Viabilitas Dan Efek Antioksidan Bubuk Beras Pendingin Tradisional (bedak Sejuk) Terbuat Dari Oryza Sativa Ssp. Indica Dan Oryza Sativa Ssp. Japonica Pada Sel Melanoma B164A5 yang Diinduksi UVB

Kontak: ali.ma@wecistanche.com

Ahmad Rohi Ghazali1 *, Raveena Vaidheswary Muralitharan1 , Chan Kam Soon1 , Tharsini Salyam1 , Nurul Najihah Ahmad Maulana1 , Ummul Aqeela Balqees Mohamed Thaha1 , Rasyidah Mohamad Halim1 , Sajidah Suhaifi1 , Muhamad Haziq Md Khalid1 , Adibah Hanis Ahmad1 , Noorhisham Tan Kofli2

Abstrak

Latar:Bubuk beras pendingin tradisional (bedak sejuk) adalah fermentasi berbasis berasKosmetikyang diterapkan topikal pada kulit seseorang, sebagai masker wajah semalaman. Menurut kesaksian pengguna,bedak sejukmempercantik dan memutihkan kulit, dimana manfaat ini dapat dimanfaatkan sebagai agen kemopreventif melanoma potensial.

Obyektif:Maka penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek daribedak sejukterbuat dari Oryza sativa ssp. indica (Indica) dan Oryza sativa ssp. japonica (Japonica) pada sel melanoma B164A5 yang diinduksi UVB, dan juga mengidentifikasiAntioksidankapasitas dari kedua jenis bedak sejuk.

Metode:Dosis optimal Indica dan Japonica bedak sejuk untuk mengobati sel-sel adalah ditentukan melalui uji MTT. Kemudian,Antioksidankapasitas dari kedua jenisbedak sejukditentukan menggunakan Uji FRAP.

Hasil:Dari uji MTT, ditemukan bahwa Indica dan Japonica bedak sejuk tidak menunjukkan sitotoksik efek pada sel. Oleh karena itu, tidak ada IC50 yang dapat diperoleh dan dua dosis yang lebih tinggi, 50 dan 100 g / L dipilih untuk perawatan. Dalam uji FRAP, Indica bedak sejuk pada 50 dan 100 g/L menunjukkan nilai FRAP sebesar 0,003 ± 0,001 μg AA (asam askorbat)/g bedak sejuk dan 0,004 ± 0,0003 μg AA/g daribedak sejuk. Sedangkan Japonica bedak sejuk pada 50 g/L memiliki nilai FRAP yang sama dengan Indica bedak sejuk pada 100 g/L. Adapun Japonica bedak sejuk pada 100 g/L, itu menunjukkan tertinggiAntioksidankapasitas dengan nilai FRAP 0,01 ± 0,0007 μg AA/g bedak sejuk yang secara statistik signifikan (p< 0.05)="" when="" compared="" to="" other="" tested="">

Kesimpulan:Kesimpulannya, Japonicabedak sejukmemiliki yang lebih tinggiAntioksidankapasitas dibandingkan dengan Indica bedak sejuk meskipun keduanya tidak sitotoksik terhadap Sel. Terlepas dari itu, penyelidikan lebih lanjut perlu dilakukan sebelum bedak sejuk dapat dikembangkan sebagai potensi melanoma agen kemoprevensi.

Kata kunci:Bedak sejuk- beras fermentasi yang difermentasikosmetik- Oryza sativa Indica- Oryza sativa Japonica

Klik untukekstrak cistanche dan cistanche deserticola ma untuk antioksidan

Perkenalan

Organ terbesar dari tubuh manusia adalah kulit, yang menyumbang 16% dari berat badan manusia. Si epidermis kulit berfungsi sebagai lapisan pelindung yang memisahkan organisme dari lingkungan eksternal. Ini sangat penting dalam menangkal stresor lingkungan seperti sebagai sinar ultraviolet (UV). Ketika sinar UV menembus epidermis, pigmen melanin dalam bentuk keratinosit penutup pelindung di atas inti keratinosit. Ini memberikan perlindungan bagi kulit terhadap penetrasi sinar UV serta menetralkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang telah diproduksi (D'Orazio et al., 2013; Aluwi dkk., 2016; Woolridge Cooper, 2018).

