Mekanisme Cistanche Deserticola Mempromosikan Fungsi Usus

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstrak

Feniletanoidglikosida(PhGs), kelas senyawa polifenol, dianggap sebagai salah satu konstituen bioaktif utama dariBentengdeserticolaYC Ma (CD), yang ekstraknya digunakan secara oral dalam pengobatan tradisional Tiongkok. Meskipun studi farmakologis sebelumnya telah melaporkan bahwa PhGs mengerahkan banyak aktivitas, profil transportasi usus mereka belum diklarifikasi. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki permeabilitas usus dari ekstrak kaya PhG (PRE) dariBentenggurun pasirsebagai sistem terintegrasi dalam model monolayer sel Caco-2 menggunakan sistem bioassay. Hasil menunjukkan bahwa PRE terutama diangkut melalui difusi pasif yang diserap dengan buruk menuruni gradien konsentrasi tanpa penghabisan, yang memberikan dasar farmakokinetik untuk aplikasi klinis PhG diCistanche Deserticola. Kami juga menentukan permeabilitas usus dari tiga mayorPhGs[acteoside (AC), isoacteoside (IS), dan echinacosida (EC)]oleh HLPC. Selanjutnya, kami mengembangkan metode deteksi fluoresensi HPLC baru untuk secara akurat menentukan jumlah fluks AC dan IS. Seperti yang diharapkan, karakteristik transportasi ketiganyaPhGskonsisten dengan PRE, menunjukkan bahwa sistem bioassay saat ini sesuai dan dapat diandalkan untuk evaluasi karakteristik transportasi kelompok bahan aktif (AIG) di PRE. Selain itu, sistem ini mungkin juga cocok untuk ekstrak tumbuhan lain yang diberikan bioaktivitas yang sesuai.

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola memiliki banyak efek, klik di sini untuk tahu lebih banyak

pengantar

Garis sel Caco-2, yang diturunkan dari adenokarsinoma usus besar manusia, menunjukkan karakteristik seperti enterosit. Dalam kondisi normal, sel Caco-2 secara spontan berdiferensiasi dari sel dewasa dan membentuk lapisan tunggal yang utuh [1]. Sel-sel yang berdekatan menempel melalui persimpangan ketat yang terbentuk di sisi apikal monolayer, yang dapat membedakan obat yang diangkut secara pasif dan aktif melintasi lapisan epitel [2]. Karena kemiripan morfologi dan biokimia dengan enterosit normal, sel monolayer Caco-2 berfungsi sebagai model in vitro yang diterima dengan baik untuk mempelajari potensi penyerapan usus dan karakteristik transportasi obat [3, 4].

Berbeda dengan bahan kimia, ekstrak tumbuhan (PE) merupakan campuran yang aktivitas biologis dan konstituen aktifnya seringkali tidak teridentifikasi dengan baik [5]. Selain itu, sifat transportasi usus PE, yang bertentangan dengan sifat konstituennya, terkait erat dengan penggunaan klinis. Pengukuran fluks untuk sampel uji melintasi monolayer sel Caco-2 biasanya melibatkan metode kimia, seperti HPLC, LC/MS, dll. Meskipun metode ini adalah alat yang ampuh, metode ini rumit, memakan waktu, mahal, dan terkadang membutuhkan peralatan yang canggih. Lebih penting lagi, baik komponen tunggal maupun minoritas tidak dapat mencerminkan PE secara keseluruhan. Dengan demikian, pendekatan baru yang independen dari penentuan konstituen perlu ditetapkan untuk mengidentifikasi dan mengevaluasi karakteristik transportasi PE.

