Apakah total glikosida cistanche memiliki efek pada penciuman?

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Pengaruh total glikosida cistanche pada sel-sel pembungkus penciuman tikus dan sekresi faktor neurotropiknya

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Cedera sumsum tulang belakang (SCI) adalah cedera serius pada pusatsistem saraf, terhitung {{0}},2 persen —0,5 persen dari total trauma. Pada patah tulang belakang, 16 persen —40 persen diperumit oleh cedera tulang belakang, sering menyebabkan kecacatan parah, menyebabkan Kesulitan dalam kehidupan sehari-hari yang mempengaruhi kualitas hidup pasien, dan menyebabkan beban besar bagi keluarga dan masyarakat.Penciumsel ensheating (OECs) adalah jenis khusus dari lem saraf. Sel plasma dapat bermigrasi ke otak denganpenciumakson saraf dan dapat mensekresi banyak faktor pertumbuhan seperti NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptida-Y, dan S-100. Karena karakteristik inipenciumsel ensheating, OEC dianggap sebagai salah satu sel benih yang menjanjikan untuk transplantasi sel untuk memperbaiki SCI. Saat ini, pengobatan SCI di bidang kedokteran rehabilitasi terutama didasarkan pada rehabilitasi komprehensif. Untuk menemukan metode yang lebih efektif, penelitian berikut telah dilakukan pada efekcistanchetotalglikosidadi OEC:

Cistanche total glikosida untuk sel-sel ensheating Olfactory

1 Bahan dan metode

1.1 Bahan percobaan

Tikus Wistar (disediakan oleh Pusat Hewan Universitas Mongolia Dalam);cistanchetotalglikosida, medium DMEM/F12, serum janin betis (FCS), poli-D-lisin, arabinosida (Ara-C), tripsin, larutan D -Hanks, anti-p75NGFR kelinci (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), inkubator sel (Thermo-HEPA Kelas 100), mikroskop fase kontras terbalik (Olympus CKX41, Jepang), meja kerja ultra-bersih (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Perusahaan, SW-CJ-2FD), enzim penganalisis label (Wellscan MKH), flow cytometer, dll.

1.2 Metode penelitian

1.2.1 Kultur, pemurnian, dan identifikasi OEC: Tikus Wistar dikorbankan dengan cara dipenggal dan direndam dalam anggur selama 5 menit. Tengkorak anterior dibuka untuk mengekspospenciumbohlam. keduanyapenciumumbi benar-benar dihapus di bawah mikroskop bedah. Cuci dalam larutan D-Hanks; memotongpenciumbohlam dengan gunting bedah mikro, tambahkan 2ml 0.25 persen pankreatin dan inkubasi pada suhu 37 derajat selama 20 menit; tambahkan media kultur D MEM/F12 yang mengandung 10 persen serum anak sapi ke dalam tabung sentrifus 2ml. Pencernaan dihentikan di tengah; pipet bus mengaspirasi jaringan yang tidak tercerna sempurna pada 800 rpm dan disentrifugasi selama 5 menit, membuang supernatannya; akhirnya menggunakan media terkondisi (20 persen FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM /F12) Buatlah menjadi lx 107ml suspensi sel tunggal, inokulasi dalam labu kultur sel berlapis polilisin, tempatkan itu dalam 37 derajat, 5 persen CO2 inkubator, dan kemudian menambahkan Arac Pemurnian dilakukan pada 36h. Gunakan anti-p75E kelinci dan antibodi sekunder IgG anti-kelinci kambing berlabel FITC untuk identifikasi sel imunohistokimia dan pengamatan mikroskop fluoresensi.

1.2.2 Gunakan MTT dan flow cytometry untuk menentukan efek daritotal glikosida cistanchepadapenciumsel-sel ensheathing: menyuntik yang berbudaya dan dimurnikanpenciummelapisi sel dalam 96-piring sumur pada 1X106, dan tambahkantotal glikosida cistanche(konsentrasi aksi adalah Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), ukur nilai OD dan ukur sitometri aliran sel setelah 24 jam aksi. Siapkan grup Kontrol danGlikosida total Cistanchekelompok konsentrasi yang berbeda: Kelompok A (Kelompok kontrol): Medium kultur yang mengandung serum digunakan sebagai kontrol negatif; Grup B (total glikosida cistanchekelompok konsentrasi rendah: llig/ml); Kelompok C (Cistanche total glikosida konsentrasi sedang Kelompok: L10jxg/MK); Grup D (total glikosida cistanchekelompok konsentrasi tinggi: 100|xg/mlo): 15 tikus di setiap kelompok.