Namun, peningkatan paparan sinar UV adalah penyebab utama hiperpigmentasi dan kerusakan kulit (Chan et al., 2014; Masyarakat Kanker Amerika, 2020). Sinar UV dari Matahari yang menembus kulit adalah UVA (90 - 95 %) dan sinar UVB (5 - 10 %), di mana luasnya kerusakan kulit tergantung pada panjang gelombang masing-masing ikan pari. Sinar UVA memiliki panjang gelombang yang lebih panjang (320 – 400 nm) yang menembus jauh ke dalam dermis dan menghasilkan bebas pembentukan radikal, terutama ROS. Adapun sinar UVB, dengan panjang gelombang yang lebih pendek (280 – 320 nm) yang menembus sampai lapisan epidermis saja, sinar merusak DNA yang pada gilirannya menyebabkan mutasi. Kombinasi formasi ROS ini dan mutasi pada akhirnya berkontribusi pada pengembangan kanker kulit (Sander et al., 2003; Pfeifer dan Besaratinia, 2012; D'Orazio et al., 2013; Kamarulzaman et al., 2017; Pavel dkk., 2017; Nagapan dkk., 2018).

Jenis kanker kulit yang timbul karena paparan berlebih untuk sinar UV adalah melanoma. Melanoma terjadi ketika melanosit tumbuh di luar kendali karena mutasi pada DNA. Meskipun melanoma hanya menyumbang kurang dari 10 % dari semua kanker kulit, itu berkontribusi pada sebagian besar kulit kematian terkait kanker. Ini dapat dikaitkan dengan melanoma potensi metastasis yang tinggi dan resistensi terhadap terapi (Pfeifer dan Besaratinia, 2012; Masyarakat Kanker Amerika, 2020). Oleh karena itu, strategi kemoprevensi melanoma lebih cocok dalam mengatasi kejadian penyakit ini (Chhabra et al., 2017).

Sejalan dengan strategi kemoprevensi melanoma, ide untuk menggunakan lokalKosmetikproduk yang memiliki potensi penurunan ros generation dan mutasi pada kulit manusia muncul. Produk ini, pendinginan tradisional bubuk beras, lebih dikenal sebagaibedak sejukdi Malaysia, adalah kosmetik berbasis beras fermentasi tradisional hasil. Butir beras yang telah difermentasi sebelumnya kajian untuk menghasilkan bedak sejuk adalah Oryza sativa ssp. indica (Indica) dan Oryza sativa ssp. japonica (Japonica) (Dzulfakar et al., 2015a). Butir beras Indica panjang, rata, ramping, mudah hancur dan memiliki kandungan amilosa yang tinggi sementara butiran beras Japonica pendek, bulat, jangan pecah mudah, dan memiliki kandungan amilosa yang rendah (Ricepedia, n.d.). Bedak sejuk sebagai produk fermentasi gabah padi adalah dalam bentuk tetesan air atau pastilles berbentuk kerucut. Ketika pastilles ini dicampur dengan air dan diterapkan ke kulit sebagai masker wajah semalaman, itu memberikan efek pendinginan. Ini telah didukung oleh kesaksian pengguna dari generasi ke generasi, yang diklaim bedak sejuk mampu mempercantik serta memutihkan kulit (Dzulfakar et al., 2015b; Dzulfakar et al., 2016c; Johar dkk., 2018). Namun, kesaksian-kesaksian ini tidak pernah diuji dalam pengaturan laboratorium terutama pada efeknya terhadap kulit sel normal dan ganas.

Oleh karena itu, penelitian kami bertujuan untuk menentukan efek daribedak sejukterbuat dari beras Indica dan Japonica subspesies menggunakan sel melanoma B164A5 yang diinduksi UVB, serta mengidentifikasiAntioksidankapasitas keduanya jenis bedak sejuk.

