Evaluasi Toksisitas Ekstrak Bunga Dolichandrone Serrulata (DSF) Terhadap Fungsi Ginjal Dan Hati

untuk informasi lebih lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Evaluasi Toksisitas Ekstrak Bunga Dolichandrone Serrulata Terhadap Organ Vital dan Reproduksi Tikus Jantan Dewasa

C. Chaimontria dan S. Iamsaard

Abstrak

MeskipunBunga dolichandrone serrulata(DSF) ekstrak air telah terbukti memiliki sifat farmakologis, toksisitas sistemiknya masih harus dievaluasi. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki efek toksisitas sub-kronis dari DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak parameter biokimia dan struktur histologis darihati, ginjal, testis. dan epididimis plus vas deferens. Tikus jantan dewasa diberikan DSF (Bunga dolichandrone serrulata) pada 100.300, dan 600 mg/kg BB melalui gavage oral selama 48 hari berturut-turut sedangkan kontrol menerima air suling. Di akhir percobaan, darah.hati, ginjal, testis, dan epididimis ditambah sampel vas deferens dikumpulkan untuk menentukan perubahan komponen biokimia serum termasuk ALT, ALP, dan tingkat kreatinin dan struktur histologis. Hasilnya menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan dalam berat badan dan konsumsi makanan atau air antara kontrol dan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)-kelompok yang dirawat. Ditemukan bahwa DSF (Bunga dolichandrone serrulata)secara signifikan meningkatkan berat epididimis plus vas deferens, sementaraginjaldanhatimenunjukkan penurunan pada kelompok dosis tinggi (P walue< 0.05).="" histological="" changes="" in="" these="" vital="" and="" reproductive="" tissues="" including="" fibrosis="" were="" not="" observed="" after="" administration="" but="" alt,="" alp,="" and="" creatinine="" levels="" were="" significantly="" altered="" in="" the="" treated="" groups(pwlue="" <="" 0.051.="" these="" altered="" levels.="" however,="" were="" still="" within="" normal="" ranges="" in="" conclusion,="" these="" findings="" demonstrated="" that="" d.serulata="" flower="" extract="" had="" no="" sub-chronic="" toxicity="" on="" vital="" and="" reproductive="" structures="" but="" slightly="" altered="" some="">fungsi hati dan ginjal.

Klik ke Cistanches dan Cistanche untuk penyakit ginjal

Kata kunci:Dolichandroneserrulata, hati, ginjal, testis, epididimis.

