Studi Perbandingan Sifat Dan Mekanisme Anti Penuaan: Resveratrol Dan Pembatasan Kalori Ⅱ

Efek resveratrol dan CR pada ekspresi mRNA SIRT1, p53, dan Foxo3a pada jaringan tikus tua

Kondisi stres oksidatifsering menginduksi ekspresi dan aktivitas SIRT1. SIRT1 memodulasi fungsi faktor kelangsungan hidup utama termasuk p53 dan Foxo3a [9]. Untuk menentukan efek resveratrol dan CR pada level mRNA SIRT1, p53, dan Foxo3a pada tikus tua yang diinduksi D-Gal, dilakukan uji RT-PCR kuantitatif. Dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang sesuai, tingkat ekspresi mRNA SIRT1 dan Foxo3a menurun secara signifikan, tetapi tingkat p53 meningkat secara signifikan pada kelompok D-Gal (P < 0.01; Gambar 9A dan 9B). Selanjutnya, pengobatan simultan resveratrol atau CR dengan D-gal pada tikus menyebabkan peningkatan level ekspresi mRNA SIRT1 dan Foxo3a tetapi menurunkan level p53 dibandingkan dengan kelompok kontrol model (P < 0.05). Namun, dibandingkan dengan pengobatan CR, tingkat ekspresi mRNA SIRT1 meningkat secara signifikan pada hati kelompok resveratrol plus D-gal dosis tinggi, tingkat ekspresi mRNA p53 menurun secara signifikan pada hati dan otak dengan resveratrol dosis tinggi plus D- kelompok gal (P <0, 05).

Klik Disini Untuk Mendapatkan Cistanche Anti-Aging Supplements

Efek resveratrol dan CR pada ekspresi SIRT1-protein terkait utama dalam jaringan otak tikus tua

FOXO3a dan p53, yang diatur oleh SIRT1, adalah molekul hilir SIRT1. Secara bersamaan, aktivitas SIRT1 diatur oleh molekul hulunya, misalnya, DBC1 (juga dikenal sebagai KIAA1967), AROS (juga dikenal sebagai RPS19BP1) dan penekan tumor HuR (juga dikenal sebagai ELAVL1) [9, 10] . Untuk menentukan efek resveratrol dan CR pada kadar protein p53, FOXO3a, HuR, AROS, dan DBC1 pada tikus tua yang diinduksi D-Gal, dilakukan uji western blot. Dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang sesuai, tingkat ekspresi protein FOXO3a, AROS dan HuR menurun secara signifikan, tetapi tingkat p53 dan DBC1 meningkat secara signifikan pada kelompok D-gal (P < 0.01 ; Gambar 10). Selain itu, pengobatan simultan resveratrol atau CR dengan D-gal pada tikus menyebabkan peningkatan ekspresi protein FOXO3a, AROS dan HuR tetapi menurunkan kadar p53 dan DBC1 dibandingkan dengan kelompok kontrol model (P <0,05). Namun, dibandingkan dengan pengobatan CR, tingkat ekspresi protein HuR meningkat secara signifikan tetapi tingkat DBC1 menurun secara signifikan pada otak kelompok resveratrol plus D-gal dosis tinggi (P <0,05). Tidak ada perbedaan antara kelompok resveratrol plus D-gal dan kelompok CR plus D-gal pada kadar ekspresi protein p53, FOXO3a dan AROS (P > 0,05).

Ekspresi FOXO3a dan p53 di jaringan otak dan hati

Status ekspresi FOXO3a dan p53 ditentukan di jaringan otak dan hati dengan imunohistokimia. Analisis imunohistokimia FOXO3a dan p53 mengungkapkan bahwa ekspresi FOXO3a di jaringan otak dan hati menurun secara signifikan, dan ekspresi p53 meningkat secara signifikan pada kelompok D-Gal, dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (P <0.{{13} }5, Gambar 11). Selain itu, pengobatan simultan resveratrol atau CR dengan D-gal pada tikus menyebabkan peningkatan ekspresi FOXO3a tetapi menurunkan ekspresi p53 dibandingkan dengan kelompok kontrol model (P < 0.05). Namun, tidak ada perbedaan antara kelompok resveratrol plus D-gal dan CR plus grup D-gal dalam ekspresi p53 dan FOXO3a (P > 0,05).