Bahan dan Metode

Persiapan Indica dan Japonica bedak sejuk

Sibedak sejukterbuat dari Indica dan Japonica subspesies beras disediakan dengan baik dari Fakultas teknik dan lingkungan binaan, Universitas Kebangsaan Malaysia, 43600 Bangi, Selangor. Secara berurutan untuk menyiapkan butir beras Bedak sejuk, Indica dan Japonica direndam dalam air keran dengan perbandingan 1:1 (b/v) secara terpisah wadah tertutup yang tidak disterilkan. Butir beras kemudian diizinkan untuk menjalani fermentasi alami untuk 14 hari pada suhu sekitar. Pada hari ke 14, nasi biji-bijian disaring menggunakan kain muslin dan direndam lagi dalam kumpulan air baru (w / v). Perendaman butiran beras diulang enam kali setiap 14 hari, membawa proses perendaman keseluruhan hingga 84 hari. Setelah 84 hari, pasta beras yang dihasilkan dari masing-masing subspesies beras adalah dikumpulkan dan dikeringkan dalam oven untuk menghasilkan bubuk bentuk bedak sejuk (Dzulfakar et al., 2016a). Bedak sejuk kemudian disimpan di lemari es pada jam 4o C sampai lebih jauh pakai. Sebelum percobaan, bedak sejuk dibubarkan dalam air suling dan disaring melalui Millipore 0,22 μm filter jarum suntik untuk sterilisasi.

Kultur sel

Garis sel melanoma murine B164A5 adalah dibeli dari Koleksi Eropa yang Diautentikasi Kultur Sel (ECACC). Sel-sel itu dikultur di Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) diperkaya dengan 10% serum sapi janin (FBS), 1% Campuran Penisilin-Streptomisin (Pena/Strep, 10.000 IU/ml), glukosa dan L-glutamin. Sel-sel itu kemudian diinkubasi dalam suasana lembab di 37o C dalam CO2 5%. Ketika konfluensi sel mencapai 80%, sel-sel itu sub-budaya (Public Health England, n.d.). Sebelum pengujian dilakukan, kurva pertumbuhan B164A5 sel diplot. Dari kurva pertumbuhan, penggandaan waktu 24 jam diperoleh, di mana temuan ini adalah didukung oleh studi dari Danciu et al., (2013).

Uji MTT

Sitotoksisitas kedua jenisbedak sejukterhadap sel B164A5 dievaluasi melalui 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium uji viabilitas sel bromida (MTT) sesuai dengan metode ini dari Mosmann (1983) dengan sedikit modifikasi. 200 μL dari 5 x 104 sel-sel diunggulkan dalam pelat bawah datar 96-sumur dan diinkubasi selama 24 jam dalam suasana lembab pada 37o C dalam CO2 5%. Setelah 24 jam inkubasi, media dibuang dan diganti dengan PBS 200 μL. Kemudian, sel-sel tersebut terpapar radiasi UVB pada 30 mJ/ cm2 selama 36,4 detik (Lin et al., 2002). Tepat setelah Paparan UVB, PBS dibuang dan sel-selnya diobati dengan kedua jenis bedak sejuk dalam serially diluted konsentrasi 6,25, 12,5, 25, 50 dan 100 g/L. Kalau kontrol positif, sel-sel diperlakukan dengan menadione dalam konsentrasi encer serial 0, 0625, 0, 125, 0, 25, 0,5 dan 1 mM menurut Basri et al., (2015), sementara kontrol negatif adalah sel-sel yang tidak diobati. Berikut pengobatan, sel-sel diinkubasi selama 24 jam lagi. Setelah masa inkubasi, 20 μL sebesar 5 mg/mL MTT solusi ditambahkan ke setiap sumur dan diinkubasi untuk 4 Jam. Kemudian, 190 μL campuran dibuang dari masing-masing sumur dan 200 μL DMSO ditambahkan dan diinkubasi untuk 15 menit. Akhirnya, piring dikocok selama 5 menit dan pembacaan absorbansi diambil pada 570 nm menggunakan pembaca pelat mikro. Persentase kelangsungan hidup sel adalah dihitung menggunakan rumus berikut: Viabilitas sel (%)= (Od rata-rata sel yang dirawat)/(Rata-rata OD kontrol negatif) ×100

Uji Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)

