Tindak Lanjut Jangka Panjang Terhadap Imunitas Spesifik Mycoplasma Hyopneumoniae pada Babi yang Divaksinasi

Abstrak

Mycoplasma hypopnea mobile adalah agen utama pneumonia enzootic pada babi. Untuk meminimalkan kerugian ekonomi yang disebabkan oleh penyakit ini, vaksinasi keliling M. hypopnea umumnya dilakukan. Namun, ketahanan imunitas yang disebabkan oleh vaksin M. hyopneumoniae, terutama imunitas seluler, hingga saat penyembelihan belum diteliti. Oleh karena itu, di dua peternakan komersial, 25 ekor babi (n=50) menerima bakterin komersial secara intramuskular pada umur 16 hari. Setiap bulan, keberadaan antibodi serum spesifik M. hyopneumoniae dianalisis dan proliferasi TNF-, IFN-, dan IL-17Produksi subset sel T yang berbeda dalam darah dinilai menggunakan uji recall. Infeksi alami M. hyopneumoniae diasumsikan terjadi di kedua peternakan. Namun, babi yang diteliti tetap negatif terhadap M. hyopneumoniae selama hampir seluruh percobaan. Serokonversi tidak diamati setelah vaksinasi dan semua babi menjadi seronegatif pada umur dua bulan. Kinetika frekuensi subset sel T serupa di kedua peternakan. Mycoplasma hypopnea sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin spesifik seluler ditemukan dalam darah babi dari kedua peternakan pada usia satu bulan tetapi menurun secara signifikan seiring bertambahnya usia. Di sisi lain, proliferasi sel T setelah stimulasi in vitro M. hyopneumoniae diamati hingga akhir masa penggemukan. Selain itu, perbedaan respons imun humoral dan seluler setelah vaksinasi M. hyopneumoniae tidak terlihat antara babi dengan dan tanpa antibodi yang diturunkan dari ibu. Studi ini mendokumentasikan respon imun jangka panjang yang diinduksi oleh vaksin seluler M. hypopnea pada babi penggemukan di bawah kondisi lapangan. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menyelidiki pengaruh infeksi alami terhadap respons ini.

manfaat cistanche untuk pria-memperkuat sistem kekebalan tubuh

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Meningkatkan Imunitas

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Kata kunci

Mycoplasma hyopneumoniae, babi, studi longitudinal, imunitas yang diinduksi vaksin, imunitas yang diperantarai sel

Perkenalan

Salah satu patogen pernapasan terpenting pada babi adalah Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae). Penyakit ini merupakan agen utama pneumonia enzootic, endemik yang terdapat di sebagian besar peternakan, dan bertanggung jawab atas kerugian ekonomi yang signifikan dalam produksi babi di seluruh dunia [1, 2]. Vaksinasi adalah praktik manajemen yang paling umum digunakan untuk mengendalikan M. hyopneumoniae karena dapat meminimalkan tanda-tanda klinis dan kerugian kinerja, serta mengurangi biaya pengobatan [3]. Tujuan dari vaksinasi M. hyopneumoniae adalah untuk meningkatkan respon imun spesifik patogen yang merespon dengan cepat dan efektif terhadap infeksi alami M. hyopneumoniae. Sebagian besar vaksin M. hyopneumoniae yang tersedia secara komersial untuk babi didaftarkan untuk pemberian antara usia satu dan tiga minggu [4]. Permulaan imunitas spesifik seluler M. hypopnea bervariasi dari satu hingga empat minggu dan bertujuan untuk melindungi terhadap infeksi selama periode penggemukan, hingga penyembelihan [4]. Secara keseluruhan, vaksinasi atau infeksi pada babi memicu diferensiasi sel B memori dan sel CD4+CD8+ T, memastikan antibodi yang cepat dan respons imun yang dimediasi sel setelah kontak kedua dengan patogen [5] . Vaksinasi terhadap M. hyopneumoniae dapat menyebabkan serokonversi dan peningkatan antibodi spesifik M. hyopneumoniae secara lokal di saluran pernapasan [6-9]. Pada hewan yang divaksinasi, tingkat limfosit penghasil IFN- -yang lebih tinggi diamati bersama dengan tingkat proliferasi limfosit yang lebih tinggi setelah stimulasi M. hyopneumoniae in vitro dibandingkan dengan hewan yang tidak divaksinasi [9-11]. Selain itu, sel T CD4+CD8− dan CD4−CD8+ polifungsional, yang memproduksi INF- dan TNF-, ditemukan setelah vaksinasi M. hyopneumoniae [12]. Namun, tidak sepenuhnya jelas berapa lama kekebalan yang disebabkan oleh vaksin spesifik seluler M. hypopnea bertahan. Dalam sebagian besar studi kemanjuran vaksin M. hyopneumoniae, babi sudah ditantang beberapa minggu setelah vaksinasi untuk menyelidiki batuk, parameter kekebalan, muatan patogen, dan lesi paru-paru [13-16]. Ketika kemanjuran jangka panjang dipelajari, sebagian besar dalam uji coba lapangan, seringkali hanya parameter produksi dan lesi paru-paru saat penyembelihan yang diperiksa dan parameter kekebalan tidak atau hanya diselidiki dengan buruk [17-20]. Sepengetahuan kami, imunitas seluler yang diinduksi vaksin spesifik M. hyopneumoniae sejak saat vaksinasi hingga penyembelihan di lapangan belum diteliti. Selain vaksinasi anak babi, vaksinasi M. hyopneumoniae pada indukan adalah praktik aklimatisasi yang umum digunakan [21]. CD4+CD8+ penghasil sitokin spesifik Mycoplasma hyopneumoniae dan sel T CD4−CD8− polifungsional terdapat setelah vaksinasi hewan pembiakan [22]. Anak babi yang menyusu kolostrum dari babi yang diimunisasi memiliki tingkat antibodi yang diturunkan dari ibu (MDA) spesifik M. hyopneumoniae yang tinggi dan kekebalan yang diperantarai sel dalam darah mereka yang dapat bertahan hingga disapih atau bahkan lebih lama [7, 22, 23]. Ketika anak babi divaksinasi terhadap M. hyopneumoniae dengan adanya MDA (kadar MDA yang tinggi), serokonversi seringkali kurang [24-26]. Namun, respons proliferasi limfosit setelah stimulasi in vitro secara signifikan lebih tinggi pada anak babi yang divaksinasi M. hyopneumoniae dibandingkan dengan anak babi yang tidak divaksinasi, terlepas dari tingkat MDA [26]. Meskipun para penulis ini menunjukkan bahwa imunitas yang dimediasi sel diprioritaskan pada vaksinasi M. hyopneumoniae dengan adanya MDA tingkat tinggi, diferensiasi lebih lanjut dari subset sel T dan produksi sitokinnya diperlukan untuk mendapatkan wawasan yang lebih baik mengenai respons imun yang dimediasi sel ini. dan pada akhirnya pengaruh infeksi alami terhadap respons ini. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki respon imun humoral dan seluler terhadap vaksinasi M. hyopneumoniae pada babi di dua peternakan komersial. Untuk tujuan ini, antibodi serum dan proliferasi serta produksi sitokin oleh subset sel T yang berbeda dipantau sejak saat vaksinasi pada usia 16 hari hingga usia pemotongan. Pengaruh potensial imunitas yang diturunkan dari ibu yang spesifik terhadap M. hyopneumoniae terhadap respons vaksin humoral dan mediasi sel pada anak babi juga diselidiki.