1. Perkenalan

Penggunaan herbal untuk pengobatan penyakit merupakan tradisi yang sudah berlangsung lama. Potensi sifat obat tanaman tergantung pada jenis dan jumlah senyawa kimianya. Diketahui bahwa setiap bagian individu tanaman obat memiliki kandungan senyawa yang berbeda-beda. Selain itu, jenis dan jumlah zat dapat bervariasi tergantung pada faktor lain seperti spesies herba, lingkungan penanaman, dan periode panen (Sringeunyuan dan Hongwiset, 1990). Saat ini, pemerintah Thailand sedang mempromosikan penggunaan tanaman obat dan herbal, yang dianggap sebagai alternatif pengobatan untuk perawatan kesehatan modern (Sringeunyuan dan Hongwiset., 1990) mengingat bahwa produk tanaman sebagian besar tidak beracun. Apalagi pengobatan herbal berasal dari kearifan lokal dalam pengobatan tradisional Thailand. Khae Na orDolichandrone serrulata(atauD. bunga serrulata(DSF)) merupakan tanaman obat purba yang secara tradisional dipercaya memiliki banyak khasiat farmakologis (Sriprasert, 2016). Sebagian besar bagian (bunga, polong, kulit kayu, dan akar) tanaman ini bermanfaat dan dikonsumsi karena berbagai sifat farmakologisnya (Sriprasert,2016; Kiratipaiboon et al.,2012). Sebuah studi saat ini telah mengungkapkan efek perlindungan dari DSF (Bunga dolichandrone serrulata)terhadap kerusakan reproduksi pada tikus diabetes (Yannasithinon et al., 2021). Studi biologi ekstrak metanol DSF (Bunga dolichandrone serrulata)telah menunjukkan aktivitas antioksidannya yang menjanjikan (Phanthong et al., 2015). Ditemukan bahwa DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak mengandung enam senyawa antara lain halleron, asam protocatechuic, rengyolone, cleroindicin B, inside, dan isomaltose (Phanthong et al, 2015). Selain itu, penelitian sebelumnya telah mengevaluasi profil fitokimia dan aktivitas biologis DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak etanolik (Sriprasert, 2016). Studi fitokimia ekstrak etanolik dari tanaman ini mengungkapkan metabolit sekunder seperti flavonoid, kumarin, saponin, tanin, terpenoid, steroid, dan glikosida jantung (Sriprasert, 2016). Baru-baru ini, ekstrak air DSF (Bunga dolichandrone serrulata)telah dilaporkan memiliki kapasitas antioksidan dan monoterpenoid seperti rengyolone dan cleroindicin B (Chaimontriet al.,2021). Namun, beberapa tanaman yang terkait dengan D. serrulata ini telah terbukti menjadi racun bagi organ vital dan reproduksi. Misalnya, ekstrak air P.alliaceum, diekstraksi dengan etanol dalam studi toksisitas akut mengurangi kemampuan sel darah putih (Granados-Echegoyenet al., 2015). Sebelumnya, Aba dan Amadi (2019) melaporkan bahwa ekstrak buah belimbing wuluh dapat merusak jaringan hati dan ginjal. Selain itu, ditemukan bahwa ginseng matahari dapat mengubah parameter serum darah termasuk tingkat ALT, ALP, dan kreatinin, yang menunjukkangangguan fungsi hati dan ginjal(Kim dkk. 2013). Selain itu, Azu et al. (2010) melaporkan bahwa ekstrak buah K. Africana dosis tinggi dapat menghambat spermatogenesis. Tercatat bahwa konsumsi produk tanaman terkini secara terus menerus dalam waktu lama dapat merusak organ vital dan reproduksi (Kiratipaiboon et al,2012; Freitas et al, 2013; Joshi et al, 2011; Karnati et al,2013; Lee et al, 2012). Meskipun DSF (Bunga dolichandrone serrulata)telah dikonsumsi untuk waktu yang lama, efek toksik dari ekstrak airnya padahati, ginjal, testis, dan epididimis belum dinilai. Untuk meningkatkan pemahaman kita tentang pertanyaan ini, penelitian ini berusaha untuk menyelidiki toksisitas sub-kronis DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak pada organ vital dan reproduksi untuk menentukan kemungkinan aman mengkonsumsi zat ini dalam waktu yang lama.

Bunga dolichandrone serrulata(DSF)

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1.Hewan

Empat puluh tikus jantan dewasa Sprague-Dawley (120-150g) dibeli dari Nomura Siam International, Bangkok, Thailand. Hewan disimpan dalam kandang baja tahan karat di bawah kondisi ruang percobaan (12 jam siklus terang/gelap, suhu 23±2 derajat , kelembaban 40-60 persen , suara<85 decibels,="" and="" light="" intensity="" approximately="" 350-400="" lux)in="" the="" northeast="" laboratory="" animal="" center,="" khon="" kaen="" university,="" thailand.="" this="" experimental="" study="" was="" approved="" by="" the="" animal="" ethics="" committee="" research="" of="" northeast="" laboratory="" animal="" center="" khon="" kaen="" university.="" the="" code="" of="" this="" animal="" ethic="" is="">