SiAntioksidankapasitas dari kedua jenisbedak sejukditentukan melalui uji FRAP seperti yang dijelaskan oleh Benzie dan Strain (1996). Ini adalah metode untuk mengevaluasi kekuatan antioksidan melalui pengurangan besi (Fe3+) ke ion besi (Fe2+) pada pH rendah yang menghasilkan pembentukan kompleks ferrous-tripyridyltriazine berwarna. Pertama, reagen kerja FRAP disiapkan baru oleh pencampuran buffer asetat (30 mM, pH 3,6), besi (III) klorida (FeCl3 ) solusi (20 mM) dan larutan TPTZ (10 mM) dalam rasio 10:1:1. Reagen kerja FRAP yang disiapkan kemudian disimpan di bak air pada 37o C dan dilindungi dari ringan. Ini diikuti oleh persiapan besi (II) sulfat (FeSO4 ) kurva kalibrasi menggunakan encer serially konsentrasi yang berkisar antara 100 – 1.000 μM. asam digunakan sebagai kontrol positif dan telah disiapkan menggunakan konsentrasi encer serial yang berkisar dari 3.125 – 50 μg/mL, dalam gelap (Hasiah et al., 2011). Adapun langkah-langkah eksperimental, 50 μL FeSO4, askorbat asam dan kedua jenis bedak sejuk ditambahkan ke dalam sumur yang dialokasikan dalam piring 96 sumur. Setelah itu, 175 μL dari reagen kerja FRAP yang dihangatkan ditambahkan kemudian ke dalam setiap sumur. Kemudian, piring diinkubasi pada 37o C untuk 5 menit. Akhirnya, pembacaan absorbansi diambil di 595 nm menggunakan pembaca pelat mikro dan nilai FRAP dinyatakan sebagai antioksidan setara asam askorbat kapasitas (AEAC) (Gashahun dan Solomon, 2019).

bubuk cistanche

Analisis statistik

Perangkat lunak SPSS v25 digunakan untuk presentasi data. Setiap data pengujian dari tiga eksperimen independen (n = 3) dinyatakan sebagai rata-rata ± SEM. Tes ANOVA satu arah digunakan untuk perbandingan antar sarana. Alpha yang digunakan adalah 0,05 dan p-value< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

Hasil

Sitotoksisitas Indica dan Japonica bedak sejuk

Sitotoksisitas kedua jenisbedak sejukAdalah dievaluasi terhadap sel melanoma B164A5 yang diinduksi UVB melalui uji MTT. Menadione, yang digunakan sebagai kontrol positif menunjukkan sitotoksisitas dengan IC50 0,04 ± 0,02 mM (Gambar 1). Setiap konsentrasi menadione signifikan secara statistik (p< 0.05)="" when="" compared="" with="" the="" negative="" control.="" whereas="" indica="" and="" japonica="" bedak="" sejuk="" showed="" no="" cytotoxicity,="" hence="" no="" ic50="" values="" were="" obtained.="" both="" types="" of="" bedak="" sejuk="" had="" a="" reduction="" of="" cell="" viability="" at="" the="" beginning="" but="" gradually="" increased="" as="" the="" concentration="" increased="" (figures="" 2="" and="" 3).="" in="" addition,="" all="" concentrations="" of="" both="" types="" of="" bedak="" sejuk="" were="" not="" statistically="" significant="" (p="">0,05) jika dibandingkan dengan kontrol negatif. Hasilnya menunjukkan bahwa keduanya jenis bedak sejuk tidak sitotoksik terhadap UVB-induced Sel melanoma B164A5.

Kapasitas antioksidan Indica dan Japonica bedak sejuk

Kemampuan mengurangi kedua jenis bedak sejuk sebagaiAntioksidanditentukan melalui FRAP Pengujian kadar logam. Nilai-nilai FRAP dinyatakan sebagai asam askorbat kapasitas antioksidan yang setara (AEAC) dalam satuan μg AA (asam askorbat)/g bedak sejuk. Nilai FRAP untuk 50 dan 100 g/L Indica bedak sejuk sebesar 0,003 ± 0,001 dan 0,004 ± masing-masing 0,0003 μg AA/g bedak sejuk (Gambar 4). Adapun Japonica bedak sejuk, nilai FRAP untuk 50 dan 100 g/L adalah 0,004 ± 0,0003 dan 0,01 ± 0,0007 μg AA/g daribedak sejukmasing-masing, menunjukkan cara yang bergantung pada dosis (Gambar 4).