manfaat suplemen cistanche-meningkatkan kekebalan tubuh

Bahan dan metode

Deskripsi kawanan dan pemilihan hewan

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 kg) dipilih, dilubangi telinga, dan ditindaklanjuti setiap bulan sejak lahir hingga disembelih (n=25 anak babi/peternakan). Pengasuhan silang pada anak babi yang memiliki telinga berlekuk tidak diperbolehkan dan babi tidak menerima antibiotik yang aktif melawan M. hyopneumoniae di kedua peternakan selama keseluruhan percobaan.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

Desain studi dan pengambilan sampel

Penelitian ini disetujui oleh Komite Etik Fakultas Kedokteran Hewan dan Fakultas Teknik Biosains, Universitas Ghent (persetujuan nomor 2020/31). Dari induk babi, kolostrum dikumpulkan selama proses berternak. Dalam waktu 6 jam setelah beranak, TBS (kateter penghisap 60 cm, Medinorm GmbH, Spiesen-Elversberg, Jerman) dan darah dalam tabung serum steril (darah beku) dikumpulkan dari babi. Pada umur dua hari, darah diambil dari anak babi dalam tabung serum. Dari usia satu hingga enam bulan, darah dalam serum steril dan tabung EDTA (darah tidak menggumpal) serta TBS diambil dari anak babi setiap bulan. Di peternakan A, babi disembelih pada umur 177 hari, sehingga sampel terakhir diambil pada umur 5,5 bulan. Pada peternakan B, babi dikirim ke rumah potong hewan pada umur 191 hari sehingga sampel terakhir diambil pada umur 6 bulan. Sampel kolostrum dan serum disimpan pada suhu -20 derajat dan sampel TBS pada suhu -80 derajat hingga analisis lebih lanjut. Darah yang tidak menggumpal segera diproses untuk analisis imunitas seluler. PCR digital untuk deteksi DNA M. hyopneumoniae Untuk menguji keberadaan M. hyopneumoniae, DNA diekstraksi dari sampel TBS menggunakan kit komersial (DNeasy® Blood & Tissue kit, Qiagen, Venlo, Belanda) dan PCR digital (dPCR ) protokol yang menargetkan gen P102 dilakukan mengikuti protokol yang dijelaskan sebelumnya [27]. Antibodi spesifik Mycoplasma hyopneumoniae Antibodi spesifik Mycoplasma hyopneumoniae dalam sampel serum dan kolostrum dianalisis menggunakan ELISA tidak langsung komersial (uji M. hyo Ab, IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME, USA) mengikuti instruksi dari pabriknya. Sampel dianggap positif jika rasio sampel terhadap positif (S/P) lebih tinggi dari 0,40 dan negatif jika rasio S/P sama dengan atau lebih rendah dari 0,40.

Produksi sitokin sel T

Dari darah segar yang tidak menggumpal, sel mononuklear darah tepi (PBMC) diisolasi menggunakan gradien kepadatan Lym phoprep™ (teknologi Stemcell, Van - - couver, Kanada). Isolasi, stimulasi, dan pewarnaan PBMC dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya dengan beberapa modifikasi kecil [22]. Sel distimulasi semalaman (20 jam) dengan bakteri strain M. hyopneumoniae J yang dibuat sendiri dan untuk setiap hewan, media negatif dan kontrol Concanavalin A (ConA) positif dimasukkan. Bakterin strain M. hyopneumoniae J dibuat berdasarkan protokol produksi bakterin M. hyopneumonia F7.2 C [16]. Untuk menyelidiki produksi sitokin, Brefeldin A (eBioscience™, San Diego, CA, USA) ditambahkan ke setiap sumur selama 4 jam terakhir stimulasi untuk menghambat sekresi protein. Untuk pewarnaan ekstraseluler, PBMC diinkubasi dengan antibodi monoklonal anti-CD3 (klon PPT3), anti-CD4 (klon 74-12-4), dan anti-CD8 (klon 11-295-33). Selanjutnya, antibodi sekunder yang sesuai anti-tikus IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), anti-tikus IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, USA) dan anti-tikus IgG2a PE-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK) ditambahkan. Selanjutnya dilakukan langkah pemblokiran dengan IgG1 mouse (10 µg/mL). Setelah pewarnaan permukaan, sel difiksasi, dan dipermeabilisasi, dan pewarnaan intraseluler untuk TNF-, IFN-, dan IL-17A dilakukan [22]. Data diperoleh dengan flow cytometer CytoFLEX (Beckman Coulter, Bea, CA, USA) dan hasilnya dianalisis lebih lanjut dengan perangkat lunak CytExpert (Beckman Coulter). Hirarki gating ditunjukkan pada File Tambahan 1.

Uji proliferasi sel T

PBMC yang terisolasi distimulasi secara in vitro dengan bakteri strain M. hyopneumoniae J yang dibuat sendiri untuk menilai proliferasi sel T. Protokol yang digunakan dijelaskan secara rinci dalam penelitian sebelumnya [22]. Untuk pewarnaan permukaan, sel pertama-tama diinkubasi dengan antibodi monoklonal anti-CD3, anti-CD4, dan anti-CD8 dan selanjutnya dengan antibodi sekunder yang sesuai anti-tikus IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), anti-tikus IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, USA), dan IgG2a AlexaFluor 647 anti-tikus (Biolegend, San Diego, CA, USA) bersama dengan propidium iodida. Data diperoleh dengan sitometer aliran CytoFLEX dan hasilnya dianalisis lebih lanjut dengan perangkat lunak CytExpert. Hirarki gating ditunjukkan pada File Tambahan 2.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

Analisis data

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{{0}}.40) atau tidak adanya (S/P Kurang dari atau sama dengan 0,40) MDA mempengaruhi imunitas humoral dan seluler setelah vaksinasi babi.

Hasil

Di setiap peternakan, lima ekor babi dikeluarkan selama uji coba karena kematian atau kehilangan ear tag. Data babi-babi ini dimasukkan dalam analisis hingga momen pengambilan sampel terakhir yang terdokumentasi dengan benar.

