Antioksidan Graphene Oxide Nanoribbon Sebagai Agen Pemutih Baru Menghambat Faktor Transkripsi Terkait Mikroftalmia Terkait Mekanisme Melanogenesis

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

ABSTRAK:Dalammelaninproses sintesis, reaksi oksidatif memainkan peran penting, dan itu adalah strategi yang baik untuk menghambat produksi melanin dengan mengurangi stres oksidatif. Fullerene dan turunannya, atau kompleksnya, dianggap sebagai pemulung radikal bebas yang kuat, dan kami selanjutnya menerapkan sp2nanocarbon berlapis-lapis untuk menemukanmelaninmekanisme penghambatan sintesis. Dalam penelitian ini, kami menggunakan bahan nano baru, seperti tabung nano karbon berdinding ganda (MWCNT), MWCNT tipe pendek, nanoribbon oksida graphene (GONR), dan GONR tipe pendek, sebagai agen anti-oksidatif untuk mengaturmelaninproduksi. Hasilnya menunjukkan bahwa GONR memiliki kemampuan anti-oksidatif yang lebih baik dalam platform analisis stres oksidatif intraseluler dan ekstraseluler daripada yang lain. Kami mengusulkan bahwa GONR memiliki kelompok fungsional yang mengandung oksigen. Dalam uji 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate, kami menemukan bahwa GONR dapat mengkhelat ion logam menjadi spesies oksigen aktif. Dalam pandangan wawasan molekuler, kami mengamati bahwa bahan nano ini menurunkan regulasi sintesis melanin dengan mengurangi ekspresi gen terkait faktor transkripsi terkait mikroftalmia, dan ada konsekuensi serupa dalam ekspresi protein. Singkatnya, GONR adalah agen potensial sebagai novelantioksidandan bahan kosmetik pemutih kulit.

cistanchemenghambat pembentukan melanin

1. PERKENALAN

Kulit adalah organ yang menutupi permukaan luar tubuh manusia. Karena antarmuka bersentuhan dengan lingkungan, lapisan kulit memainkan peran penting dalam melindungi tubuh dari patogen, menghindari kehilangan air yang berlebihan, mengatur suhu tubuh, dan sebagainya. Melanosit tumbuh di membran basal epidermis kulit dan menyumbang 5 sampai 10 persen dari konten seluler. Mereka dicirikan sebagai "kelenjar" uniseluler yang memiliki dendrit dan percabangan yang tipis, panjang, seperti pita. Melanosit bergerak melalui sel-sel epidermis di sekitar mereka, menciptakan konstelasi sel-sel epidermis di sekitar setiap melanosit. Ada banyak penyebab internal dan eksternal penuaan kulit, dan salah satu faktornya adalah radiasi ultraviolet (UV) dari sinar matahari.1 Selama paparan UV, tingkat spesies oksigen reaktif (ROS) di kulit meningkat secara dramatis, yang dikenal sebagai stres oksidatif. Beberapa faktor toksisitas lingkungan juga meningkatkan stres oksidatif pada kulit, seperti pestisida, karbon tetraklorida, logam berat, amina aromatik, dan partikulat 2.5 (PM2.5).2 Dalam mekanisme biokimia, oksidan intraseluler dihasilkan dari sistem non-enzimatik, mengubahnya menjadi ROS untuk memicu jalur melanogenesis.

Selain ROS, ada banyak faktor yang mempengaruhi produksi melanin, termasuk ekspresi gen, peradangan, perubahan endokrin, dan penyerapan pigmen.1 Pada langkah pertama produksi melanin, tirosinase berperan dalam mengkatalisis tirosin menjadi pheomelanin dan eumelanin. Mekanisme pembuatan kedua pigmen serupa, yang meliputi hidroksilasi L tirosin menjadi 3,4-dihidroksi-L-fenilalanin (L-DOPA) dan oksidasi L-DOPA menjadi dopakuinon. Pada langkah berikutnya, dopamin dioksidasi oleh tirosinase terkait protein 1 (TRP-1) dan protein terkait tirosinase 2 (TRP-2) inmelanosom, yang diatur oleh faktor transkripsi terkait mikroftalmia (MITF) untuk membentukmelanin.Akhirnya, melanin matang dan diendapkan dalam stratum korneum.4,5 Ini menembus keratinosit tetangga dari lapisan basal dan melindungi DNA mereka dari mutasi atau modifikasi yang diinduksi UV. yang dewasamelanindalam melanosom ditransfer ke keratinosit6-9 dan akhirnya menyebabkan pigmentasi tahan lama. Lentigines, bintik-bintik, dan bintik-bintik coklat/hitam kadang-kadang menyebabkan masalah sosial pada pria dan wanita. Memblokir stres oksidatif atau menekan aktivitas tirosinase adalah salah satu strategi untuk menurunkan regulasi sindrom hiperpigmentasi dan kelainan dermatologis.Antioksidanmenyembuhkan hiperpigmentasi dan kerusakan sel yang disebabkan oleh ROS.10,11 Oleh karena itu, senyawa anti-oksidatif yang disintesis memiliki banyak aplikasi biofungsional dalam aplikasi perawatan kulit.

Fullerene (C60), carbon nanotube (CNT), graphene, dan graphene nanoribbon (GNR) adalah empat jenis nanokarbon sp2 yang banyak diteliti di seluruh dunia.12 Fullerene dan turunan atau kompleksnya telah lama dianggap sebagai penangkal radikal bebas yang kuat. Yodoh dkk. menggunakan C60 yang larut dalam air sebagai agen pelindung terhadap degenerasi yang diinduksi stres katabolik. Injak dkk. menyimpulkan bahwa C60(OH)24 kuatantioksidansenyawa ketika stres oksidatif terlalu tinggi. Okuda dkk. menyarankan bahwa kompleks C60 dapat mencegah cedera sel yang dimediasi NO.13,14 Tong et al. menunjukkan bahwa kompleks C60 mungkin merupakan kandidat yang menjanjikan untuk mengobati penyakit terkait otak yang disebabkan oleh peningkatan kadar superoksida. Sebenarnya, sebuah perusahaan Jepang mengidentifikasi fullerene dengan aktivitas antioksidan kuat untuk penggunaan kosmetik pada tahun 2006. Lucente Schultz et al. menunjukkan bahwa kemampuan pemulung radikal oksigen dari CNT berdinding tunggal yang difungsikan (SWCNTs) hampir 40 kali lebih besar daripada dendritik C60.15−19Fenoglio et al. mengamati bahwa CNT berdinding banyak (MWCNTs) memiliki kapasitas pembersihan radikal yang luar biasa dalam kontak dengan sumber eksternal radikal hidroksil atau superoksida. Perhitungan teori fungsional kepadatan juga mengungkapkan model SWCNT sebagai pemulung radikal bebas. Pada tahun 2004, Novoselov et al. pertama kali mendemonstrasikan bahwa graphene menunjukkan efek ambipolarelectric yang kuat dan dapat menjanjikan untuk aplikasi elektronik.21 Setelah itu, mereka melanjutkan untuk menunjukkan bahwa graphene memiliki sifat elektronik yang khas untuk gas 2D partikel yang dijelaskan oleh persamaan Dirac. 22,23 Sejak dua makalah terobosan ini, semakin banyak perhatian diberikan pada penelitian berbasis graphene.24-30 Misalnya, Qiu et al. pada tahun 2014 menunjukkan bahwa graphene oxide dan graphene beberapa lapis menunjukkan signifikanantioksidanaktivitas dan dapat melindungi berbagai molekul biomolekuler dari oksidasi.31Han et al. eksperimental menunjukkan pada tahun 2007 bahwa celah energi GNR dapat dikontrol selama proses litografi dengan mengubah lebar pita. Di antara empat nanokarbon, GNR paling sedikit mendapat perhatian. Sepengetahuan kami, ada sedikit penelitian tentang sifat antioksidan graphene oxide nanoribbons (GONRs).31,33 Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami dengan hati-hati menyiapkan MWCNT, MWCNT pendek, GONR, dan GONR pendek dan bertujuan untuk membandingkan sifat antioksidannya dan hasil terkait secara sistematis .

