdenyut. Dalam Teknologi Pengolahan Makanan yang Inovatif; Knoerzer, K., Juliano, P., Smithers, G., Eds.; Penerbitan Woodhead: Sawston, Inggris, 2016; hlm. 31–56.

24. Käferböck, A.; Smetana, S.; de Vos, R.; Schwarz, C.; Toepfl, S.; Parniakov, O. Ekstraksi berkelanjutan komponen berharga dari Spirulina dibantu oleh teknologi medan listrik berdenyut. Alga Res. 2020, 48, 101914. [CrossRef]

25. Parniakov, O.; Barba, FJ; Grimi, N.; Marchal, L.; Jubeau, S.; Lebovka, N.; Vorobiev, E. Medan listrik berdenyut dibantu ekstraksi senyawa bergizi berharga dari mikroalga Nannochloropsis spp. menggunakan campuran biner pelarut organik dan air.Innov. Ilmu Makanan. muncul. teknologi. 2015, 27, 79–85. [CrossRef]

26. Scherer, D.; Krust, D.; Frey, W.; Mueller, G.; Nick, P.; Gusbeth, C. Pulsed electric field (PEF)-assisted protein recovery dari ChlorellaVulgaris dimediasi oleh proses enzimatik setelah kematian sel. Alga Res. 2019, 41, 101536. [CrossRef]

27. Naseri, A.; Marinho, GS; Tahan, SL; Bartela, JM; Jacobsen, C. Ekstraksi berbantuan enzim dan karakterisasi protein dari rumput laut merah Palmaria palmitat. Alga Res. 2020, 47, 101849. [CrossRef]

menyeberang

28. Robin, A.; Kazir, M.; Karung, M.; Israel, A.; Frey, W.; Mueller, G.; Livney, YD; Golberg, A. Konsentrat Protein Fungsional yang Diekstraksi dari Makroalga Laut Hijau Ulva sp., dengan Medan Listrik Berdenyut Tegangan Tinggi dan Mesin Press. ACS Berkelanjutan. Kimia Ind.2018, 6, 13696–13705. [CrossRef]

29. Einarsdóttir, R.; órarinsdóttir, KA; Aðalbjörnsson, BV; Guðmundsson, M.; Marteinsdottir, G.; Kristbergsson, K. Pengaruh parameter pengobatan berbantuan medan listrik berdenyut pada ekstraksi air mentah Laminaria digitata. J. Aplikasi phycol. 2021, 33,3287–3296. [CrossRef]

30. Postma, Humas; Cerezo-Chinarro, O.; Akkerman, RJ; Olivieri, G.; Wijffels, RH; Brandenburg, WA; Eppink, MHM Biorefinery dari makroalga Ulva Lactuca: Ekstraksi protein dan karbohidrat dengan disintegrasi ringan. J. Aplikasi phycol. 2018, 30, 1281–1293.[CrossRef]

31. Zbinden, MDA; Sturm, BSM; Nord, RD; Carey, WJ; Moore, D.; Shinogle, H.; Stagg-Williams, SM Medan listrik berdenyut (PEF) sebagai pretreatment intensifikasi untuk ekstraksi lipid pelarut yang lebih hijau dari mikroalga. Bioteknologi. Bioeng. 2013, 110, 1605–1615.[CrossRef]

32. Silve, A.; Papachristou, saya.; Wustner, R.; Sträßner, R.; Schirmer, M.; Leber, K.; Guo, B.; Interrante, L.; Posten, C.; Frey, W. Ekstraksi lipid dari mikroalga basah Auxenochlorella protothecoides menggunakan perlakuan medan listrik berdenyut dan campuran etanol-heksana. AlgaRes. 2018, 29, 212–222. [CrossRef]

33. Chittapun, S.; Jonjaroen, V.; Khumrangsee, K.; Charoenrat, ekstraksi T. C-phycocyanin dari dua cyanobacteria air tawar dengan teknik pembekuan-pencairan dan medan listrik berdenyut untuk meningkatkan efisiensi dan kemurnian ekstraksi. Alga Res. 2020, 46, 101789. [CrossRef]

