Polisakarida Cistanche Deserticola Xinjiang Memiliki Efek Antioksidan
Aug 30, 2023
abstrak
Aktivitas antioksidan polisakarida Cistanche deserticola dipelajari secara in vitro. Mengambil asam askorbat sebagai kontrol, mengambil reaksi Fenton untuk menghasilkan radikal hidroksil, reaksi autoksidasi dopamin menghasilkan radikal anion superoksida, reaksi natrium hipoklorit dengan hidrogen peroksida menghasilkan oksigen singlet, radikal difenil pahit hidrazin sebagai model percobaan. , efek polisakarida Cistanche deserticola pada radikal anion superoksida, radikal hidroksil DPPH · radikal bebas (radikal difenil pahit hidrazin), efek pemulungan oksigen singlet. Hasil penelitian menunjukkan bahwa polisakarida dari Cistanche deserticola memiliki efek pembersihan yang jelas terhadap radikal bebas di atas, dan efek pembersihan berkorelasi positif dengan konsentrasi polisakarida.
Kata kunci :Cistancdia tubulosa Polisakharide; Radikal bebas
1. Perkenalan
Tubuh secara terus menerus memproduksi berbagai radikal bebas oksigen reaktif (ROS) dalam proses metabolisme oksidatif aktivitas kehidupan, yang merupakan produk antara dari reaksi oksidasi-reduksi metabolisme aerobik.Penelitian menemukan bahwa radikal bebas yang berlebihan akan menyerang makromolekul kehidupan dan berbagai organel, menyebabkan berbagai kerusakan pada tingkat molekuler, tingkat sel, jaringan, dan tingkat organ, mempercepat proses penuaan tubuh dan memicu penyakit seperti trombosis, diabetes, aterosklerosis, tumor, dll. [1]. Karena toksisitas antioksidan yang disintesis secara kimia terhadap tubuh manusia, pencarian antioksidan alami dengan efisiensi tinggi dan toksisitas rendah yang dapat menghilangkan radikal bebas oksigen telah menjadi topik penelitian hangat di bidang kedokteran, pangan, teknik kimia, dan bidang lainnya. tahun terakhir.
Cistanche desertikola(YCMa.)adalah obat tradisional Tiongkok yang langka dan dikenal sebagai "ginseng gurun" [2]. Cistanche deserticola mapolisakarida adalah salah satu komponen bioaktif utama Cistanche deserticola, namun belum ada laporan apakah polisakarida Cistanche deserticola memiliki efek menangkal radikal bebas. Dalam makalah ini, efek pemulungan polisakarida Cistanche deserticola pada radikal anion superoksida, radikal hidroksil, radikal bebas DPPH ·, dan oksigen singlet ditentukan melalui analisis spektral, untuk mengevaluasi aktivitas antioksidannya dan memberikan dasar ilmiah untuk pengembangan penuh dan pemanfaatan. sumber daya alam ini.
Cistanche ramuan Cina
2. Bagian percobaan
2.1 Instrumen dan reagen
Spektrofotometer UV-2401 UV-visibel (Shimadzu, Jepang); LumatLB9507 luminometer tabung ultra-sensitif (Jerman
BertholdTechnologies); RE-52Rotary evaporator CS (Pabrik Instrumen Biokimia Shanghai Yarong); Pemandian air termostatik elektronik HW-SY (Pabrik Instrumen Jintan Xinhang); PHS-3Pengukur pH C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 oven pengering vakum (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: dibeli dari Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamin (Institut China untuk Pengendalian Produk Farmasi dan Biologi), FeSO4, EDTA, vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, dll. semuanya merupakan reagen analitik dalam negeri. Air percobaan adalah air suling penukar ion.
2.2 Metode eksperimen
2.2.1 Metode ekstraksiCistanche desertikolapolisakarida
Ambil 30g bubuk Cistanche deserticola dan masukkan ke dalam labu berbentuk kerucut 500 mL. Rendam dalam petroleum eter (60-90 derajat ), eter, dan larutan panas etanol 80% (30 derajat ) masing-masing selama 6 jam, dan residu diuapkan untuk mengeringkan pelarut. Rendam sisa filter dalam air dengan perbandingan 1 ∶ 10 selama 24 jam, panaskan pada suhu 30 derajat, dan ekstrak selama 100 menit. Setelah ekstraksi, sentrifugasi untuk mendapatkan supernatan. Setelah supernatan dipekatkan pada tekanan tereduksi, supernatan diendapkan dengan etanol 95% sebanyak 3 kali volume. Didiamkan selama 24 jam pada suhu 4 derajat. Setelah sentrifugasi, dikumpulkan dan diendapkan. Setelah pengeringan vakum, polisakarida mentah Cistanche deserticola dapat diperoleh. Timbang 1,00 g polisakarida mentah, larutkan dengan air, dan masukkan ke dalam labu ukur 50 mL untuk siaga.