2.2. Pengumpulan dan persiapan bunga D.serrulata

Spesimen tanaman Khae Na segar dikumpulkan dari Kecamatan Ban Thum, Kabupaten Mueang, Provinsi Khon Kaen, Thailand, dan disahkan oleh Assist. Prof. Dr. Pimwadee Pornpongrungrueng, Departemen Biologi, Fakultas Sains, Universitas Khon Kaen (sampel voucher D.serrulata, disimpan di Herbarium KKU dengan nomor S.lamsaard02). Dalam ekstraksi, DSF dikeringkan (Bunga dolichandrone serrulata)diiris kecil-kecil sebelum direndam dan direbus dalam air suling pada derajat 90-95 derajat selama 40 menit. DSF . berair (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak diliofilisasi menggunakan lyophilizer(M-00359-1/57,13-1011-18-2019, Labconco, Becthai Scientific Industry, Thailand). Persentase hasil dari DSFextract mentah adalah 40,78 persen. Ekstrak ini diperoleh dari Dr. Sitthichai lamsaard seperti yang dijelaskan sebelumnya dalam detail ekstraksi (Chaimontri et al., 2021; Yannasithinon et al, 2021).

2.3. Desain eksperimental

Setelah aklimatisasi selama 7 hari, tikus jantan secara acak dibagi menjadi 4 kelompok (10 ekor per kelompok) meliputi kontrol, DSF (Bunga dolichandrone serrulata)100, DSF (Bunga dolichandrone serrulata)300, dan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)600 kelompok, masing-masing. DSF (Bunga dolichandrone serrulata) dosis ekstrak dihitung berdasarkan dosis konsumsi maksimal DSF (Bunga dolichandrone serrulata)pada seseorang dengan berat rata-rata 60 kg. Secara singkat takaran 600 mg/Kg BB dihitung dari daya konsumsi 40 bunga/hari/orang. Rasio proporsional dari dosis tengah (300mg) dan terendah (100 mg) dihitung dari 600 mg. Untuk DSF (Bunga dolichandrone serrulata)kelompok perlakuan, tikus diobati dengan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)-ekstrak dilarutkan dalam air suling (DW) pada dosis masing-masing 100, 300, dan 600 mg/kg BB, melalui gavage oral. Hewan pada kelompok kontrol hanya diberikan DW. Berat badan mereka dicatat setiap hari selama pemberian selama 48 hari berturut-turut.

2.4. Analisis biokimia

Pada akhir percobaan, semua tikus dibius dengan natrium thiopental (60 mg/kg BB via ip) sebelum dilakukan euthanasia dengan dislokasi serviks. Setelah membuka dinding dada, darah dikumpulkan dengan tusukan jantung dan disentrifugasi pada 12,000 r/menit selama 10 menit pada 4 derajat, menggunakan microcentrifuge (Microfuge 22R Centrifuge, Beckman Coulter TM, USA) untuk memisahkan sel darah dari serumnya. Serum darah segera dikirim ke unit imunologi, Rumah Sakit Srinagarind, Fakultas Kedokteran, Universitas Khon Kaen, Thailand untuk penentuan nitrogen urea darah (BUN) dan kreatinin (untukginjalfungsi) dan albumin, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), dan alkaline phosphatase (ALP) (untuk fungsi hati). Tingkat biokimia ditentukan dengan menggunakan immunoassay electrochemiluminescence (Roche Diagnostics) dengan Cobas dan analisa imun (Roche Diagnostics, Mannheim, Jerman).

2.5. Studi histologi organ vital

Setelah pengambilan darah,hati, ginjal, dan organ reproduksi termasuk testis dan epididimis dengan cepat dikumpulkan dan ditimbang. Semua jaringan difiksasi dengan larutan fiksatif formalin 10 persen selama 72 jam. Kemudian, mereka diproses untuk bagian parafin rutin dan diwarnai dengan pewarna trichrome Masson untuk menyelidiki perkembangan serat kolagen. Secara singkat, bagian jaringan dideparafinisasi dengan xilena dan direhidrasi dengan alkohol desendens serial. Kemudian, potongan direndam dalam larutan Bouin dan diwarnai dengan hematoxylin besi Weigert. Selanjutnya, bagian diwarnai dengan kit pewarnaan trichrome Masson (Katalog no. HT15, Sigma-Aldrich, Inc, USA). Akhirnya, bagian dicuci dengan asam asetat 1 persen. Perubahan histologi organ vital dan organ reproduksi diamati dan difoto dengan mikroskop Nikon light ECLIPSE E200 yang dilengkapi dengan kamera digital DXM1200.

