Penghambatan Enteropeptidase Meningkatkan Fungsi Ginjal Pada Tikus Model Penyakit Ginjal Diabetik

{0}}

PENGANTAR

Diabetes mellitus tipe 2 adalah gangguan metabolisme kronis yang ditandai dengan hiperglikemia, resistensi insulin, dan insufisiensi insulin relatif. Ini adalah masalah klinis global yang mengarah pada komplikasi diabetes mikrovaskular dan makrovaskular penyakit ginjal(DKD) adalah komplikasi diabetes mikrovaskular utama yang mengakibatkanpenyakit ginjal(CKD) dan tahap akhirpenyakit ginjal. Di Amerika Serikat, lebih dari 40 persen pasien dengan diabetes tipe 2 memiliki DKD.2 DKD didefinisikan oleh mikroalbuminuria diikuti oleh proteinuria, yang mencerminkan kerusakan glomerulus yang disebabkan oleh hiperfiltrasi yang diinduksi hiperglikemia, hipertensi, dan cedera podosit.3 Pada proteinuria, protein yang berlebihan beban ke sel tubulus proksimal menyebabkanginjalperadangan dan fibrosis interstisial, jalur utama dalamgagal ginjalprogresi.4 Blokade sistem renin-angiotensin (RAS) dengan penghambat enzim pengubah angiotensin atau penghambat reseptor angiotensin II (ARB) secara klinis digunakan sebagai pengobatan standar untuk pasien dengan DKD.5 Baru-baru ini, co-transporter natrium-glukosa{ {6}} inhibitor telah diperkenalkan sebagai kelas baru obat renoprotektif.6,7 Namun, terlepas dari intervensi obat ini, pasien dengan kondisi yang memburuk secara bertahapfungsi ginjal tetap, dan obat baru dengan mekanisme aksi baru diperlukan untuk meningkatkanginjalkeadaan patologis.Asupan protein makanan yang berlebihan dianggap mempercepat perkembangangagal ginjaldengan menginduksi hiperfiltrasi glomerulus, akumulasi racun uremik, dan penghambatan autofagi glomerulus.8 Telah dilaporkan bahwa peningkatan asupan protein makanan berkorelasi positif dengan peningkatan risiko perkembangan ke stadium akhirgagal ginjalpada pasien dengan CKD; 9 namun, signifikansi terapeutik dari menurunkan asupan protein makanan untukfungsi ginjalmasih kontroversial,10 dan efektivitas intervensi farmakologis dalam mengatur kaskade pencernaan protein tidak jelas.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN GAGAL GINJAL/GINJAL

Enteropeptidase adalah protease serin transmembran tipe II, sangat diekspresikan pada sisi luminal enterosit pada batas sikat duodenum. Ini mengubah tripsinogen tidak aktif menjadi tripsin aktif melalui pembelahan di situs aktivasi tripsinogen, dan tripsin yang diaktifkan kemudian mengaktifkan zimogen pencernaan lain yang disekresikan dari pankreas, termasuk kimotripsinogen, proelastase dan prokarboksipeptidase.11-13 Enzim yang diaktifkan ini mengatur pemecahan protein menjadi asam amino ( AA). Dengan demikian, enteropeptidase memainkan peran kunci dalam pencernaan protein dan penyerapan AA. SCO-792 adalah inhibitor enteropeptidase baru yang tersedia secara oral dengan konsentrasi penghambatan setengah maksimal dari<10 nm="" against="" rat="" and="" human="" enteropeptidase="" in="" vitro.14="" in="" mouse="" models,="" enteropeptidase="" inhibition="" improves="" obesity="" and="" diabetes.15="" how="" ever,="" the="" pharmacological="" effects="" of="" enteropeptidase="" inhibition="" on=""> ginjalkomplikasi sebagian besar tidak diketahui. Mempertimbangkan bahwa enteropeptidase adalah hulu terjauh dari enzim yang terlibat dalam pencernaan protein dan proses penyerapan, penyelidikan efek terapeutik penghambatan enteropeptidase pada kondisi DKD mungkin bermanfaat.Dalam penelitian ini, kami memeriksa efek inhibitor enteropeptidase, SCO-792, padaginjal variabel pada tikus Wistar berlemak (WF), model hewan dengan DKD.16 Pertama, kami mengevaluasi efek metabolik dan renoprotektif SCO-792 pada tikus WF. Selanjutnya, kontribusi perubahan penyerapan AA terhadap kemanjuran SCO-792 dievaluasi. Eksperimen tambahan dilakukan untuk mengungkapkan efek SCO 792 pada aktivitas autofagi glomerulus dan untuk menguji efek gabungan SCO-792 dengan ARB.

