Faktor Imunomodulator di Cistanche Salsa

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Shinjiro MARUYAMA," Koji YAMADA, Hirofumi TACHIBANA

Cistanche salsa(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae adalah tanaman parasit yang digunakan sebagai tonik obat oriental di Jepang. Dalam penelitian kami sebelumnya, kami menemukan bahwa C, ekstrak salsa meningkatkan produksi IgM dan IgG dalam limfosit kelenjar Ivmph manusia. Selanjutnya, C, salsa dialisat (CSD) disiapkan menggunakan membran dialisis dengan a3.500-Pemotong berat molekul Da yang meningkatkan produksi IgM dalam sel B manusia BOLA-1; selain itu, hal itu menyebabkan sedikit proliferasi sel. Namun, sebaliknya, penghambatan pertumbuhan yang diinduksi CSD disertai dengan apoptosis pada garis sel limfoma Burkitt manusia Namalwa. Hasil ini menunjukkan kemungkinan adanya konstituen aktif di CSD yang spesifik untuk limfosit, Sejauh ini, sifat kimia dari konstituen ini belum dijelaskan. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki sifat kimia dari konstituen aktif dalam CSD. Kedua aktivitas yang disebutkan di atas dalam garis sel B tidak dinonaktifkan oleh pengobatan autoklaf CSD. Menggunakan kromatografi kolom filtrasi gel, kami menemukan bahwa puncak fraksi aktif terkonsentrasi di fraksi yang berbeda. Hasil kami menunjukkan bahwa setidaknya ada 2 jenis konstituen aktif di CSD, dan mereka mungkin polisakarida karena mereka adalah konstituen berat molekul tinggi yang larut dalam air dan termostabil.

Kata kunci: Cistanche salsa, berat molekul tinggi, IgM, penghambatan pertumbuhan.

pengantar

Cistanche salsa(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae adalah tanaman parasit yang digunakan sebagai tonik obat oriental di Jepang. Di Cina, tanaman ini merupakan obat tradisional penting yang digunakan untuk pengobatan defisiensi ginjal dan neurasthenia. Melalui studi in vitro, kami telah melaporkan efek C. salsa pada sistem kekebalan tubuh. Pertama. kami menunjukkan bahwa ekstrak C. salsa meningkatkan produksi IgM dan IgG dalam limfosit kelenjar getah bening manusia. Kedua, kami menunjukkan bahwa C. salsa dialisat(CSD) yang dibuat menggunakan membran dialisis batas berat molekul 3,500-Da meningkatkan produksi IgM dalam sel B manusia BALL-1; selain itu, ia menginduksi proliferasi sel dalam jumlah kecil.2Selanjutnya, CSD memiliki efek sebaliknya di mana ia menginduksi penghambatan pertumbuhan disertai dengan apoptosis pada garis sel limfoma Burkitt manusia, Namalwa.3)Temuan ini menunjukkan bahwa efek CSD ini terkait dengan aktivasi sel B, sedangkan apoptosis dihasilkan dari kurangnya sinyal lain yang diperlukan untuk diferensiasi sel B, seperti sitokin dan kontak sel-sel; Namun, sifat kimia CSD tidak dijelaskan dalam penelitian sebelumnya. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami menyelidiki sifat kimia dari konstituen aktif dalam CSD.

Bahan dan metode

CSD disiapkan dengan metode yang sama dalam penelitian kami sebelumnya. CSD dilarutkan dalam phosphate-buffered saline (PBS) pada 20 mg/ml. Larutan yang disiapkan (0.8 ml) dilewatkan melalui filter (0.22 um) sebelum aplikasi dan kemudian dielusi dengan larutan yang sama melalui kolom yang mengandung TOYOPEARL HW-40F (1.0×96,5 cm; Tosoh Corp, Jepang),TOYOPEARL HW-55F(1.0 × 98.0 cm; Tosoh Corp.,Jepang) , dan Sephacryl S-400HR(1.0×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); dan 1 ml (30 tetes) fraksi kemudian dikumpulkan. Untuk menentukan volume kosong gel dan perkiraan berat molekul (MW) dari konstituen yang difraksinasi, dekstran biru (BD)(Sigma-Aldrich Japan KK, Japan); dan dekstrans dari MW yang diketahui diperoleh dari Leuconostoc spp.(Sigma-Aldrich Japan KK,Japan), yaitu dari MW2,000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3) dan 6 kDa (D4); dan cyanocobalamin (VB12, MW:1355.4) (Wako Pure Chemical Industries Ltd., Jepang) digunakan. Kandungan gula dan protein total dari setiap fraksi ditentukan dengan menggunakan metode asam fenol-sulfat dan metode Lowry dengan kit uji protein PIERCETM bicinchoninic acid (BCA) (Thermo Fisher Scientific Inc., USA), masing-masing. Glukosa dan albumin serum sapi digunakan sebagai standar masing-masing. Selanjutnya, absorbansi pada 320nm(A:2o) dari masing-masing fraksi diukur. Puncak elusi dekstran biru dan sianokobalamin ditentukan oleh nilai absorbansinya pada 260 nm, dan puncak dekstrans dari MW yang diketahui ditentukan dengan menggunakan metode asam fenol-sulfat. CSD diautoklaf pada 120 derajat selama 20 menit untuk menilai termostabilitasnya. Dalam bioassay, kultur sel dan pengukuran IgM dilakukan dengan metode yang sama dalam penelitian kami sebelumnya.