2. HASIL DAN PEMBAHASAN

2.1. Morfologi MWCNT dan GONR.

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >10 m sampai2−3 m. Secara bersamaan, diamati bahwa perlakuan asam nitrat membuat permukaan tabung menjadi kasar. Beberapa takik dan bentuk tidak beraturan ditampilkan dalam gambar perbesaran tinggi. Selanjutnya, menggunakan MWCNTs dan MWCNTs pendek melalui reaksi gelombang mikro memperoleh GONR dan shortGONR, masing-masing. Kami juga mengilustrasikan gambar TEM perbesaran rendah dan tinggi dari GONR dan GONR pendek. Karena pembukaan ritsleting longitudinal utama dan pemotongan horizontal minor, tampaknya GONR lebih pendek daripada MWCNT. Di sisi lain, gambar perbesaran tinggi menunjukkan diameter yang lebih besar, yaitu, 0.11−0,18 m, dari GONRs daripada MWCNT, menunjukkan bahwa proses unzip berhasil. Demikian pula, GONR pendek menunjukkan panjang yang lebih pendek dan diameter yang lebih besar daripada MWCNT pendek. Dalam kompresor udara dari proses membuka ritsleting baru kami, struktur lapisan tipis GONR kurang dari yang kami peroleh dalam laporan awal untuk daya gelombang mikro yang sama 250 W sambil mempertahankan MWCNT pusat yang lebih tebal.12 Ini berarti heterostruktur MWCNT/GONR inti-cangkang lebih mungkin muncul sebagai ganti struktur nanoribbon yang sepenuhnya terbuka melalui semua daya gelombang mikro dalam proses baru. Untuk membandingkan dengan GONR pendek dalam penelitian kami sebelumnya,34 daya gelombang mikro yang lebih tinggi menghasilkan lebih banyak takik di sisi pita dan tidak membentuk tepi pita halus yang bagus. Perhatikan bahwa kami menggunakan dua jenis kisi Cu yang berbeda pada Gambar 1a. Untuk MWCNT dan GONR dengan panjang yang cukup, kisi Gu dengan bentuk renda yang distabilkan dengan karbon (produkno. 01881-F, Ted Pella, Inc., USA) digunakan. Lubang terbuka dalam film karbon berenda mencegah gambar transmisi yang tumpang tindih antara karbon nano dan film karbon. Jaringan abu-abu gelap milik film karbon renda. Namun, kisi Gu dengan formvar distabilkan dengan karbon (produk no. 01800-F, Ted Pella, Inc., USA) diperlukan untuk MWCNT pendek dan GONR pendek. Ini karena lubang besar pada film karbon berenda menyebabkan masalah untuk menahan MWCNT pendek dan GONR pendek secara efisien. Seperti yang diilustrasikan pada Gambar 1, kontras abu-abu muda di bawah MWCNT pendek dan GONR pendek adalah lapisan karbon yang ringan. Lapisan karbon ini menstabilkan film formvar yang terkena berkas elektron melalui sifat konduktor panas dan listriknya.

2.2. Konfigurasi Ikatan MWCNT dan GONR.

Spektrum Raman dari empat nanokarbon disajikan pada Gambar 1b; pita D GONR lebih tinggi daripada MWCNT setelah proses unzip. Ini dikaitkan dengan tingkat oksidasi yang lebih tinggi dan jumlah struktur tepi GONR yang lebih banyak dibandingkan dengan MWCNT. Fenomena ini juga mirip dengan apa yang kami amati pada 2011.12 Karena tingkat grafitisasi yang tinggi, pita G MWCNTs memiliki jumlah lebar-penuh-pada-setengah-maksimum terendah. Rasio ID/IG dari keempat nanokarbon masing-masing adalah 0.076, 0.502, 0,483, dan 0,700. Secara singkat, penurunan panjang dan oksidasi permukaan meningkatkan tingkat cacat dan dengan demikian membuat rasio ID/IG lebih tinggi. Puncak D′ hadir di semua graphene yang cacat dan dipandang sebagai ukuran kualitas.35 Seperti yang diilustrasikan pada Gambar 1b, puncak D′ dalam empat spektrum menjadi lebih menonjol baik setelah proses pemotongan atau pembukaan ritsleting, menunjukkan bahwa mereka adalah proses destruktif yang memperkenalkan banyak cacat. Gambar 1c,d menampilkan spektrum spektroskopi fotoelektron sinar-X dari keempat nanokarbon. Rupanya, puncak D′ adalah yang paling jelas untuk GONR pendek. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1c, tingkat O meningkat secara signifikan dari 7,6 persen (MWCNTs) menjadi 19,9 persen (GONRs) karena kemampuan oksidasi KMnO4 yang kuat dalam lingkungan asam. Di sisi lain, tingkat O sedikit meningkat sebesar 0,8 persen dari MWCNT ke MWCNT pendek. Yang penting, tingkat O tertinggi adalah 38,3 persen untuk GONR pendek, menyiratkan bahwa ujung nanoribbon akan lebih mudah untuk melampirkan gugus fungsi oksigen daripada permukaan planar sp2. Jumlah lebar penuh-pada-setengah-maksimum yang lebih besar dan pergeseran ke energi ikat tinggi dari puncak C1s setelah proses unzip keduanya MWCNTs dan MWCNTs pendek diilustrasikan pada Gambar 1d. Untuk oksida graphene, puncak terdekonvolusi dalam energi ikat tinggi sisi dapat ditugaskan untuk ikatan C−C(CC), C−O,CO, dan COOH.36 Kami mengkarakterisasi GONR (200W) pada tahun 2013,37 dan hasilnya mirip dengan hasil penelitian ini. fenomena spektrum Raman, yang berarti bahwa lebih banyak gugus fungsi yang mengandung oksigen yang dihasilkan selama transformasi tabung-ke-pita (Gambar 2).