2.6. Analisis statistik

Semua data dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD). Untuk membandingkan perbedaan antara keempat kelompok, digunakan perbandingan berganda Post Hoc untuk data terdistribusi normal, dan perbedaan data dilakukan dengan menggunakan One Way ANOVA menggunakan program SPSS statistik 19.0.2software(paket statistik untuk the Social Sciences, versi 19.0.2, SPSS Inc, Armonk, New York, USA diinstal dari KKUSoftware Center, Khon Kaen University) untuk analisis data. Program SPSS digunakan untuk menguji perbedaan yang signifikan antar kelompok. nilai-p<0.05 was="" considered="" a="" significant="">

3. Hasil

3.1. Pengaruh ekstrak bunga D.serrulata terhadap berat badan, dan organ vital dan reproduksi

Rata-rata tubuh berubah tubuh, dan bobot testis hewan pada kelompok kontrol dan perlakuan tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan. Sebaliknya, berat epididimis ditambah vas deferens di DSF (Bunga dolichandrone serrulata)600 kelompok perlakuan meningkat secara signifikan jika dibandingkan dengan kontrol. Asupan air dan konsumsi makanan untuk semua hewan tidak menunjukkan variasi yang signifikan (Tabel 1). Menariknya, bobot relatif dariginjaldan hatidi DSF (Bunga dolichandrone serrulata)300 dan 600 hewan perlakuan menurun secara signifikan bila dibandingkan dengan kontrol (P <0,05).

Tabel 1. Perbandingan berat badan, testis, epididimis plus vas deferens, ginjal, dan berat organ hati antara kontrol dan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)tikus -diperlakukan setelah 48 hari studi toksisitas sub-kronis.

3.2. Pengaruh ekstrak bunga D.serrulata pada parameter biokimia

Setelah analisis serum, parameter biokimia yang menunjukkan fungsi hati menunjukkan bahwa DSF (Bunga dolichandrone serrulata)secara signifikan menurunkan tingkat alanine aminotransferase (ALT) dan alkaline phosphatase (ALP) dibandingkan dengan kelompok kontrol (P<0.05, table="" 2).="" by="" contrast,="" creatinine="" levels="" which="">fungsi ginjal, dari DSF (Bunga dolichandrone serrulata)100 dan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)300 kelompok meningkat secara signifikan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol (P<0.05, table="" 2).="" interestingly,="" no="" difference="" in="" renal="" function="" was="" indicated="" by="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" albumin,="" and="" blood="" urea="" nitrogen(bun)levels="" in="" all=""> (Bunga dolichandrone serrulata)kelompok yang diperlakukan diamati.

Tabel 2. Perbandingan kadar parameter biokimia dalam serum antara tikus kontrol dan tikus perlakuan setelah 48 hari studi toksisitas subkronis

3.3.Pengaruh ekstrak bunga D.serrulata terhadap perkembangan serat kolagen pada testis, epididimis ekor, ginjal, dan hati tikus

Bagian jaringan testis, caudal epididimis,ginjal, dan hatidiwarnai oleh trikoma Masson menunjukkan tidak ada perbedaan dalam ketebalan serat kolagen antara kelompok kontrol dan perlakuan seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1-4. Sebaliknya, serat kolagen dan fibroblas yang melimpah ditemukan di lamina basal di bawah epitel seminiferus (panah biru pada Gambar 1). Selain itu, epididimis caudal menunjukkan serat kolagen halus bersama dengan dinding tubulus dan ruang intertubular (bintang hitam pada Gambar 2 ). Di ginjal, serat kolagen hadir di membran basal tubulus ginjal dan ruang Bowman (panah biru pada Gambar 3). Selain itu, jaringan hati dari semua kelompok menunjukkan sejumlah kecil serat kolagen yang mengelilingi triad portal yang mengandung arteri hepatika, vena portal, dan saluran empedu (panah biru pada Gambar 4).