Kata kunci:obat anti-diabetes, nefropati diabetik, pengembangan obat; penyakit ginjal; gagal ginjal; ginjal

BAHAN DAN METODE

Bahan:Semua reagen dibeli dari FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorporation (Osaka, Jepang), kecuali dinyatakan lain. SCO-792 disintesis oleh Takeda Pharmaceutical Co. Ltd (Tokyo, Jepang). Pioglitazone hidroklorida dibeli dari Tokyo Chemical Industry (Tokyo, Jepang). Irbesartan dibeli dari LKT Laboratories, Inc. (St Paul, Minnesota).

HewanTikus WF jantan dan tikus Wistar lean (WL) yang tidak diketik diperoleh dari RABICS Ltd (Kanagawa, Jepang). Semua hewan ditempatkan di ruangan dengan suhu terkontrol (23 C), kelembaban (55 persen ), dan pencahayaan (lampu menyala antara pukul 07.00 hingga 19.00, dengan akses gratis untuk diet chow laboratorium standar (CE-2; CLEA Japan, Inc., Tokyo, Jepang) dan air keran. Prosedur perawatan hewan dan protokol percobaan hewan yang digunakan dalam penelitian ini telah disetujui oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional (Shonan Health Innovation Park), yang diakreditasi oleh American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN FUNGSI GINJAL/GINjal

Studi dosis berulang dua minggu pada tikus WFTikus WF jantan, usia 31 minggu, dengan berat badan awal 693,5 ± 22,5 g dan kadar hemoglobin terglikasi 7,4 ± 0,4 persen , diacak menjadi lima kelompok (kendaraan, 6, 20 dan 60 mg/kg SCO-792, dan 1 mg/kg pioglitazone hidroklorida; n=7), dengan mempertimbangkan rasio albumin-kreatinin urin awal (UACR), hemoglobin terglikasi, glukosa plasma, insulin plasma dan berat badan. Tikus WL digunakan sebagai kontrol (n=5). Tikus diberikan secara oral baik pembawa (0,5 persen [b/v] metilselulosa), SCO-792, atau pioglitazone hidroklorida sekali sehari selama 15 hari. Hari perawatan pertama ditetapkan sebagai hari 0. Berat badan dan asupan makanan dipantau setiap 1 hingga 4 hari, dan feses dikumpulkan pada hari ke 7. Sampel darah dikumpulkan sebelum pengacakan dan pada hari ke-14 untuk menilai variabel darah. Sampel urin dikumpulkan sebelum pengacakan dan pada hari ke 3, 7 dan 13 untuk mengukur variabel urin. Pada hari ke 15,ginjaljaringan diisolasi dari tikus yang dibius dan disimpan pada suhu -80C sampai digunakan.

Pengukuran laju filtrasi glomerulusTikus WF jantan, usia 30 minggu, diacak menjadi dua kelompok (n=7) berdasarkan laju filtrasi glomerulus awal (GFR), UACR, hemoglobin terglikasi dan berat badan dan kemudian diberikan secara oral kendaraan (0,5 persen metilselulosa) atau 60 mg/kg SCO-792 selama 4 hari. Tikus WL digunakan sebagai kontrol (n=5). GFR diukur menggunakan fluorescein isothiocyanate (FITC)-inulin (F3272; Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri). FITC-inulin yang dilarutkan dalam saline disuntikkan ke dalam vena ekor tikus pada 36 mg/kg, dan darah dikumpulkan pada 20, 40, 60 dan 80 menit setelah injeksi untuk mengukur konsentrasi FITC-inulin. GFR dihitung dari FITC-inulin clearance.17

