Pengaruh Terapi Cistanche Deserticola Terhadap Defekasi Pada Tikus Sembelit Pikun Model
Mar 27, 2022
Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791
Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang
Abstrak
LATAR BELAKANG
Konstipasi merupakan salah satu penyakit fungsional saluran cerna kronis. Ini sangat mempengaruhi kualitas hidup. Cistanche deserticola (C. deserticola) dapat mengobati sembelit dengan jelas, tetapi mekanismenya belum diklarifikasi. Kami menduga bahwa mekanisme itu meningkatkan motilitas usus dengan merangsang sel Cajal interstitial (ICC). Aktivasi reseptor C-kit pada permukaan ICC terkait erat dengan fungsi ICC, dan jalur pensinyalan faktor sel induk (SCF)/C-kit memainkan peran penting di dalamnya. Untuk menyelidiki mekanisme bagaimana C. deserticola mengobati sembelit, penelitian ini bertujuan untuk membangun model sembelit pada tikus dan mengeksplorasi peran jalur pensinyalan SCF/C-kit dalam pengobatan.
TUJUAN
Untuk mengeksplorasi jalur pensinyalan SCF/C-kit dalam peran C. deserticola untuk pengobatan sembelit oleh model tikus sembelit.
METODE
Empat puluh delapan ekor tikus Sprague–Dawley berumur 8-bulan dibagi menjadi 4 kelompok dengan metode randomweight: Kelompok normal (n=12), kelompok model (n=12), kelompok C. deserticola (n=12) dan grup pemblokir (n=12). Kelompok normal menerima bygavage salin normal; kelompok model menerima loperamide dengan gavage; kelompok blocker menerima loperamide dan C. deserticola dengan gavage, dan STI571 disuntikkan secara intraperitoneal. Selama perlakuan, berat badan, butiran tinja, dan kualitas tinja dicatat setiap 10 hari. Pada hari ke 20 setelah model induksi, jaringan usus besar dari masing-masing kelompok dikeluarkan. Pewarnaan hematoxylin dan eosin digunakan untuk mengamati perubahan patologis. Tingkat ekspresi gen SCF, C-kit, dan Aquaporin dideteksi dengan imunohistokimia, western blotting, dan reaksi berantai polimerase kuantitatif real-time. Mitokondria epitel kolon dan sel goblet diamati dengan mikroskop elektron transmisi.
HASIL
Dibandingkan dengan kelompok normal, seiring dengan kemajuan pengobatan, berat badan tikus pada kelompok model dan blocker menurun secara signifikan, berat tinja menurun, dan kualitas tinja menjadi kering (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" membalikkan="" penurunan="" berat="" badan="" dan="" berat="" tinja="" dan="" meningkatkan="" kualitas="" tinja.="" analisis="" histopatologi="" menunjukkan="" bahwa="" epitel="" mukosa="" kolon="" pada="" kelompok="" model="" tidak="" lengkap,="" dan="" susunan="" kelenjar="" tidak="" teratur="" atau="" rusak.="" pengobatan="" dengan="" c.="" deserticola="" meningkatkan="" integritas="" dan="" kontinuitas="" sel="" epitel="" dan="" pengaturan="" kelenjar="" yang="" teratur.="" agen="" penghambat="" menghambat="" efek="" imunohistokimia="" c.="" deserticola="" dan="" reaksi="" berantai="" polimerase="" kuantitatif="" real-time="" menunjukkan="" bahwa="" ekspresi="" scf="" dan="" c-kitprotein="" atau="" gen="" dalam="" jaringan="" kolon="" kelompok="" model="" menurun="" (p=""><0,05), sedangkan="" pengobatan="" dengan="" c.="" deserticola="" meningkatkan="" ekspresi="" protein="" atau="" gen="" (p=""><0,05). western="" blotting="" menunjukkan="" bahwa="" ekspresi="" aquaporin="" apq3="" meningkat,="" sedangkan="" ekspresi="" cx43="" menurun="" pada="" kelompok="" model.="" pengobatan="" dengan="" c.="" deserticolain="" menghambat="" ekspresi="" apq3="" dan="" meningkatkan="" ekspresi="" cx43.="" mikroskop="" elektron="" transmisi="" menunjukkan="" bahwa="" mitokondria="" epitel="" kolon="" pada="" kelompok="" model="" membengkak="" dan="" tersusun="" tidak="" teratur,="" dan="" mikrovili="" jarang.="" kondisi="" lebih="" baik="" pada="" kelompok="" c.="" deserticola.="" tikus="" yang="" diobati="" dengan="" penghambat="" sti571="" menegaskan="" bahwa="" pemblokiran="" jalur="" scf/c-kit="" menghambat="" perbaikan="" konstipasi="" oleh="" c.="">
KESIMPULAN
C. deserticola meningkatkan buang air besar pada tikus dengan konstipasi, dan jalur pensinyalan SCF/C-kit, yang merupakan penghubung utama fungsi ICC, memainkan peran penting dalam pengobatan.