BentengdeserticolaYC Ma (CD), tanaman holoparasit, adalah obat tradisional Cina yang umum terutama digunakan untuk mengobati defisiensi ginjal, kelemahan tubuh, dan sembelit, dan penggunaan ini telah dicatat secara resmi di Farmakope Cina [6]. Feniletanoid glikosida (PhGs), termasuk echinacosida (EC), acteoside (AC), isoacteoside (IS), dll, adalah kelas senyawa polifenol [7]. Mereka dianggap sebagai salah satu konstituen bioaktif utama dariBentengspesies [8]. Studi farmakologis telah menunjukkan bahwa bioaktivitasPhGsberagam dan termasuk anti-oksidatif [9], anti-kelelahan [10], hepatoprotektif [11], imunomodulator [12], anti-inflamasi [7, 13] dan efek neuroprotektif [14]. Namun, karakteristik transportasi usus dariPhGsbelum diselidiki. Dalam penelitian ini, kami mengeksplorasi permeabilitas usus dari ekstrak kaya PhG (PRE) dari CD sebagai sistem terintegrasi dan permeabilitas tiga PhG utama (AC, IS, dan EC) dalam sel Caco-2 yang berbeda. Hasil kami menunjukkan bahwa PRE terutama diangkut melalui difusi pasif yang diserap dengan buruk menuruni gradien konsentrasi tanpa penghabisan, yang memberikan dasar farmakokinetik untuk aplikasi klinis PhG dalam CD.

Bahan dan metode

Bahan:

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 persen ) dibeli dari Must Biotechnology Co. (Chengdu, China). Media Dulbecco yang dimodifikasi Eagle (DMEM), serum janin sapi (FBS), dan asam amino non-esensial (NEAA) diproduksi oleh Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6-pelat TranswellTM sumur (memasukkan area pertumbuhan membran 4,67 cm2) diperoleh dari Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Kolagen ekor tikus diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Semua reagen dan bahan kimia untuk analisis HPLC adalah kelas analitis.

Persiapan PRE dari Cistanche deserticola

Bahan CD yang dikeringkan di udara dibubuk dan diekstraksi dengan perkolasi dengan etanol 70 persen. Fraksi kaya PhG disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya [10] dan diekstraksi dengan n-butil alkohol jenuh air. Cairan ekstrak dipekatkan dan dikeringkan di bawah tekanan tereduksi. Spektrofotometri resin-UV makropori [15] mengukur kandungan PhG sebesar 78,4 persen. Sampel akhir mewakili hasil 1,75 persen bahan baku dengan berat kering. Sampel yang diperoleh disimpan pada suhu -20 derajat sampai digunakan lebih lanjut.

Penentuan AC, IS, dan EC dengan HPLC

Sistem HPLC Shimadzu yang dilengkapi dengan perangkat lunak solusi LC digunakan untuk menguji isi AC, IS, dan EC di PRE. Kolom Intersil C18 fase terbalik (4,6 mm × 250 mm, 5 m) digunakan dan dipertahankan pada suhu kamar. Fase gerak adalah asetonitril dan air yang mengandung 0.1 persen asam fosfat (v/v) dengan elusi gradien (Tabel 1) pada laju alir 1,0 ml/menit. Detektor spektrofotometer UV diatur ke 334 nm. Untuk menentukan fluks AC dan IS secara akurat, kami mengembangkan metode deteksi fluoresensi HPLC (HPLC-FLD) baru. Setelah analisis struktural dan pemindaian panjang gelombang fluoresensi (data tidak ditampilkan), kami memperoleh kondisi deteksi fluoresensi optimal untuk AC (Misal: 338 nm, Em: 448 nm) dan IS (Misal: 320 nm, Em: 434 nm)

Metode analisis HPLC divalidasi dengan menggunakan karakteristik kinerja berikut: stabilitas, linieritas, sensitivitas, presisi (variabilitas intra dan antar hari), dan akurasi. Analit dalam buffer transportasi disimpan pada 25 derajat dalam gelap selama 24 jam, dan stabilitasnya diukur. Analit sangat stabil dengan adanya vitamin C (0,4 persen ) karena nilai standar deviasi relatif (RSD) di daerah puncak <3,5 persen.="" persamaan="" regresi="" linier,="" koefisien="" korelasi,="" rentang="" linieritas,="" lod,="" dan="" loq="" untuk="" ac,="" is,="" dan="" ec="" ditunjukkan="" pada="" tabel="" 2.="" lod="" (18–30="" nm)="" dan="" loq="" (60–100="" nm)="" nilai="" menggambarkan="" bahwa="" metode="" hplc-fld="" dan="" hplc-uv="" sangat="" sensitif.="" nilai="" rsd="" yang="" menyatakan="" ketepatan="" metode="" semuanya=""><2 persen="" untuk="" variabilitas="" intra="" dan="" antar="" hari,="" menunjukkan="" presisi="" yang="" baik.="" untuk="" evaluasi="" pemulihan,="" ac,="" is,="" dan="" ec="" ditambahkan="" ke="" buffer="" transpor="" untuk="" menghasilkan="" tiga="" tingkat="" konsentrasi="" (tinggi,="" sedang,="" dan="" rendah).="" nilai="" perolehan="" kembali="" dari="" metode="" untuk="" analit="" dirangkum="" dalam="" tabel="" 3.="" perolehan="" rata-rata="" berkisar="" antara="" 90,0="" persen="" sampai="" 96,4="" persen,="" menunjukkan="" akurasi="" yang="" baik.="" kesimpulannya,="" metode="" hplc="" yang="" ditetapkan="" memuaskan="" sehubungan="" dengan="" linearitas,="" sensitivitas,="" presisi,="" dan="" akurasi="" untuk="" kuantifikasi="" ac,="" is,="" dan="" ec="" dalam="" buffer="">