Evaluasi suplementasi AA pada tikus WFTikus WF jantan, usia 24 minggu, diacak menjadi empat kelompok (n=5) berdasarkan UACR awal, hemoglobin terglikasi, glukosa plasma dan berat badan. Tikus menerima diet atau diet bubuk CE-2 termasuk peningkatan AA sebesar 51,8 persen (pada rasio CE-2 yang sama) setelah suplementasi dengan 18 L-AA (asam aspartat, treonin, serin, glutamat asam, glisin, alanin, valin, isoleusin, leusin, tirosin, fenilalanin, lisin, histidin, arginin, prolin, sistein, metionin dan triptofan). Baik kendaraan (0.5 persen metilselulosa) atau 60 mg/kg SCO- 792 diberikan secara oral kepada tikus sekali sehari selama 11 hari. Untuk mengevaluasi perubahan kadar AA plasma, sampel darah dikumpulkan sebelum dan pada 3, 8 dan 13 jam setelah pemberian SCO-792 pada hari ke 9. Sampel urin dikumpulkan pada hari ke-11 untuk mengukur UACR.

Pengukuran penanda autophagy glomerulusTikus WF jantan, usia 29 minggu, diacak menjadi dua kelompok berdasarkan UACR, kadar hemoglobin terglikasi, kadar glukosa plasma dan berat badan (n=7) dan kemudian diberikan pembawa secara oral (0. 5 persen metilselulosa) atau 60 mg/kg SCO-792. Setelah 3 jam,ginjaljaringan diisolasi dari tikus yang dibius, dan kemudian glomeruli diisolasi dengan metode pengayakan.18 Kadar protein target, termasuk LC3A/B, p62, p-S6, S6, Wilms tumor 1 (WT1) dan -aktin, dalam glomeruli terdeteksi oleh Western blotting.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN INFEKSI GINJAL/GINJAL

Pengobatan kombinasi empat minggu SCO-792 dengan irbesartan pada tikus WFTikus WF jantan, usia 32 minggu, dengan berat badan awal 675,7 ± 31,2 g dan hemoglobin terglikasi 7,0 persen ± 0,3 persen diacak menjadi enam kelompok (kendaraan, {{ 9}}.02 persen SCO-792, 0.{{20}}5 persen SCO-792, 15 mg/kg irbesartan, { {29}}.02 persen SCO-792 ditambah 15 mg/kg irbesartan, dan 0,05 persen SCO-792 ditambah 15 mg/kg irbesartan; n=7) berdasarkan UACR mereka, hemoglobin terglikasi, glukosa plasma dan berat badan. Tikus WL digunakan sebagai kontrol normal (n=5). Tikus memiliki akses gratis ke diet bubuk CE-2 yang mengandung masing-masing senyawa (b/b: 0,02 dan 0,05 persen SCO-792) atau diet bubuk CE-2 saja. Baik pembawa (0,5 persen metilselulosa) atau irbesartan (15 mg/kg) diberikan secara oral sekali sehari. Sampel darah diambil pada hari ke 28 untuk mengetahui variabel darah. Sampel urin dikumpulkan sebelum pengacakan, dan pada hari ke 7 dan 30 untuk menentukan variabel urin.Ginjaljaringan diisolasi dari tikus yang dibius pada hari ke 33 dan disimpan pada suhu -80C sampai digunakan.

Analisis statistikSignifikansi statistik pertama dianalisis menggunakan uji Bartlett untuk homogenitas varians, diikuti oleh uji Williams (P > {{0}}.05) dan uji Shirley-Williams (P Kurang dari atau sama dengan 0.{{10}}5) untuk studi tergantung dosis, uji Dunnett (P > 0.05) dan uji Baja (P Kurang dari atau sama dengan 0.05) untuk beberapa perbandingan versus kontrol, atau uji Tukey (P > 0,05) untuk semua perbandingan berpasangan. Atau, signifikansi statistik dianalisis menggunakan uji F untuk homogenitas varians, diikuti oleh uji-t Student (P > 0,2) atau uji Aspin-Welch (P Kurang dari atau sama dengan 0,2). Uji Williams dan Shirley-William dilakukan dengan menggunakan tingkat signifikansi satu arah sebesar 2,5 persen (0,025). Pengujian lainnya dilakukan dengan menggunakan tingkat signifikansi dua arah yaitu 1 persen (0,01) dan 5 persen (0,05). Untuk mengevaluasi apakah perlakuan kombinasi dengan SCO-792 dan irbesartan memiliki efek aditif atau sinergis yang signifikan, dilakukan ANOVA dua arah yang memberikan efek utama dan efek interaksi SCO-792 dan irbesartan. Semua data disajikan sebagai mean ± SD. Metode untuk mengukur kandungan protein feses, mengukur variabel darah dan urin, menganalisis ekspresi gen, mengisolasi glomerulus, melakukan Western blotting, dan mengukurginjalkandungan kolagen dijelaskan dalam Lampiran S1.