34. Aryee, ANA; Agyei, D.; Akanbi, TO Pemulihan dan pemanfaatan pigmen rumput laut dalam pengolahan makanan. Curr. pendapat. Ilmu Pangan.2018, 19, 113–119. [CrossRef]

35. Nowacka, M.; Tappi, S.; Wiktor, A.; Rybak, K.; Miszczykowska, A.; Czyzewski, J.; Drozdzal, K.; Witrowa-Rajchert, D.; Tylewicz, U. Dampak Medan Listrik Berdenyut pada Ekstraksi Senyawa Bioaktif dari Bit. Makanan 2019, 8, 244. [CrossRef]

36. Martinez, JM; Delso, C.; lvarez, saya.; Raso, J. Ekstraksi berbantuan medan listrik dari senyawa berharga dari mikroorganisme. Memahami. Pdt. Ilmu Pangan. Makanan Saf. 2020, 19, 530–552. [CrossRef]

37. Pataro, G.; Goettel, M.; Straessner, R.; Gusbeth, C.; Ferrari, G.; Frey, W. Pengaruh pengobatan PEF pada ekstraksi senyawa berharga dari mikroalga C. vulgaris. Kimia Ind. Trans. 2017, 57, 67–72.

38. Brunton, NP; Luengo, E. Medan Listrik Berdenyut untuk Ekstraksi Metabolit Sekunder dari Tumbuhan. Di Medan Listrik Berdenyut untuk Ekstraksi Metabolit Sekunder dari Tumbuhan; Miklavcic, D., Ed.; Penerbitan Internasional Springer: Cham, Swiss, 2017; hal. 1–15.

39. Schiener, P.; Hitam, KD; Stanley, MS; Hijau, DH Variasi musiman dalam komposisi kimia spesies rumput laut Laminaria digitata, Laminaria hyperborea, Saccharina latissima dan Alaria esculenta. J. Aplikasi phycol. 2015, 27, 363–373. [CrossRef]

40. Salgado, LT; Tomazetto, R.; Cinelli, LP; Farina, M.; Filho, GMA Pengaruh alginat ganggang coklat pada senyawa fenolik kemampuan penyerapan radiasi ultraviolet in vitro. braz. J. Oceanog. 2007, 55, 145-154. [CrossRef]

41. Orfanoudaki, M.; Hartmann, A.; Karsten, U.; Ganzera, M. Profil kimia asam amino seperti mikosporin dalam spesies alga dua puluh tiga. J.Fikol. 2019, 55, 393–403. [CrossRef]

42. Pangestuti, R.; Siahaan, EA; Kim, S.-K. Zat Fotoprotektif Berasal dari Alga Laut. Mar. Narkoba 2018, 16, 399.[CrossRef] [PubMed]

43. Schneider, G.; Figueroa, FL; Vega, J.; Chaves, P.; lvarez-Gómez, F.; Korbee, N.; Bonomi-Barufi, J. Sifat fotoproteksi organisme fotosintetik laut yang tumbuh di daerah paparan ultraviolet tinggi: Aplikasi kosmetik. Alga Res. 2020,49, 101956. [CrossRef]

44. Nishida, Y.; Kumagai, Y.; Michiba, S.; Yasui, H.; Kishimura, H. Ekstraksi Efisien dan Kapasitas Antioksidan Asam Amino Serupa Mikosporin dari Alga Merah Dulse Palmaria palmitat di Jepang. Mar. Narkoba 2020, 18, 502. [CrossRef] [PubMed]

45. Rehm, E.; Dalgleish, F.; Hut, M.; Matteoli, S.; Archambault, P.; Lambert Girard, S.; Piche, M.; Lagunas-Morales, J. Membandingkan teknik LiDAR absorpsi fluoresen dan diferensial untuk mendeteksi biomassa alga dengan aplikasi pada substrat Arktik. InOcean Sensing dan Monitoring X; Masyarakat Internasional untuk Optik dan Fotonik: Bellingham, WA, AS, 2018; Jilid 10631, hal. 106310Z.