Adanya infeksi alami M. hyopneumoniae di peternakan

Di peternakan A, semua sampel TBS (dari babi betina, anak babi, dan babi penggemukan) dinyatakan negatif terhadap keberadaan DNA M. hyopneumoniae. Di peternakan B, semua sampel TBS dari babi, babi, dan babi penggemukan diuji negatif terhadap keberadaan DNA M. hyopneumoniae hingga usia lima bulan. Pada umur enam bulan, empat ekor babi penggemukan dinyatakan positif M. hyopneumoniae dengan 300, 7, 22, dan 14 organisme M. hyopneumoniae/µL DNA.

Persistensi antibodi spesifik M. hyopneumoniae pada babi

Di kedua peternakan, empat dari lima induk babi memiliki antibodi spesifik M. hyopneumoniae dalam serum dan kolostrum saat melahirkan (Gambar 1A dan C). Anak babi berumur dua hari yang menyusu kolostrum dari babi tersebut memiliki antibodi ibu spesifik M. hyopneumoniae (ada MDA), sedangkan anak babi dari babi seronegatif juga seronegatif (tidak ada MDA) (Gambar 1B dan D). Meskipun vaksinasi dilakukan pada umur 16 hari, di kedua peternakan, tingkat antibodi spesifik M. hyopneumoniae dalam serum babi menurun secara signifikan dari umur dua hari menjadi satu bulan, dari satu bulan menjadi dua bulan, dan dari dua bulan menjadi umur tiga bulan (Gambar 1E). Tidak ada perbedaan signifikan yang terlihat antara momen pengambilan sampel selanjutnya. Sejak umur dua bulan dan seterusnya, semua babi, kecuali dua di peternakan A pada umur empat bulan, adalah M. hyopneumoniae seronegatif. Tingkat antibodi spesifik M. hyopneumoniae dari anak babi dengan MDA menurun seiring berjalannya waktu dan pada usia dua bulan mencapai tingkat yang sama dengan anak babi tanpa MDA (Gambar 1F).

Kinetika frekuensi subset sel T pada babi

Selama hidup babi, frekuensi subset sel T yang berbeda dalam darah berubah karena pematangan sistem kekebalan tubuh dan kontak dengan mikroorganisme [28]. Untuk menyelidiki kinetika subset sel T yang berbeda, PBMC darah dari kontrol medium yang tidak distimulasi dievaluasi dengan flow cytometry. Pada usia satu bulan, frekuensi (rata-rata%) sel T CD4− CD8+ adalah 13,6±2,8% dan 10,5±3,4% pada babi dari peternakan A dan B. Frekuensi ini meningkat secara signifikan pada umur dua bulan di kedua peternakan dan menurun lagi secara signifikan pada umur tiga bulan di peternakan A. Sejak umur tiga bulan dan seterusnya frekuensi ini tetap stabil di peternakan A, sedangkan di peternakan B peningkatan yang signifikan kembali terlihat pada umur enam bulan. umur bulan (Gambar 2A). Di kedua peternakan, frekuensi sel T CD4+CD8− tertinggi pada umur satu bulan dengan 37,5±6.0% (peternakan A) dan 42,3±5,9% (peternakan B). Frekuensi ini menurun secara signifikan pada usia dua bulan. Di lahan A, frekuensinya stabil sejak dua bulan ke depan, sedangkan di lahan B, penurunan terjadi secara bertahap (Gambar 2B). Pada umur satu bulan, rasio CD4/CD8 adalah 2,8 (peternakan A) dan 4.0 (peternakan B). Rasio tersebut turun pada umur dua bulan dan tetap di bawah 1.0 sejak umur tiga bulan dan seterusnya di kedua peternakan. Frekuensi sel T CD4−CD8− pada babi berumur satu bulan adalah 31,1±7,2% dan 25,6±5,4% masing-masing di peternakan A dan B. Di kedua peternakan, frekuensinya tetap sama pada umur dua bulan namun meningkat secara signifikan setelahnya hingga mencapai tingkat tertinggi pada umur lima bulan (Gambar 2C). Frekuensi sel T CD4+CD8+ paling rendah pada umur satu bulan dengan masing-masing 3,3±1,1% dan 4.0±1,0% di peternakan A dan B. Frekuensi ini meningkat secara signifikan pada usia dua bulan. Di peternakan A, setelah itu tetap stabil, sedangkan di peternakan B secara bertahap meningkat hingga umur empat bulan dan menurun lagi secara signifikan pada umur lima bulan (Gambar 2D).

Gambar 1 Kehadiran antibodi spesifik Mycoplasma hyopneumoniae pada babi dan babi. A, C

Gambar 2 Frekuensi bulanan (%) subset sel CD3+ T dalam darah babi. A

Gambar 3 Persistensi sel T CD3+ yang berproliferasi dan bersirkulasi pada babi. A, B

Proliferasi sel T

PBMC yang distimulasi M. hypopnea moniae dianalisis untuk menyelidiki persentase sel T yang berkembang biak. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3A dan B, sel T CD3+ yang berkembang biak terdapat dalam darah babi pada setiap momen pengambilan sampel di kedua peternakan setelah stimulasi in vitro dengan bakteri M. hyopneumoniae, meskipun persentase pada beberapa hewan lebih tinggi pada peternakan A. Di peternakan A, persentase sel T yang berproliferasi menurun secara signifikan pada umur enam bulan dibandingkan dengan persentase pada umur lima bulan, sedangkan di peternakan B, tidak ada penurunan atau peningkatan yang signifikan dalam persentase sel T yang berkembang biak. dilihat. Sel T CD4−CD8− adalah subset sel T CD3+ dominan yang berkembang biak sebagai respons terhadap stimulasi M. hyopneumoniae di kedua peternakan, diikuti oleh subset sel T CD4+CD8− (Gambar 3 C dan D).