1.2.3 Penentuan kandungan faktor neurotropik dalam supernatan dengan ELISA: menginokulasikan yang dikultur dan dimurnikanpenciummenyelubungi sel dalam 6-piring sumur pada 1x106, tambahkantotal glikosida cistanche(konsentrasi yang sama seperti di atas) setelah 24 jam dan bekerja selama 24 jam, dan mengumpulkan supernatan secara terpisah, Disimpan di -80 Lama. Kandungan faktor pertumbuhan saraf dalam cairan ditentukan dengan metode ELISA.

1.3 Analisis statistik

Data dalam penelitian ini diperlakukan sebagai data pengukuran, dan data yang diperoleh dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi, dan perangkat lunak statistik SPSS 11.0 digunakan untuk analisis statistik. Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis varians, dan P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Hasil

2.1 Efek daricistanchetotal glikosida padapenciumsel selubung

2.1.1 Hasil penentuan metode metil oksazolil tetrazol (MT): Golongan A: 0.617±0.149; Grup B: 0.589±0.147; Grup C: 0.761±0.138; Grup D: 0.732±0.234. Perbandingan antaraGlikosida total Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, perbedaannya tidak signifikan;Glikosida total Cistanche10mg/ml, kelompok konsentrasi 100mg/ml (C, D) dibandingkan dengan kelompok Kontrol (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Hasil penentuan flow cytometry ditunjukkan pada Gambar 1. Dibandingkan dengan kelompok Kontrol,total glikosida cistanchekelompok lebih tinggi dari kelompok Kontrol, dan persentase sel apoptosis lebih rendah dari kelompok Kontrol.

2.2 Hasil uji imunosorben terkait enzim (ELISA)

Hasil pengujian menunjukkan bahwa kandungan glial-cell-line-derived neurotrophic factor (GDNF): sebelum pemberian dosis: 302,1±16,6 pg/ml, kelompok A: 340,5±13,2pg/ml; kelompok B: 333.2±23.6pg/ml; Grup C: 355,2±17.6pg/ml; Grup D; 379,2±15,3pg/ml. Dibandingkan dengan pra-administrasi, konten GDNF meningkat secara signifikan; dibandingkan dengan kelompok Kontrol (A), konten GDNF dariGlikosida total CistancheKelompok konsentrasi 100mg/ml (D) meningkat secara signifikan.

3 Diskusi

Kesulitan dalam regenerasi akson adalah salah satu alasan utama mengapa sulit untuk pulih setelah cedera tulang belakang. OEC memiliki peran dalam regenerasi akson neuron pusat yang jenis sel lain sulit untuk digantikan. Dalam beberapa tahun terakhir, penelitian tentangpenciumsel-sel ensheating telah menjadi hot spot.Penciumsel ensheating adalah jenis khusus sel glial yang memiliki karakteristik sel Schwann dan astrosit. Mereka berasal daripenciummembran basal dan tersebar luas di permukaanpenciummukosa,penciumsaraf, danpenciumbohlam. Ia memiliki kemampuan untuk membelah dan beregenerasi seumur hidup dan dapat menemanipenciumakson saraf untuk bermigrasi ke otak. Akson daripenciumsaraf dapat melewati persimpangan antara sistem saraf tepi dan sistem saraf pusat setiap 30-60 hari, tumbuh kembali menjadipenciumselubung dan membangun koneksi sinaptik4.Penciumsel-sel pembungkus dapat mengeluarkan banyak faktor pertumbuhan seperti NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptida-Y, dan S-100. Penelitian telah menunjukkan bahwa faktor pertumbuhan saraf (NGF) dapat mencegah neuron nukleus merah tulang belakang dari atrofi dan memperkuat saluran kortikospinalis Sprout dan mempromosikan regenerasi jalur saraf sumsum tulang belakang inti merah; baik faktor neurotropik yang diturunkan dari otak (BDNF) dan neurotropin-3 (NT-3) dapat mencegah apoptosis sel sumsum tulang belakang nukleus merah pada tikus dewasa dengan cedera axotomi dan menyelamatkan neuron yang sekarat dan mendorong regenerasi aksonal P. Sebagai tambahan,penciumsel ensheating juga mengekspresikan faktor lain pada membran sel mereka, seperti faktor adhesi sel saraf (N-CAM), yang terlibat dalam adhesi sel dan pertumbuhan akson. Karena karakteristik inipenciumsel ensheating, OEC dianggap sebagai salah satu sel benih yang menjanjikan untuk transplantasi sel untuk memperbaiki SCI.