46. ​​Wang, T.; Jonsdottir, R.; lafsdóttir, G. Total senyawa fenolik, radikal scavenging dan khelasi logam ekstrak dari rumput laut Islandia. Kimia Makanan. 2009, 116, 240–248. [CrossRef]

47. Bedoux, G.; Hardouin, K.; Burlot, AS; Bourgougnon, N. Bab Dua Belas—Komponen Bioaktif dari Rumput Laut: Aplikasi Kosmetik dan Pengembangan Masa Depan. Dalam Kemajuan dalam Penelitian Botani; Bourgougnon, N., Ed.; Pers Akademik: Cambridge, MA,USA, 2014; Jilid 71, hlm. 345–378.

48. Roleda, SAYA; Marfaing, H.; Desnica, N.; Jonsdottir, R.; Skjermo, J.; Rebours, C.; Nitschke, U. Variasi kandungan polifenol dan logam berat dari biomassa massal rumput laut yang dipanen dan dibudidayakan secara liar: Penilaian risiko kesehatan dan implikasinya untuk aplikasi makanan. Kontrol Makanan 2019, 95, 121–134. [CrossRef]

49. Ummat, V.; Tiwari, BK; Jaiswal, AK; Condon, K.; Garcia-Vaquero, M.; O'Doherty, J.; O'Donnell, C.; Rajauria, G. Optimalisasi Frekuensi Ultrasound, Waktu Ekstraksi dan Pelarut untuk Pemulihan Polifenol, Phlorotannin dan Aktivitas Antioksidan Terkait dari Rumput Laut Coklat. Mar. Narkoba 2020, 18, 250. [CrossRef]

50. Afonso, C.; Matos, J.; Guarda, saya.; Gomes-Bispo, A.; Gomes, R.; Cardoso, C.; Gueifão, S.; Delgado, saya.; Coelho, saya.; Castanheira, saya.; dkk. Potensi bioaktif dan nutrisi Alaria esculenta dan Saccharina latissima. J. Aplikasi phycol. 2021, 33, 501–513. [CrossRef]

51. Cotas, J.; Leandro, A.; Monteiro, P.; Pacheco, D.; Figueirinha, A.; Gonçalves, AMM; da Silva, GJ; Pereira, L. Fenolik Rumput Laut: Dari Ekstraksi hingga Aplikasi. Mar. Narkoba 2020, 18, 384. [CrossRef]

52. Farasat, M.; Khavari-Nejad, RA; Nabawi, SM; Namjooyan, F. Aktivitas Antioksidan, Total Fenolik dan Kandungan Flavonoid dari Beberapa Rumput Laut Hijau yang Dapat Dimakan dari Pantai Utara Teluk Persia. IJPR 2014, 13, 163–170. [PubMed]

53. Manivannan, K.; Thirumaran, G.; Devi, GK; Anantharaman, P.; Balasubramanian, T. Komposisi Proksimat Berbagai Kelompok Rumput Laut dari Perairan Pesisir Vedalai (Teluk Mannar): Pantai Tenggara India. Timur Tengah J. Sci. Res. 2009, 4, 72–77.

54. Mišurcova, L.; krovánková, S.; Samak, D.; Ambrožová, J.; Mach u, L. Bab 3—Manfaat Kesehatan dari Polisakarida Alga dalam Nutrisi Manusia. Kemajuan dalam Penelitian Pangan dan Gizi; Henry, J., Ed.; Pers Akademik: Cambridge, MA, AS, 2012; Jilid66, hlm. 75–145.

55. Lafarga, T.; Acién-Fernández, FG; Garcia-Vaquero, M. Peptida bioaktif dan karbohidrat dari rumput laut untuk aplikasi makanan: Kejadian alami, isolasi, pemurnian, dan identifikasi. Alga Res. 2020, 48, 101909. [CrossRef]

56. Mutripah, S.; Meinita, MDN; Kang, J.-Y.; Jeong, G.-T.; Susanto, AB; Prabowo, RE; Hong, Y.K. Pembuatan bioetanol dari hidrolisat Palmaria palmata menggunakan asam sulfat dan fermentasi dengan brewer's yeast. J. Aplikasi phycol. 2014, 26, 687–693.[CrossRef]

57. Dominguez, H.; Loret, EP Ulva lactuca, Sumber Masalah dan Potensi Kekayaan. Mar. Narkoba 2019, 17, 357. [CrossRef]

58. Kidgell, JT; Magnusson, M.; de Nys, R.; Glasson, CRK Ulvan: Sebuah tinjauan sistematis ekstraksi, komposisi dan fungsi.Alga Res. 2019, 39, 101422. [CrossRef]

