Echincoside Mempromosikan Proliferasi Sel Epitel Tubular Ginjal Manusia Dengan Memblokir Jalur Pensinyalan NFkB yang dimediasi HBX/TREM2

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

YuFan ZHanG , QinFanG Wu , liMin ZHonG , donGWei GongG

Abstrak.

Protein virus hepatitis B X (HBX) diperlukan untuk replikasi HBV dan berperan dalam perkembangan hepatitis pada manusia. Namun, fungsi yang mendasari HBX selama glomerulonefritis kronis yang diinduksi HBV (HBV-Gn) tidak diketahui. (echinacosida dari cistanche)(ecH) adalah glikosida fenilethanoid dari genus Cistanche, yang memiliki aktivitas antiapoptosis dan neuroprotektif yang kuat. dalam penelitian ini, fungsi HBX dan hubungan antara HBX dan ecH dalam sel epitel tubulus ginjal manusia (rTecs; HK-2 cell line) dieksplorasi. analisis transkripsi-kuantitatif Pcr dan western blot digunakan untuk mengukur tingkat ekspresi mRNA dan protein HBX dalam sel HK-2, masing-masing. Pengujian Kit penghitungan sel-8 dilakukan untuk menganalisis proliferasi sel. Analisis flow cytometry digunakan untuk menentukan laju apoptosis. HBX menunjukkan efek antiproliferatif dan proapoptosis dalam sel HK-2 dan secara positif terkait dengan reseptor pemicu yang diekspresikan pada ekspresi sel myeloid 2 (TreM2). Selanjutnya, ECH mengganggu fungsi HBX dalam sel HK-2, berfungsi sebagai penekan HBX. Selain itu, inhibitor NFkB spesifik, PdTc, digunakan untuk memeriksa lebih lanjut hubungan antara HBX dan nF-kB. Hasilnya menunjukkan bahwa nF-κB terlibat dalam jalur pensinyalan HBX/TreM2 dan secara negatif mengatur ekspresi TreM2 di RTECS. Penelitian ini memberikan wawasan baru tentang fungsi HBX, dan juga menunjukkan nilai potensial ECH sebagai agen terapeutik untuk HBV-Gn.

pengantar

Virus hepatitis B (HBV) adalah virus Hepadnaviridae, yang menyebabkan hepatitis akut dan kronis pada manusia (1). HBV, tidak hanya menyebabkan infeksi persisten atau sementara di hati tetapi juga menginfeksi jaringan ekstrahepatik, termasuk pankreas, saluran empedu, sistem limfoid dan ginjal (2). Selain itu, infeksi HBV terkait erat dengan glomerulonefritis kronis (HBV-Gn); namun, mekanisme molekuler HBV selama HBV-Gn tidak sepenuhnya dipahami (3,4).

Protein pengatur HBV virus hepatitis B X (HBX) diperlukan untuk replikasi HBV (5,6). sejumlah penelitian telah melaporkan bahwa HBX mendorong proliferasi sel selama hepatokarsinoma terkait infeksi HBV (7-9). Sel epitel tubulus ginjal manusia (rTecs) adalah bagian utama dari interstitium tubulus ginjal dan memainkan peran aktif dalam peradangan ginjal (10). Apoptosis rTec terkait erat dengan disfungsi interstitium tubulus, yang selanjutnya mengarah pada perkembangan HBV-Gn (10). HBX terutama diekspresikan dalam sel rTec dan menyebabkan apoptosis rTec dan lesi tuba ginjal pada pasien dengan HBV-Gn (11,12). Lebih lanjut, HBX telah dilaporkan menekan proliferasi rTec tikus (13), dan ekspresi berlebih HBX mempercepat progresi siklus sel dari fase G1 ke S pada rTec primer, yang menyebabkan penghentian siklus sel pada fase S (14). Oleh karena itu, mengidentifikasi inhibitor HBX dapat memberikan terapi baru untuk HBV-Gn. Namun, jaringan molekul HBX yang tepat pada rTec manusia tidak sepenuhnya dipahami.(echinacosida dari cistanche)(ecH) adalah senyawa alami yang diekstraksi dariBentengtanaman, yang menunjukkan efek antiapoptotic dan anti-inflamasi (15,16). Sebuah penelitian sebelumnya melaporkan bahwa ecH menginduksi proliferasi dan mencegah apoptosis sel epitel usus (17). Lebih lanjut, ecH telah dilaporkan mempercepat regenerasi tulang dengan meningkatkan proliferasi sel osteoblas (18). ecH juga dapat menurunkan replikasi HBV, ekspresi antigen dan inflamasi pada sel epitel usus tikus (16,19). Namun, efek biologis ecH pada rTecs belum sepenuhnya dijelaskan.