DISKUSI

Proses kimia dasar yang mendasari penuaan pertama kali dikemukakan olehteori penuaan radikal bebas[11], danstres oksidatifdiyakini menjadi faktor utama dalam proses normal penuaan.Inisiator radikal bebas AAPHdigunakan untukmenginduksi stres oksidatifdan membangun model oksidatifpenuaan seluler yang diinduksi stresdalam sel IMR-90 manusia [12, 13]. Keuntungan dari metode ini adalah bahwa AAPH terdekomposisi secara termal menjadimenghasilkan radikaltanpa biotransformasi atau enzim, dan lajugenerasi radikaldapat dengan mudah dikontrol dengan mengatur konsentrasi inisiator [12]. AAPH ditemukanmenghambat perkembangbiakan manusiaIMR- 90 sel dalam konsentrasi dan bergantung waktu. Hasil menunjukkan bahwa inkubasi 2 hari dengan AAPH (1 mM) secara signifikan meningkatkan persentase rasio positif SA -Gal, populasi sel apoptosis, mengurangi ekspresi mRNA SIRT1, dan menginduksi morfologi yang membesar dan rata. Ini menunjukkan bahwa stres oksidatif yang dihasilkan oleh AAPH menyebabkan sel IMR-90 mengalami penuaan. Berdasarkan model penuaan seluler ini, pengobatan resveratrol 10 μM lebih efisien menghambat penuaan dan apoptosis yang diinduksi AAPH daripada pengobatan CR.

Model hewan D-gal adalah model hewan menua yang diakui secara internasional dan telah banyak digunakan di bidangobat anti penuaan. D-gal adalah nutrisi fisiologis yang biasanya dimetabolisme oleh D-galactokinase dan galaktosa-1-fosfat pada hewan. Namun, kelebihan pasokan D-gal, yang tidak dimetabolisme oleh enzim di atas tetapi terakumulasi dalam sel, menyebabkan stres oksidatif dan kerusakan sel [14]. Dengan demikian, pemberian D-gal jangka panjang menginduksi perubahan yang menyerupai penuaan alami pada hewan, seperti umur yang lebih pendek, disfungsi kognitif, degenerasi saraf, stres oksidatif, penurunan respons imun, dan pembentukan produk akhir glikasi lanjut (AGE) [15]. Studi ini menunjukkan keberhasilan pembentukan model penuaan mimetik, dibuktikan dengan pembelajaran yang luar biasa dan gangguan memori, produksi MDA, akumulasi lipofuscin, penurunan T-AOC dan SOD, dan penurunan regulasi aktivitas telomerase di otak. Sementara itu, perawatan resveratrol atau CR melindungi tikus yang diinduksi D-gal terhadap stres oksidatif dengan meningkatkan aktivitas enzim antioksidan, menurunkan kadar produk peroksidasi lipid, dan menjaga keseimbangan sistem oksidatif dan antioksidan. Dalam tes perilaku dan aktivitas telomerase, pengobatan resveratrol atau CR dapat membalikkan gangguan kognitif dan aktivitas telomerase yang diinduksi D-gal. Selain itu, tikus model penuaan yang diobati dengan resveratrol dosis tinggi menunjukkan efek yang relatif lebih signifikan terhadap perilaku dibandingkan tikus yang diobati dengan CR.

Gambar 11: Analisis imunohistokimia ekspresi p53 (A, B) dan FOXO3a (C, D) di jaringan hati (A, C) dan otak (B, D) tikus tua. Perbesarannya adalah 20x. NG, kelompok kontrol negatif; MG, kelompok kontrol model; RESL, kelompok resveratrol dosis rendah; RESH, kelompok resveratrol dosis tinggi; CR, kelompok pembatasan kalori