Penentuan PRE oleh sistem bioassay

Bioassay (kapasitas antioksidan total) didasarkan pada uji FRAP (kekuatan pereduksi besi/antioksidan) yang telah kami jelaskan sebelumnya [16] dan divalidasi dalam hal linearitas dan presisi (variabilitas intra dan antar hari). Linearitas metode bioassay ditentukan berdasarkan kurva kalibrasi. Rentang konsentrasi linearitas adalah 0.0625 40 ug/ml (y=0.0258x ditambah 0,0968, R2=0.996). Ketepatan metode bioassay yang ditetapkan ditentukan dalam hal variabilitas intra dan antar hari untuk analisis PRE (10,0 ug/ml). Pengulangan metode intra-hari ditentukan berdasarkan lima penentuan berturut-turut pada hari yang sama. Pengulangan antar hari diukur berdasarkan lima penentuan berturut-turut pada tiga hari yang berbeda. Nilai RSD untuk presisi metode ini masing-masing 1,014 persen dan 4,72 persen untuk variabilitas intra dan antar hari, menunjukkan presisi yang baik. Dengan demikian, metode bioassay yang ditetapkan memuaskan sehubungan dengan linearitas, presisi, dan akurasi untuk kuantifikasi PRE dalam buffer transportasi.

Budaya sel

Sel Caco{{0}} dikultur pada 37 derajat dan kelembaban relatif 95 persen dalam atmosfer yang mengandung 5 persen CO2 dan medium yang terdiri dari DMEM, 10 persen FBS, 1 persen NEAA, 1 persen L-glutamin, penisilin ( 100 U/ml), dan streptomisin (100 ug/ml). Media diubah setiap hari selama pertumbuhan dan diferensiasi sel. Sel-sel ditanam dalam labu plastik 75-cm2 dan dipanen setiap 3-5 hari dengan 0,05 persen EDTA-tripsin. Untuk percobaan transportasi, sel-sel diunggulkan dengan kepadatan 1 × 105 sel / cm2 pada sisipan Transwell yang dilapisi dengan kolagen. Sekitar 21 hari setelah penyemaian, lapisan tunggal digunakan untuk percobaan transportasi. Integritasnya ditentukan dengan mengukur hambatan listrik trans-epitel (TEER) melintasi lapisan tunggal dengan EVOM yang dilengkapi dengan ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA). Nilai TEER dari monolayer sel Caco-2 harus melebihi 500 O∙cm2.