Ekspresi berlebihan TreM2 mempromosikan proliferasi sel glioma (22). Sebaliknya, knockdown TreM2 menurunkan translokasi nF-κB ke nukleus dalam sel degeneratif nukleus pulposus manusia (23). Selanjutnya, TreM2 telah diidentifikasi sebagai target terapi baru untuk degenerasi diskus intervertebralis manusia (23). Namun, fungsi biologis TreM2 pada rTec manusia belum dilaporkan. dalam penelitian ini, ekspresi berlebih HBX (oeHBX) diinduksi dalam rTecs manusia (garis sel HK-2) ​​dan selanjutnya, efek ecH(echinacosida dari cistanche) pada sel oeHBX yang ditransfusikan diselidiki. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki fungsi HBX dan nilai potensial ecH sebagai agen terapi yang efektif untuk HBV-Gn.

Bahan: dan metode

Sel budaya.Garis sel rTec manusia HK-2 dibeli dari Shanghai Yaji Biotechnology co., ltd. Sel HK-2 dikultur dalam media DME/F12 (kucing no. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) yang dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi (kucing no. 16000‑044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, inc .), 2 mM l-glutamin dan 1 persen penisilin/streptomisin (cat. no. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) pada 37˚C dengan 5 persen CO2.

RNA isolasi dan membalik transkripsi‑kuantitatif PCR (RT‑qPCR).Total rna diekstraksi dari sel HK-2 menggunakan Trizol® (cat. no. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), sesuai dengan protokol pabrikan. Total RNA ditranskripsi balik menjadi cDNA menggunakan kit Sintesis cDNA Untai Pertama sesuai dengan protokol pabrikan (cat. no. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). qPCR dilakukan menggunakan SYBr-Green premix sesuai dengan protokol pabrikan (cat. no. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) pada detektor waktu nyata ABI‑7300 ​​(Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Kondisi PCR adalah: 95˚C selama 10 menit diikuti oleh 40 siklus 95˚C selama 15 detik, 60˚C selama 45 detik. Tiga pengulangan diperlukan untuk setiap reaksi. Pasangan primer berikut digunakan untuk qPCR: HBX forward, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' dan sebaliknya, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 maju, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' dan mundur, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; dan GaPdH maju, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' dan sebaliknya, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. Level mRNA dikuantifikasi menggunakan metode 2‑ΔΔCq dan dinormalisasi ke gen referensi internalGAPDH (24).

Ekspresi berlebihan dan memukul jatuh.Untuk menginduksi ekspresi berlebih dari HBX dan TreM2, urutan cDNA HBX atau TreM2 panjang penuh dimasukkan ke dalam vektor plVX-puro (laboratorium cleantech, inc.) dengan pencernaan ganda (Belakangiii danEcoRI). Selanjutnya, plasmid rekombinasi (1,5 g) ditransfusikan ke dalam sel HK-2 (2x105). Plasmid tiruan (vektor kosong, 1 g) ditransfusikan secara sementara ke dalam sel HK-2 (2x105) sebagai kontrol negatif (oenc) menggunakan lipofectamine® 2000 (cat. no. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, inc.). ecH(echinacosida dari cistanche)(cat. no. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) dilarutkan dalam DMSO (cat. no. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) pada konsentrasi 1, 2.5, 5, 10, 20 dan

masing-masing 50 mg/l; dan ditambahkan ke kultur sel oeHBX atau oeTreM2 yang ditransfeksi. Eksperimen berikutnya dimulai 48 jam kemudian.

Untuk merobohkan ekspresi TreM2, tiga interferensi kecil (si)RNA (siTreM2-1, siTreM2-2 dan siTreM2-3; 20 M) yang menargetkan TreM2 disintesis (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co . ltd.) dan selanjutnya ditransfeksi ke dalam sel HK-2 (2x105) menggunakan lipofectamine® 2000 sesuai dengan protokol pabrikan (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Urutan siRNA acak nonspesifik (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) kontrol si-negatif (nc) digunakan sebagai kontrol negatif. Lokus yang ditargetkan dan urutan sirna TreM2 disediakan di Tabel Si. Eksperimen selanjutnya dilakukan 48 jam kemudian.