Studi telah menunjukkan bahwa CR, pengurangan 10–40 persen asupan makanan bergizi, bisamemperlambat penuaan dan meningkatkan umur, jadi satu tingkat CR yang umum digunakan (pengurangan 40 persen asupan makanan) diterapkan pada tikus kelompok CR dalam penelitian ini. Namun demikian, beberapa penyelidikan mengungkapkan bahwa tidak ada efek menguntungkan dari CR pada umur panjang primata alami [16]. Demikian pula, meskipun pengobatan resveratrol terbukti menginduksi efek mirip CR padametabolisme energidan profil metabolik pada manusia obesitas [17], itu tidak meningkatkan fungsi metabolisme pada wanita non-obesitas dengan toleransi glukosa normal [18]. Alasan perbedaan antara studi ini tidak jelas tetapi mungkin CR dan resveratrol bekerja untuk memulihkan homeostasis pada individu yang mengalami gangguan metabolisme, dan kurang pada individu yang sehat, kemungkinan konsisten dengan fungsi SIRT1 yang diketahui dalam penelitian pada hewan [19]. Oleh karena itu, model tikus penuaan yang diinduksi D-gal diterapkan untuk membandingkan aktivitas anti-penuaan resveratrol atau CR , daripada model tikus yang berumur alami.

SIRT1, sebuah deasetilase yang bergantung pada (NAD plus), telah mendapatkan banyak perhatian karena perannya yang berlipat ganda dalam perpanjangan masa hidup, ketahanan stres dan pengurangan apoptosis [20, 21]. Mengumpulkan studi sangat menyiratkan bahwa SIRT1 adalah target utama resveratrol dan CR [22]. Ada sejumlah besar molekul hilir SIRT1, termasuk p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 dan E2F1, yang diatur oleh SIRT1. Secara bersamaan, aktivitas SIRT1 diatur oleh molekul hulunya, misalnya p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR dan AROS. Penarikan nutrisi akut mengaktifkan program transkripsi di promotor SIRT1 yang diarahkan oleh faktor transkripsi Foxo3a dan p53. Karena p53 menekan ekspresi gen SIRT1, penghilangannya oleh Foxo3a mengaktifkan transkripsi SIRT1 [23]. DBC1 dan AROS baru-baru ini digambarkan sebagai regulator negatif dan positif langsung dari aktivitas SIRT1, masing-masing, HuR menunjukkan efek penurunan level ekspresi SIRT1 pada sel tua tua [9, 10].

CRmemperlambat penuaan dan memperpanjang rentang hidup rata-rata dan maksimaldalam berbagai spesies, termasuk tikus, mencit, ikan, lalat, cacing, dan ragi. Namun, program diet yang ketat pada orang yang hidup bebas telah menimbulkan masalah etika dan metodologi [24]. Saat ini, meningkatkan rentang kesehatan mungkin lebih penting daripada sekadar memperpanjang umur. Investigasi terbaru menunjukkan bahwa resveratrol adalah salah satu pemicu aktivitas SIR2 yang paling kuat di antara semua polifenol tanaman [25], dan itu mempengaruhi umur panjang melalui mekanisme yang sama seperti yang terlihat pada pembatasan kalori. Hasil ini menunjukkan bahwa CR dan resveratrol memiliki aktivitas serupa dalam memulihkan level ekspresi mRNA SIRT1, meningkatkan ekspresi protein FOXO3a, AROS dan HuR dan menurunkan level p53 dan DBC1. Sementara itu, banyak bukti yang meyakinkan menunjukkan efek menguntungkan dari resveratrol pada sistem saraf, hati, dan kardiovaskular.

BAHAN DAN METODE

Kultur sel, stres dan perawatan

Strain fibroblast diploid manusia IMR-90 diperoleh dari ATCC. Sel ditanam dalam media esensial minimum (MEM) (Gibco, Inggris) yang dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi (FBS) (Gibco) pada suhu 37 derajat dalam 5 persen CO2 . Setelah pertemuan tercapai, sel-sel diunggulkan ke 6-pelat kultur sumur. Satu hari kemudian, sel dirawat selama 48 jam dengan 1 mM 2,2′-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) (Sigma, USA) yang diencerkan dalam MEM plus 10 persen FBS. Inkubasi 48 jam dengan inisiator radikal bebas AAPH menetapkan model penuaan seluler yang diinduksi stres oksidatif [12, 13]. Sel kontrol diinkubasi dalam media kultur saja. Setelah pengobatan AAPH, IMR-90 dicuci dengan salin dapar fosfat dingin (PBS) pH 7,4 dan diinkubasi dengan media biakan segar atau media biakan yang mengandung resveratrol (gugus resveratrol) atau MEM yang dilengkapi dengan 3 persen FBS (gugus CR) selama tambahan 48 jam sebelum panen.