Kata Kunci:Cistanche deserticola; sembelit pikun; Faktor sel induk; C-kit
bahan baku cistanche segar
PENGANTAR
Konstipasi senilis (SC) adalah salah satu penyakit fungsional gastrointestinal kronis yang umum pada pasien geriatri, yang menginduksi atau memperburuk kejadian serebrovaskular dan penyakit lainnya dan secara serius mempengaruhi kualitas hidup populasi lanjut usia[1,2].Menurut pengobatan tradisional Tiongkok, penyebab utama Etiologi dan Patogenesis SCare panas gastrointestinal, defisiensi Yin dan Jin, dan de-wetting usus [3,4], sedangkan Cistanche deserticola (C. deserticola) dapat menghangatkan ginjal dan mengendurkan usus. Para peneliti telah melaporkan bahwa efek usus perbaikan motilitas dan pengobatan SC jelas, tetapi mekanismenya belum diklarifikasi [5,6]. Interstitial Cajalcells (ICCs) adalah jenis sel mesenkimal khusus di saluran pencernaan. Aktivasi reseptor C-kit pada permukaan ICCs terkait erat dengan proliferasi, diferensiasi, dan fungsi sel. ICCs berpartisipasi dalam patogenesis banyak disfungsi motorik gastrointestinal [7,8]. Aktivasi C-kit tergantung pada pengikatan ligan stem cell factor (SCF)[9]. Untuk menyelidiki efek dan mekanisme kerja C. deserticola pada SC, penelitian ini bertujuan untuk membangun model SC pada tikus yang diinduksi oleh loperidol untuk mengeksplorasi peran jalur pensinyalan SCF/C-kit dalam pengobatan sembelit oleh C. deserticola.
BAHAN DAN METODE
Bahan percobaan
Hewan percobaan:Hewan percobaan adalah 48 ekor tikus jantan Sprague Dawley berumur 8-bulan dengan berat 500-550 g; semua dibeli dari Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Tikus dibesarkan di laboratorium hewan Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd., diberi cahaya siang dan malam normal, makanan dan minuman. Semua prosedur sesuai dengan pedoman manajemen yang dikeluarkan oleh Komite Etik Rumah Sakit Pengobatan Tradisional Tiongkok Chongqing.
Reagen primer:Reagen utama termasuk loperamide (Sigma, St. Louis, MO, Amerika Serikat), C. deserticola dari Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 dari Chinese Selleck Co. Ltd., dan SCF, C-kit, connexin 43 (Cx43), aquaporin 3 (AQP3) dan antibodi -aktin (Abcam, Cambridge, MA, Amerika Serikat), PrimeScript II 1st Strand cDNA Kit Sintesis dan Premix Taq™ (Ex Taq™ Versi 2.0)(Takara Co. Ltd., Jepang).
suplemen ekstrak herbal cistanche
Metode
Persiapan dan pengelompokan model SC:Untuk menghindari pengaruh faktor perancu seperti berat badan terhadap hasil percobaan, tikus dikelompokkan secara acak dengan metode block random grouping. Empat puluh delapan tikus diberi makan secara adaptif selama 1 minggu, dan tikus-tikus itu diberi nomor berdasarkan berat dari ringan sampai berat. Berdasarkan urutan berat badan, tikus dibagi menjadi 12 zona (berat tikus di setiap zona sama), dengan 4 ekor di setiap zona. Ke-12 zona tersebut dibagi menjadi 4 kelompok masing-masing 12 (normal, model, C. deserticola, dan blocker). Tikus dalam kelompok model diberi loperamide (0.0625/100 g, 10 mL/kg) secara gavage. Dosis gavage pertama digandakan, dan obat diberikan pada pukul 10:00 setiap hari, sekali sehari selama 20 hari berturut-turut. Kelompok normal diberi jumlah normal saline yang sama secara gavage. Selain itu, kelompok model diperlakukan dengan C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) dengan gavage. Kelompok blocker diberi C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 mL/kg) secara gavage dan STI571 (25 mg/mL, 1 mL/kg) dengan injeksi intraperitoneal. Selama percobaan, berat badan, berat tinja, dan kondisi tinja dicatat setiap 10 hari. Tidak ada kematian akibat kecelakaan yang terjadi pada tikus mana pun. Dua puluh hari kemudian, tikus dibunuh, dan jaringan kolon diambil untuk pemeriksaan dan pengawetan nitrogen cair. Bagian yang tersisa diperbaiki dan disematkan.
