Metode Deteksi Peredaran Exosomal PD-L1

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Masih ada kekurangan metode yang diterima dan arus utama untuk mendeteksi PD-L1 eksosomal yang bersirkulasi. Metode deteksi eksosom tradisional seperti enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) dan analisis aliran dapat digunakan untuk mendeteksi PD-L1 dalam eksosom yang bersirkulasi, dan ELISA saat ini merupakan metode yang paling umum digunakan. Metode ELISA secara kuantitatif dapat mendeteksi kandungan PD-L1 dalam eksosom yang bersirkulasi dan mudah dioperasikan. Flow cytometry dapat digunakan untuk mendeteksi secara kuantitatif PD-L1 eksosom yang bersirkulasi dalam sampel besar, tetapi memerlukan peralatan deteksi yang tinggi. Dengan penelitian mendalam tentang eksosom, metode deteksi protein eksosom dan asam nukleat juga diperkaya dan dikembangkan, dan beberapa metode baru telah diperkenalkan ke bidang deteksi PD-L1 dalam eksosom yang bersirkulasi (Gambar).

Deteksi dariberedareksosomalPD-L1

1. PCR Digital

Karena sejumlah kecil asam nukleat yang terkandung dalam eksosom, sulit untuk metode deteksi konvensional untuk secara akurat mendeteksi nomor salinan gen mereka. Teknologi PCR digital adalah metode deteksi asam nukleat dengan sensitivitas yang sangat tinggi dan kuantifikasi absolut. Sensitivitasnya dapat mencapai tingkat molekul asam nukleat tunggal, sehingga memiliki keunggulan dalam mendeteksi kandungan asam nukleat eksosom. Para peneliti menggunakan teknologi PCR digital untuk menganalisis secara kuantitatif secara akurat jumlah salinan mRNA PD-L1 dalam eksosom plasma pasien dengan melanoma dan kanker paru-paru non-sel kecil dan mengungkapkan hubungan antara nomor salinan mRNA PD-L1 eksosom plasma dan Korelasi anti-PD1 antara efek pengobatan. Pengenalan teknologi PCR digital telah secara signifikan meningkatkan kemampuan deteksi mRNA PD-L1 eksosom, yang sangat penting bagi penelitian PD-L1 eksosom. Namun, mungkin ada inkonsistensi antara isi mRNA PD-L1 eksosom dan ekspresi protein PD-L1. Oleh karena itu, deteksi mRNA PD-L1 eksosom saja mungkin memiliki cacat tertentu, yang memerlukan penelitian dan klarifikasi lebih lanjut.

Manfaat cistanche gurun anti-kanker dari ekstrak cistanche

2. ELISA

ELISA adalah metode analisis imunologi tradisional, yang sering digunakan untuk mendeteksi protein molekul kecil dalam plasma atau media kultur. Ini memiliki sensitivitas tinggi dan dapat dianalisis secara kuantitatif. ELISA juga dapat digunakan untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom dan dapat mencapai deteksi kuantitatif sejumlah besar sampel. Kit deteksi protein PD-L1 berdasarkan prinsip metode ELISA juga telah diterapkan pada deteksi kuantitatif protein PD-L1 eksosom plasma. Chen dkk. membangun sistem deteksi protein PD-L1 eksosom berdasarkan prinsip ELISA, yang digunakan untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom yang berasal dari media kultur sel atau plasma. Rentang deteksi linier adalah {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA adalah metode yang baik untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom, yang mudah dideteksi secara kuantitatif dan memiliki pengulangan yang baik. Namun, karena adanya protein PD-L1 bebas dalam plasma, akan mengganggu akurasinya. Oleh karena itu, metode ini mendeteksi sirkulasi. Sensitivitas dan spesifisitas protein PD-L1 eksosom masih perlu dieksplorasi lebih lanjut.