Aktivitas pewarnaan SA -gal

Munculnya biomarker penuaan diperiksa (penurunan potensi proliferasi dan peningkatan pewarnaan SA-gal) [26] dari hari setelah perawatan. Kemudian sel-sel diwarnai mengikuti instruksi pabrik dari SA -gal Staining Kit (CST, USA). Setelah pewarnaan, setidaknya 300 sel di beberapa bidang diperiksa dan sel positif SA-gal dihitung. Eksperimen ini diulang tiga kali, dan hasilnya disajikan sebagai nilai rata-rata dengan standar deviasi (SD). Untuk menghindari pewarnaan nonspesifik yang mungkin disebabkan oleh pertemuan sel, pewarnaan histokimia SA -gal dilakukan dengan sel subkonfluen.

Pemindaian analisis mikroskop elektron

Sel ditumbuhkan pada kaca penutup di 6-pelat biakan sumur seperti dijelaskan di atas. Setelah resveratrol dan CR dirawat, kaca penutup dilepas dari pelat, kemudian sel-sel difiksasi dalam 2,5 persen glutaraldehida yang disangga fosfat dan pasca-diperbaiki dalam osmium tetroksida yang disangga 1 persen. Spesimen tetap direndam dalam t-butil alkohol setelah dehidrasi melalui serangkaian etanol bertingkat. Spesimen dibekukan dari t-butil alkohol, kemudian dilapisi evaporatif dengan emas menggunakan pelapis halus otomatis (JFC-1600, JEOC, Jepang), dan diperiksa menggunakan mikroskop elektron pemindaian (JEOL, JSM{{11} }LV, Jepang).

Analisis apoptosis

Setelah inkubasi resveratrol atau CR, semua sel dipanen dengan trypsin dan dicuci dua kali dengan PBS, diikuti dengan disuspensikan kembali dalam buffer pengikat Annexin V 400 μL. Kemudian sel-sel diwarnai mengikuti instruksi pabrik dari kit deteksi apoptosis sel Annexin V-FITC (BestBio, Cina). FACSCalibur flow cytometer (Becton-Dickinson, San Jose, CA) digunakan untuk mendeteksi fluoresensi, dan persentase sel apoptosis dihitung oleh sistem perangkat lunak internal FACSCalibur. Sekitar 104 sel dianalisis untuk setiap jejak.

Prosedur hewan

Tikus Wistar albino jantan, dengan berat sekitar 200 ± 10 g, diperoleh dari Pusat Hewan Eksperimental Fakultas Kedokteran Tongji, Universitas Sains dan Teknologi Huazhong (SCXK 2010-0009). Hewan-hewan tersebut diadaptasikan selama 2 minggu sebelum diberi dosis di Pusat Hewan Eksperimental Universitas Pengobatan Cina Hubei, selama waktu itu mereka memiliki akses gratis ke makanan dan air ad libitum. Setelah aklimatisasi, dipilih 50 ekor tikus dan dibagi menjadi lima kelompok yang masing-masing terdiri dari sepuluh ekor. Hewan dipelihara sesuai pedoman dan protokol nasional yang disetujui oleh Komite Etika Hewan Institusional (IAEC).

Tikus kelompok I (kelompok kontrol negatif) menerima pembawa saja (1 mL/kg berat badan 0.9 persen saline) selama 6 minggu. Tikus kelompok II (kelompok kontrol Model) menerima D-gal (200 mg / kg berat badan, Sigma Chemical, St. Louis, MO) selama 6 minggu. Tikus kelompok III (kelompok resveratrol dosis rendah) menerima D-gal dan resveratrol (50 mg/kg berat badan) yang dilarutkan dalam 5 persen dimetil sulfoksida (DMSO) selama 6 minggu. Tikus kelompok IV (kelompok resveratrol dosis tinggi) mendapat D-gal dan resveratrol (100 mg/kg berat badan). Tikus kelompok V (kelompok CR) menerima D-gal dan CR (diberi makan diet yang 40 persen lebih rendah kalori daripada tikus yang diberi makan ad libitum [27]) selama 6 minggu. D-gal diberikan secara intraperitoneal, sedangkan resveratrol diberikan secara oral selama durasi percobaan. Tikus dikorbankan pada hari terakhir perlakuan, kemudian darah, serum dan organ segera dikumpulkan untuk bioassay atau disimpan pada suhu -80 derajat untuk digunakan nanti.