2.3. Sifat Anti-oksidatif MWCNT dan GONR.

2.3.1. Penentuan 1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil Uji Aktivitas Pemulungan Radikal Bebas.

1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) aktivitas penangkapan radikal bebas adalahantioksidanplatform yang diterapkan untuk mendeteksi kapasitas antioksidan; hasil untuk empat nanokarbon dijelaskan pada Tabel 2. Dalam uji DPPH, vitamin C pada konsentrasi 100 M digunakan sebagai kontrol positif. Untuk menguji aktivitas anti-oksidatif MWCNT, MWCNT pendek, GONR, dan GONR pendek, dosis 1, 5, dan 10 mg/L diinkubasi ke dalam larutan reaksi untuk mengukur sifat-sifatnya. MWCNT, MWCNT pendek, GONR, dan GONR pendek memiliki kemampuan penghambatan sedang pada 1{{20}} mg/L (19,2 ±0.3, 12,1 ± 0,3, 26,8 ± 0,3, dan 30,0 ± 0,4 persen ), sedangkan vitamin Chad kondisi serupa pada 100 M (93,4 ± 0,1 persen ) untuk supresi.

2.3.2. Uji Aktivitas Pengkelat Ion.

Dalam situasi stres oksidatif, ferrozine dapat mengembangkan kompleks dengan Fe2 plus untuk diukur secara kuantitatif. Dengan adanya mediator pengkhelat, kompleks tersebut rusak, menyebabkan ion besi tereduksi dari warna merah gelap dari kompleks Fe2 plus. Kami menggunakan EDTA sebagai kontrol positif. Tabel 2 menunjukkan bahwa MWCNTs, MWCNTs pendek, GONRs, dan GONRs pendek memiliki aktivitas chelating pada 10 mg/L (29,2 ± {{10}}.8, 28,7 ± 0. 7, 69,7 ± 0.6, dan 68,9 ± 0,3 persen ), sedangkan kontrol positif memiliki kondisi yang sama pada 100 M (93,4 ± 0,1 persen ).

2.3.3. Pengukuran Daya Antioksidan Pengurang Besi.

Uji potensi pereduksi besi adalah pengujian sederhana dan andal yang digunakan untuk mengukur sintesis kompleks Fe(III)-ferrisianida. Dalam pengujian ini, daya reduksi dari empat nano karbon yang menghasilkan kompleks besi Fe(III)−TPTZ dideteksi dengan perubahan warna larutan dari kuning menjadi hijau dan biru. Tabel 2 menunjukkan bahwa daya reduksi MWCNT, MWCNT pendek, GONR, dan GONR pendek adalah kerapatan optik (OD) 1,11, 1,13, 1,15, dan 1,11 pada 10 mg/L.

2.3.4. MWCNT dan GONR Menghambat Akumulasi ROSA Intraseluler.

Banyak laporan telah menunjukkan bahwa ROS menghancurkan integritas struktural membran sel, termasuk membran sel dan membran inti untuk menyebabkan kerusakan sel dan hilangnya fungsi normal.38-40 Selain itu, ROS juga merupakan salah satu faktor penting untuk mengkatalisis tirosinase membentuk melanin, dan penghambatan produksi ROS adalah strategi yang baik untuk menurunkan regulasimelanin synthesis. In this study, we used the 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) staining assay to analyze the intracellular oxidative stress level in MWCNT and GONR treatment cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) induced oxidative stimulations in MWCNT and GONR groups and was used as a negative control.41 When the concentration of PMA was 20 ng/mL, it induced oxidative stress, increasing the value to 38%; after treating GONRs and MWCNTs, the levels of ROS were downregulated to the normal level. The data showed that both materials inhibited oxidative stress levels, and the anti-oxidative effect of GONRs was higher than that of MWCNTs (Figure 3). Table 1 shows a similar consequence list. We contended that there are three reasons for our new findings: first, the order of solubility of these materials was as follows: short GONRs > GONRs >MWCNTs pendek > MWCNTs, artinya area kontak GONRs pendek paling besar, sehingga lebih unggul untuk ROSscavenging. Kedua, GONR dan MWCNT adalah struktur karbon sp2-yang dapat menghancurkan listrik ROS melalui adduksi atau transfer elektron.42 Kami menemukan bahwaefek antioksidanstruktur nanoribbon lebih baik daripada struktur nanotube, sehingga nanoribbon lebih mudah untuk mentransfer elektron daripada nanotube. Akhirnya, pada Gambar 1b, kami mengamati bahwa situs karbon GONR sp2-mengandung lebih banyak gugus fungsi oksigen daripada MWCNT, gugus asam karboksilat dapat mengkelat ion logam, dan gugus hidroksil dapat menjadi donor H untuk mengais ROS dan menghambat produksi melanin.

2.4. Sitotoksisitas MWCNT dan GONR yang Diobati dalam Sel Fibroblas Kulit Manusia.

Metode {{0}}(4,5-Dimethylth-triazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) diterapkan untuk mengevaluasi sitotoksik sifat GONR pada sel Hs68 (Gambar 3), dan sel dikultur pada dosis yang berbeda dari 1, 5, dan 10 ug/mL. Kami memeriksa bahwa viabilitas sel MWCNT adalah 100,7 ± 3,7, 99,8 ± 4,9, dan 94,1 ± 4,7 persen pada konsentrasi masing-masing 1, 5, dan 10 mg/L; viabilitas untuk MWCNT pendek dihitung dalam urutan yang sama dan ditemukan 93,9 ± 2,2, 86.4 ± 3,0, dan 98,9 ± 2,1 persen . Kami mengamati bahwa sel B16−F10 diinkubasi dalam konsentrasi tinggi, dan kelangsungan hidup sel sel Hs68 lebih dari 80 persen, menunjukkan bahwa MWCNT dan MWCNT pendek tidak memiliki efek toksik pada sel fibroblas dermal manusia. Selviabilitas GONR dan short GONR adalah 86.24 ± 2.1, 90.87± 3.5, 88.58 ± 2.5, 89.03 ± 3.6, 90.71 ± 2.8, dan 90.64 ±2.5 persen . Juga ditunjukkan pada Gambar 4a bahwa GONR dan shortGONR tidak memiliki efek sitotoksik yang terlihat pada sel HS68. Dalam laporan sebelumnya, penggunaan bahan nano yang belum teruji untuk keperluan kosmetik dapat dianggap dipertanyakan,43,44 dan biasanya karena serangan DNA setelah nanopartikel masuk ke dalam sel. Setelah uji sitotoksisitas, kami menemukan bahwa bahan kami tidak menyebabkan toksisitas pada sel kulit normal. Kami menyimpulkan bahwa setelah nanomaterial masuk ke dalam sel, nanomaterial hanya menghambat produksi melanin dengan mengurangi stres oksidatif dan mengkhelat ion logam dan tidak merusak mitokondria atau DNA, yang berarti MWCNT dan GONR aman untuk digunakan.