Analisis histopatologi:Tikus yang dipuasakan semalaman dibius dengan injeksi intraperitoneal dengan 7 persen chloral hydrate (5 mL/kg) pada hari berikutnya. Abdomen dibuka untuk memisahkan jaringan kolon, dan 8-10 mm kolon dibuang. Isi usus dihilangkan dengan mengocok perlahan dalam polibutilena suksinat yang telah didinginkan sebelumnya dan difiksasi selama 24 jam dalam larutan fiksatif paraformaldehida 4 persen. Penyematan parafin konvensional dilakukan. Bagian jaringan (5 m) dihilangkan untuk pewarnaan hematoxylin dan eosin, dan morfologi histopatologi diamati di bawah mikroskop.
Deteksi ekspresi SCF dan C-kit dengan pewarnaan imunohistokimia:Jaringan parafin yang diperiksa dengan histopatologi di atas dipotong, direhidrasi dengan etanol gradien xilena dewaxed, antigen diperbaiki dengan panas, dan disegel selama 1 jam dengan serum kambing pada suhu kamar. Antibodi primer SCF dan C-kit ditambahkan tetes demi tetes, dan jaringan disimpan semalaman pada suhu 4 derajat. Setelah dibilas dengan polibutilen suksinat, horseradish peroksidase diteteskan ke label antibodi sekunder, dibilas dengan polibutilen suksinat selama 5 menit, teteskan 2,4-larutan kromogen asam diaminobutirat, celup ulang dengan hematoksilin, dehidrasi alkohol dengan gradien terbalik, ditransparasi dengan xilena dan netral segel resin. Secara mikroskopis, nukleus berwarna biru keunguan, dan produk hasil positif berupa partikel kuning kecoklatan atau kuning.
Deteksi ekspresi mRNA C-kit dalam jaringan kolon dengan real-time-quantitativepolymerase chain reaction (RT-qPCR):Jaringan kolon tikus beku digerus dengan homogenizer, dan ditambahkan 1 mL RNAiso Plus. Total RNA jaringan kolon diekstraksi dengan metode kloroform/isopropanol, dan kualitas RNA dideteksi dengan elektroforesis gel. Setelah diidentifikasi oleh bio-Rad gel imager, 1 ug RNA ditranskripsi balik menjadi cDNA oleh Takara PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit. Menurut database NCBI Gene ID: 64030, wilayah CDS dari gen C-kit ditemukan dan digabungkan dengan NCBI Primer-Blast design Primer sequence, yang disintesis oleh Sangon Biotech Co. Ltd, C-kit primer sequence sense strand 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', antisense strand 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - actin sense strand 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', antisense strand 5'-CTGTGTTGGATAGAGGTCTT-3'. Amplifikasi PCR dilakukan pada instrumen PCR Bio-RadCFX90 Real-Time. Kondisi untuk pengujian PCR adalah denaturasi awal pada 95 derajat selama 5 menit, 30 siklus 95 derajat selama 30 detik, 60 derajat selama 30 detik dan 72 derajat selama 1 menit diikuti dengan perpanjangan akhir pada 72 derajat selama 10 menit. 2-ΔΔCt (ΔCt=Nilai Ct - -nilai Ct aktin) diambil untuk menganalisis ekspresi gen relatif.