Tes perilaku

Tes labirin air Morris dirancang untuk menilai kapasitas pembelajaran spasial dan memori tikus setelah 6 minggu pasca cedera [28]. Tes labirin air Morris terdiri dari 4-pelatihan memori dan pembelajaran sehari serta uji coba penyelidikan pada hari ke-5. Hewan dilatih di kolam melingkar (berdiameter 155 cm) dengan isyarat visual. Platform penyelamatan diri (berdiameter 9,0 cm) terendam 1,0 cm di bawah permukaan air kolam, yang dipertahankan pada 25 ± 2 derajat . Lokasi platform tetap berada di tengah kuadran barat laut selama 4-hari periode pelatihan. Setiap hari, tikus dilatih untuk satu blok pagi dan satu blok sore. Tikus itu berenang bebas hingga menemukan platform dalam waktu 120 detik. Jika gagal, ditempatkan di platform selama 10 detik. Latensi melarikan diri (menemukan platform melarikan diri yang terendam) dan kecepatan renang dicatat. Uji coba probe dilakukan dengan melepas platform dan membiarkan setiap tikus berenang bebas selama 120 detik di dalam kolam. Jumlah penyeberangan peron di kuadran terlatih (di mana peron dilepas) direkam dengan sistem video terkomputerisasi. Labirin air versi platform yang terlihat tidak dilakukan setelah perbedaan yang signifikan dalam kecepatan berenang diamati antara tikus yang diberi D-gal dan kendaraan.

Deteksi indikator biologis terkait stres oksidatif

Tingkat MDA, SOD, dan T-AOC dalam darah dan jaringan ditentukan secara fotometrik sesuai dengan protokol pabrikan dengan menggunakan alat uji enzimatik yang tersedia secara komersial (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR China). Semua percobaan yang dijelaskan dalam bagian ini dilakukan dalam rangkap tiga untuk mendapatkan rata-rata dan SD.

Tingkat lipofuscin ditentukan dengan metode Sohal [29]. Singkatnya, kami menimbang 200 mg korteks serebral, menambahkan 2 ml ekstrak kloroform-metanol (2:1), dihomogenkan dan disaring, lalu mencuci residu dengan ekstrak, menggabungkan filtrat, menambahkan ekstrak ke 5 ml dan mengukur intensitas fluoresensi pada spektrometer fluoresensi. Panjang gelombang emisi adalah 435 nm dan panjang gelombang eksitasi adalah 365 nm. Spektrofluorometer dibakukan untuk memberikan defleksi 50 pada panjang gelombang di atas dengan larutan 1 ug/ml kina bisulfat dalam 0,1 M H2SO4 . Hasilnya dinyatakan sebagai unit fluoresen relatif/ml kloroform/g berat jaringan basah.

Deteksi aktivitas TE

Untuk ekstraksi telomerase sekitar 30 mg jaringan dicuci dua kali dalam PBS dingin, dan akhirnya dihomogenkan dalam sekitar 150 ml PBS. Aktivitas TE diukur menggunakan kit TE ELISA sesuai dengan instruksi pabriknya (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, China). Batas sensitivitas tes adalah 0,8 IU/L untuk TE.

analisis RT-PCR

Tingkat ekspresi mRNA SIRT1, Foxo3 dan p53 di jaringan hati dan otak dianalisis menggunakan analisis RT PCR. Total RNA diekstraksi menggunakan Trizol, dan kuantitas serta kemurniannya dinilai dengan mikrospektrofotometer ultra (Thermo Fisher Scientific, USA) berdasarkan pengukuran absorbansi pada 260 dan 280 nm. Setelah kuantifikasi, cDNA disintesis menggunakan kit FastQuant RT (Tiangen Biotech, Beijing, China) sesuai dengan instruksi pabriknya. Tingkat ekspresi mRNA SIRT1, Foxo3, p53 diukur dengan RT-PCR menggunakan TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Beijing, China) dengan primer spesifik (Tabel 2). PCR real-time kuantitatif dilakukan dengan sistem PCR LightCycler 480 derajat (Roche, Basel, Swiss) menggunakan 20 μL sebagai volume total setiap reaksi. Amplifikasi PCR dimulai dengan denaturasi selama 15 menit pada 95 derajat , dan kemudian diikuti oleh 40 siklus 95 derajat selama 10 detik, 59-63 derajat (suhu anil) selama 20 detik dan 72 derajat selama 30 detik, dan inkubasi akhir pada 72 derajat selama 5 menit. Jumlah ambang siklus yang diperoleh dari setiap gen (nilai Ct) dinormalisasi menjadi lipatan perubahan relatif sesuai dengan persamaan metode 2-∆∆CT [30].