2.5. Dua Jenis MWCNT dan GONR dalam Aktivitas Tirosinase Seluler B16−F10 dan Konten Melanin.

Dalammelaninjalur sintesis, tirosinase memainkan peran penting. Tirosinase mengoksidasi dan membentuk eumelanin dan pheomelanin melalui serangkaian reaksi biokimia. Untuk menentukan apakah GONR dan MWCNT menghambat aktivitas tirosinase dan menyebabkan penurunan produksi melanin, kami menganalisis aktivitas tirosinase dalam sel B16−F10. Kami menemukan bahwa MWCNT dan MWCNT pendek menghambat aktivitas tirosinase sekitar 17,1 persen dan 23 persen pada 10mg/L. GONR dan GONR pendek memiliki efek yang lebih baik dalam menekan aktivitas tirosinase pada konsentrasi yang sama dibandingkan dengan GONR lain. Mereka juga bergantung pada dosis dan menghambat 49,8 persen dan 44,7 persen aktivitas tirosinase, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4b.

Melaninadalah pigmen yang sangat diperlukan dalam tubuh manusia, tetapi ekspresi melanin yang berlebihan sering memicu serangkaian penyakit. Dalam penelitian sebelumnya, Xiao et al. menggunakan bahan serupa, Radical Sponge, nanopartikel fullerene, sebagai anti-melaninagen.45 Ada beberapa hasil yang baik; sekitar 20 persen darimelaninproduksi dapat terhambat. Untuk meningkatkan efisiensinya, kami lebih meningkatkan bahan pengujian untuk mengukur tingkat penghambatan melanin dan mekanisme molekulernya, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4c dan 5. MWCNT dan MWCNT pendek menurunkan kandungan melanin sebesar 17,6 ± 5,5 dan 13,2 ± 0. 2 persen pada 10 mg/L dan dengan cara yang bergantung pada dosis. GONR dan GONR pendek secara kuat menurunkan regulasi nilai menjadi 32,0 ±2,3 dan 35,3 ± 3,4 persen pada 10 mg/L. Hasil percobaan menunjukkan bahwa keempat jenis dapat menghambat sintesis melanin dan GONR memiliki efek yang lebih kuat. Di sisi lain, kami juga mengamati bahwa GONR pendek memiliki efek yang lebih baik dalam menghambat produksi melanin. Kami menyimpulkan bahwa GONR pendek memiliki lebih banyak kelompok fungsional dan dapat secara efektif mencegah tirosinase yang dikatalisis ion logam, yang selanjutnya menghambat produksi melanin (Gambar 2). Pada Tabel 1, kami mengamati bahwa upaya pengkhelat ion logam tipe pendek lebih tinggi dari tipe normal; Artinya, GONR pendek ini berpotensi diterapkan di bidang kosmetik sebagai agen perawatan kulit.

2.6. Mekanisme MWCNTs dan GONRs Menghambat Konten Melanin Seluler B16−F10.

Sel merespon stres oksidatif eksternal dengan mengatur ekspresi protein. Sel B16−F10 meningkatkan ekspresi gen c-myc dan meningkatkan AMPK untuk menurunkan tingkat oksidatif,46 dan dalam pekerjaan ini, MITF adalah faktor transkripsi spesifik tirosinase untuk mengatur jalur sinyal sintesis melanin molekuler.47−49 Pada Gambar 5a, MWCNT dan GONR menurunkan regulasi faktor transkripsi terkait mikroftalmia dengan mengurangi stres oksidatif, dan kemudian, gen hilir TRP-1 dan TRP-2 juga diturunkan regulasi. Untuk tingkat protein, fenomena serupa ditemukan, di mana MWCNT dan GONR menurunkan regulasi jalur melanogenesis terkait MITF dan akhirnya mengurangimelaninkonten (Gambar 5b).

binaraga cistanche

3. BAHAN DAN METODE EKSPERIMENTAL

3.1. Persiapan MWCNT dan GONR.

Proses yang relevan untuk membuat GONR telah dilaporkan dalam makalah sebelumnya.12MWCNT (0.05 g) disuspensikan dalam H2SO4/H3PO4 9:1 dan diolah dengan reaktor gelombang mikro (CEM-Discover) dengan set daya pada 250 W selama 2 menit. Setelah penambahan KMnO4 (0,25 g) ke dalam larutan, larutan diperlakukan dengan daya gelombang mikro yang sama pada 65 derajat selama 4 menit12 Kami kemudian memodifikasi proses ini menggunakan waktu gelombang mikro tahap kedua yang lebih pendek 8 menit dengan memanfaatkan kompresor udara. Di sini, kompresor udara digunakan untuk mengontrol suhu reaktor gelombang mikro selama proses berlangsung. Daya gelombang mikro ditetapkan pada 250 W pada pengujian pendahuluan.

3.2. Persiapan Short MWCNTs dan Short GONRs.

Proses yang relevan untuk membuat GONR pendek dilaporkan dalam makalah kami sebelumnya. 34 Waktu perlakuan asam dipilih sebagai 8 jam. Daya gelombang mikro diatur pada 250 W, yang sama dengan untuk mendapatkan GONR.

3.3. Kegiatan Penanggulangan Radikal DPPH.

DPPH sering digunakan untuk menentukan kapasitas scavenging sampel dan sifat antioksidannya.50 DPPH adalah reagen ungu yang berubah warna dari ungu menjadi kuning jika radikal bebas dipindahkan ke analit. Sampel anti-oksidatif positif dengan konsentrasi yang sesuai ditambahkan ke dalam larutan, dan sampel dianalisis pada 517 nm selama 30 menit. Kami menggunakan persentase DPPH yang tersisa selain sampel pengujian untuk mengukur jumlahantioksidandiperlukan untuk mengurangi radikal DPPH sebelumnya. Vitamin C pada 100 M digunakan sebagai kontrol positif. Aktivitas pemulungan ( persen ) diukur sebagai

3.4. Aktivitas Pengetatan Logam.

Ion logam adalah faktor yang menyebabkan oksidasi lipid yang berlebihan, dan Fe2 plus adalah salah satu ion yang paling berpengaruh.50 Berbagai konsentrasi nano biomaterial (1 L) dimasukkan ke dalam pelat sumur 96-yang berisi 2mM FeCl2·4H2O ( 10 L), dan kemudian dimuat ke dalam ferrozine (5mM, 20 L). Campuran dicampur sepenuhnya dengan 69 Lmenthol dan disimpan pada suhu kamar selama 10 menit. Kemudian, larutan reaksi sampel diamati pada 562 nm. EDTA digunakan sebagai kontrol positif pada 100 M, dan rumus perhitungan aktivitas pengkhelat logam didasarkan pada persamaan 1.