59. Habibullah, SFK; Alagarsamy, S.; Arnous, A.; Jacobsen, C. Ekstraksi enzimatik bahan antioksidan dari rumput laut Denmark dan karakterisasi prinsip aktif. Alga Res. 2021, 56, 102292. [CrossRef]

60. Yuan, Y.; Zhang, J.; Kipas angin, J.; Clark, J.; Shen, P.; Li, Y.; Zhang, C. Ekstraksi senyawa fenolik dengan bantuan gelombang mikro dari empat spesies makroalga coklat ekonomi dan evaluasi aktivitas antioksidan dan efek penghambatannya pada -amilase, -glukosidase, lipase pankreas dan tirosinase. Int. Makanan Res. J. 2018, 113, 288–297. [CrossRef]

61. Balboa, EM; Konde, E.; Moure, A.; Falque, E.; Domínguez, H. Sifat antioksidan in vitro dari ekstrak kasar dan senyawa dari ganggang coklat. Kimia Makanan. 2013, 138, 1764–1785. [CrossRef]

62. Kainama, H.; Fatmawati, S.; Santoso, M.; Papilaya, PM; Ersam, T. Hubungan Penangkal Radikal Bebas dengan Kandungan Fenolik dan Flavonoid Total PAM Garcinia lasoar. Farmasi. Kimia J. 2020, 53, 1151-1157. [CrossRef]

63. Dang, TT; Van Vuong, Q.; Schreider, MJ; Bower, MC; Van Altena, IA; Scarlett, CJ Optimalisasi kondisi ekstraksi berbantuan ultrasound untuk kandungan fenolik dan aktivitas antioksidan alga Hormosira bankii menggunakan metodologi permukaan respons. J. Aplikasi phycol. 2017, 29, 3161–3173. [CrossRef]

64. Couteau, C.; Coiffard, L. Bab 14-Aplikasi Rumput Laut dalam Kosmetik. Dalam Rumput Laut dalam Pencegahan Kesehatan dan Penyakit; Fleurence, J., Levine, I., Eds.; Pers Akademik: San Diego, CA, AS, 2016; hal. 423–441.

65. Tsukahara, K.; Takema, Y.; Moriwaki, S.; Tsuji, N.; Suzuki, Y; Fujimura, T.; Imokawa, G. Penghambatan Selektif FibroblastElastase Kulit Memunculkan Pencegahan Bergantung Konsentrasi Ultraviolet B-Induced Wrinkle Formation. J. Investigasi. Dermatologi. 2001,117, 671–677. [CrossRef]

66. Liyanaarachchi, GD; Samarasekera, JKRR; Mahanama, KRR; Hemalal, KDP Tyrosinase, elastase, hyaluronidase, aktivitas penghambatan dan antioksidan tanaman obat Sri Lanka untuk kosmetik baru. Produk Tanaman Ind. 2018, 111, 597–605. [CrossRef]

67. Gupta, PL; Rajput, M.; Oza, T.; Trivedi, U.; Sanghvi, G. Keunggulan Produk Mikroba dalam Industri Kosmetik. Nat. Prod.Bioprospek. 2019, 9, 267–278. [CrossRef] [PubMed]

68. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hasan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Ulasan komprehensif tentang inhibitor tirosinase. J. Enzim Inhib. Med. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]

69. Couteau, C.; Coiffard, L. Phycocosmetics and Other Marine Cosmetics, Kosmetik Spesifik yang Diformulasi Menggunakan Sumberdaya Laut.Mar. Narkoba 2020, 18, 322. [CrossRef]

70. Sari, DM; Anwar, E.; Arifianti, AE Aktivitas antioksidan dan inhibitor tirosinase ekstrak etanol rumput laut coklat (Turbinaria conoides) sebagai bahan pencerah. Farmasi. J. 2019, 11, 379–382. [CrossRef]

71. Brenner, M.; Pendengaran, VJ Peran pelindung melanin terhadap kerusakan UV pada kulit manusia. fotokimia. fotobiol. 2008, 84.539–549. [CrossRef] [PubMed]