Barat noda.Protein total diekstraksi dari sel HK-2

menggunakan buffer lisis RIPA (cat. no. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Protein total dihitung menggunakan kit uji Asam Bicinchoninic (cat. no. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) sesuai dengan protokol pabrikan dan 20 g protein/jalur dipisahkan melalui SDS-PaGe pada gel 15 persen. Densitometri sampel ditentukan dengan menggunakan pembaca lempeng mikro (dnM-9602, Pulangxin). Selanjutnya, protein yang dipisahkan dipindahkan ke membran PVDF. Setelah pemblokiran dengan 5 persen susu kering tanpa lemak selama 1 jam pada suhu kamar, membran diinkubasi dengan antibodi primer (Tabel SII) pada suhu 4˚C semalaman dan diinkubasi kembali dengan antibodi sekunder anti-tikus igG (1:1, 000, cat.no. a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) selama 1 jam pada 37˚C. Pita protein imunoreaktif divisualisasikan menggunakan sistem ecl (cytiva). Blot dilakukan dalam rangkap tiga.GAPDHdan H3 masing-masing digunakan sebagai kontrol pemuatan untuk protein sitoplasma dan inti.

Hasil

ECH (echinacosida dari cistanche)menekan fungsinya dari HBX di HK‑2 sel.Untuk menilai

fungsi HBX, ekspresi berlebih HBX diinduksi dalam sel HK-2. Tingkat mrna dan protein relatif HBX secara signifikan diregulasi dalam sel oeHBX dibandingkan dengan sel oenc (Gbr. 1a dan B). Selanjutnya, sel oeHBX dikultur dengan konsentrasi ecH yang berbeda (1, 2.5, 5, 10, 20 dan 50 mg/l; e1, e2.5, e5, e10, e20 dan e50, masing-masing). Ekspresi berlebih HBX secara signifikan mengurangi proliferasi sel HK-2, dan penurunan ini dibalikkan oleh ecH dengan cara yang bergantung pada dosis pada 24 dan 48 jam (Gbr. 1c).

Selanjutnya, tingkat proliferasi sel oeHBX tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan sel yang diobati dengan E1 (Gbr. 1c). Sebaliknya, pengobatan e10 secara signifikan meningkatkan tingkat proliferasi sel oeHBX dibandingkan dengan pengobatan E20 dan E50 yang tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan (Gbr. 1c). Oleh karena itu, efek ecH pada apoptosis diperiksa dalam sel yang diberi perlakuan e2.5, e5 dan e10-. Ekspresi berlebih HBX secara signifikan meningkatkan apoptosis sel HK‑2, dan tingkat apoptosis sel oeHBX menurun dengan pengobatan ecH dengan cara yang bergantung pada dosis (Gbr. 1d). secara keseluruhan, hasilnya menunjukkan bahwa ecH menghambat fungsi HBX dalam sel HK-2 dengan cara yang bergantung pada dosis.

TREM2 ekspresi adalah terhambat oleh ECH(echinacosida dari cistanche) di ditransfeksi oeHBX

sel.rT-qPcr dan western blotting digunakan untuk memeriksa mrna relatif dan tingkat ekspresi protein TreM2 dalam sel oeHBX, masing-masing. TreM2 mrna dan tingkat ekspresi protein secara signifikan diregulasi dalam sel oeHBX dibandingkan dengan sel oenc (Gbr. 2a dan B). Namun, ecH menurunkan tingkat ekspresi TreM2 dalam sel oeHBX yang ditransfusikan dengan cara yang bergantung pada dosis (Gbr. 2a dan B). Oleh karena itu, hasilnya menunjukkan bahwa ekspresi HBX secara positif terkait dengan ekspresi TreM2, dan selanjutnya menunjukkan efek supresif ecH pada HBX dalam sel HK-2.