3.5. Mengurangi Daya.

Perhitungan daya reduksi didasarkan pada penelitian sebelumnya.50 Pertama, bahan graphene 2,5 L dicampur dengan buffer PBS (67 mM, pH 6,8) dan K3Fe(CN)6(2,5 L, 20 persen ) kemudian diinkubasi pada suhu 50 derajat selama 20 menit Kemudian, 10 persen asam trikloroasetat (160 L) dicampur dengan zat-zat pada 300g disentrifugasi selama 20 menit. Panjang serapan ditentukan pada 700 nm setelah dicampur dengan 25 L FeCl3(2 persen). Butylated hydroxyanisole (BHA) digunakan pada 100 M.

3.6. Pemeriksaan Proliferasi Sel.

Garis sel fibroblas dermal manusia HS68 digunakan untuk menganalisis rasio proliferasi sel. HS68 diinkubasi dalam media Dulbecco's Modified Eagle (DMEM) yang mengandung 10 persen serum janin sapi dan 1 persen penisilin dan campuran streptomisin.50,51 Setelah diperlakukan dengan konsentrasi sampel yang berbeda, kami menerapkan MTT untuk mendeteksi rasio proliferasi sel. 8000 sel disemai di 96-piring sumur dan diperlakukan dengan sampel selama 24 jam. Larutan supernatan dihilangkan, dan kami menggunakan larutan MTT untuk kultur selama 2 jam pada suhu 37 derajat. Setelah inkubasi, media yang mengandung MTT dipindahkan dan dilarutkan dengan dimetil sulfoksida (DMSO). Solusinya dibaca pada OD 590nm dan laju dihitung dengan persamaan 1.

3.7. Penilaian Isi Melanin Seluler.

Kami menggunakan metode dengan sedikit modifikasi berdasarkan pengujian sebelumnya.52,53 Pelet sel B16−F10 dari Bioresource Collection and Research Center (BCRC, CRL 6323, Hsinchu, Taiwan) dilarutkan dalam campuran NaOH 2,0 N dan 10 persen DMSO. Sampel kemudian dipanaskan selama 1 jam pada 90 derajat dan disentrifugasi pada 10,000g selama 10 menit untuk mendapatkan supernatan yang diklarifikasi. Itumelaninhitung ditentukan dengan memantau OD supernatan pada 475 nm.

3.8. B16−F10 Aktivitas Tirosinase Seluler.

Untuk aktivitas tirosinase seluler B16−F10, kami mengacu pada pekerjaan sebelumnya dengan beberapa modifikasi.50 Sel dikultur dalam pelat sumur pada 105 sel setiap sumur. Setelah perawatan dengan sampel, sel dilisiskan dalam 1 persen Triton X-100/PBS dan 2 mML-tirosin (50 L) selama 3 jam. Setelah inkubasi, media dipindahkan dan dibaca absorbansinya pada OD 590 nm. Rumus aktivitas tirosinase dihitung dengan persamaan 1.

3.9. Deteksi ROS dengan Pewarnaan DCFDA.

Mengacu pada penelitian sebelumnya,54 1.2 1.105 Sel B16−F10 diunggulkan di6-piring sumur dan diperlakukan dengan berbagai konsentrasi sampel. Sel ditangguhkan dalam PBS dan kemudian dimuat dengan DCFDA (5 M) dalam DMEM merah non-fenol selama 30 menit pada 37 derajat. Flow cytometer (Guava, Merck, Germany) digunakan untuk mendeteksi sinyal fluoresen DCFDA. Panjang gelombang eksitasi dan emisi DCFDA masing-masing adalah 488 dan 535 nm.

3.10. Reaksi Rantai Polimerase Waktu Nyata Kuantitatif.

Kami mengikuti metode Lin et al. (2018).1Reaksi rantai transkripsi-polimerase terbalik kuantitatif real-time (qRT-PCR) terdiri dari probe primer eksklusif untuk menghasilkan fluoresensi. Ini menggunakan teknik deteksi fluoresensi yang mendeteksi setiap siklus menggunakan 7500 qRT-PCRSystem (Applied Biosystems, USA). Ini mendeteksi siklus berdasarkan jumlah fluoresensi yang dilepaskan, dan kemudian produk dari setiap siklus dihitung untuk konten yang dihasilkan, yang menghasilkan pencapaian tujuan kuantitatif waktu nyata. Trizol (Invitrogen, USA) digunakan untuk mengekstrak RNA lengkap dari jaringan paru-paru, sesuai arahan yang diberikan oleh pabrikan. Selanjutnya, kit transkripsi balik (Takara, Jepang) digunakan untuk menghasilkan DNA. Dalam qRT-PCR menggunakan primer, tercantum dalam Tabel 1, pertama, sampel dipanaskan untuk membentuk untai tunggal DNA; kemudian terjadi pengikatan primer untuk membentuk DNA untai ganda (dsDNA), setelah itu SYBR Green dsDNA digabungkan, di mana kit reagen plus SYBR green (Roche, Basel, Swiss) digunakan, yang menghasilkan pelepasan fluoresensi. Hasilnya dilewatkan melalui sistem deteksi fluoresensi. Deteksi sinyal fluoresen terjadi selama fase elongasi atau annealing dari setiap siklus; setelah deteksi, isi sampel didorong kembali oleh intensitas fluoresensi yang terdeteksi.55 Tingkat ekspresi gen target dinormalisasi ke tingkat -tubulin menggunakan metode 2−ΔΔCt .

efek pemutih cistanche pada kulit menjadi anti-oksidasi

3.11. Tes Western Blot.

Sel B16−F10 dilisiskan pada suhu 4 derajat semalaman dengan buffer uji radioimmunopresipitasi (Thermo Scientific Co., USA), yang mengandung proteaseinhibitor. Kit uji protein asam bicinchoninic (BCA, Sigma-Aldrich Corp., USA) digunakan untuk mengukur jumlah protein. Protein sampel dipisahkan pada 10 persen gel sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide dan dipindahkan ke membran apolyvinylidene difluoride (PVDF) (Pall LifeScience, Ann Arbor, MI, USA). Membran PVDF diblok dengan buffer pemblokiran (Thermo Scientific) selama 1 jam dan diinkubasi dengan antibodi primer spesifik semalam pada suhu 4 derajat. Selanjutnya, membran dicuci dengan buffer tris-buffered saline Tween 20 dua kali dan diinkubasi dengan antibodi sekunder selama 1,5 jam. Setelah itu, membran dicelupkan ke dalam reagen pendeteksi chemiluminescence (Thermo Scientific) dan dianalisis oleh MiniChemi Chemiluminescenceimager (Beijing Sage Creation Science, China). Sumber antibodi antara lain anti-MITF kelinci, anti-TRP kelinci-1, anti-TRP kelinci-2, dan -aktin (Thermo Scientific).