Gambar 4 Sirkulasi sel CD4+CD8+ T penghasil sitokin spesifik Mycoplasma hyopneumoniae dalam darah babi di kedua peternakan. A

Produksi sitokin sel T

Untuk mendapatkan wawasan yang lebih baik tentang keberadaan dan persistensi sel T spesifik M. hyopneumoniae pada babi, produksi TNF-, IFN-, dan IL-17A oleh PBMC darah yang distimulasi in vitro dengan bakteri M. hyopneumoniae dievaluasi dengan aliran sitometri. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4, di kedua peternakan, sel T CD4+CD8+ yang terstimulasi menghasilkan sitokin, yang lebih jelas terlihat pada babi yang berusia lebih muda. Persentase sel T TNF- + CD4+CD8+ menurun secara signifikan pada babi di peternakan A dari umur satu hingga dua bulan dan dari umur dua hingga tiga bulan di peternakan B. A penurunan signifikan pada sel T IFN- + CD4+CD8+ teramati sejak umur satu hingga dua bulan pada babi di kedua peternakan dan dari umur dua hingga tiga bulan di peternakan B. Te persentase sel T CD4+CD8+ yang memproduksi TNF- dan IFN- menurun secara signifikan pada babi dari usia satu hingga dua bulan di peternakan A dan dari dua hingga tiga bulan di peternakan B. Pada usia satu bulan seiring bertambahnya usia, persentase sel T IL-17A+ CD4+CD8+ lebih tinggi dibandingkan persentase pada usia dua bulan, namun perbedaan ini tidak signifikan secara statistik. Empat hewan di peternakan B yang dites positif M. hyopneumoniae pada usia enam bulan memiliki produksi sitokin yang serupa oleh sel T CD4+CD8+ dibandingkan dengan hewan M. hyopneumoniae negatif. Selain subset sel T CD4+CD8+, kami juga mengamati perbedaan produksi sitokin oleh subset sel T lainnya di peternakan B. Gambar 5 menunjukkan data respons yang jelas dan perbedaan signifikan dalam produksi sitokin oleh subset sel T lainnya yang hanya terjadi di peternakan B. Untuk parameter lain dan di peternakan A, tidak ada perbedaan yang diamati dalam produksi sitokin CD4−CD8+, CD4+CD8− atau CD4− CD8− sel T. Persentase sel T TNF- + CD4+CD8− meningkat secara signifikan, sedangkan persentase sel T IFN- + CD4−CD8+ menurun secara signifikan dari satu hingga dua bulan usia. Sebagai catatan, babi yang positif M. hyopneumoniae pada usia enam bulan dengan 7 organisme M. hyopneumoniae/ µL DNA memiliki persentase TNF- + CD4+CD8− dan IL-17 yang tinggi A+ CD4−CD8+ sel T dalam darahnya. Babi positif M. hyopneumoniae lainnya pada usia enam bulan memiliki persentase sel T penghasil sitokin yang serupa dengan babi negatif M. hyopneumoniae.

Gambar 5 Sirkulasi subset sel T penghasil sitokin spesifik Mycoplasma hyopneumoniae dalam darah babi di peternakan B. A

Di setiap peternakan, MDA spesifik M. hyopneumoniae terdapat dalam serum 20 anak babi berumur dua hari dan tidak ada dalam serum lima anak babi, yang berasal dari babi tanpa antibodi serum spesifik M. hyopneumoniae. Untuk menyelidiki apakah MDA mempunyai pengaruh terhadap imunitas seluler yang diinduksi oleh vaksin M. hyopneumoniae, perbedaan dibuat antara anak babi dengan dan tanpa MDA, dan perbedaan antara kedua kelompok diselidiki untuk subset sel T yang signifikan. perbedaan diamati dalam produksi sitokin (Gambar 6A – E). Di peternakan B, persentase sel T TNF- + CD4+CD8+ cenderung lebih tinggi pada babi berumur satu bulan yang diberi MDA, dibandingkan dengan babi berumur satu bulan babi tanpa MDA. Untuk sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin lainnya, persentase rata-ratanya serupa antara kedua kelompok babi pada usia satu bulan, di setiap peternakan. Seiring berjalannya waktu, terdapat tren penurunan persentase rata-rata sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin dalam darah babi dengan perbedaan yang kecil atau tidak ada sama sekali pada usia enam bulan antara babi dengan dan tanpa MDA (Gambar 6A – C). Hal yang sama diamati pada sel T IFN- -yang memproduksi CD8+ dalam darah babi di peternakan B (Gambar 6D). Pada umur satu dan dua bulan, rata-rata persentase sel T TNF- + CD4+CD8− di peternakan B sama untuk babi dengan atau tanpa MDA, sedangkan pada umur enam bulan, persentasenya lebih tinggi jumlah sel TNF- -yang memproduksi CD4+CD8− diamati dalam darah babi tanpa MDA (Gambar 6E).

manfaat suplemen cistanche-meningkatkan kekebalan tubuh

Diskusi

Ini adalah studi pertama yang memberikan wawasan mengenai respon imun jangka panjang yang diinduksi oleh vaksin M. hyopneumoniae pada babi sejak lahir hingga disembelih di lapangan. Respon imun humoral dalam serum, yang dinilai dengan ELISA IDEXX, tidak ada setelah vaksinasi namun terdapat respons imun yang diperantarai sel (cell-mediated immunity). Proliferasi sel T setelah stimulasi in vitro M. hyopneumoniae diamati hingga akhir periode penggemukan. Selain itu, pada usia satu bulan, setelah vaksinasi M. hyopneumoniae, terdapat sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin spesifik M. hyopneumoniae, yang mencakup sel T memori, namun menurun seiring bertambahnya usia. . Antibodi ibu tampaknya tidak memengaruhi respons imun yang diinduksi oleh vaksin humoral dan sel selama hidup babi, kecuali adanya sel T TNF- + CD4+CD8+ . Untuk mengevaluasi persistensi dan perbedaan respons imun pada anak babi yang divaksinasi M. hyopneumoniae di tingkat peternakan, kami menyertakan dua peternakan komersial. Meskipun sirkulasi M. hyopneumoniae diasumsikan terjadi di kedua peternakan, babi yang diteliti tetap negatif terhadap M. hyopneumoniae selama seluruh percobaan, kecuali empat babi di peternakan B pada akhir percobaan, yang memungkinkan kami untuk menyelidiki kegigihan vaksin yang diinduksi. respon imun tanpa pengaruh infeksi alami. Keempat babi positif PCR M. hyopneumoniae pada usia enam bulan di peternakan B tidak memiliki tingkat antibodi spesifik M. hyopneumoniae yang lebih tinggi dibandingkan dengan babi negatif PCR. Kecuali satu babi, mereka juga tidak memiliki persentase sel T penghasil sitokin yang lebih tinggi dalam darahnya setelah stimulasi in vitro M. hyopneumoniae. Hal ini dapat dijelaskan oleh fakta bahwa infeksi M. hyopneumoniae kemungkinan terjadi sesaat sebelum pengambilan sampel, sehingga tidak memberikan waktu yang cukup bagi sistem kekebalan untuk merespons infeksi tersebut [29-31]. Pada tiga dari empat babi yang positif M. hyopneumoniae, muatan patogen dalam sampel TBS juga agak rendah.