Tabel 2: Daftar Primer

analisis noda barat

Tingkat ekspresi protein p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1, dan DBC1 di jaringan otak dianalisis menggunakan analisis western blotting. Total protein jaringan otak diekstraksi menggunakan RIPA Lysis Buffer (Beyotime, China) sesuai dengan instruksi pabriknya. Konsentrasi protein ditentukan dengan menggunakan BCA Protein Assay Kit (Beyotime, China). 5 mg protein dipisahkan menggunakan 12 persen gel SDS-poliakrilamida dan dipindahkan ke membran PVDF (0.45 μm, Millipore, USA). Bercak diblokir dengan 5 persen susu tanpa lemak di TBS, kemudian diinkubasi semalaman pada suhu 4 derajat dengan pengenceran antibodi primer yang sesuai: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Teknologi Pensinyalan), anti-HuR (#12582, Teknologi Pensinyalan Sel), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Teknologi Pensinyalan Sel), aksi anti- - (AC004, Teknologi ABclonal) . Setelah mencuci membran untuk menghilangkan kelebihan antibodi primer, membran diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar dengan antibodi sekunder yang sesuai pada pengenceran 1:2000-1:5000 (AC004 atau AS003, Teknologi ABclonal). Membran dicuci 3 kali kemudian divisualisasikan menggunakan Pierce ECL Western Blotting Substrat (Thermo Scientific). -tindakan digunakan sebagai kontrol internal.

Imunohistokimia

Sampel jaringan difiksasi dalam formalin buffer netral 10 persen dalam waktu 1 jam setelah operasi pengangkatan dan tertanam parafin menggunakan prosedur standar. Kemudian spesimen tertanam parafin tetap dipotong menjadi bagian setebal 5-μm, yang dideparafinisasi dalam xylene, direhidrasi dalam etanol, dan diolah dengan microwave untuk pengambilan antigen. Antibodi primer yang diencerkan dengan tepat, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) dan anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), diinkubasi selama 60 menit pada suhu kamar dalam ruang lembab. Slide kemudian dibilas dalam PBS dan selanjutnya diinkubasi dengan antibodi sekunder terhadap antibodi anti-kelinci dan visualisasi HRP (konsentrasi 1:300, #074-1506, KPL). Kemudian slide dicuci dan bagian dikembangkan dalam larutan enzim-substrat diaminobenzidine (DAB, Sigma). Gambar bagian yang diwarnai secara imunohistokimia ditangkap oleh mikroskop digital Olympus (IX-73P1F, Olympus, Jepang).

Analisis statistik

Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD untuk setidaknya tiga percobaan independen dan dianalisis menggunakan perangkat lunak SPSS 18.0. Perbedaan kelompok dalam latensi melarikan diri dan kecepatan berenang dalam tugas pelatihan labirin air Morris dianalisis menggunakan analisis varians dua arah (ANOVA) dengan pengukuran berulang, faktornya adalah hari perawatan dan pelatihan. Data lain dianalisis dengan ANOVA satu arah diikuti dengan uji Tukey post-hoc. Nilai P kurang dari 0.05 dianggap signifikan.

KESIMPULAN

Resveratrol dan CR menunjukkan aktivitas anti-penuaan yang serupa baik in vitro dan in vivo, dibuktikan dengan kemampuan mereka untuk menghambat penuaan dan apoptosis yang diinduksi AAPH, dan memulihkan kerusakan kognitif terkait usia yang disebabkan oleh pemberian D-gal. Mekanisme anti-penuaan mereka termasuk mengatur aktivitas TE, mengurangi kerusakan oksidatif, dan mengatur jalur SIRT1. Secara keseluruhan, 10 μM resveratrol in vitro dan resveratrol in vivo dosis tinggi menunjukkan aktivitas anti-penuaan dan merangsang tingkat SIRT1 yang relatif lebih kuat. Hasil ini melibatkan potensi resveratrol sebagai tiruan CR.