3.12. Analisis Bahan.

TEM (JEOL JEM-1230, 100 kV) digunakan untuk mengamati morfologi nanokarbon. Spektrometer Amikro Raman (PTT, RAMaker) diterapkan untuk memeriksa mode resonansi nanokarbon. Pengukuran spektroskopi fotoelektron sinar-X (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) juga dilakukan untuk menentukan analisis komposisi.

3.13. Analisis statistik.

Semua sampel dan eksperimen standar diulang setidaknya tiga kali. Kami menerapkan uji-t Siswa untuk membandingkan dan menyatakan rata-rata nilai temaan ± standar deviasi secara statistik.

4. KESIMPULAN

Singkatnya, kami mengamati bahwa GONR pendek adalah bahan potensial untuk produksi perawatan kulit karena sifat multibiofungsionalnya (Gambar 6). Hasil penelitian menunjukkan bahwa nanokarbon berperan sebagai antioksidan ekstraseluler dan intraseluler. Sementara itu, nanokarbon menghambat aktivitas tirosinase danmelaninkonten dan tidak menyebabkan cedera serius pada sel pigmen. Karya ini menetapkan fungsi anti-melanogenesis dari empat jenis nanokarbon; studi di masa depan akan meneliti mekanisme senyawa ini pada ekspresi gen dan protein spesifik yang terkait dengan pematangan, transportasi, dan akumulasi melanin.

cistanche bienfaits

REFERENSI

(1) Lin, L.-C.; Chen, C.-Y.; Kuo, C.-H.; Lin, Y.-S.; Hwang, BH;Wang, TK; Kuo, Y.-H.; Wang, H.-MD 36H: Sebuah Novel PotentInhibitor untuk Antimelanogenesis. Oksid. Med. Sel. Panjang umur 2018,2018, 6354972.

(2) Li, R.; Qiu, X.; Xu, F.; Lin, Y.; Fang, Y.; Zhu, T. Macrophage Mediated Effects Airborne Fine Particulate Matter (PM2.5) pada Hepatocyte Insulin Resistance in Vitro. ACS Omega 2016, 1, 736−743.

(3) Anda, Y.-J.; Wu, P.-Y.; Liu, Y.J.; Hou, C.-W.; Wu, C.-S.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Sesamol Menghambat Hiperpigmentasi dan Kerusakan Akibat Radiasi Ultraviolet pada Kulit Tikus C57BL/6.Antioksidan 2019, 8, 207.

(4) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.;Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Efek Sinergis Linderanolide B Dikombinasikan dengan Arbutin, PTU, atau Asam Kojic pada Penghambatan Tirosinase. Curr. Farmasi. Bioteknologi. 2015, 16, 1120-1126.

(5) Bae-Harboe, Y.-SC; Park, H.-Y. Tirosinase: protein pengatur pusat untuk pigmentasi kulit. J. Berinvestasi. Dermatologi. 2012, 132.2678−2680.

(6) Rezapour-Lactose, A.; Yeganeh, H.; Ostad, SN; Gharibi, R.;Mazaheri, Z.; Ai, J. Polyurethane/siloxanemembrane termoresponsif untuk pembalut luka dan transplantasi lembaran sel: Studi in vitro dan in-vivo. ibu. Sci. Eng., C 2016, 69, 804−814.

(7) Boo, YC p-Coumaric Acid sebagai Bahan Aktif dalam Kosmetik: Tinjauan Berfokus pada Efek Antimelanogeniknya.Antioksidan 2019, 8, 275.

(8) Awan, F.; Islam, MS; Mungkin.; Yang, C.; Shi, Z.; Berry, RM;Tam, KC Cellulose Nanocrystal-ZnO Nanohybrids untuk Mengontrol Aktivitas Fotokatalitik dan Perlindungan UV dalam Formulasi Kosmetik.ACS Omega 2018, 3, 12403−12411.

(9) Cristina Negritto, M.; Valdez, C.; Sharma, J.; Rosenberg, C.;Selassie, Penghambatan Pertumbuhan CR dan Kerusakan DNA yang Diinduksi oleh X Fenol dalam Ragi: Studi Hubungan Struktur-Aktivitas Kuantitatif. ACS Omega 2017, 2, 8568−8579.

(10) Hamelin, M.; Hemmati, S.; Varma, K.; Veisi, H. Greensynthesis, antibakteri, antioksidan dan efek sitotoksik nanopartikel emas menggunakan ekstrak Pistacia Atlantica. J.Taiwan Inst. Kimia.Eng. 2018, 93, 21−30.

(11) Meneses-Gutierrez, CL; Herna ndez-Damia n, J.; Pedraza- Chaverri, J.; Guerrero-Legarreta, I.; Tellez, DI; Jaramillo-Flores, M. E. Kapasitas Antioksidan dan Efek Sitotoksik Katekin dan Oligomer Resveratrol Hasil Oksidasi Enzimatik Terhadap Sel Kanker Kandung Kemih Manusia T24. Antioksidan 2019, 8, 214.

(12) Matahari, C.-L.; Chang, C.-T.; Lee, H.-H.; Zhou, J.; Wang, J.; Syam,T.-K.; Pong, W.-F. Sintesis berbantuan gelombang mikro dari heterostruktur inti MWCNT/GONR untuk deteksi elektrokimia asam askorbat, dopamin, dan asam urat. ACS Nano 2011, 5, 7788−7795.

(13) Lin, T.-E.; Lu, Y.-J.; Matahari, C.-L.; Pilih, H.; Chen, J.-P.; Lesch, A.;Girault, HH Soft Electrochemical Probe untuk Pemetaan Distribusi Biomarker dan Nanomaterial yang Disuntikkan pada Jaringan Hewan dan Manusia. Angew. Kimia., Int. Ed. Inggris 2017, 56, 16498−16502.

(14) Okuda, K.; Hirota, T.; Hirobe, M.; Nagano, T.; Mochizuki, M.;Nishino, T. Sintesis berbagai turunan G60 yang larut dalam air dan aktivitas pendinginan superoksidanya. Ilmu Fullerene. teknologi. 2000, 8.127−142.