Eksperimen transportasi

Lapisan tunggal dicuci dengan buffer transpor (buffer P yang mengandung 10 mM HEPES, 1 mM natrium piruvat, 10 mM glukosa, 3 mM CaCl2 dan 145 mM NaCl, pH 7,4) dan kemudian diinkubasi selama 20 menit pada 37 derajat. Setelah menghilangkan buffer transport, buffer transport segar yang mengandung sampel uji ditambahkan ke ruang apikal (AP) (1,5 ml) dalam studi terarah AP ke basolateral (BL) atau ruang BL (2,5 ml) dalam studi terarah BL ke AP. Untuk pengujian AC, IS dan EC menggunakan HPLC, sebuah alikuot (300 ul) dikeluarkan dari setiap ruang penerima pada interval waktu yang berbeda (30, 60, 90, dan 120 menit). Ruang penerima diisi kembali dengan volume yang sama dari buffer transportasi yang dipanaskan sebelumnya (37 derajat) setelah setiap pengambilan sampel. Sampel yang dikumpulkan disimpan pada suhu -20 derajat untuk digunakan lebih lanjut. Untuk penentuan PRE menggunakan bioassay, hanya sampel pada menit ke 120 yang diambil. Karena ketidakstabilan PRE, AC, IS, dan EC, 0,4 persen (b/v) vitamin C ditambahkan untuk menstabilkan sampel untuk menentukan kandungan AC, IS, dan EC dengan HPLC, dan sampel untuk PRE bioassay diuji segera setelah diambil sampelnya. Nilai koefisien permeabilitas yang tampak (Papp atau 'Papp) dari setiap sampel dihitung.

Analisis data

Nilai Papp dalam arah AP BL atau BLAP AC, IS dan EC dihitung berdasarkan persamaan berikut: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), di mana Papp adalah koefisien permeabilitas semu (cm/s) yang ditentukan oleh HPLC. (4Q/4t) adalah laju kemunculan senyawa uji (AC, IS, atau EC) pada sisi penerima (μmol/s); A adalah luas permukaan sisipan (cm2 ); C0 adalah konsentrasi senyawa uji awal di sisi donor (μmol/ml). Secara khusus, satuan massa "ug" digunakan sebagai ganti "μmol" ketika 'nilai Papp dihitung. Data dinyatakan sebagai mean ± SD.

Hasil

Komposisi Acteoside, Isoacteoside, dan Echincoside dalam PRE dari Cistanche Deserticola

Karena AC, IS dan EC dianggap sebagai PhG bioaktif utama dari spesies Cistanche [8], kami menganalisis isinya di PRE melalui HPLC-UV. Kromatogram perwakilan ditunjukkan pada Gambar. 1. Identifikasi konstituen ini didasarkan pada perbandingan waktu retensi dan spektrum UV dengan standar otentik pada panjang gelombang 334 nm. Isi AC, IS dan EC pada PRE masing-masing sebesar 26,60 persen , 1,84 persen , dan 32,83 persen . Dengan demikian, ketiga senyawa ini menyumbang 61,27 persen dari PRE; Selanjutnya, hasil di atas menunjukkan bahwa kandungan PhG pada PRE adalah 78,4 persen. Oleh karena itu, AC, IS dan EC menyumbang sekitar 80 persen PhGs di PRE.

Total kapasitas anti-oksidatif PRE, AC, IS, dan EC

Studi aktivitas anti-oksidatif PhGs dari CD telah dilaporkan [9], dan AC, IS dan EC menyumbang sekitar 80 persen dari PhGs di PRE. Dengan demikian, kapasitas anti-oksidatif total PRE, AC, IS dan EC diuji dan dinyatakan menggunakan nilai FRAP (× 10-6 mmol). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2, ketika nilai FRAP adalah 8 × 10-6 mmol, konsentrasi akhir PRE, AC, IS dan EC adalah 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml, dan 4,89 ug/ ml, masing-masing, menunjukkan bahwa kapasitas antioksidan total dari keempat sampel ini diberi peringkat sebagai berikut: AC > EC > PRE > IS. Bioaktivitas PRE dikaitkan dengan kelompok bahan aktifnya (AIG). Untuk sekitar 60 persen PRE, AC dan EC menunjukkan aktivitas anti-oksidatif total yang lebih kuat daripada PRE dan IS. Karena IS (1,84 persen ) merupakan fraksi yang sangat kecil dari PRE, komponen lain, seperti IS anti-oksidatif yang lemah, juga jelas aktif dalam PRE. Anehnya, total aktivitas anti-oksidatif berbeda hampir 7-kali lipat antara AC dan IS isomernya, yang menunjukkan tidak hanya jumlah gugus hidroksil fenolik [9] tetapi juga posisi gugus hidroksil fenolik dalam molekul yang mempengaruhi anti -efek oksidatif