Ketika nilai FRAP Indica bedak sejuk untuk 50 dan 100 g / L dibandingkan, itu tidak secara statistik signifikan (p = 0, 803). Tapi, nilai-nilai FRAP japonica bedak sejuk untuk 50 dan 100 g/L secara statistik signifikan (p = 0,006) jika dibandingkan. Selain itu, nilai FRAP dari Japonica bedak sejuk untuk 100 g/L menunjukkan yang tertinggi kapasitas antioksidan secara statistik signifikan ketika dibandingkan dengan nilai FRAP Indicabedak sejukuntuk keduanya 50 (p = 0,001) dan 100 g/L (p = 0,003).

Diskusi

Akhir-akhir ini, penggunaan produk alami dalam perawatan kulit telah menunjukkan tren yang meningkat. Sebagian besar dari ini produk alami telah terbukti memilikiAntioksidankarakteristik selain memberikan perlindungan kepada kulit terhadap sinar UV (Abdul Wahab et al., 2014). Satu contoh produk tersebut adalah bedak sejuk, yang difermentasi produk kosmetik berbasis beras. Selama beberapa generasi,bedak sejukpastilles dicampur dengan air dan dioleskan pada topikal pada kulit seseorang sebagai masker wajah semalaman (Dzulfakar et al., 2016c; Johar dkk., 2018).

Dalam fermentasi biji-bijian beras untuk menghasilkan bedak sejuk, bakteri asam laktat (LAB) biasanya terlibat, bersama jamur dan ragi (Dzulfakar et al., 2015a; Dzulfakar et al., 2016b). PenggunaanKosmetikProduk yang memiliki hasil komponen padi fermentasi LAB ini dalam ekspansi dan kelancaran produk juga sebagai perasaan basah saat aplikasi pada kulit (Sawaki dkk., 2010). Pengalaman serupa juga dilaporkan olehbedak sejukpengguna, dimana aplikasi bedak sejuk menghasilkan perasaan sejuk (Dzulfakar et al., 2015a). Ada juga hubungan yang menarik antara kulit dan fermentasi oleh LAB, di mana LAB air perendaman yang digunakan selama fermentasi butiran beras, mengandung asam laktat dan asam amino lainnya yang berkontribusi untuk hidrasi kulit. Manfaat ini membuat LAB berendam air bermanfaat sebagai sumber produk kosmetik. Oleh karena itu, kombinasi substrat atau medium seperti butiran beras dan strain LAB dapat membawa efek kosmetik seperti efek antioksidan, kontrol pH dan pencegahan stres sel (Izawa dan Sone, 2014). Manfaat ini sejalan dengan strategi kemoprevensi melanoma. Namun, bedak sejuk belum diselidiki karena efeknya pada ganas sel-sel kulit di laboratorium. Oleh karena itu, sebagai pendahuluan studi untuk agen kemoprevensi melanoma potensial, sel melanoma murine B164A5 yang telah Uvb-induced adalah model kanker yang cocok.

Pertama, dalam uji MTT, ditemukan bahwa Indica dan Japonicabedak sejuktidak sitotoksik terhadap Sel melanoma B164A5 yang diinduksi UVB. Namun, itu mencatat bahwa ada penurunan viabilitas sel pada tingkat yang lebih rendah konsentrasi bedak sejuk, diikuti dengan peningkatan dalam viabilitas sel pada konsentrasi bedak sejuk yang lebih tinggi. Penurunan viabilitas sel ini dapat dikaitkan dengan fakta bahwa sinar UVB bersifat sitotoksik terhadap sel, dalam hal ini kasus, sel B164A5 (Pavel et al., 2017). Pada waktu bersamaan, konsentrasi bedak sejuk yang lebih rendah tidak cukup untuk meningkatkan jumlah sel yang telah diinduksi UVB. Terlepas dari itu, penurunan viabilitas sel tidak jatuh di bawah tanda 50% dan karenanya, tidak ada IC50 yang dapat diperoleh untuk kedua jenis bedak sejuk. Akibatnya, dua dari yang lebih tinggi dosis, 50 g/L dan 100 g/L dipilih sebagai pengobatan dosis untuk pengujian berikutnya.