(15) Lucente-Schultz, RM; Moore, VC; Leonard, AD; Harga, BK; Kosynkin, DV; Lu, M.; Partha, R.; Conyers, JL; Tour, JMantioksidan karbon nanotube berdinding tunggal. Selai. Kimia Soc. 2009,131, 3934−3941.

(16) Injak, R.; Perse, M.; Obermajer, N.; Djordjevic-Milic, V.;Prijatelj, M.; Djordjevic, A.; Cerar, A.; Strukelj, B. Potensi efek hepatoprotektif fullerene C60(OH)24 dalam hepatotoksisitas yang diinduksi doksorubisin pada tikus dengan karsinoma mammae. Biomaterial 2008, 29, 3451−3460.

(17) Tong, J.; Zimmerman, MC; Li, S.; Yi, X.; Luxenhofer, R.;Yordania, R.; Kabanov, AV Neuronal serapan dan superoksida intraseluler dari formulasi nanoformulasi fullerene (C60)-poli(2-oxazoline). Biomaterial 2011, 32, 3654−3665.

(18) Yugioh, K.; Shishido, K.; Murayama, H.; Yano, M.;Matsubayashi, K.; Takada, H.; Nakamura, H.; Masuko, K.; Kato, T.;Nishioka, K. Fullerene C60 yang larut dalam air mencegah degenerasi kartilago artikular pada osteoartritis melalui regulasi aktivitas katabolik kondrosit dan penghambatan degenerasi kartilago selama perkembangan penyakit. Rematik Arthritis. 2007, 56, 3307−3318.

(19) Takada, H.; Mimura, H.; Xiao, L.; Islam, RM; Matsubayashi, K.; Ito, S.; Miwa, N. Innovative Anti-Oxidant: Fullerene (INCI #:7587) sebagai "Spon Radikal" pada Kulit. Tingkat Keamanan, Stabilitas, dan Potensinya yang Tinggi sebagai Bahan Kosmetik Anti Penuaan dan Pemutih Utama. Fullerene, Nanotubes, Carbon Nanostruct.2006, 14, 335−341.

(20) Fenoglio, saya.; Yunani, G.; Tomatis, M.; Muller, J.; Raymundo Piñero, E.; Beguin, F.; Fonseca, A.; Nagi, JB; Singa, D.; Fubini, B. Cacat struktural memainkan peran utama dalam toksisitas paru akut dari tabung nano karbon multiwall: aspek fisikokimia. Kimia Res.Toxicol. 2008, 21, 1690−1697.

(21) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.;Zhang, Y.; Dubonos, SV; Grigorieva, IV; Firsov, AA Efek medan listrik dalam film karbon tipis atom. Sains 2004, 306, 666−669.

(22) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.;Katsnelson, MI; Grigorieva, IV; Dubonos, SV; Firsov, AA Gas dua dimensi dari fermion Dirac tak bermassa dalam graphene. Alam 2005,438, 197−200.

(23) Zhou, X.; Wei, Y.; Dia, Q.; Boey, F.; Zhang, T.; Zhang, H.Reduced graphene oxide film yang digunakan sebagai matriks MALDI-TOF-MS untuk deteksi octachlorodibenzo-p-dioxin. Kimia Kom. 2010, 46,6974−6976.

(24) Zhao, W.; Kipas angin, S.; Xiao, N.; Liu, D.; Tay, YY; Yu, C.; Sim, D.;Huang, HH; Zhang, T.; Boey, F.; Bu, X.; Zhang, H.; Yan, Q. Kertas nanotube karbon fleksibel dengan sifat termoelektrik yang ditingkatkan.Environ Environ. Sci. 2012, 5, 5364−5369.

(25) Wang, Z.; Wu, S.; Zhang, J.; Chen, P.; Yang, G.; Zhou, X.;Zhang, Q.; Yan, T.; Zhang, H. Studi perbandingan pada film oksida graphene tereduksi satu lapis yang diperoleh dengan reduksi elektrokimia dan reduksi uap hidrazin. skala nano Res. Lett. 2012, 7, 161.

(26) Liang, X.; Fu, Z.; Chou, SY Transistor Graphene dibuat melalui transfer-printing di area aktif perangkat pada wafer besar. Nano Lett.2007, 7, 3840−3844.

(27) Matahari, X.; Liu, Z.; Wales, K.; Robinson, JT; Goodwin, A.;Zaric, S.; Dai, H. Nano-graphene oxide untuk pencitraan seluler dan pengiriman obat. Nano Res. 2008, 1, 203−212.

(28) Chen, W.; Xiao, P.; Chen, H.; Zhang, H.; Zhang, T.; Chen, Y.Bahan Massal Grafena Polimerik dengan Jaringan Grafena Monolitik Cross-Linked 3D. Adv. ibu. 2019, 31, 1802403.

(29) Chen, D.; Feng, H.; Li, J. Graphene oxide: preparasi, fungsionalisasi, dan aplikasi elektrokimia. Kimia Wahyu 2012,112, 6027−6053.

(30) Ranjan, P.; Agrawal, S.; Sinha, A.; Rao, TR; Balakrishnan, J.; Thakur, AD Sintesis GrapheneOxide Non-eksplosif Berbiaya Rendah untuk Aplikasi yang Dapat Diskalakan. Sci. Rep. 2018, 8, 12007.

(31) Qiu, Y.; Wang, Z.; Owens, AS; Kulaots, saya.; Chen, Y.; Kane, AB; Hurt, RH Kimia antioksidan bahan berbasis graphene dan perannya dalam teknologi proteksi oksidasi. Skala nano 2014, 6.11744−11755.

(32) Han, SAYA; Ozyilmaz, B.; Zhang, Y.; Kim, P. Rekayasa celah pita energi dari pita nano graphene. fisik. Pdt. Lett. 2007, 98.206805.

(33) Souza, JP; Mansano, AS; Venturini, FP; Santos, F.;Zucolotto, V. Antioksidan metabolisme ikan zebra setelah sub-mematikan paparan graphene oksida dan pemulihan. Fisiol Ikan. Biokimia. 2019,45, 1289−1297.

(34) Matahari, C.-L.; Seperti.; Wu, J.J. Sintesis nanoribbons grapheneoxide pendek untuk deteksi biomarker yang lebih baik dari penyakit Parkinson. Biosen. Bioelektron. 2015, 67, 327−333.

(35) Raja, AAK; Davies, BR; Noorbehesht, N.; Newman, P.;Gereja, TL; Haris, AT; Razal, JM; Minett, AI RamanMetric Baru untuk Karakterisasi Graphene oxide dan Derivatifnya.Sci. Rep. 2016, 6, 19491.

(36) Hsu, H.-C.; Ditampilkan, saya.; Wei, H.-Y.; Chang, Y.-C.; Du, H.-Y.; Lin,Y.-G.; Tseng, C.-A.; Wang, C.-H.; Chen, L.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, K.H. Grafena oksida sebagai fotokatalis yang menjanjikan untuk konversi CO2 menjadi metanol. Skala nano 2013, 5, 262−268.