Singkatan

AAPH, 2,2′-azobis (2-amidinopropana) dihidroklorida; AMPK, protein kinase teraktivasi adenosin monofosfat; ANOVA, analisis varians; AROS, pengatur aktif SIRT1; CR, pembatasan kalori; DBC1, dihapus pada kanker payudara 1; D-gal, D-galaktosa; FBS, serum janin sapi; Foxo3a, kotak garpu 3a; HuR, antigen Hu R; MEM, media esensial minimum; PBS, saline penyangga fosfat; PGC-1 , koaktivator reseptor G yang diaktifkan proliferator peroksisom-1 ; RES, resveratrol; SA -gal, terkait penuaan -galactosidase; SD, standar deviasi; SIRT1, membungkam regulator informasi; TE, telomerase.

Kontribusi penulis

Konsepsi dan desain penelitian: Gang Chen; akuisisi, analisis dan interpretasi data: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; memperoleh pembiayaan dan revisi kritis naskah untuk konten intelektual: Gang Chen, Ke-Li Chen; penulisan naskah: Juan Li. Semua penulis telah membaca dan menyetujui publikasi naskah ini. UCAPAN TERIMA KASIH DAN DANA

Karya ini didanai oleh China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), proyek Natural Science Foundation (81373704, 30873292).

KONFLIK KEPENTINGAN

Tidak ada konflik kepentingan dari semua penulis yang berpartisipasi.

REFERENSI

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Pembatasan kalori, resveratrol, dan melatonin: Peran SIRT1 dan implikasinya terhadap penuaan dan penyakit terkait. Mech Aging Dev. 2015; 146–148:28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Pembatasan kalori mengurangi kematian terkait usia dan semua penyebab kematian pada monyet rhesus. Nat Komun. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Stres oksidatif Weindruch R., pembatasan kalori, dan penuaan. Sains. 1996; 273:59–63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Pembatasan kalori dan mimetik pembatasan diet: strategi untuk meningkatkan penuaan dan umur panjang yang sehat. Curr Pharm Des. 2014; 20:2950–77.

5. Jalur MA, Roth GS, Ingram DK. Mimetik pembatasan kalori: pendekatan baru untuk biogerontologi. Metode Mol Biol. 2007; 371:143–9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, dkk. Resveratrol meningkatkan kesehatan dan kelangsungan hidup tikus dengan diet tinggi kalori. Alam. 2006; 444:337–42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P, dkk. Resveratrol meningkatkan fungsi mitokondria dan melindungi dari penyakit metabolik dengan mengaktifkan SIRT1 dan PGC-1alfa. Sel. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Aktivator molekul kecil sirtuin memperpanjang umur Saccharomyces cerevisiae. Alam. 2003; 425:191–6.

9. Kwon HS, Ott M. Naik turunnya SIRT1. Tren Biochem Sci. 2008; 33:517–25.

10. Brooks CL, Gu W. Bagaimana SIRT1 memengaruhi metabolisme, penuaan, dan kanker? Kanker Nat Rev. 2009; 9:123–8.

11. Harman D. Teori penuaan radikal bebas. Mutat Re. 1992; 275:257–66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Kerusakan oksidatif pada katalase yang diinduksi oleh radikal peroksil: perlindungan fungsional oleh melatonin dan antioksidan lainnya. Radik Bebas Res. 2003; 37:543–53.

13. Hubbackova S, Krejcikova K, Bartek J, Hodny Z. IL1- dan pensinyalan TGF -Nox4, stres oksidatif, dan respons kerusakan DNA adalah fitur bersama dari replikasi, yang diinduksi onkogen, dan penuaan parakrin yang diinduksi oleh obat. '. Penuaan (Albany NY). 2012; 4:932–51. https://doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Paparan D-galaktosa sistemik kronis menyebabkan kehilangan memori, degenerasi saraf, dan kerusakan oksidatif pada tikus: Efek perlindungan R{{ 2}}asam lipoat. J Neurosci Res. 2006; 84:647–54.

Tanya lebih lanjut:

Surel:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950