Gambar 1. Gambaran histologi testis yang diwarnai dengan trikoma kontrol Masson: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), dan DSF600 (D) kelompok, masing-masing. Panah merah=serat kolagen; SG=spermatogonia; RS=spermatid bulat.	Gambar 2. Gambaran histologi epididimis caudal yang diwarnai oleh trikoma kontrol Masson: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), dan DSF600 (D) kelompok, masing-masing. Serat kolagen=bintang hitam.
Gambar 3. Gambaran histologi ginjal yang diwarnai dengan trikoma kontrol Masson: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), dan DSF600 (D) kelompok, masing-masing. Panah biru=serat kolagen; RT=tubulus ginjal.	Gambar 4. Gambaran histologi hati yang menunjukkan triad portal yang diwarnai oleh trikoma kontrol Masson: (A), DSF100 (B), DSF300 (C), dan DSF600 (D) kelompok, masing-masing. Panah biru=serat kolagen.

4. Diskusi

Studi ini menunjukkan bahwa DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak tidak mempengaruhihati, ginjal, dan struktur organ reproduksi setelah pemberian selama 48 hari. Namun, DSF (Bunga dolichandrone serrulata)sedikit diubahfungsi hati dan ginjal, tetapi kadar serum mereka masih dalam kisaran normal sesuai dengan nilai standar. Telah dilaporkan bahwa dosis tinggi (500 mg/kg BB) dari spesies yang sama dari tanaman ini menekan produksi sperma (Azuet al., 2010); Namun, dosis tinggi DSF (Bunga dolichandrone serrulata)(600 mg/kg BB) tidak mengubah berat organ reproduksi atau struktur histologis. Hasil ini setuju dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan peningkatan konsentrasi dan kualitas sperma epididimis setelah DSF (Bunga dolichandrone serrulata)pengobatan (Chaimontri et al., 2021). Selain itu, DSF meningkatkan jumlah sperma dan fisiologi serta histopatologi testis pada tikus diabetes tipe 1 (Yannasithinon et al., 2021). Bersama dengan hasil kami, penyelidikan tersebut menunjukkan bahwa DSF aqueous berair (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak tidak memiliki toksisitas sub-kronis pada sistem reproduksi pria. Ini dapat dijelaskan karena DSF . berair (Bunga dolichandrone serrulata)menyajikan aktivitas antioksidan dan mengandung total kandungan fenolik termasuk komponen terpenoid (Chaimontri et al., 2021). Memang, dalam literatur, banyak bagian D.serrulata yang diekstraksi dengan etanol atau metanol juga telah terbukti memiliki kapasitas dan zat antioksidan seperti alkaloid, flavonoid, glikosida, senyawa fenolik, saponin, dan tanin (Chatchanayuenyong dan Sujayanont, 2020; Khaing dkk,2018; Kiratipaiboon dkk., 2012; Sinaphet dkk,2006; Sittiwet, 2009). Kapasitas antioksidan DSF . ini (Bunga dolichandrone serrulata)dapat menurunkan kadar glukosa darah cepat (FBG) yang tinggi dan malondialdehida testis (MDA) dengan peningkatan kadar testosteron tikus yang diobati dengan DM Tipe 2 (Yannasithinon et al., 2021).

Studi sebelumnya telah melaporkan toksisitas banyak zat termasuk ekstrak tumbuhan pada deposit serat kolagen pada testis diabetes (Ismail et al.2017), epididimis hipertensi (Mazen dan Zidan, 2017), distribusi sel stellata hati (Nishimura et al, 2012; Towne et al., 2015), danpenyakit ginjal kronispasien (Allon et al, 2019). Seperti yang ditunjukkan dalam penelitian baru-baru ini, intensitas serat kolagen yang ada di testis, epididimis caudal, hati, dan jaringan ginjal yang diwarnai oleh trikrom Masson, tidak menunjukkan perbedaan antara kontrol dan DSF. (Bunga dolichandrone serrulata)kelompok pengobatan. Hasil ini menunjukkan bahwa DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak tidak menginduksi fibrosis histopatologi, akumulasi serat kolagen, di jaringan vital dan reproduksi. Hasil ini menunjukkan bahwa mengkonsumsi DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak untuk periode sub-kronis tidak menyebabkan fibrosis pada organ reproduksi atau vital. Tercatat bahwa ketebalan kapsul Bowman di antara DSF (Bunga dolichandrone serrulata) kelompok perlakuan tidak menunjukkan perubahan yang jelas dibandingkan dengan kelompok kontrol. Selain itu, bobot organ-organ tersebut tidak berbeda secara signifikan antar kelompok, yang sesuai dengan penelitian sebelumnya yang mengamati tikus yang dirawat selama periode toksisitas akut (Katisart dan Konsue, 2019).