Validasi lapisan tunggal Caco-2

Untuk memvalidasi sistem monolayer sel Caco-2, nilai Papp dari propranolol (penanda yang ditransportasikan dengan baik) dan Lucifer yellow (penanda yang diangkut dengan buruk) dari AP ke BL melintasi lapisan tunggal Caco-2 ditentukan sebagai 1,51 × 10-5 cm/s dan 2,8 × 10-7 cm/s, masing-masing, dan nilai-nilai ini setuju dengan yang diterbitkan dalam laporan sebelumnya [17, 18]. Uji aktivitas alkaline phosphatase juga menegaskan bahwa monolayer sel Caco-2 secara kualitatif sebanding dengan epitel usus kecil [19]

Permeabilitas Acteoside, Isoacteoside, dan Echincoside

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), sedangkan obat yang diserap dengan buruk rendah (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

Permeabilitas PRE

Hasil di atas menunjukkan bahwa kapasitas antioksidan total dari PRE setidaknya disebabkan oleh 61,27 persen AIG dari PRE. Jadi, kami mengevaluasi TR dari PRE berdasarkan kurva konsentrasi-efek dari kapasitas antioksidan total dan menghitung nilai 'Papp untuk mencerminkan karakteristik transportasi PRE. 'Nilai Papp dari PRE untuk AP!BL dan BL!AP adalah (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s dan (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, masing-masing, menunjukkan bahwa senyawa ini kurang permeabel. Selanjutnya, efflux atau transpor aktif tidak terlihat karena rasio 'Papp BL terhadap AP/'Papp AP terhadap BL untuk PRE adalah 1,45 [20]. Selain itu, TR dua arah dari PRE meningkat secara linier antara sekitar 300 dan 900 ug/ml (Gbr. 5). Kurangnya preferensi arah hasil menunjukkan bahwa difusi pasif adalah mekanisme transportasi utama dari PRE.

Diskusi

Dibandingkan dengan produk obat yang sangat murni, PE umumnya merupakan campuran yang terdiri dari ratusan konstituen dengan sifat fisikokimia yang sangat berbeda. Oleh karena itu, PE memberikan tindakan sinergis yang sistematis, multitarget, dan multisaluran karena AIG kompleks mereka [21], yang menghambat analisis karakteristik transportasi PE. Untuk mengevaluasi sifat transportasi PE lebih ilmiah, beberapa peneliti telah mengidentifikasi beberapa komponen, bukan komponen tunggal, di PE [22-24]. Namun demikian, jumlah konstituen yang terbatas tidak dapat mencerminkan PE secara keseluruhan. Namun, menentukan semua komponen dalam PE tidak mungkin. Selain itu, jika komponen yang beragam dalam PE menampilkan karakteristik transportasi yang sama sekali berbeda, karakteristik transportasi holistik PE akan sulit untuk diidentifikasi.

Pada 1990-an, sistem bioassay digunakan untuk mengevaluasi TR agen antimikroba [25]. Pada tahun 2005, Eguchi dan rekan-rekannya [26] telah mengevaluasi aktivitas anti-oksidatif ekstrak wortel dengan menggunakan media BL dari sel Caco-2 yang berdiferensiasi; pendekatan ini lebih tepat untuk mencerminkan situasi in vivo.

Berdasarkan laporan sebelumnya tentang aktivitas PhGs [9] dan hasil kami (Gbr. 2), TR AIG di PRE dapat dievaluasi dengan menentukan kapasitas antioksidan total media di ruang penerima. Setelah percobaan transpor, kami menemukan bahwa TR PRE serupa di kedua arah, dan transpor ini tidak jenuh dan diserap dengan buruk ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3],="" dan="" itu="" tidak="" menunjukkan="" penghabisan,="" menunjukkan="" bahwa="" difusi="" pasif="" menuruni="" gradien="" konsentrasi="" adalah="" mekanisme="" transpor="" utama="" pre="" (gbr.="" 5).="" selanjutnya,="" karakteristik="" transpor="" pre="" konsisten="" dengan="" ac,="" is,="" dan="" ec,="" komponen="" efektif="" yang="" menampilkan="" aktivitas="" anti-oksidatif="" di="" pre="" (gbr.="" 4="" dan="" tabel="" 4).="" hasil="" ini="" diharapkan="" dan="" menunjukkan="" bahwa="" sistem="" bioassay="" saat="" ini="" sesuai="" dan="" andal="" untuk="" evaluasi="" karakteristik="" transpor="" aig="" di="" pre="" dalam="" sel="" caco-2="" yang="">