72. Lee, SY; Baek, N.; Nam, T.-G. Inhibitor tirosinase alami, semisintetik dan sintetis. J. Enzim Inhib. Med. Kimia 2016, 31,1–13. [CrossRef] [PubMed]

73. Ferreres, F.; Lopes, G.; Gil-Izquierdo, A.; Andrade, PB; Sousa, C.; Mouga, T.; Valentão, P. Phlorotannin Ekstrak dari Fucales Dicirikan oleh HPLC-DAD-ESI-MSn: Pendekatan Kapasitas Inhibisi Hyaluronidase dan Sifat Antioksidan. Mar.Obat 2012, 10, 2766–2781. [CrossRef] [PubMed]

74. Fayad, S.; Nehme, R.; Tannouri, M.; Lesellier, E.; Pichon, C.; Morin, ekstrak air P. Macroalga Padina pavonica yang diperoleh dengan ekstraksi cair bertekanan dan ekstraksi berbantuan gelombang mikro menghambat aktivitas hyaluronidase seperti yang ditunjukkan oleh elektroforesis kapiler.J. Kromatografi A 2017, 1497, 19-27. [CrossRef] [PubMed]

75. Athukorala, Y.; Kim, K.-N.; Jeon, Y.-J. Sifat antiproliferatif dan antioksidan dari hidrolisat enzimatik dari alga coklat, Ecklonia cava. Kimia Makanan. racun. 2006, 44, 1065–1074. [CrossRef]

76. Jiménez-Escrig, A.; Gómez-Ordóñez, E.; Rupérez, P. Brown dan rumput laut merah sebagai sumber potensial antioksidan nutraceuticals.J. aplikasi phycol. 2012, 24, 1123-1132. [CrossRef]

77. Karawita, R.; Siriwardhana, N.; Lee, K.W.; Heo, M.-S.; Yeo, I.-K.; Lee, Y.-D.; Jeon, Y.-J. Pemulungan spesies oksigen reaktif, metalchelation, mengurangi daya dan sifat penghambatan peroksidasi lipid dari fraksi pelarut yang berbeda dari Hizikia fusiformis.Eur. Makanan Res. teknologi. 2005, 220, 363–371. [CrossRef]

78. Jormalainen, V.; Honkanen, T. Variasi seleksi alam untuk pertumbuhan dan florotanin pada alga coklat Fucus vesiculosus.J. Evolusi. Biol. 2004, 17, 807–820. [CrossRef] [PubMed]

79. Koivikko, R.; Loponen, J.; Pihlaja, K.; Jormalainen, V. Analisis kromatografi cair kinerja tinggi florotanin dari alga coklat Fucus vesiculosus. fitokimia. dubur. 2007, 18, 326–332. [CrossRef] [PubMed]

80. Mareˇcek, V.; Mikyška, A.; Hampel, D.; Cejka, P.; Neuwirthov á, J.; Malachova, A.; Metode Cerkal, R. ABTS dan DPPH sebagai alat untuk mempelajari kapasitas antioksidan spring barley dan malt. J. Ilmu Sereal. 2017, 73, 40–45. [CrossRef]

81. Asada, M.; Sugi, M.; Inoue, M.; Nakagomi, K.; Hong, S.; Murata, K.; Irie, S.; Takeuchi, T.; Tomizuka, N.; Oka, S. Efek Penghambatan Asam Alginat pada Hyaluronidase dan pada Pelepasan Histamin dari Sel Mast. Biosci. Bioteknologi. Biokimia. 1997, 61, 1030–1032.[CrossRef] [PubMed]

82. Mase, T.; Yamauchi, M.; Kato, Y.; Esaki, H.; Isshiki, S. Hyaluronidase-Menghambat Polisakarida Asam Terisolasi dari PorphyridiumPurpureum. Kumpulan Esai Penelitian di Universitas Gakuen Wanita Suishan. Nat. Sci. 2013, 44, 105-113,83. Tolpeznikaite, E.; Bartkevic, V.; Ruzauskas, M.; Pilkaityte, R.; Viskelis, P.; Urbonaviciene, D.; Zavistanaviciute, P.; Zokaityte, E.;Ruibys, R.; Bartkiene, E. Karakterisasi Ekstrak Makro dan Mikroalga Senyawa Bioaktif dan Unsur Mikro dan Makro Transisi dari Alga ke Ekstrak. Makanan 2021, 10, 2226. [CrossRef]