(37) Lin, L.-Y.; Ya, M.-H.; Tsai, J.-T.; Huang, Y.-H.; Matahari, C.-L.;Ho, K.-C. Heterostruktur nanotube karbon multi-dinding core-shell baru @ grapheneoxide nanoribbon sebagai bahan superkapasitor potensial. J.Materi. Kimia 2013, 1, 11237−11245.

(38) Yin, H.; Xu, L.; Porter, NA Peroksidasi lipid radikal bebas: mekanisme dan analisis. Kimia Wahyu 2011, 111, 5944−5972.

(39) Tung, C.-H.; Chang, J.-H.; Hsieh, Y.-H.; Hsu, J.-C.; Ellis, AV; Liu, W.-C.; Yan, R.-H. Perbandingan hasil radikal hidroksil antara pengolahan air dengan katalis foto dan elektro. J.Taiwan Inst. Kimia.Eng. 2014, 45, 1649−1654.

(40) Ohshima, H.; Yoshie, Y.; Auriol, S.; Gilbert, I. Tindakan antioksidan dan pro-oksidan flavonoid: efek pada kerusakan DNA yang disebabkan oleh oksida nitrat, peroksinitrit, dan anion nitroksil. Biol Radikal Bebas. Med.1998, 25, 1057−1065.

(41) Chou, H.-Y.; Lee, C.; Pan, J.-L.; Wen, Z.-H.; Huang, S.-H.; Lan,C.-W.; Liu, W.-T.; Jam, T.-C.; Hseu, Y.-C.; Hwang, B.; Cheng, K.-C.; Wang, H.-M. Ekstrak Astaxanthin yang Diperkaya dari HaematococcusPluvialis Menambah Sekresi Faktor Pertumbuhan untuk Meningkatkan Proliferasi Sel dan Menginduksi Degradasi MMP1 untuk Meningkatkan Produksi Kolagen pada Fibroblas Kulit Manusia. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17.955.

(42) Bitner, BR; Marcano, DC; Berlin, JM; Fabian, RH;Cherian, L.; Culver, JC; Dickinson, SAYA; Robertson, CS; Pauller, RG; Kent, TA; Tour, JM Partikel karbon antioksidan meningkatkan disfungsi serebrovaskular setelah cedera otak traumatis. ACSNano 2012, 6, 8007−8014.

(43) Liao, C.; Li, Y.; Tjong, S. Graphene Nanomaterials: Sintesis, Biokompatibilitas, dan Sitotoksisitas. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 3564.

(44) Kong, H.; Wang, L.; Zhu, Y.; Huang, T.; Fan, C. Wawasan fisikokimia terkait budaya menengah pada sitotoksisitas bahan nano karbon. Kimia Res. racun. 2015, 28, 290−295.

(45) Xiao, L.; Matsubayashi, K.; Miwa, N. Efek penghambatan dari turunan fullerene yang dibungkus polimer larut dalam air pada melanogenesis yang diinduksi UVA melalui penurunan regulasi ekspresi tirosinase pada melanosit manusia dan jaringan kulit. Lengkungan. Dermatologi. Res. 2007, 299.245−257.

(46) Kfoury, A.; Amar, M.; Collet, C.; Sordet-Dessimoz, J.;Giner, MP; Christen, S.; Moko, S.; Leleu, M.; Leval, L.; Koch, U.;Trumpp, K.; Sakamoto, K.; Beermann, F.; Radtke, F. AMPK meningkatkan kelangsungan hidup sel melanoma c-Myc-positif dengan menekan stres oksidatif. EMBO J. 2018, 37, No. e97673.

(47) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Efek Sinergis Linderanolide B Dikombinasikan dengan Arbutin, PTU, atau KojicAcid pada Penghambatan Tirosinase. Curr. Farmasi. Bioteknologi. 2015, 16,1120−1126.

(48) Lee, S.; Kim, J.; Lagu, H.; Seok, J.; Hong, S.; Boo, Y. Luteolin7-Sulfat melemahkan Sintesis Melanin melalui Penghambatan CREB dan Ekspresi Tirosinase yang Dimediasi MITF. Antioksidan 2019, 8, 87.

(49) Duval, C.; Cohen, C.; Chagnoleau, C.; Bunga, V.; Borreau, E.; Bernard, F. Peran pengatur utama inpigmentasi fibroblas dermal seperti yang ditunjukkan menggunakan model kulit yang direkonstruksi: dampak penuaan-foto. PLoS One 2014, 9, No. e114182.

(50) Li, P.-H.; Chiu, Y.-P.; Shih, C.-C.; Wen, Z.-H.; Ibeto, LK;Huang, S.-H.; Chiu, CC; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Chang, Y.-N.;Wang, H.-MD Aktivitas Biofungsional Ekstrak Equisetum ramosissimum: Efek Perlindungan terhadap Oksidasi, Melanoma, dan Melanogenesis. Oksid. Med. Sel. Panjang umur 2016, 2016, 2853543.

(51) Liang, C.-H.; Chan, L.-P.; Ding, H.-Y.; Jadi, KPU; Lin, R.-J.;Wang, H.-M.; Chen, Y.-G.; Chou, T.-H. Aktivitas Pemulungan Radikal Bebas 4-(3,4-Dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -d-glucopyranoside dari Origanum vulgare dan Perlindungannya terhadap Kerusakan Oksidatif. J. Pertanian. Kimia Makanan. 2012, 60, 7690−7696.

(52) Wang, H.-M.; Chen, C.-Y.; Wen, Z.-H. Mengidentifikasi penghambat melanogenesis dari Cinnamomum SubGenius dengan sistem penyaringan in vitro dan in vivo dengan menargetkan tirosinase manusia. Exp. Dermatol. 2011, 20, 242−248.

(53) Wang, Y.-C.; Huang, X.-Y.; Chiu, C.-C.; Lin, M.-Y.; Lin, W.-H.;Chang, W.-T.; Tseng, C.-C.; Wang, H.-MD Penghambatan melanogenesis melalui bubuk ekstrak buah Phyllanthus Emblica dalam sel B16F10. Biosci Makanan. 2019, 28, 177−182.

(54) Panchuk, RR; Skorokhyd, NR; Kozak, YS; Lehka, LV;Moiseenok, AG; Stoica, RS Aktivitas pelindung jaringan selenomethionine dan D-pantherine pada tikus yang mengandung melanoma B16 di bawah pengobatan doxorubicin tidak terhubung dengan potensi pemulungan ROS mereka. Kroasia. Med. J.2017, 58, 171.

(55) Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.-S.Mengeksplorasi potensi penggunaan alga dalam kosmetik. Bioresour. Technol.2015, 184, 355−362