Memukul jatuh dan ekspresi berlebihan dari TREM2 di HK‑2 sel.Untuk menilai lebih lanjut fungsi TreM2, knockdown TreM2 dan ekspresi berlebih diinduksi dalam sel HK-2 masing-masing menggunakan interferensi rna dan vektor lentiviral. Untuk uji knock-down, tiga siRNA menargetkan gen manusiaTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 dan siTreM2-3) ditransfusikan ke dalam sel HK‑2, dan siRNA non-spesifik digunakan sebagai kontrol negatif (sinc). ketiga sirna TreM2 berhasil merobohkan ekspresi endogen TreM2 dalam sel HK-2 (Gbr. 3a dan B). Namun, level ekspresi TreM2 mrna dan protein relatif terendah diamati pada sel yang ditransfeksi siTreM2-1 dan siTreM2-2-(Gbr. 3a dan B), oleh karena itu, siTreM2-1 dan siTreM{{13 }}sel yang ditransfeksi dipilih untuk eksperimen selanjutnya. Untuk eksperimen ekspresi berlebih, sebuah plasmid yang berisi urutan TreM2cdna manusia full-length dibangun dan kemudian ditransfeksi ke dalam sel HK-2 (oeTreM2). sebuah

tiruan plasmid berfungsi sebagai kontrol negatif (oenc). Tingkat ekspresi TREM2 meningkat secara signifikan pada sel oeTREM2 dibandingkan dengan sel oenc (Gbr. 3c dan d). Oleh karena itu, sel oeTreM2 digunakan untuk eksperimen selanjutnya.

TREM2 membungkam berkurang itu apoptosis dari oeHBX sel.Profil apoptosis sel oeHBX yang ditransfeksi dengan siTREM2 atau sinc dinilai. Tingkat apoptosis sel oeHBX plus sinc secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan sel terbuka. Namun, tingkat apoptosis menurun secara signifikan pada sel oeHBX plus siTreM2-1 atau siTreM2-2 dibandingkan dengan sel oeHBX plus sinc (Gbr. 4a). Hasilnya menunjukkan bahwa knockdown TreM2 menghambat fungsi HBX selama apoptosis sel HK-2.

Survivin termasuk dalam inhibitor keluarga protein apoptosis, yang menghambat aktivitas apoptosis dan menekan kematian sel (25). Menargetkan Survivin telah diidentifikasi sebagai pendekatan baru untuk pengobatan karsinoma sel ginjal (26). nF-κB juga merupakan inhibitor apoptosis yang berperan dalam proses tumor antiapoptosis (27). Selanjutnya, aktivasi caspase3 terkait erat dengan apoptosis (28). dalam penelitian ini, kandungan protein TreM2, Survivin dan caspase3 yang dibelah dalam sel HK‑2 diukur. Tingkat ekspresi TREM2 menurun secara signifikan pada sel oeHBX plus siTreM2-1/2 dibandingkan dengan sel oeHBX plus sinc (Gbr. 4B). Tingkat ekspresi Survivin meningkat secara signifikan dalam sel oeHBX plus siTreM2-1/2 dibandingkan dengan sel oeHBX. selain itu, tingkat ekspresi caspase3 yang dibelah secara signifikan menurun dalam sel oeHBX plus siTreM2-1/2 dibandingkan dengan sel oeHBX plus sinc (Gbr. 4B). Selanjutnya, oeHBX secara signifikan menurunkan translokasi NFkB ke nukleus, dan transfeksi siTREM2‑1/2 secara signifikan meningkatkan translokasi nuklir nF-kB (Gbr. 4B). Secara keseluruhan, hasilnya menunjukkan bahwa TreM2 adalah faktor hilir HBX dalam sel HK-2, oleh karena itu, HBX dapat mempromosikan apoptosis dengan mengatur ekspresi TreM2 dalam rTecs manusia.

TREM2 ekspresi berlebihan menekan itu translokasi dariNF‑κB ke itu inti di HK‑2 sel.Efek dari ecH(echinacosida dari cistanche)pada oeTreM2-sel yang ditransfeksi dianalisis. Ekspresi berlebihan TreM2 mempromosikan apoptosis sel HK-2 (Gbr. 5a). Apoptosis sel oeTREM2 secara signifikan menurun dengan pengobatan ECH (E10; Gambar 5A). Selanjutnya, ECH secara signifikan menurunkan ekspresi TreM2 dalam sel oeTreM2. Ekspresi berlebih TREM2 secara signifikan menurunkan tingkat ekspresi Survivin, namun, penurunan ekspresi ini dibalikkan oleh ecH. selain itu, tingkat ekspresi protein caspase3 yang dibelah secara signifikan meningkat dalam sel oeTreM2 dibandingkan dengan sel oenc; efek yang secara signifikan menurun dengan pengobatan ECH. Selanjutnya, ecH mempromosikan translokasi nF-κB ke nukleus dalam sel oeTreM2 (Gbr. 5B). Secara keseluruhan, hasilnya menunjukkan bahwa ecH juga menekan fungsi TreM2 dalam sel rTec manusia.