Klik di sini untuk melihat produk bedak Cistanche
【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.2.2 Uji kemampuan mengaisCistanche desertikolapolisakarida menjadi O-2 · radikal bebas
Kemampuan pemulungan polisakarida Cistanche deserticola menjadi O{{0}} · diuji dengan produksi radikal bebas superoksida (O-2 ·) dari autoksidasi dopamin [3]. Tambahkan 3.0mL {{10}}.1mmol/LpH=10.12 larutan buffer karbonat, 3.0mL air, dan {{18 }}.5mL larutan sampel polisakarida dengan konsentrasi berbeda dalam tabung reaksi pengeringan dengan kerak secara bergantian. Setelah pemanasan awal dalam penangas air 30 derajat selama 5 menit, tambahkan 1.0mL 2.0mmol/L dopamin yang telah dipanaskan sebelumnya dalam penangas air 30 derajat, segera campur dan atur waktu, pertahankan reaksi pada suhu 30 derajat selama 5 menit, dan segera hentikan reaksi dengan 2 tetes 10mol/L HCl. Gunakan larutan buffer sebagai acuan, ukur absorbansi (sampel A) pada 221 nm, ganti sampel (blank A) dengan 0,5 mL air pada kelompok blanko, dan ganti sampel dengan 0,5 mL asam askorbat pada kelompok kontrol. , ukur setiap sampel tiga kali secara paralel, dan ambil nilai rata-ratanya. O-2 · tingkat izin (%)=(Kosong - Sampel)/Kosong × 100%
2.2.3 Uji kemampuan mengaisCistanche desertikolapolisakarida menjadi · OH radikal bebas
Dtermasuk ramuan cistanche hidup—Antioksidan
Sistem EDTA-Fe (Ⅱ) - metilen biru - H2O2 digunakan untuk menguji kemampuan pemulungan polisakarida Cistanche deserticola terhadap radikal hidroksil. Prinsipnya adalah EDTA-Fe (Ⅱ) bereaksi dengan hidrogen peroksida menghasilkan · radikal bebas OH, yang mengurangi karakteristik puncak serapan larutan metilen biru pada 660 nm.
Tambahkan 1.0mL larutan 5mmol/L LFeSO4, 1,2mL larutan 5mmol/L LEDTA, 2.0mL 0.03mol/L NaH2PO{ {12}}larutan buffer Na2HPO4 (pH=7.4), dan 1,3mL larutan hidrogen peroksida 20mmol/L ke dalam serangkaian tabung reaksi 10mL dengan sumbat, kocok rata, tambahkan 0.7mL larutan metilen biru 0,2mmol/L, lalu tambahkan 1,0mL larutan yang akan diuji dan vitamin C1.0 dengan konsentrasi berbeda, encerkan hingga 10.00 mL dengan air, aduk rata, simpan pada suhu 37 derajat selama 30 menit, dan ukur nilai serapan setiap larutan pada 660nm, Kelompok blanko mengganti larutan sampel dengan air. Setiap sampel harus diukur tiga kali secara paralel, dan nilai rata-rata harus diambil. · Laju pemulungan radikal OH sampel (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Dalam rumus 100%: A0 -- serapan nilai tabung yang tidak rusak; A1 - nilai serapan tabung rusak; A2 -- Nilai fotometrik setelah penambahan sampel.
2.2.4 Uji DPPH · kemampuan mengaisCistanche desertikolapolisakarida
Ambil {{0}}.1mL larutan polisakarida Cistanche deserticola dan tambahkan ke dalam larutan 5,0mLDPPH ·, aduk cepat, dan diamkan selama 10 menit pada suhu kamar,
Tentukan perubahan serapannya pada panjang gelombang 517nm [4]. Setiap sampel harus diukur tiga kali secara paralel, dan nilai rata-rata harus diambil. Tingkat pembersihan sampel DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Dalam rumus 100%: A0 -- nilai serapan DPPH · (1.9mLDPPH ·+0.1mL50% etanol) tanpa sampel; A - nilai serapan sampel setelah reaksi dengan DPPH ·; B -- nilai serapan sampel kosong (sampel 0.1mL+1.9mL etanol 50%).
2.2.5Cistanche desertikolates oksigen singlet pemulungan polisakarida 1O2
Oksigen garis tunggal (1O2) dihasilkan oleh reaksi kimia NaClO dan H2O2 pada suhu 37 derajat [5]. Larutan yang digunakan untuk penentuan 1O2 adalah larutan NaClO 100 μL2.8mmol/L, larutan 400 μL5mmol/LNaOH, larutan 300 μL10mmol/LH2O2, larutan 50 μL1mmol/Luminol. Selama reaksi, larutan reaksi ditambahkan ke larutan sampel, dan instrumen chemiluminescence secara otomatis mencatat proses reaksi pada saat yang bersamaan. Ambil NaClO-H2O2-NaOH-Luminol sebagai kontrol kosong. Mulai reaksi, dan tambahkan larutan reaksi ke dalam tabung sampel dari botol penyimpanan instrumen chemiluminescence sesuai dengan jumlah yang ditentukan dalam prosedur. Kemudian intensitas chemiluminescence campuran reaksi dicatat pada kertas perekam setiap 5 detik, setiap sampel diukur tiga kali secara paralel, dan diambil nilai rata-ratanya.