HASIL

SCO-792 meningkatkan variabel metabolisme pada tikus WFUntuk mengevaluasi potensi anti-DKD dari penghambatan enteropeptidase, SCO-792 diberikan secara oral kepada tikus WF sekali sehari selama 2 minggu. Tikus WF dihasilkan oleh persilangan tikus Wistar Kyoto dan tikus berlemak Zucker19 dan ideal untuk digunakan sebagai model DKD karena fenotipe metaboliknya yang representatif (hiperglikemia, resistensi insulin dengan obesitas berat, proteinuria progresif dari usia 12 minggu16). Kadar protein feses, yang merupakan penanda farmakodinamik dari pencernaan protein yang berkurang setelah penghambatan enteropeptidase di usus, meningkat tergantung dosis pada tikus yang diobati dengan SCO-792-(Gambar 1A). Pengurangan asupan makanan diamati selama penelitian dan asupan makanan kumulatif menurun secara signifikan oleh SCO-792 (Gambar 1B). Secara konsisten, berat badan lebih rendah pada tikus yang diberi SCO-792-(Gambar 1C). Variabel diabetes seperti glukosa plasma, hemoglobin terglikasi, insulin plasma dan kadar glukagon plasma menurun setelah 2-minggu pemberian dosis berulang SCO-792 (Gambar 1D-G). Kadar lipid plasma juga diturunkan oleh SCO-792 (Gambar 1H,I).

SCO-792 meningkatkan variabel ginjal pada tikus WFSelain peningkatan variabel diabetes, SCO-792 segera mengurangi UACR dan efek ini dipertahankan selama pemberian dosis berulang (Gambar 2A). Sebaliknya, UACR tetap tidak berubah pada tikus yang diberikan pioglitazone, agonis reseptor yang diaktifkan oleh proliferator peroksisom, meskipun ada penurunan kuat dalam kadar glukosa plasma.

setara dengan SCO-792 (Angka 1D, 2A). Di akhir studi,ginjalkadar mRNA Col1a1, penanda fibrosis,20 dan Ccl2, penanda peradangan,21 menurun pada tikus yang diberi SCO-792 (Gambar 2B). Kencingginjalmolekul cedera-1 (KIM-1), yang merupakan biomarker dariginjalcedera tubular,22 juga berkurang pada tikus yang diobati dengan -792-SCO (Gambar 2C). Pengukuran GFR menggunakan FITC-inulin mengungkapkan keadaan hiperfiltrasi glomerulus pada tikus WF dibandingkan dengan tikus WL. Namun, setelah 4-hari pemberian SCO-792, kelebihan glomerulus pada tikus WF benar-benar dinormalisasi (Gambar 2D).

Suplementasi AA dari diet membalikkan pengurangan UACR oleh SCO-792 pada tikus WFPeningkatan kadar protein feses yang diamati setelah pengobatan SCO-792 menegaskan bahwa penghambatan enteropeptidase mencegah pencernaan protein (Gambar 1A). Dengan demikian, SCO-792 melemahkan pembentukan AA dari protein dalam lumen usus. Untuk menyelidiki peran asupan AA dalam efek renoprotektif SCO-792, tikus yang diberi kendaraan atau SCO-792 ditempatkan dengan akses gratis ke chow normal atau chow yang ditambah AA. Seperti yang diharapkan, pada tikus yang diberi makan makanan biasa, SCO- 792 menurunkan kadar AA total plasma (Gambar 3A,C). Namun, suplementasi AA untuk diet meniadakan perubahan yang diinduksi enteropeptidase (Gambar 3B, C). Sementara kadar asam amino rantai cabang (BCAA) plasma seperti valin, leusin, dan isoleusin secara khusus diturunkan oleh SCO-792 pada tikus yang diberi makan makanan normal, sekali lagi, perubahan ini dinegasikan oleh suplementasi AA (Gambar 3D-F ). Konsisten dengan perubahan yang diamati dalam kadar AA plasma, pengurangan UACR yang diinduksi SCO-792-sebagian besar dilemahkan pada tikus yang diberi makan makanan yang diberi AA (Gambar 3G).