84. Gomez, saya.; Huovinen, P. Morpho-fungsional pola dan zonasi rumput laut Chili Selatan: Pentingnya sifat fotosintesis dan bio-optik. Mar.Ekol. Prog. Ser. 2011, 422, 77–91. [CrossRef]

85. Karsten, U.; Wiencke, C. Faktor-faktor yang Mengontrol Pembentukan Asam Amino Seperti Mikosporin yang Menyerap UV dalam Palmaria Palmaria RedAlga Laut dari Spitsbergen (Norwegia). J. Tanaman. Fisiol. 1999, 155, 407–415. [CrossRef]

{0}}. Ummat, V.; Sivagnanam, SP; Rajauria, G.; O'Donnell, C.; Tiwari, BK Kemajuan dalam teknik pra-perawatan dan teknologi ekstraksi hijau untuk bioaktif dari rumput laut. Tren Makanan Sci. Technol 2021, 110, 90–106. [CrossRef]

87. Boussetta, N.; Lanoiselle, J.-L.; Bedel-Cloutour, C.; Vorobiev, E. Ekstraksi zat terlarut dari pomace anggur oleh pelepasan listrik tegangan tinggi untuk pemulihan polifenol: Pengaruh sulfur dioksida dan perawatan termal. J. Food Eng. 2009, 95, 192–198.[CrossRef]

88. Goettel, M.; Eing, C.; Gusbeth, C.; Straessner, R.; Frey, W. Berdenyut medan listrik dibantu ekstraksi intraseluler berharga dari mikroalga. Alga Res. 2013, 2, 401–408. [CrossRef]

89. Hwang, P.-A.; Wu, C.-H.; Gau, S.-Y.; Chien, S.-Y.; Hwang, D.-F. Aktivitas antioksidan dan stimulasi kekebalan dari ekstrak air panas dari rumput laut Sargassum epiphyllum. J.Mar. Sci. teknologi. 2010, 18, 41–46. [CrossRef]

90. Sabeena Farvin, KH; Jacobsen, C. Senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan dari spesies rumput laut terpilih dari Danishcoast. Kimia Makanan. 2013, 138, 1670–1681. [CrossRef] [PubMed]

91. Godlewska, K.; Michalak, saya.; Tuhy, L.; Chojnacka, K. Biostimulan Pertumbuhan Tanaman Berdasarkan Berbagai Metode Ekstraksi Rumput Laut dengan Air. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

92. Zhang, T.; Zhang, J.; Shen, J.; Silva, A.; Dennis, DA; Barrow, CJ Metode Sederhana 96-Sumur Microplate untuk Estimasi Kandungan Polifenol Total dalam Rumput Laut. J. Aplikasi phycol. 2006, 18, 445–450. [CrossRef]

93. Kamtekar, S.; Ker, V.; Patil, V. Estimasi kandungan fenolik, kandungan flavonoid, aktivitas penghambatan antioksidan dan alfa-amilase dari formulasi poliherbal yang dipasarkan. J. Aplikasi Farmasi. Sci. 2014, 4, 61.

94. Neto, R.; Maral, C.; Queiros, A.; Abreu, M.; Silva, A.; Cardoso, S. Skrining Ulva rigida, Gracilaria sp., Fucus vesiculosus dan Saccharina latissima sebagai Bahan Fungsional. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 2987. [CrossRef]

95. Benzie, JIKA; Strain, JJ Kemampuan mengurangi besi plasma (FRAP) sebagai ukuran "kekuatan antioksidan": The FRAP assay. Anal.Biokimia. 1996, 239, 70–76. [CrossRef]

96. Eun Lee, K.; Bharadwaj, S.; Yadawa, U.; Gu Kang, S. Evaluasi kafein sebagai inhibitor terhadap kolagenase, elastase, dan tirosinase menggunakan pendekatan in silico dan in vitro. J. Enzim Inhib. Med. Kimia 2019, 34, 927–936. [CrossRef] [PubMed]