Deteksi tingkat ekspresi protein Cx43 dan AQP3 di jaringan kolon dengan Western blotting:Sekitar 1 cm jaringan kolon beku dikumpulkan dan dilisiskan dengan cairan pirolisis kuat RIPA (100 L). Jaringan dihomogenkan dengan glasshomogenizer sebanyak 20 kali dan dipindahkan ke tabung sentrifus 1,5 mL. Supernatan diekstraksi setelah disentrifugasi pada 12000 rpm pada 4 derajat selama 5 menit, dan konsentrasi protein total dalam supernatan ditentukan dengan metode BCA. Kami menghilangkan 25 ug protein terdenaturasi untuk melakukan elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida dan kemudian mentransfer protein dalam gel ke membran polivinilidena fluorida pada arus konstan 200 mA kemudian disegel dengan 5 persen cairan susu skim selama 2 jam pada suhu kamar. Antibodi primer yang sesuai diencerkan dengan cairan penyegel, diinkubasi pada suhu 4 derajat semalaman, kemudian dicuci resistensi membran dan ditambahkan antibodi kedua. Setelah menambahkan cairan ECL, mereka ditempatkan di bawah pengukur paparan untuk pengujian dengan analisis densitas optik.
Mikroskop elektron transmisi:Kami mengambil sekitar 1 cm jaringan kolon proksimal, memfiksasinya dalam 2,5 persen glutaraldehid selama 24 jam, mengeringkannya dengan aseton bergradasi, menyematkannya di Epon812, dan memotong bagian ultratipis 50 nm pada ultramikrotom. Bagian diwarnai dengan uranium dioksida asetat dan cairan pencelupan timbal sitrat pada suhu kamar selama 10 menit. Kami mengamati vili kolon, mitokondria sel epitel, dan sel goblet di bawah mikroskop elektron transmisi Philips Tecnai-10.
Analisis statistik
Perangkat lunak SPSS 19.0 digunakan untuk analisis data, dan perangkat lunak GraphPad Prism8.4 digunakan untuk merencanakan hasil. Uji Shapiro-Wilk digunakan untuk pengujian normalitas. Data berdistribusi normal direpresentasikan dengan mean ± SD. Item kesalahan digunakan untuk mewakili mean ± SD hemoglobin setelah pengobatan. Uji-t siswa digunakan untuk perbandingan antara dua kelompok. Analisis varians digunakan untuk perbandingan antara beberapa kelompok. Metode Student-Newman-Keuls digunakan untuk perbandingan antara beberapa kelompok berpasangan, dan uji Dunnett digunakan untuk mengukur perbedaan antara masing-masing kelompok eksperimen dan kelompok kontrol secara berurutan. Data terkait diukur dengan beberapa titik waktu, dan pengukuran berulang analisis data varians diadakan. Jika uji kebulatan menunjukkan P > 0.{{10}}5, digunakan analisis varians data pengukuran berulang. Jika P < 0,05,="" persamaan="" estimasi="" umum="" diambil.="" data="" yang="" tidak="" sesuai="" dengan="" distribusi="" normal="" diwakili="" oleh="" m="" (p25,="" p75),="" dan="" uji="" rank-sum="" kruskal-wallis="" h="" digunakan="" untuk="" perbandingan="" antar="" kelompok.="" uji="" 2="" digunakan="" untuk="" membandingkan="" antar="" kelompok="" ketika="" data="" merupakan="" data="" tidak="" beraturan,="" dan="" uji="" 2="" pearson="" digunakan="" jika="" proporsi="" sel="" dengan="" frekuensi="" teoritis="">< 5="" adalah="">< 20="" persen="" .="" jika="" proporsi="" sel="" dengan="" frekuensi="" teoretis=""><5 lebih="" besar="" dari="" atau="" sama="" dengan="" 20="" persen,="" uji="" eksak="" fisher="" digunakan.="" p="">< 0,05="" digunakan="" untuk="" menentukan="" bahwa="" perbedaan="" itu="" signifikan="" secara="">
Gambar 1 Perubahan histopatologis kolon.
HASIL
Kondisi umum
Satu hari setelah gavage loperamide dibandingkan dengan kelompok normal, berat badan dan berat tinja pada kelompok model menurun secara signifikan (P < {{0}}.05),="" tetapi="" tidak="" ada="" perbedaan="" yang="" signifikan="" dalam="" kualitas="" tinja.="" skor="" (p=""> 0,05). Perlakuan C. deserticola pada kelompok model memperlambat penurunan berat badan dan berat feses (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Histopatologi kolon
Pewarnaan hematoxylin dan eosin pada jaringan kolon tikus ditunjukkan pada Gambar 1. Pada kelompok normal, vili usus utuh, mukosa usus utuh dan kontinu, sel dan kelenjar tersusun teratur. Mukosa dan submukosa tidak terinfiltrasi sel radang, dan struktur jaringan normal. Pada kelompok model, vili usus dan mukosa sebagian besar hancur, vili lokal terlepas dan tersusun longgar, dan sebagian struktur kelenjar menghilang. Pada kelompok C. deserticola, pewarnaan histopatologis lebih sedikit dibandingkan dengan kelompok model, tetapi ada nekrosis pada beberapa sel goblet. Setelah injeksi intraperitoneal pada kelompok blocker, dibandingkan dengan kelompok C.deserticola, masih ada kehilangan vili usus lokal, dan ada fraktur dan hilangnya mukosa usus.