SCO-792 mengaktifkan pensinyalan autophagy di glomerulus tikus WFAsam amino bertindak sebagai pengatur utama homeostasis protein intraseluler, sehingga memodulasi keseimbangan antara proses anabolik (sintesis protein) dan katabolik (autophagy).23 Hal ini dicapai melalui protein penginderaan AA, seperti target mamalia rapamycin (mTOR), dan kontrol umum nonderepressible kinase 2. Untuk memeriksa apakah SCO-792 mempengaruhi jalur autophagy di glomerulus, ekspresi protein LC3A/BI dan LC3A/B-II di glomerulus tikus WF dilakukan

diukur dengan Western blotting. LC3A/B adalah penanda autophagosome, sedangkan LC3A/BI diubah menjadi LC3A/B-II oleh lipidasi terminal-C selama autophagy. Oleh karena itu, rasio ekspresi protein LC3A/B-II terhadap LC3A/BI digunakan sebagai indikator autophagy.24 Di sini, analisis Western blotting mengungkapkan bahwa SCO-792 secara signifikan meningkatkan rasio LC3A/B-II terhadap LC3A/BI di glomerulus tikus WF (Gambar 4A,B). Sebaliknya, tingkat protein p62, penanda autophagy alternatif yang mengirimkan substrat autophagic ke autophagosomes dan didegradasi oleh autophagy,25 dikurangi oleh SCO-792 (Gambar 4A,C). Selain itu, SCO-792 secara signifikan menurunkan tingkat fosforilasi protein S6; ini menunjukkan inaktivasi pensinyalan mTOR (Gambar 4A, D). Sebaliknya, tingkat ekspresi WT1, penanda podosit, dan -aktin, kontrol pemuatan untuk Western blotting, tidak berubah di antara kelompok (Gambar 4A, E, F).

Kombinasi SCO-792 dengan irbesartan aditif menurunkan UACR pada tikus WFKarena inhibitor RAS banyak digunakan sebagai pengobatan standar untuk pasien dengan DKD, efek tambahan pada inhibitor RAS diperlukan untuk obat anti-DKD baru. Untuk mengevaluasi efek gabungan SCO-792 dengan ARB, SCO-792 (0.02 persen dan 0.05 persen dalam diet) dan irbesartan (15 mg/kg dosis oral sekali sehari) sendiri atau dalam kombinasi diberikan pada tikus WF selama 4 minggu. Itu menarik untuk mengevaluasi kemanjuran penghambatan enteropeptidase berkelanjutan pada variabel penyakit; maka pemberian diet-admix SCO-792 dilakukan dalam penelitian ini. Dosis SCO-792 yang dihitung (mg/kg/hari) untuk setiap kelompok adalah 6,81 untuk kelompok 0.02 persen SCO-792, 13,10 untuk SCO 0,05 persen -792 grup, 6,59 untuk grup 0,02 persen SCO-792 plus irbesartan, dan 11,44 untuk grup 0,05 persen SCO-792 plus irbesartan. Sementara SCO-792 saja dan irbesartan saja menurunkan UACR, kombinasi SCO-792 dan irbesartan semakin menurunkan UACR. Efek aditif yang signifikan pada pengurangan UACR diamati setelah pemberian SCO- 792 dalam kombinasi dengan irbesartan (Gambar 5A,B). Sebaliknya,irbesartan tidak mempengaruhi efek anti-diabetes atau anti-obesitas yang dicapai oleh SCO-792 (Gambar 5C-F). Khususnya, SCO-792 secara signifikan mengurangiginjalkandungan kolagen (Gambar 5G).