Gambar 6 Persentase rata-rata subset sel T penghasil sitokin spesifik Mycoplasma hyopneumoniae berdasarkan tingkat antibodi yang diturunkan dari ibu. AC

Tingkat antibodi serum pada babi berumur dua hari berhubungan dengan tingkat antibodi spesifik M. hyopneumoniae dalam serum dan kolostrum dari babi saat melahirkan, mengkonfirmasikan transfer kekebalan ibu spesifik M. hyopneumoniae melalui kolostrum [22, 23]. Serokonversi tidak diamati setelah vaksinasi M. hyopneumoniae pada umur 16 hari. Sebaliknya, kadar antibodi spesifik M. hyopneumoniae menurun seiring berjalannya waktu dan semua hewan menjadi seronegatif pada usia dua bulan. Vaksin komersial M. hyopneumoniae yang digunakan dalam penelitian ini diketahui menyebabkan serokonversi terbatas setelah pemberian tunggal, yang juga diamati pada penelitian sebelumnya [14, 32, 33]. Dalam sebuah penelitian eksperimental, mengenai vaksinasi anak babi sekitar masa penyapihan, 40% hewan telah mengalami serokonversi 3 minggu setelah vaksinasi, sedangkan dalam uji coba lapangan, hanya 3 dari 40 babi yang mengalami serokonversi 7 minggu setelah vaksinasi [14, 32]. Namun, ada (atau tidak adanya) antibodi serum spesifik M. hyopneumoniae setelah vaksinasi tidak berhubungan dengan perlindungan (atau kekurangannya) terhadap infeksi [14, 25, 34]. Untuk melindungi inang terhadap patogen bakteri fakultatif intraseluler dan ekstraseluler seperti M. hyopneumoniae, sel pembantu CD4+CD8− T, terutama sel T1 dan T17, memainkan peran penting. Sel T1 menghasilkan IFN-, yang mengaktifkan makrofag untuk membunuh patogen, sedangkan sel T17 menghasilkan IL-17A untuk memperkuat penghalang mukosa [35-38]. Baru-baru ini, telah ditunjukkan bahwa persentase sel M. hyopneumoniae yang rendah juga dapat ditemukan secara intraseluler, dan mengingat peran penting sel T sitotoksik CD4−CD8+ dalam melindungi inang dari patogen intraseluler, sel T sitotoksik ini mungkin juga penting untuk mengendalikan infeksi M. hyopneumoniae [31, 35, 39]. Untuk menyelidiki kinetika frekuensi subset sel T yang berbeda dan kemampuan sel T ini untuk berkembang biak setelah stimulasi in vitro M. hyopneumoniae, PBMC diisolasi dari anak babi di kedua peternakan. Pola frekuensi subset sel T serupa pada kedua peternakan ini. Menurut penelitian lain, persentase sel T CD4+CD8− lebih tinggi dibandingkan persentase sel T CD4−CD8+ pada usia lebih muda. Dengan bertambahnya usia, persentase sel T CD4+CD8− menurun, sedangkan persentase sel T CD4−CD8+ meningkat sehingga mengakibatkan penurunan rasio CD4/CD8 seiring berjalannya waktu [40–42]. Anak babi dilahirkan dengan hampir tidak ada sel T CD4+CD8+. Sel-sel ini meningkat seiring bertambahnya usia ketika babi melakukan kontak dengan mikroorganisme, karena beberapa sel ini memiliki fungsi memori spesifik patogen [5, 22, 42-44]. Namun, di peternakan A, frekuensi sel T CD4+CD8+ tetap pada tingkat yang sama sejak usia dua bulan dan seterusnya. Di peternakan B, terjadi peningkatan bertahap hingga usia empat bulan, seperti yang diharapkan, meskipun persentase sel CD4+CD8+ T menurun lagi setelahnya. Membandingkan subset sel T dengan penelitian lain masih sulit karena PBMC dalam penelitian ini tidak diukur secara langsung setelah pengambilan sampel darah, namun terlebih dahulu diinkubasi selama 20 jam sebelum mengukur persentase subpopulasi sel T. Proliferasi sel T CD3+ spesifik Mycoplasma hyopneumoniae bertahan hingga akhir periode penggemukan, membenarkan adanya sel T spesifik M. hyo pneumoniae dalam darah babi yang divaksinasi pada usia 16 hari. Kehadiran sel T spesifik M. hyopneumoniae yang berproliferasi mungkin berkorelasi dengan perlindungan terhadap pneumonia enzootic karena penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kemampuan PBMC untuk berproliferasi, setelah stimulasi in vitro dengan mitogen ConA, berkorelasi dengan resistensi terhadap penyakit pada babi [45 ]. Sel T CD4−CD8− adalah subset sel T utama yang berkembang biak di kedua peternakan diikuti oleh sel T CD4+CD8− dengan persentase yang berfluktuasi seiring waktu. Pada babi, sebagian besar sel T CD4−CD8− mengandung reseptor sel T δ invarian berbeda dengan sel T spesifik antigen [31, 42]. Setelah babi terinfeksi dengan patogen lain seperti PRRSV, sel T juga merupakan respon proliferasi utama pasca viremia PRRSV [46]. Sel T tersebut juga berperan dalam produksi antibodi penawar setelah vaksinasi babi terhadap demam babi klasik [47]. Lebih jauh lagi, pada cairan lavage bronchoalveolar dari babi yang terinfeksi Actinobacillus pleuropneumoniae, terjadi peningkatan sel T CD8− δ yang diamati [48]. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menyelidiki peran sel T δ dalam pengendalian dan perlindungan terhadap infeksi M. hyopneumoniae. Dalam uji recall, subset sel T yang berbeda dinilai untuk produksi TNF-, IFN-, dan IL-17A. Pada usia dua bulan, persentase sel T TNF- -, IFN- - dan TNF- /IFN- -yang memproduksi CD4+CD8+ menurun secara signifikan dibandingkan dengan persentase pada usia satu bulan. Setelah itu, persentasenya bervariasi, menurun lebih jauh atau tetap stabil seiring berjalannya waktu. Pola yang sama terlihat pada sel T yang memproduksi IL-17CD4+CD8+, meskipun tidak signifikan secara statistik. Pada ayam yang divaksinasi terhadap PRRSV, produksi IFN oleh PBMC juga diamati hingga 42 hari pasca vaksinasi primo, namun menurun setelahnya hingga 147 hari pasca vaksinasi [49]. Peningkatan jumlah limfosit yang mensekresi IFN setelah vaksinasi M. hyo pneumoniae telah ditunjukkan sebelumnya [9, 10].