Ekstrak salsa cistanche

Hasil dan Diskusi

Gambar 1 menunjukkan kromatogram kolom filtrasi gel CSD pada HW-40F. Dari Gambar la, MW konstituen aktif diperkirakan lebih dari 6 kDa berdasarkan penanda dekstran D4. Selanjutnya, kedua aktivitas CSD, yaitu meningkatkan produksi IgM dan menginduksi penghambatan pertumbuhan, tidak diinaktivasi oleh perlakuan autoklaf (Gambar 2), meskipun beberapa konstituen berkumpul dan hilang setelah CSD dilewatkan melalui 0.{{6} }um filter. Pola elusi CSD dan CSD yang diautoklaf hampir identik, namun, aktivitas relatif meningkatkan produksi IgM dalam CSD yang diautoklaf lebih rendah daripada CSD yang tidak diobati. Beberapa alasan tampaknya agregat memegang konstituen aktif atau beberapa konstituen aktif tidak aktif. Hasil kromatografi pada HW-55F menunjukkan kemungkinan adanya 2 jenis faktor imunomodulator: yang pertama, terkonsentrasi di fr. no.32. adalah konstituen aktif berbobot molekul tinggi (HCS) yang dapat meningkatkan produksi IgM, sedangkan yang kedua, terkonsentrasi di fr. no.50, adalah konstituen aktif dengan berat molekul menengah (MCS) yang dapat menghambat proliferasi sel (Gambar 3). Namun, puncak yang diperoleh untuk HCS dan MCS (masing-masing fr.no.32 dan 50) tidak setajam dekstrans dari MW yang diketahui (data tidak ditampilkan). Pengamatan ini menunjukkan kemungkinan adanya produk sampingan yang dihasilkan secara artifisial selama persiapan CSD, polimer dari konstituen aktif yang mudah dihancurkan dan terdiri dari banyak unit, atau berbagai konstituen aktif yang memiliki MW asli yang berbeda. Pola elusi pada kromatogram menunjukkan bahwa tidak mudah untuk mendapatkan konstituen murni dari HCS dan MCS karena tampaknya ada berbagai konstituen yang memiliki MW yang sedikit berbeda seperti yang disebutkan di atas. Meskipun keduanya merupakan campuran dari konstituen aktif, tampak bahwa HCS terdiri dari konstituen MW melebihi 70 kDa, sedangkan MCS terdiri dari MW melebihi 6 kDa. HCS dielusi pada HW-55F dalam fraksi yang berada di luar rentang pemisahan. Pada Sephacryl-S400.sebagian dari HCS(fr.no.36) dielusi dalam fraksi yang sama dengan penanda D1, yaitu dari MW 2,000 kDa (Gambar 4). Secara umum, polisakarida dan protein diperhitungkan sebagai konstituen MW tinggi yang larut dalam air dalam ekstrak tumbuhan. Karena hampir semua protein fungsional dinonaktifkan oleh perlakuan panas, mereka tampaknya polisakarida. Namun, Taman et. Al. telah melaporkan protein kecil sitotoksik termostabil yang disebut viscotoxin, yang dibuat dari ekstrak mistletoe (Viscum album L., Viscaceae).4Selanjutnya, viscotoxins telah terbukti meningkatkan aktivitas imunomodulator sel pembunuh alami manusia.5Pada Gambar 3, MCS, yang memiliki MW yang lebih rendah, menunjukkan kandungan protein yang lebih tinggi. Mempertimbangkan fakta-fakta ini, MCS mungkin polisakarida yang terikat protein8 atau mungkin protein termostabil seperti viscotoxins. Hasil ini menunjukkan bahwa 2 konstituen aktif mungkin polisakarida. Jika tidak, MCS mungkin merupakan protein termostabil.

Referensi

1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: Efek perlindungan tubuloside B pada apoptosis yang diinduksi alfa TNF dalam sel saraf. Acta Pharmacol. Dosa.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:Ekstrak salsa cistanchepeningkatan produksi IgM di lini sel B manusia, BALL-1.J. perdagangan Med.,24,209-211,2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche salsaekstrak menginduksi apoptosis pada garis sel limfoma Burkitt manusia Namalwa. J.Trad. Med.,25,24-27,2008.

4) Taman. JH,Hyun, CK,Shin HK: Efek sitotoksik dari komponen dalam benalu yang diberi perlakuan panas (album Viscum).Cancer Let, 139, 207-213,1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Viscotoxins mistletoe meningkatkan sitotoksisitas yang diperantarai sel pembunuh alami. Eur.J. Biokimia.,269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M., Yang, LX: Efek antikanker dan mekanisme polisakarida-K (PSK): implikasi imunoterapi kanker. Antikanker Res.,22,1737-1754,2002.

suplemen cistanche