fungsi HBX adalah tertindas oleh itu NF‑κB penghambat PDTCdi manusia RTEC.Untuk menilai lebih lanjut hubungan antara

Sel HBX dan nF-κB, HK‑2 dikultur dengan inhibitor nF-κB spesifik, PdTc (10 mol/l; P10). Tingkat apoptosis sel sel oeHBX meningkat secara signifikan dibandingkan dengan sel oenc (Gbr. 6a). Namun, sel oeHBX plus PdTc menunjukkan tingkat apoptosis yang meningkat secara signifikan dibandingkan dengan sel oeHBX. Selanjutnya, tingkat ekspresi mRNA dan protein relatif TreM2 telah menurun pada sel oeHBX plus PdTc dibandingkan dengan sel oeHBX (Gbr. 6B). Oleh karena itu, hasil

menyarankan bahwa nF-κB secara negatif mengatur ekspresi TreM2 dalam sel yang ditransfeksi oeHBX.

NF‑κB penghambat PDTC menekan TREM2 promotor aktivitas di oeHBX sel.reporter luciferase (pGl3-enhancer-luc2) yang berisi urutan promotor tipe liar TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) dibuat dan kemudian ditransfeksi ke oenc , oeHBX dan oeHBX ditambah sel kultur P10.

Aktivitas luciferase dari vektor reporter yang mengandung promotor TREM2 tipe liar meningkat secara signifikan dalam sel oeHBX dibandingkan dengan sel oenc. Namun, PdTc secara signifikan menekan aktivitas luciferase reporter dalam sel oeHBX (Gbr. 7). secara keseluruhan, hasilnya menunjukkan bahwa PdTc menghambat transkripsi TreM2 dengan menekan aktivitas promotor TreM2 dalam sel oeHBX.

Diskusi

HBX terutama diekspresikan dalam rTec pasien dengan HBV-Gn, dan berfungsi sebagai penentu patogenesis virus (11,29). Oleh karena itu, peningkatan pengetahuan tentang fungsi jaringan molekul HBX merupakan langkah penting dalam mengembangkan pendekatan baru untuk pengobatan HBV-Gn. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memeriksa lebih lanjut fungsi HBX dan untuk mengeksplorasi potensi jaringan molekuler pada rTec manusia.

HBX menghambat proliferasi rTec (11). dalam penelitian ini, fungsi antiproliferasi dan pro-apoptosis HBX pada RTEC manusia diidentifikasi, menunjukkan bahwa HBX menekan perkembangan rTecs manusia.(echinacosida dari cistanche)menghambat replikasi HBV dan ekspresi antigen (19). dalam penelitian ini, ecH(echinacosida dari cistanche)pengobatan mengganggu fungsi HBX dalam sel HK-2, oleh karena itu, HBX dapat dipengaruhi oleh eH dalam sel HK-2.

LAPORAN Kedokteran Molekuler 22: 1137-1144, 2020 1143

Selanjutnya, hasil menunjukkan bahwa ecH(echinacosida dari cistanche)dapat berfungsi sebagai agen terapi potensial untuk HBV-Gn.

TreM2 adalah reseptor imun bawaan yang berperan dalam respon inflamasi (30). Dalam penelitian ini, ekspresi HBX secara positif terkait dengan ekspresi TreM2 pada RTECS manusia. Selain itu, knockdown TREM2 secara signifikan menurunkan tingkat apoptosis sel oeHBX, dan ecH(echinacosida dari cistanche)pengobatan mengurangi efek oeTreM2 pada apoptosis sel. Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa TreM2 ditargetkan oleh HBX di sel HK-2. Oleh karena itu, eH(echinacosida dari cistanche)dapat menghambat apoptosis rTec manusia dengan memblokir aktivitas jalur pensinyalan HBX/TreM2.