Cistanche yang hidup di guruntubulosa

Baru-baru ini, semakin banyak bukti yang menunjukkan bahwa sel T polifungsional, yang menghasilkan lebih dari satu sitokin, memiliki peran penting dalam perlindungan dan pembersihan patogen. Misalnya, pada babi yang terinfeksi spesies Chlamydia, sel T CD4+CD8− polifungsional berkorelasi dengan perlindungan [50]. Vaksinasi anak babi terhadap M. hyo pneumoniae juga meningkatkan persentase sel T CD4+CD8− dan CD4−CD8+ polifungsional [12]. Dalam penelitian lain, vaksinasi babi terhadap PCV2 menghasilkan kadar sel T TNF- +/IFN- + CD4+CD8+ yang lebih tinggi pada 24 hari pasca vaksinasi, dan kembali menurun. menjelang akhir penelitian pada 56 hari pasca vaksinasi [51]. Dalam penelitian kami, kami juga mengamati bahwa keberadaan sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin menurun seiring waktu. Penelitian ini berfokus pada sirkulasi limfosit darah, namun vaksinasi juga menginduksi respon imun yang dimediasi sel spesifik M. hyopneumoniae lokal di paru-paru dan kelenjar getah bening bronkial [8]. Oleh karena itu, penelitian di masa depan mengenai imunitas yang diinduksi oleh vaksin spesifik M. hyo pneumoniae juga harus fokus pada respon imun yang dimediasi sel lokal. Selain itu, untuk mengimunisasi anak babi, hanya satu vaksin komersial M. hyopneumoniae yang digunakan dalam penelitian ini. Respon imun antar vaksin dapat berbeda karena dipengaruhi oleh formulasi vaksin (adjuvan dan antigen) dan rute pemberiannya [16, 52, 53]. Misalnya, karbopol, bahan pembantu dalam vaksin komersial M. hyopneumoniae yang digunakan, diketahui mengarahkan respons imun ke respons T1 [54]. Di setiap peternakan, lima anak babi adalah M. hyopneumoniae seronegatif, dan dalam serum 20 anak babi terdapat MDA spesifik seluler M. hyopneu. Terlepas dari status MDA mereka, semua babi memiliki seronegatif M. hyopneumoniae pada usia dua bulan, dan serokonversi tidak teramati pada titik waktu berikutnya. Temuan kami sesuai dengan penelitian sebelumnya di mana anak babi berumur tujuh hari dengan dan tanpa MDA divaksinasi terhadap M. hyopneumoniae [25]. Pada kedua kelompok, serokonversi setelah vaksinasi tidak diamati dan semua babi bersifat seronegatif pada 42 hari pasca vaksinasi. Di sisi lain, penelitian lain menemukan bahwa vaksinasi M. hyopneumoniae dengan adanya MDA menghasilkan tingkat antibodi yang lebih tinggi dibandingkan dengan anak babi yang tidak divaksinasi, namun semakin tinggi titer MDA, semakin rendah responsnya [24, 26]. Meskipun respons antibodi tidak selalu terlihat setelah vaksinasi M. hyopneumoniae, respons imun termediasi sel spesifik M. hyopneumoniae diinduksi [26]. Tidak ada perbedaan yang diamati dalam proliferasi PBMC yang diisolasi dari babi yang divaksinasi M. hyopneumoniae terlepas dari tingkat MDA [26]. Dalam penelitian kami, di setiap peternakan, tidak ada perbedaan yang diamati pada sel T penghasil sitokin antara babi yang divaksinasi M. hyopneumoniae dengan dan tanpa MDA pada usia satu bulan. Hanya di peternakan B, anak babi dengan MDA cenderung memiliki persentase sel TNF- + CD4+CD8+ T yang lebih tinggi pada usia satu bulan dibandingkan dengan anak babi tanpa MDA. Relevansi temuan ini harus diselidiki lebih lanjut dalam penelitian yang mencakup jumlah anak babi yang lebih besar dan sama dengan dan tanpa MDA spesifik M. hyopneumoniae. Analisis statistik juga harus dilakukan karena hal ini tidak dilakukan dalam penelitian ini karena rendahnya dan tidak meratanya jumlah hewan dalam kelompok tanpa dan dengan pengobatan MDA. Sebagai kesimpulan, penelitian ini menunjukkan bahwa, meskipun serokonversi setelah vaksinasi M. hyopneumoniae pada anak babi masih kurang, respon imun seluler spesifik M. hyopneumoniae terdeteksi. Sel T CD4+CD8+ penghasil sitokin polifungsional terdapat hingga usia tiga bulan dan sel T yang berkembang biak diamati hingga akhir periode penggemukan yang menunjukkan adanya imunitas yang diperantarai sel spesifik patogen pada babi yang divaksinasi M. hyopneumoniae. Hasil ini menjadi dasar untuk penelitian lebih lanjut yang menilai pengaruh infeksi alami M. hyopneumoniae terhadap kekebalan yang dipicu oleh vaksin dalam kondisi lapangan.

Referensi

1. Pieters M, Maes D (2019) Mikoplasmosis. Dalam: Zimmermann JJ, Karriker LA, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson GW, Zhang J (eds) Penyakit babi, edisi ke-11. Wiley, New York

2. Rycroft A (2020) Ciri-ciri umum dan klasifikasi spesies Mycoplasma babi. Dalam: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasma pada Babi. Acco, hal 26–46

3. Maes D, Segalés J, Meyns T, Sibila M, Pieters M, Haesebrouck F (2008) Pengendalian infeksi Mycoplasma hyopneumoniae pada babi. Mikrobiol Dokter Hewan 126:297–309

4. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2018) Strategi aklimasi pada gilt untuk mengendalikan infeksi Mycoplasma hyopneumoniae. Mikrobiol Dokter Hewan 219:23–29 5. Saalmüller A, Werner T, Fachinger V (2002) Sel T-helper dari naif menjadi berkomitmen. Dokter Hewan Imunol Imunopatol 87:137–145

6. Ruiz AR, Utrera V, Pijoan C (2003) Pengaruh vaksinasi babi Mycoplasma hyopneumoniae pada kolonisasi anak babi saat disapih. J Produk Kesehatan Babi 11:131–135

7. Sibila M, Bernal R, Torrents D, Riera P, Llopart D, Calsamiglia M, Segalés J (2008) Pengaruh vaksinasi babi terhadap Mycoplasma hyopneumoniae pada kolonisasi dan serokonversi babi dan babi, serta lesi paru-paru babi saat penyembelihan. Mikrobiol Dokter Hewan 127:165–170

8. Marchioro SB, Maes D, Flahou B, Pasmans F, Del Pozo Sacristán R, Vranckx K, Melkebeek V, Cox E, Wuyts N, Haesebrouck F (2013) Respon imun lokal dan sistemik pada babi yang disuntik secara intramuskular dengan Mycoplasma hyopneumoniae yang tidak aktif vaksin. Vaksin 31:1305–1311

9. Martelli P, Saleri R, Cavalli V, De Angelis E, Ferrari L, Benetti M, Ferrarini G, Merialdi G, Borghetti P (2014) Respon imun sistemik dan lokal pada babi yang disuntik secara intradermal dan intramuskular dengan vaksin Mycoplasma hyopneumoniae yang dilemahkan. Mikrobiol Dokter Hewan 168:357–364