Berbeda dengan nilai Papp kanonik, yang biasanya digunakan untuk mencerminkan pengangkutan senyawa tunggal, nilai 'Papp yang diperoleh dari TR berdasarkan kurva efek konsentrasi mungkin tidak hanya mencerminkan komponen yang menembus lapisan tunggal dengan struktur utuh tetapi juga juga melibatkan faktor lain yang terkait dengan aktivitas target, seperti metabolit komponen, produk yang terdegradasi secara kimiawi, dan bahkan beberapa sitokin yang disekresikan dari sel Caco-2 sebagai respons terhadap stimulasi yang dapat memengaruhi bioaktivitas target. Dengan demikian, multifaktor yang disebutkan di atas, daripada hanya komponen utuh yang diangkut, menentukan 'nilai Papp. Oleh karena itu, 'Papp mungkin berkorelasi lebih kuat dalam situasi Vivo daripada nilai Papp kanonik [26]. Dalam penelitian ini, kami mengklarifikasi sifat PRE yang tersebar secara pasif dan diserap dengan buruk berdasarkan nilai 'Papp-nya, dan sifat ini mungkin terkait dengan dosis tinggi dan periode pengobatan klinis CD yang lama [27]. Namun demikian, temuan ini akan memberikan panduan yang lebih sistematis bagi dokter dalam penerapan CD ketika hanya karakteristik transportasi sebagian besar AIG dalam CD, tidak hanya PhGs, yang telah diidentifikasi.

Namun, item bioaktivitas yang dipilih harus cukup sensitif untuk dideteksi dalam media ruang penerima, yang menghadirkan tantangan bagi pembentukan sistem bioassay untuk mengevaluasi karakteristik transportasi PE. Selanjutnya, bioaktivitas juga harus bergantung pada sebanyak mungkin komponen. Dalam penelitian kami, uji kapasitas anti-oksidatif total lebih tepat daripada beberapa metode lain (S1 Gambar.). Namun demikian, pengujian kami hanya dapat mendeteksi TR dari PRE pada 120 menit.

Secara kolektif, penelitian ini membentuk sistem bioassay baru untuk mengevaluasi permeabilitas usus dari PRE dalam sel Caco-2 yang berbeda. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa difusi pasif yang diserap dengan buruk menuruni gradien konsentrasi tanpa penghabisan adalah mekanisme transpor utama PRE (Gbr. 5), yang memberikan dasar farmakokinetik untuk aplikasi klinis PhG dalam CD. Penggunaan sistem bioassay baru untuk mengevaluasi TR dan dengan demikian menghitung nilai 'Papp untuk menilai properti transportasi usus AIG dalam PE jelas layak. Pendekatan ini mungkin juga cocok untuk PE lain dengan bioaktivitas yang sesuai

informasi pendukung

S1 Gambar. Pengaruh PRE pada (A) anion superoksida, (B) radikal hidroksil, (C) produk peroksidasi lipid, dan (D) radikal DPPH. Prosedur pengujian dilakukan sesuai dengan laporan sebelumnya [1, 2] tanpa menggunakan buffer transportasi. Nilai IC50 (50 persen konsentrasi penghambatan) dan SC50 (50 persen konsentrasi pembilasan) dihitung berdasarkan kurva respons konsentrasi standar. (DOCX)

Kontribusi Penulis

Menyusun dan merancang eksperimen: YG XC YQ. Melakukan percobaan: YG CZ FL LF RC YS. Menganalisis data: CZ YG YQ. Reagen/bahan/alat analisis yang disumbangkan: RC. Menulis makalah: YG YQ

Departemen Pusat Penelitian Farmakologi dan Toksikologi, Institut Pengembangan Tanaman Obat, Akademi Ilmu Kedokteran Tiongkok & Perguruan Tinggi Kedokteran Serikat Peking, Beijing, PR Tiongkok,

Universitas Kedokteran Tiongkok Heilongjiang, Harbin, Heilongjiang, PR Tiongkok