Dalam uji FRAP, ditemukan bahwa Japonica bedak sejuk memiliki yang lebih tinggiAntioksidankapasitas dibandingkan dengan itu dari Indicabedak sejuk. Perbedaannya bisa dijelaskan oleh fakta bahwa butiran beras Japonica dibudidayakan di daerah beriklim sedang dan lebih dingin di Asia, sedangkan beras Indica biji-bijian dibudidayakan di seluruh Asia tropis (Garris et al., 2005). Suhu lingkungan memainkan hal yang penting peran dalam kegiatan antioksidan tanaman, dan tanaman yang dibudidayakan dalam cuaca yang lebih dingin memiliki antioksidan yang lebih jelas kegiatan yang bertentangan dengan tanaman yang dibudidayakan di cuaca yang lebih hangat. Peningkatan aktivitas antioksidan ini dapat dikaitkan dengan produksi lebih banyak fitokimia karena tanaman mengalami stres dalam cuaca yang lebih dingin (Kumar et al., 2017).

Ada juga produk beras fermentasi lainnya yang telah menunjukkan hasil yang menjanjikan. Pertama, ada Galactomyces ferment filtrate (GFF) yang merupakan produk sampingan fermentasi beras oleh ragi Galactomyces. The GFF ekstrak mengandung campuran unik vitamin, mineral, peptida kecil dan oligosakarida yang digunakan sebagaiKosmetikbahan-bahan dalam produk perawatan kulit. Ekstrak telah menunjukkanAntioksidankarakteristik dengan melindungi melanosit epidermis manusia normal (NHEM) dari stres oksidatif (Woolridge Cooper, 2018). Temuan ini dari GFF mirip dengan temuanbedak sejukdalam hal ini belajar.

Dedak padi juga memiliki aktivitas antioksidan yang kuat untuk titik yang menghasilkan sitotoksisitas terhadap melanosit. Tapi, ketika dedak padi difermentasi, sitotoksisitasnya dari ekstrak dedak padi terhadap sel B16F1 telah Dihilangkan. Ini menunjukkan bahwa fermentasi otak beras menghasilkan senyawa bermanfaat baru dengan biologis fungsi, meskipun senyawa yang tepat belum dijelaskan (Chung et al., 2009).

Akhirnya, nasi merendam air dari bubukbedak sejuksebenarnya mengandung asam amino yang bisa bermanfaat untuk aplikasi kosmetik. Ada 16 dari 17 asam amino yang terdeteksi di Indica bedak sejuk sebagai serta airnya yang merendam. Asam glutamat adalah yang tertinggi konsentrasi asam amino yang ditemukan di kedua Indica bedak sejuk dan air rendamannya (Johar et al., 2018). Glutamin (turunan asam glutamat), bersama arginin, tirosin dan lisin yang terdeteksi pada bedak sejuk dan perendamannya air adalah salah satu asam amino utama yang digunakan dalam industri kosmetik (Ha et al., 2018). Selain itu, asam amino diKosmetikproduk berfungsi sebagaiAntioksidan(Ivanov et al., 2013) dan kandungan asam amino dalam Indica bedak sejuk jauh lebih tinggi dibandingkan dengan airnya yang basah kuyup. Oleh karena itu, aplikasi bedak sejuk lebih efektif dalam hal kadar asam amino jika dibandingkan dengan air perendaman (Johar dkk., 2018).

Singkatnya, Indica dan Japonicabedak sejukperlu untuk diselidiki lebih lanjut sebelum mereka dapat dikatakan memiliki potensi sebagai agen kemoprevensi melanoma yaitu mampu (1) mencegah melanoma, (2) mencegah perkembangan melanoma ganas dari lesi pra-ganas atau (3) mencegah terulangnya kembali melanoma setelah berhasil pengobatan melanoma (Chhabra et al., 2017).