10. Thacker EL, Thacker BJ, Kuhn M, Hawkins PA, Waters WR (2000) Evaluasi respon imun lokal dan sistemik yang disebabkan oleh injeksi bakteri Mycoplasma hyopneumoniae intramuskular ke babi. Am J Dokter Hewan Res 61:1384–1389

11. Seo HW, Han K, Oh Y, Park C, Choo EJ, Kim SH, Lee BH, Chae C (2013) Perbandingan imunitas seluler yang disebabkan oleh tiga bakteri Mycoplasma hyopneumoniae dosis tunggal komersial pada babi. J Dokter Hewan Med Sci 75:245–247

12. Matthijs AMF, Auray G, Jakob V, Garcia-Nicolas O, Braun RO, Keller I, Bruggman R, Devriendt B, Boyen F, Guzman CA, Michiels A, Haesebrouck F, Collin N, Barnier-Quer C, Maes D , Summerfield A (2019) Karakterisasi emu neologi sistem formulasi vaksin baru untuk bakteri Mycoplasma hyopneumoniae. Imunol Depan 10:1087

13. Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, Vranckx K, Calus D, Pasmans F, Haeseb‑ rouck F, Maes D (2011) Pengaruh vaksinasi terhadap penularan Mycoplasma hyopneumoniae pada babi dalam kondisi lapangan. Dokter Hewan J 188:48–52

14. Arsenakis I, Panzavolta L, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2016) Kemanjuran vaksinasi Mycoplasma hyopneumoniae sebelum dan saat penyapihan terhadap infeksi tantangan eksperimental pada babi. Dokter Hewan BMC Res 12:63

15. Park C, Jeong J, Choi K, Chae C (2016) Kemanjuran vaksin bivalen baru untuk porcine circovirus tipe 2 dan Mycoplasma hyopneumoniae (Fostera™ PCV MH) dalam kondisi eksperimental. Vaksin 34:270–275

16. Matthijs AMF, Auray G, Boyen F, Schoos A, Michiels A, García-Nicolás O, Barut GT, Barnier-Quer C, Jakob V, Collin N, Devriendt B, Summerfield A, Haesebrouck F, Maes D (2019) Kemanjuran tiga vaksin bakterin inovatif terhadap infeksi eksperimental Mycoplasma hyopneumoniae. Dokter Hewan Res 50:91

17. Reynolds SC, St Aubin LB, Sabbadini LG, Kula J, Vogelaar J, Runnels P, Peters AR (2009) Mengurangi lesi paru pada babi yang ditantang 25 minggu setelah pemberian dosis tunggal vaksin Mycoplasma hyopneumo niae sekitar 1 minggu umur. Dokter Hewan J 181:312–320

18. Wilson S, Van Brussel L, Saunders G, Taylor L, Zimmermann L, Heinritzi K, Ritzmann M, Banholzer E, Eddicks M (2012) Vaksinasi anak babi pada usia 1 minggu dengan vaksin Mycoplasma hyopneumoniae yang dilemahkan mengurangi lesi paru-paru dan peningkat rata-rata pertambahan berat badan harian. Vaksin 30:7625–7629

19. Del Pozo Sacristán R, Sierens A, Marchioro SB, Vangroenweghe F, Jourquin J, Labarque, Haesebrouck F, Maes D (2014) Kemanjuran vaksinasi awal Mycoplasma hyopneumoniae terhadap penyakit pernafasan campuran pada babi penggemukan yang lebih tua. Catatan Dokter Hewan 174:197

20. Cvjetkovíc V, Sipos S, Szabó I, Sipos W (2018) Kemanjuran klinis dari dua strategi vaksinasi terhadap Mycoplasma hyopneumoniae pada kawanan babi yang menderita penyakit pernapasan. Manajer Kesehatan Porc 4:19

21. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2017) Survei praktik aklimasi emas Mycoplasma hyopneumoniae di Eropa. Manajer Kesehatan Porc 3:21

22. Biebaut E, Beuckelaere L, Boyen F, Haesebrouck F, Gomez-Duran CO, Devriendt B, Maes D (2021) Transfer imunitas yang dimediasi sel spesifik Mycoplasma hyopneumoniae ke anak babi neonatal. Dokter Hewan Res 52:96

23. Bandrick M, Ariza-Nieto C, Baidoo SK, Molitor TW (2014) Imunitas yang dimediasi anti-tubuh kolostral dan yang dimediasi sel berkontribusi terhadap imunitas bawaan dan spesifik antigen pada anak babi. Dev Comp Imunol 43:114–120

24. Hodgins DC, Shewen PE, Dewey CE (2004) Pengaruh usia dan antibodi ibu terhadap respon antibodi anak babi neonatal yang divaksinasi terhadap Mycoplasma hyopneumoniae. J Produk Kesehatan Babi 12:10–16

25. Martelli P, Terreni M, Guazzetti S, Cavirani S (2006) Respon antibodi terhadap infeksi Mycoplasma hyopneumoniae pada babi yang divaksinasi dengan atau tanpa antibodi ibu yang disebabkan oleh vaksinasi babi. J Dokter Hewan Kedokteran 53:229–233

26. Bandrick M, Theis K, Molitor TW (2014) Imunitas ibu meningkatkan respons imun yang dimediasi sel yang diinduksi oleh vaksinasi Mycoplasma hyopneumoniae pada anak babi. Dokter Hewan BMC Res 10:124

27. Beuckelaere L, Haspeslagh M, Biebaut E, Boyen F, Haesebrouck F, Krejci R, Meyer E, Gleerup D, De Spiegelaere W, Devriendt B, Maes D (2022) Respon imun lokal, bawaan, dan adaptif yang berbeda diinduksi oleh dua bakteri Mycoplasma hyopneumoniae komersial dan bahan pembantu saja. Imunol Depan 13:1015525

28. Gerner W, Mair KH, Schmidt S (2022) Kekebalan sel T lokal dan sistemik dalam melawan infeksi virus dan bakteri babi. Annu Rev Anim Biosci 10:349–372

29. Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch GJ (1999) Profiling Mycoplasma hypopnea mobile di peternakan menggunakan serologi dan teknik PCR bersarang. J Produk Kesehatan Babi 7:263–268

30. Pieters M, Daniels J, Rovira A (2017) Perbandingan jenis sampel dan metode diagnostik untuk deteksi in vivo Mycoplasma hyopneumoniae selama tahap awal infeksi. Mikrobiol Dokter Hewan 203:103–109

31. Tizard IR (2018) Imunologi veteriner, edisi ke-10. Elsevier, St

32. Arsenakis I, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2017) Vaksinasi Mycoplasma hyopneumoniae pada atau sesaat sebelum penyapihan dalam kondisi lapangan: uji efikasi secara acak. Catatan Dokter Hewan 181:19