DISKUSIDalam penelitian ini, kami mengevaluasi efek inhibitor enteropeptidase baru, SCO-792, pada keadaan penyakit pada model tikus praklinis DKD. Pemberian oral SCO-792 pada tikus WF segera mengurangi albuminuria setelah hanya 3 hari pengobatan, dan efek ini dipertahankan selama periode pemberian obat. Selain itu, efek ini mungkin tidak bergantung pada kontrol glukosa. Selain itu, penurunan fibrosis, peradangan, dan penanda cedera tubular diginjaldiamati pada tikus yang diobati-792-SCO. SCO-792 dosis menginduksi tambahanginjalefek perlindungan, termasuk menghilangkan hiperfiltrasi glomerulus dan aktivasi autophagy di glomerulus. Pengurangan UACR yang diinduksi SCO-792-sebagian besar dilemahkan oleh suplementasi AA dari makanan. Akhirnya, menggabungkan SCO-792 dan irbesartan secara efektif menurunkan UACR Asam amino dikenal sebagai penginduksi hiperfiltrasi.26 Pada manusia, makanan kaya protein tunggal atau infus AA secara sementara meningkatkan GFR.27,28 Keadaan hiperfiltrasi yang disebabkan oleh kaya proteinDiet dianggap mempercepat penurunan progresif dalamfungsi ginjalpada pasien dengan CKD.29 Dalam penelitian ini, tikus WF menunjukkan peningkatan GFR, menunjukkan hiperfiltrasi glomerulus yang kemungkinan meningkatkan UACR. Sementara pengobatan SCO-792 mengurangi kadar AA plasma dan menurunkan UACR pada tikus WF, efek ini ditiadakan setelah suplementasi AA pada makanan. Selain itu, pengobatan SCO-792 menormalkan GFR pada tikus WF. Secara bersama-sama, penurunan SCO-792-dalam sirkulasi AA mungkin berperan dalam memperbaiki hiperfiltrasi glomerulus dan mengurangi UACR pada tikus WF. Selanjutnya, SCO-792 meningkatkan fibrosis, peradangan, dan penanda cedera tubulus diginjal.Kelebihan protein dalam filtrat glomerulus dapat menyebabkanginjalinflamasi dan fibrosis interstisial pada sel tubulus proksimal.4 Oleh karena itu, mitigasi albuminuria dapat melindungi glomerulus danginjalsel tubular pada tikus yang diobati dengan SCO-792-dari perkembanganginjalpenurunan nilai.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN NYERI GINJAL / GINJAL

Perubahan rasio LC3AB-II ke LC3AB-I dan tingkat protein p62 menunjukkan SCO-792-menginduksi aktivasi autophagy di fraksi glomerulus dariginjaljaringan pada tikus WF. Menariknya, SCO-792 secara akut menurunkan kadar BCAA plasma pada tikus WF. BCAA, terutama leusin, adalah pengatur utama jalur autofagi dengan pensinyalan mTOR dan menghambat pembentukan autofagosom.23,30 Faktanya, fosforilasi protein S6, yang merupakan molekul pensinyalan hilir mTOR, secara potensial dihambat oleh SCO{{ 4}}, menunjukkan bahwa penurunan kadar BCAA plasma oleh penghambatan enteropeptidase mungkin terlibat dalam aktivasi autofagi glomerulus melalui inaktivasi jalur mTOR. Autophagy umumnya merupakan respons terhadap kekurangan nutrisi, tetapi juga terlibat dalam berbagai proses fisiologis dan perkembangan penyakit, termasukpenyakit ginjal0,31 Di glomerulus, autophagy diperlukan untuk melindungi podosit dari stres retikulum endoplasma dan untuk mempertahankan fungsi podosit, dan dengan demikian, ada tingkat aktivitas autophagy yang tinggi di podosit.32 Penurunan autophagy spesifik podosit menghasilkan proteinuria, menunjukkan peran penting autophagy dalam mesin filtrasi glomerulus.32,33 Oleh karena itu, aktivasi autophagy glomerulus mungkin menjadi salah satu mekanisme terkait AA dimana SCO-792 meningkatkan albuminuria pada tikus WF.