Tingkat jarak bebas dihitung berdasarkan rumus berikut: tingkat jarak bebas (%)=(kontrol intensitas cahaya - sampel intensitas cahaya)/kontrol intensitas cahaya × 100%
3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Efek pemulunganCistanche desertikolapolisakarida pada O-2 ·
Manfaat cistanche tubulosa—Antioxidan
Sifat kimia O-2 · bersifat aktif, yaitu dapat membuat asam lemak pada biofilm menghasilkan peroksida, dan kemudian menghancurkan sel [6]. Dalam tulisan ini, metode dopamin digunakan untuk menentukan kemampuan pemulungan O-2 ·. Kemampuan Cistanche deserticola terhadap O-2 · ditunjukkan pada Gambar 1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa polisakarida Cistanche deserticola dapat menghambat O-2 · yang dihasilkan oleh autoksidasi dopamin, dan meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi dalam rentang konsentrasi yang diukur (0-8mg/mL), tetapi kemampuan pemulungannya lebih rendah dibandingkan asam askorbat.
3.2 Efek pemulunganCistanche desertikolapolisakarida · OH
·OH adalah salah satu radikal bebas oksigen paling aktif dalam spesies oksigen aktif. Ia dapat bereaksi dengan hampir semua makromolekul biologis dalam sel hidup dan dapat menyebabkan proses biokimia seperti peroksidasi lipid, polimerisasi protein, dan depolimerisasi, pemecahan asam nukleat, dll di jaringan tubuh, menyebabkan penyakit jaringan dan sel, yang menyebabkan terjadinya penyakit jaringan. berbagai penyakit dan mempercepat penuaan tubuh [7]. Kemampuan pemulungan polisakarida Cistanche deserticola terhadap · OH ditunjukkan pada Gambar 2. Hasil penelitian menunjukkan bahwa polisakarida Cistanche deserticola memiliki efek pemulungan yang baik terhadap · OH, dan meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi.
3.3 Kemampuan pemulungan polisakarida Cistanche deserticola terhadap DPPH ·
DPPH · (radikal difenil pahit hidrazin) adalah radikal bebas stabil, berwarna ungu dalam pelarut organik dan memiliki daya serap kuat mendekati 517nm. Setelah penambahan antioksidan, beberapa radikal bebas dihilangkan, sehingga melemahkan penyerapan, yang dapat digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan zat ini [8]. Lihat Gambar 3 untuk DPPH · kapasitas pemulungan polisakarida Cistanche deserticola. Hasil percobaan menunjukkan bahwa kapasitas pemulungan polisakarida Cistanche deserticola pada DPPH · berkorelasi positif dengan konsentrasinya, dan kapasitas pemulungan lebih besar dibandingkan dengan asam askorbat.
3.4 Kemampuan menangkap polisakarida Cistanche deserticola menjadi 1O2
Oksigen garis tunggal adalah oksigen molekuler tereksitasi dengan sifat kimia aktif. Karena elektron yang tidak berpasangan mempunyai kecenderungan untuk berpasangan, radikal bebas menunjukkan sifat kimia yang lebih aktif [9]. Kemampuan pemulungan polisakarida Cistanche deserticola terhadap 1O2 ditunjukkan pada Gambar 4. Hasil percobaan menunjukkan bahwa kapasitas pemulungan polisakarida Cistanche deserticola lebih rendah dibandingkan dengan asam askorbat pada kisaran 0-4.0mg /mL, dan kapasitas pemulungan polisakarida Cistanche deserticola lebih tinggi dibandingkan asam askorbat ketika konsentrasinya lebih besar dari 4.0mg/mL.
4. Kesimpulan
Aktivitas antioksidan polisakarida Cistanche deserticola in vitro dipelajari secara rinci melalui berbagai sistem radikal bebas oksigen reaktif.Dari hasil percobaan terlihat bahwa dalam rentang konsentrasi percobaan, ekstrak polisakarida Cistanche deserticola mempunyai efek pemulungan terhadap O-2 ·, · OH, DPPH · dan 1O2, dan efek pemulungan berbeda untuk berbagai sistem.Hasilnya menunjukkan hal ituPolisakarida Cistanche deserticola adalah antioksidan alami eksogen yang efektif, yang layak untuk penelitian lebih lanjut, pengembangan, dan pemanfaatan komprehensif.
Cistanche tubulosa 200mg—Antioxidan