Hati dan ginjalmikrostruktur tidak menunjukkan perubahan yang jelas setelah DSF (Bunga dolichandrone serrulata)pemberian pada dosis apapun. Namun, fungsinya sedikit berubah karena penurunan kadar ALT dan ATP, sementara kadar kreatinin meningkat secara signifikan. Perubahan fungsional tersebut dapat dijelaskan oleh aktivitas saponin yang ditemukan di DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak kasar seperti yang dijelaskan dalam penelitian sebelumnya (Kiratipaiboon et al. 2012). Mekanisme ini mungkin mirip dengan yang diamati pada pengobatan dengan ginseng matahari, yang kandungan saponinnya menyebabkan perubahan parameter serum darah yang terkait dengan hati danginjalfungsiseperti kadar ALT, ALP, dan kreatinin (Kim et al.2013). Namun, perubahan fisiologis seperti itu tidak cukup untuk merusak hati danginjalstruktur. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2; parameter biokimia dalam serum darah dari DSF (Bunga dolichandrone serrulata)kelompok perlakuan berubah jika dibandingkan dengan kontrol, namun kadarnya masih dalam kisaran normal termasuk ALT[{{0}}U/L], ALP 62-230 U/L], dan kreatinin [0.2-0.5 mg/dl seperti yang dilaporkan sebelumnya pada model hewan (Hayakawa et al.,2013; Pereira et al.,2017). Sebagai batasan penelitian, zat beracun lainnya di DSF (Bunga dolichandrone serrulata)dan penanda apoptosis dalam jaringan perlu diselidiki lebih lanjut untuk menentukan keamanannya untuk digunakan dan dikonsumsi dalam waktu yang lama.

5. Kesimpulan

Studi ini menunjukkan bahwa DSF . berair (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak bunga tidak memiliki toksisitas pada organ vital dan jaringan reproduksi pria, tetapi menghasilkan perubahan ringan pada beberapa parameter untukhati danginjalfungsi.

6. Prospek Masa Depan

Berdasarkan temuan artikel ini, keamanan DSF (Bunga dolichandrone serrulata)konsumsi selama waktu yang lama untuk mikrostruktur ginjal dan hati ditunjukkan. Secara khusus, DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak terbukti tidak beracun untuk testis dan epididimis. Semoga DSF (Bunga dolichandrone serrulata)ekstrak dapat dikembangkan lebih lanjut sebagai suplemen makanan untuk kesehatan reproduksi pria.

Referensi

1. ABA, PE and AMADI, AU,2019.Evaluasi kemungkinan potensi hepatotoksik dan nefrotoksik ekstrak sari buah belimbing wuluh pada tikus albino betina.Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology,vol.31,no.1.https:// doi.org/10.1515jbcpp-2019-0042.PMid:31536032.

2. ALLON,M.,LITOVSKY,SH,TEYJ,SUNDBERG,CA.,ZHANG,Y,CHEN, Z.,FANG,Y.,CHEUNG,AK.and SHIU,YT,2019.Kelainan histologi vaskular dan konfigurasi serat kolagen pada pasien dengan stadium lanjutpenyakit ginjal kronis.Jurnal Akses Vaskular, vol. 20, no.1, hal.31-40.http://dx. doi. org/10.1177/1129729818773305.PMid:29742957.

Catatan:di atas bukan daftar referensi lengkap