Laporan sebelumnya menunjukkan bahwa nF-κB, tidak hanya berperan dalam apoptosis sel tetapi juga terlibat dalam regulasi respons imun dan peradangan (31). Selanjutnya, TreM2 dimediasi oleh nF-κB-sensitif microRNA-34a selama penyakit Alzheimer dan degenerasi makula (32,33). dalam penelitian ini, tingkat apoptosis sel oeHBX meningkat secara signifikan dengan adanya PdTc . Sejauh pengetahuan kami, penelitian ini menyarankan untuk pertama kalinya bahwa, penghambat NFkB PdTc menekan aktivitas promotor TreM2. Lebih lanjut, hasilnya menunjukkan bahwa TreM2 secara negatif mengatur translokasi nF-κB ke nukleus dalam sel HK-2, tetapi secara positif terkait dengan level ekspresi caspase3 yang dibelah. TreM2 memainkan peran yang berlawanan dalam sel HK-2 dengan perannya dalam nukleus pulposus dan sel glioma degeneratif manusia (22,23). Oleh karena itu, penelitian ini menyarankan bahwa TreM2 mungkin memiliki fungsi yang berbeda dalam berbagai jenis sel manusia.

Secara keseluruhan, penelitian ini, tidak hanya menunjukkan bahwa nF-κB adalah komponen baru dari jalur pensinyalan HBX/TreM2 tetapi juga menyarankan bahwa nF-κB secara negatif mengatur ekspresi TreM2 dalam rTec manusia. Namun, keterbatasan utama dari penelitian ini adalah kurangnyadi vivopercobaan dan data klinis. Oleh karena itu, lanjutdi vivodan studi klinis diperlukan untuk mengkonfirmasi temuan penelitian ini.

dalam penelitian ini, fungsi ecH(echinacosida dari cistanche)diselidiki dan hasilnya menyarankan efek potensial dari ecH(echinacosida dari cistanche)pada jalur pensinyalan di rTecs manusia. Selanjutnya, penelitian ini meningkatkan pengetahuan yang ada tentang fungsi biologis ecH dalam sel rTec manusia dan juga menyarankan potensinya sebagai agen terapi baru untuk HBV-Gn.

Referensi

1. Karayiannis P: Virus hepatitis B: virologi, biologi molekuler, siklus hidup, dan penyebaran intrahepatik. Hepatologi internasional 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c dan Mason WS: Biologi virus hepatitis B. Mikrobiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usama e , ana Maria S, W ray K dan Fervenza Fc: Pengobatan nefropati terkait virus hepatitis B. nephron clin Praktek 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l, chen J dan Zheng F: Glomerulonefritis akut pascainfeksi terkait HBV: laporan 10 kasus. PloS satu 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl dan Bouchard MJ: Virus Hepatitis B X dan regulasi ekspresi Gen Virus. Cold Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Pera l , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et Al: Identifikasi seluruh genom dari target genomik HBx langsung. Genomik BMC 18: 184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z dan lv Q: downregulasi mir-200a-3p yang diinduksi oleh protein virus hepatitis B X (HBx) mendorong proliferasi dan invasi sel pada infeksi terkait HBV hepato-karsinoma. Pathol res Praktik 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y dan Gong G: HBx meningkatkan proliferasi sel dengan mengganggu pembicaraan silang antara mir-181a dan PTen. Sci rep 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c , Merle P, Thénoz M, Montreux F, dan Wattel e: HBx memicu penuaan seluler atau proliferasi sel tergantung pada fenotipe seluler. J Viral Hepat 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wang l, Zhu n, Zhou Y, Gu lJ dan Yuan WJ: Virus hepatitis B protein X memodulasi respons sel T dan makrofag yang diinduksi sel epitel tubulus ginjal. Sel imun Biol 94: 266-273, 2016.

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Mal dan Feng G: Virus hepatitis B protein X memodulasi apoptosis pada sel epitel tubulus proksimal ginjal manusia dengan mengaktifkan jalur pensinyalan JaK2/STAT3. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y dan Yuan W: Protein X virus hepatitis B dan sitokin proinflamasi bersinergi untuk meningkatkan apoptosis sel tubulus ginjal yang diinduksi Trail dengan upregulasi dr4. int J Biochem sel Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y dan li d: HBx menghambat proliferasi dan menginduksi apoptosis melalui peningkatan regulasi Fas/Fasl pada sel epitel tubulus ginjal tikus. J nephrol 26: 1033, 2013.

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l , chen Q dan lu Y: Transfeksi gen HBx mempengaruhi siklus sel epitel tubulus ginjal primer melalui pengaturan ekspresi siklin. Mol Med perwakilan 18: 1947-1954, 2018.