Hiperglikemia kronis dilaporkan terlibat dalam jalur genesis DKD dengan menginduksi aktivasi jalur poliol, generasi produk akhir glikasi lanjut, stres oksidatif, dan inflamasi.34 Dalam penelitian ini, pioglitazone, yang meningkatkan hiperglikemia, gagal menurunkan UACR pada tikus WF. Hal ini menunjukkan bahwa peningkatan hiperglikemia bukanlah faktor utama dalam pengurangan UACR yang cepat oleh SCO-792 dalam model ini. RAS adalah jalur penting untuk perkembangangagal ginjal, dan efek menguntungkan dari penghambatannya dengan ARB pada pasien dengan DKD telah ditetapkan.5 Sebuah studi kombinasi mengungkapkan bahwa waktu untuk memulai penurunan UACR berbeda antara SCO-792 dan irbesartan, dan bahwa senyawa ini bertindak secara aditif untuk meningkatkan UACR pada tikus WF. Hasil ini menunjukkan bahwa mekanisme yang mendasari efek anti-albuminuria dari SCO-792 adalah tidak tergantung pada RAS. Tikus WF adalah normotensif dan SCO-792 tidak berpengaruh pada tekanan darah pada tikus WF; karenanya, efek yang diamati dari SCO-792 mungkin tidak bergantung pada kontrol tekanan darah (Gambar S1). Oleh karena itu, SCO-792 dapat digunakan sebagai terapi tambahan untuk inhibitor RAS dalam pengaturan klinis di masa depan. Selanjutnya, penghambatan enteropeptidase yang berkelanjutan telah disarankan untuk lebih efektif dalam mengobati variabel penyakit karena pemberian diet-admix SCO-792 menunjukkan kemanjuran terapeutik yang lebih kuat pada dosis harian yang lebih rendah daripada dosis oral sekali sehari.

Seperti disebutkan di atas, kadar BCAA plasma terutama menurun di antara AA oleh SCO-792 pada tikus WF. Hubungan antara penyakit metabolik dan BCAA telah banyak berkorelasi dengan resistensi insulin.35 Selain itu, konsumsi protein menginduksi resistensi insulin otot pada manusia.36 Oleh karena itu, pengurangan BCAA plasma yang disebabkan oleh pemberian SCO-792 dapat meningkatkan resistensi insulin dan memperbaiki fenotip diabetes pada tikus WF. Hal ini konsisten dengan hasil penelitian sebelumnya pada tikus diabetes yang menunjukkan bahwa SCO-792 meningkatkan sensitivitas insulin (terutama di otot) dalam studi klem hiperinsulinemia-euglikemia.15 Terlebih lagi, penurunan kadar AA oleh SCO{{7} } mungkin terlibat dalam pengurangan glukagon plasma melalui siklus umpan balik timbal balik antara glukagon dan AA.37 Menariknya, peningkatan ampuh dalam variabel diabetes diamati bahkan pada dosis yang hanya memiliki efek kecil pada berat badan dalam 2-minggu diulang studi dosis SCO-792. Ini menunjukkan mekanisme yang bergantung pada AA termasuk peningkatan resistensi insulin dan penurunan kadar glukagon plasma kemungkinan besar terlibat dalam efek anti-diabetes SCO-792 selain tindakan yang bergantung pada penurunan berat badan.

Keterbatasan utama dari penelitian ini adalah bahwa efek SCO-792 pada fase akhir DKD tidak dievaluasi. Tikus WF menunjukkan albuminuria dengan peningkatan GFR, suatu kondisi penyakit yang mewakili fase DKD yang relatif awal. Untuk mengatasi keterbatasan ini, model CKD lain yang menunjukkan penurunan progresif GFR akan diperlukan untuk evaluasi jangka panjangginjalhasil setelah pengobatan SCO-792. Baru-baru ini, usus-ginjalaxis telah menjadi salah satu topik yang menarik, dan asosiasi mikrobiota usus dan metabolitnya denganpenyakit ginjaltelah diselidiki.38 Mempertimbangkan peran fisiologis enteropeptidase, penghambatannya dapat memodulasi komposisi mikrobiota usus. Oleh karena itu, analisis tambahan yang berfokus pada SCO-792-perubahan yang disebabkan oleh mikrobiota juga diperlukan.

Kesimpulannya, ini adalah studi pertama yang menunjukkan bahwa penghambat enteropeptidase SCO-792 secara efektif meningkatkanginjalvariabel dalam model tikus DKD. Penghambatan pemecahan protein di usus, diikuti dengan penurunan penyerapan AA, kemungkinan menjadi jalur utama untuk efek renoprotektif SCO-792, yang mempengaruhi pengurangan hiperfiltrasi glomerulus dan aktivasi autophagy di glomerulus. Secara keseluruhan, hasilnya menunjukkan bahwa SCO-792 memiliki potensi sebagai pilihan terapi baru untuk pasien dengan DKD.