Gambar 2 Ekspresi faktor sel induk dan rasio kepadatan optik relatif dalam jaringan kolon dengan deteksi imunohistokimia.
Deteksi ekspresi faktor sel induk dan protein C-kit dengan pewarnaan imunohistokimia
Pewarnaan imunohistokimia menunjukkan bahwa SCF dan C-kit diekspresikan pada kolon kelompok kontrol. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, ekspresi SCF dan C-kit pada kelompok model menurun secara signifikan (P < 0.05).="" dibandingkan="" dengan="" kelompok="" model,="" ekspresi="" scf="" dan="" c-kit="" pada="" kelompok="" c.="" deserticola="" meningkat="" secara="" signifikan="" (p="">< 0.05).="" tidak="" ada="" perbedaan="" ekspresi="" scf="" dan="" c-kit="" antara="" kelompok="" blocker="" dan="" model="" (p=""><0,05, gambar="" 2="" dan="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >{}.05). Hasil ini menunjukkan bahwa ekspresi C-kit yang disesuaikan oleh C. desertico berpartisipasi dalam perbaikan sembelit, dan penghambat menghambat kemanjuran C. gurun pasir.
manfaat cistanche salsa
blotting barat
Western blotting menunjukkan bahwa protein AQP3 diekspresikan pada tingkat yang rendah pada kelompok kontrol normal, sementara itu meningkat secara signifikan pada kelompok model dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 5) (P < 0.05)="" .="" ekspresi="" protein="" aqp3="" menurun="" setelah="" pengobatan="" dengan="" c.="" deserticola,="" dan="" efek="" penghambatan="" c.deserticola="" pada="" ekspresi="" aqp3="" dihambat="" oleh="" pengobatan="" blocker="" (p=""><0,05). ekspresi="" cx43="" adalah="" kebalikan="" dari="" aqp3.="" hasil="" ini="" menunjukkan="" bahwa="" efek="" farmakologi="" c.="" deserticola="" pada="" tikus="" dengan="" sc="" dicapai="" dengan="" mempromosikan="" ekspresi="" cx43="" dan="" menghambat="" ekspresi="" aqp3="" (gambar="">
Mikroskop elektron transmisi
Setelah induksi loperamide, pembengkakan mitokondria dan autophagy terjadi pada beberapa sel epitel mukosa kolon pada kelompok model. Jumlah dan panjang mikrovili usus menurun, dan terjadi piknosis sel goblet (Gambar 8). Setelah perawatan dengan C. deserticola, jumlah mikrovili usus meningkat. Mikrovili tersusun rapi, dan strukturnya lengkap. Sel goblet panjangnya lebih pendek, morfologi mitokondria tidak teratur, dan piknosis sel goblet yang parah.
Gambar 3 Ekspresi C-kit dan rasio kepadatan optik relatif dalam jaringan kolon dengan deteksi imunohistokimia.
DISKUSI
Konstipasi sering terjadi pada populasi lansia dan merupakan salah satu gejala umum yang mempengaruhi status kesehatan dan kualitas hidup lansia [10,11]. Dalam pengobatan tradisional Cina, Bai et al [12] percaya bahwa patogenesis dasar SC adalah disfungsi fungsi konduksi usus besar, kegagalan tubuh pikun, hilangnya fungsi hati dan ginjal secara bertahap, kekurangan qi dan darah, dan hilangnya cairan tubuh. , yang menyebabkan tinja kering, mengakibatkan sembelit [13]. SC memberikan tekanan pada pasien dan keluarganya dalam banyak aspek, dan penting untuk mengeksplorasi patogenesisnya.