Komponen kimia dariBentengterutama termasuk glikosida fenilethanoid, iridoid, komponen volatil, lignan, polisakarida, dan alkaloid. Studi tersebut menemukan bahwaBentengdan komponen kimianya memiliki efek neuroprotektif. Deng dkk. mempelajari efek tubulosa B pada apoptosis neuron SH-SY5Y yang diinduksi oleh tumor necrosis factor (TNF ). Hasil penelitian menunjukkan bahwa setelah 100ug/ Neuron SH-SY5Y setelah 36 jam pengobatan TNF oleh L menunjukkan karakteristik apoptosis yang khas, sedangkan pengobatan tubulin B selama 2 jam dapat secara signifikan mengurangi apoptosis yang diinduksi oleh TNF . Selain itu, penelitian juga menunjukkan bahwa glikosida fenilethanoid dapat menghambat apoptosis sel granul serebelar tikus dengan menghambat caspase-3 dan caspase-8, dan terhadap tikus hitam C57 yang disebabkan oleh methyl phenyl tetrahydropyridine (MPTP). Kerusakan neuron dopaminergik berkualitas memiliki efek perlindungan. Tidak hanya itu, tapiBentengjuga dapat meringankan berbagai kerusakan seperti iskemia-reperfusi pada sistem saraf. Eksperimen cedera iskemia otak tikus menunjukkan bahwa kisaran infark 24 jam dan 48 jam setelah iskemia pada kelompok reperfusi iskemia serebral adalah rata-rata 72,98 persen dan 60,45 persen. Sebaliknya,cistanchetotal glikosida kelompok dosis besar, sedang, dan rendah (250.0mg·kg/hari; 125,0mg·kg/hari; 62,5mg·kg/hari) masing-masing dapat membuat otak tikus setelah iskemia-reperfusi serebral 24 jam Ukuran infark berkurang menjadi 25,94 persen , 25,81 persen , dan 31,13 persen , dan ukuran infark serebral berkurang menjadi 22,14 persen , 20,06 persen , dan 22,27 persen setelah 48 jam. Ada perbedaan yang signifikan antara keduanya, menunjukkan efek penghambatan yang signifikan pada apoptosis neuron.

Dalam penelitian ini, konsentrasi yang berbeda daritotal glikosida cistanchediterapkan pada OEC. Metode MTT dan pengukuran aliran sitometri menegaskan bahwa 10mg/ml100mg/mltotal glikosida cistanchedapat mempromosikan proliferasipenciummenyelubungi sel. Hasil flow cytometry menunjukkan bahwatotal glikosida cistanchedapat mempromosikan proliferasipenciumsel ensheating Ini terutama mempromosikan proliferasi siklus G1 daripenciumsel sperma dan secara signifikan mengurangi sel apoptosis. Karena itu,Glikosida total Cistanchetidak hanya dapat mempromosikan proliferasipenciumsel kulit tetapi juga meningkatkan aktivitas sel dan menghambat apoptosis mereka. Uji imunosorben terkait-enzim membuktikan bahwaGlikosida total Cistanchedapat secara signifikan mempromosikan sekresi GDNF denganpenciummenyelubungi sel. Hasil di atas memberikan dasar eksperimental untuk aplikasi klinis dariGlikosida total Cistanche.

Referensi

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, dkk. Faktor-faktor yang mempengaruhi kualitas hidup pasien cedera tulang belakang selama rehabilitasi [J]. Jurnal Pengobatan Rehabilitasi Cina, 2009, 4 (24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, dkk. Lamina propria danpenciumsel-sel selubung banteng menunjukkan integrasi dan migrasi yang berbeda dan mendorong pertumbuhan akson yang berbeda di medula spinalis yang mengalami lesi[J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. sel selubung penciuman: peran mereka dalam perbaikan sistem saraf pusat[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotensi dimurnikan. transplantasi sel basal glukosa dalampenciumepitel[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. sel marostromal yang mengekspresikan BDNF; mendukung pertumbuhan aksonal yang luas di lokasi d cedera tulang belakang [J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, dkk. Efek perlindungan tubulosa B pada apoptosis yang diinduksi TNF dalam sel saraf [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FeniletanoidglikosidadariCistanchessalsa menghambat apoptosis yang diinduksi oleh ion 1-metil-4-fenilpiridinium dalam neuron[J]. J Ethnopharmacol,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Lagu L.Pu X, dkk. Efek neuroprotektif