33. Betlach AM, Fano E, Vanderwaal K, Pieters M (2021) Pengaruh beberapa vaksinasi terhadap penularan dan derajat infeksi Mycoplasma hyopneumoniae pada gilt. Vaksin 39:767–774

34. Martínez-Boixaderas N, Garza-Moreno L, Sibila M, Segalés J (2022) Dampak imunitas yang diturunkan dari ibu terhadap respons imun yang ditimbulkan oleh vaksinasi dini pada anak babi terhadap patogen paling umum yang terlibat dalam kompleks penyakit pernapasan babi. Manajer Kesehatan Porc 8:11

35. Schroder K, Hertzog PJ, Ravasi T, Hume DA (2004) Interferon- : gambaran umum tentang sinyal, mekanisme, dan fungsi. J Leukoc Biol 75:163–189

36. Dobbs NA, Odeh AN, Sun X, Simecka JW (2009) Peran multifaset imunitas yang dimediasi sel T dalam patogenesis dan resistensi terhadap penyakit pernapasan Mycoplasma. Tren Saat Ini Imunol 10:1–19

37. Ge Y, Huang M, Yao Y (2020) Biologi interleukin-17 dan signifikansi patofisiologisnya pada sepsis. Imunol Depan 11:1558

38. Summerfeld A (2020) Respon imun terhadap infeksi Mycoplasma babi. Dalam: Maes D, Sibila M, Pieters M (eds) Mycoplasma pada Babi. Acco, hal 110–125

39. Raymond BBA, Turnbull L, Jenkins C, Madhkoor R, Schleicher I, Uphof CC, Whitchurch CB, Rohde M, Djordjevic SP (2018) Mycoplasma hyopneumoniae berada secara intraseluler di dalam sel epitel babi. Rep Sains 8:17697

40. Borghetti P, De Angelis E, Saleri R, Cavalli V, Cacchioli A, Corradi A, Mocchegiani E, Martelli P (2006) Perubahan limfosit T perifer pada anak babi neonatal: hubungan dengan hormon pertumbuhan (GH), prolaktin (PRL) dan perubahan kortisol. Dokter Hewan Imunol Imunopatol 110:17–25

41. Brown DC, Maxwell CV, Erf GF, Davis ME, Singh S, Johnson ZB (2006) Ontogeni limfosit T dan karakteristik morfologi usus pada babi neonatal pada berbagai umur pada periode pascakelahiran. J Anim Sains 84:567–578

42. Stepanova H, Samankova P, Leva L, Sinkora J, Faldyna M (2007) Perkembangan awal sistem kekebalan tubuh pascakelahiran pada anak babi: redistribusi subset limfosit T. Imunol Sel 249:73–79

43. Hernández J, Garfas Y, Nieto A, Mercado C, Montaño LF, Zenteno E (2001) Evaluasi komparatif CD4 + CD8 + dan CD4 + CD{{5} } limfosit dalam respon imun terhadap virus rubula babi. Dokter Hewan Imunol Imunopatol 79:249–259

44. Blanc F, Prévost-Blondel A, Piton G, Bouguyon E, Leplat J, Adréoletti F, Egidy G, Bourneuf E, Bertho N, Vincent-Naulleau S (2020) Komposisi leukosit yang bersirkulasi bervariasi menurut usia dan timbulnya melanoma pada model biomedis babi MeLiM. Imunol Depan 11:291

45. Jeon RL, Gilbert C, Cheng J, Putz AM, Dyck MK, Plastow GS, Fortin F, Canada P, Dekkers JC, Harding JCS (2021) Proliferasi sel mononuklear darah tepi dari anak babi yang sehat setelah stimulasi mitogen sebagai indikator penyakit ketangguhan. J Anim Sci 99:skab084

46. ​​Kick AR, Amaral AF, Cortes LM, Fogle JE, Crisci E, Almond GW, Käser T (2019) Respon sel T terhadap virus sindrom reproduksi dan pernapasan babi tipe 2 (PRRSV). Virus 11:796

47. Petersen B, Kammerer R, Frenzel A, Hassel P, Dau TH, Becker R, Breithaupt A, Ulrich RG, Lucas-Hahn A, Meyers G (2021) Generasi dan karakterisasi pertama babi knockout TRDC yang kekurangan sel T. Rep Sains 11:14965

48. Faldyna M, Nechvatalova K, Sinkora J, Knotigova P, Leva L, Krejci J, Toman M (2005) Eksperimental Infeksi Actinobacillus pleuropneumoniae pada anak babi dengan jenis dan tingkat perlindungan spesifik yang berbeda: analisis genotipe imun dari subset limfosit di sirkulasi dan jaringan limfoid mukosa pernapasan. Dokter Hewan Imunol Imunopatol 107:143–152

49. Sánchez-Matamoros A, Camprodon A, Maldonado J, Pedrazuela R, Miranda J (2019) Keamanan dan kekebalan jangka panjang dari kombinasi pemberian vaksin virus hidup yang dimodifikasi terhadap virus sindrom reproduksi dan pernafasan babi 1 dan vaksin yang tidak aktif melawan porcine parvovirus dan Erysipelothrix rhusiopathiae pada pembiakan emas. Manajer Kesehatan Porc 5:11

50. Käser T, Pasternak JA, Delgado-Ortega M, Hamonic G, Lai K, Erickson J, Walker S, Dillon JR, Gerdts V, Mearens F (2017) Chlamydia suis dan Chlamydia trachomatis menginduksi sel T CD4 multifungsi pada babi. Vaksin 35:91–100

51. Koinig HC, Talker SC, Stadler M, Ladinig A, Graage R, Ritzmann M, Hennig Pauka I, Gerner W, Saalmüller A (2015) Vaksinasi PCV2 menginduksi sel T yang memproduksi bersama IFN- / TNF- dengan peran potensial dalam perlindungan. Dokter Hewan Res 46:20

52. Xiong Q, Wei Y, Xie H, Feng Z, Gan Y, Wang C, Liu M, Bai F, Xie F, Shao G (2014) Pengaruh formulasi bahan pembantu yang berbeda terhadap imunogenisitas dan efek perlindungan dari Mycoplasma hyopneumoniae hidup vaksin setelah inokulasi intramuskular. Vaksin 32:3445–3451

53. Maes D, Boyen F, Devriendt B, Kuhnert P, Summerfield A, Haesebrouck F (2021) Perspektif peningkatan vaksin Mycoplasma hyopneumoniae pada babi. Dokter Hewan Res 52:67

54. Gartlan KH, Krashias G, Wegmann F, Hillson WR, Scherer EM, Greenberg PD, Eisenbarth SC, Moghaddam AE, Sattentau QJ (2016) Peradangan steril yang disebabkan oleh Carbopol menimbulkan respons imun adaptif yang kuat tanpa adanya pola molekuler terkait patogen . Vaksin 34:2188–2196