C. deserticola memiliki fungsi mengencangkan Yang ginjal, bermanfaat bagi darah, dan mengatur kekebalan tubuh[14]. C. deserticola dan ramuan herbal Cina yang mengandungC. deserticola telah banyak digunakan dalam pengobatan sembelit, dan efek klinisnya luar biasa. Du et al [15] menemukan pada model tikus defisiensi Yang dan konstipasi bahwa C. deserticola meningkatkan amplitudo kontraksi kolon yang terisolasi, memperkuat kontraktilitas saluran usus, dan mengembalikan tingkat hormon gastrointestinal ke normal. Selain itu, serat makanan C. deserticola, produk sampingan pengolahan C. deserticola, meningkatkan kapasitas menahan air dari feses dan memiliki keuntungan dari dosis rendah dan efek yang baik dalam menyehatkan usus dan memperbaiki buang air besar [16]. Studi kami menemukan bahwa pengobatan C. deserticola meningkatkan fecalmoisture dan histopatologi kolon tikus dengan sembelit.
ICC ditemukan di seluruh saluran usus dan memainkan peran penting dalam kontrol saraf gerakan usus sebagai alat pacu jantung dan transmisi saraf usus [17]. Reseptor pengkode proto-onkogen tirosin kinase, C-kit, diekspresikan oleh ICC, dan SCF adalah ligan C-kit[18]. Sistem SCF/C-kit sangat penting dalam pengembangan ICCs. Jalur pensinyalan SCF/C-kit telah dianalisis selama pengobatan konstipasi transfer lambat pada tikus dengan akupunktur[19]. Elektroakupunktur di titik Tianshu meningkatkan jumlah ICC usus besar pada tikus yang diobati dengan ACK 2-, meningkatkan ekspresi protein SCF dan C-kit, dan membalikkan fenotipe ICC. Resep untuk menyegarkan qi dan limpa dapat meningkatkan ekspresi ICC di jaringan kolon dan meningkatkan ekspresi mRNA C-kit dan SCF, sehingga memperbaiki gejala konstipasi[20]. Dalam penelitian kami, imunohistokimia menunjukkan bahwa C. deserticola secara signifikan meningkatkan ekspresi SCF dan protein C-kit dalam model tikus SC, dan RT-qPCR menunjukkan bahwa C. deserticola secara signifikan meningkatkan ekspresi C-kitmRNA. C-kit blocker menghambat upregulasi ekspresi SCF dan C-kit yang diinduksi oleh C. deserticola.
Kadar air tinja dan transportasi air kolon terkait erat dengan AQPs, yang memainkan peran penting dalam metabolisme air usus [21]. Dalam sebuah penelitian pada tikus dengan konstipasi transportasi lambat, rebusan defekasi secara signifikan meningkatkan gejala konstipasi dengan mengatur penyerapan air usus melalui penurunan regulasi AQP3 dan AQP4 [22]. Dalam model tikus konstipasi fungsional, mekanisme pengobatan Oral Xiaofu Tongjie Fluid untuk konstipasi fungsional dapat diwujudkan dengan mengatur ekspresi polipeptida usus vasoaktif dan AQP3 di usus besar [23]. Gapjunctions memainkan peran penting dalam memediasi kontraksi sinkron sel otot polos. Cx43 adalah protein terpenting selama proses tersebut[24]. Hilangnya ekspresi Cx43 mungkin sebagian bertanggung jawab untuk disfungsi motorik otot polos [25]. Perbaikan struktur jaringan sistem saraf usus pada tikus dengan konstipasi transit lambat dapat meningkatkan ekspresi Cx43 dll dan gejala sembelit [26]. Hasil ini menunjukkan bahwa peningkatan ekspresi AQP3 menurunkan kadar air tinja, menyebabkan konstipasi, yang mungkin merupakan mekanisme penting dari konstipasi. Ekspresi Cx43 mungkin berhubungan dengan kontraksi otot polos usus dan mengurangi terjadinya konstipasi. Dalam penelitian kami, western blotting menunjukkan bahwa ekspresi Cx43 meningkat dan ekspresi AQP3 dihambat oleh pengobatan C.deserticola, yang mengakibatkan peningkatan kontraksi otot polos dan penurunan penyerapan air, dan pengobatan blocker membalikkan efek ini.
Untuk informasi lebih lanjut, silakan klik di sini.
KESIMPULAN
Kesimpulannya, C. deserticola dapat menghambat ekspresi AQP3 dan meningkatkan ekspresi Cx43 melalui jalur SCF/C-kit, sehingga meningkatkan konstipasi yang diinduksi oleh loperamine dan mengurangi kerusakan jaringan kolon pada tikus tua. Studi ini memberikan dasar teoritis yang baik untuk penggunaan klinis C. deserticola.