Akar cistanche herbal: anti kanker

3. Metode analisis aliran

Flow cytometry sering digunakan untuk mengetik dan menghitung sel atau partikel biologis lainnya yang tersuspensi dalam cairan, sehingga metode ini juga telah diperkenalkan ke dalam deteksi dan penghitungan eksosom. THEODORAKIS dkk. pertama kali menggunakan kromatografi untuk memisahkan eksosom dalam plasma pasien kanker kepala dan leher, kemudian menggunakan analisis aliran untuk mendeteksi dan menghitung eksosom positif PD-L1-. Ekspresi protein PD-L1 dinyatakan sebagai intensitas fluoresensi. Hasilnya menunjukkan bahwa metode ini memiliki reproduktifitas yang baik dalam mendeteksi protein PD-L1 eksosom, dan variasi intra-individunya adalah 7 persen ketika beberapa uji paralel dilakukan pada sampel pasien tunggal. Pada saat yang sama, untuk memverifikasi keakuratan metode, para peneliti menggunakan analisis fluoresensi confocal sebagai metode referensi untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom. Tiga sampel diuji secara paralel, dan hasilnya dibandingkan, dan ditemukan bahwa hasil analisis flow cytometry dan confocal fluorescence sangat konsisten, menunjukkan bahwa flow cytometry adalah metode yang akurat untuk analisis kuantitatif PD-L1 eksosom. Selain itu, LUX et al. juga berhasil mendeteksi ekspresi protein eksosomal PD-L1 dan c-Met dalam serum pasien kanker pankreas dengan flow cytometry, namun kinerja metode deteksi tersebut perlu dipelajari lebih lanjut. Saat ini, penganalisis aliran yang khusus digunakan untuk deteksi eksosom juga telah diluncurkan, seperti penganalisis aliran nano ultra-sensitif Apogee, yang lebih cocok untuk deteksi protein eksosom daripada penganalisis aliran tradisional.

Manfaat suplemen ekstrak cistanche tubulosa: anti tumor dan kanker

4. Teknologi Hamburan Raman yang Disempurnakan di Permukaan

Surface-enhanced Raman scattering (SERS) adalah teknik spektroskopi sidik jari yang sangat sensitif yang telah banyak digunakan dalam bidang biomedis. Saat ini, para ahli telah menggunakan teknologi SERS untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom. Para peneliti pertama-tama menggunakan manik-manik magnetik yang dimodifikasi TiO2-untuk secara non-spesifik menyerap eksosom dalam plasma, dan kemudian menggunakan probe SERS yang terkait dengan antibodi PD-L1 untuk memodifikasi nanopartikel emas, dan kemudian menginkubasi sampel eksosom dengan nanopartikel emas. Ini membentuk struktur kompleks nanopartikel manik-manik-eksosom-emas magnetik, dan akhirnya menggunakan medan magnet untuk memperkaya dan memisahkan kompleks, dan kemudian menempatkan pada spektrometer Raman confocal laser untuk deteksi, sehingga mewujudkan deteksi eksosom positif PD-L1 . Deteksi konten tubuh. Metode ini memiliki sensitivitas deteksi yang tinggi, dan batas deteksi terendahnya dapat mencapai 1 PD-L1 plus plasma eksosom/μL. Selain itu, peneliti menggunakan metode ini untuk mendeteksi sekelompok sampel dengan konsentrasi yang berbeda. Hasil penelitian menunjukkan bahwa intensitas SERS berbanding lurus dengan logaritma konsentrasi sampel eksosom, menunjukkan bahwa metode deteksi memiliki stabilitas yang baik dan dapat langsung digunakan dalam plasma. Deteksi eksosom tanpa langkah isolasi eksosom tambahan. Saat ini belum banyak penelitian tentang penerapan langsung teknologi SERS untuk deteksi protein PD-L1 eksosom, namun penelitian tentang penerapan teknologi SERS untuk deteksi eksosom lain telah dilakukan, yang juga memiliki referensi penting. untuk mendeteksi nilai protein PD-L1 eksosom.

Situasi pertumbuhan cistanche yang hidup di gurun

5. Metode HOLMES-ExoPD-L1

Metode HOLMES-ExoPD-L1 adalah metode deteksi baru dari protein PD-L1 eksosom. Dalam metode ini, aptamer MJ5C baru yang menargetkan protein PD-L1 dirancang, yang dapat secara efisien mengikat protein PD-L1 pada membran eksosom dan tidak terganggu oleh glikosilasi protein PD-L1. Dalam metode ini, aptamer dan eksosom MJ5C berlabel fluoresensi pertama kali diinkubasi bersama dalam kapiler tipis untuk mengikat satu sama lain, dan laser inframerah difokuskan ke kapiler tipis untuk membentuk gradien suhu skala mikron. Tingkat termoforesis dari aptamer MJ5C bebas dan kompleks aptamer MJ5C eksosom berbeda secara signifikan, dan penipisan termoforesis aptamer bebas lebih cepat daripada kompleks eksosom-aptamer. dipisahkan. Oleh karena itu, di bawah aksi cahaya eksitasi, kandungan protein PD-L1 eksosomal dapat ditentukan dengan mendeteksi intensitas fluoresensi aptamers berlabel fluoresensi. Metode ini memiliki sensitivitas tinggi dan batas deteksi 17,6 pg/mL. Selain itu, ia juga memiliki kelebihan volume sampel yang lebih sedikit dan waktu deteksi yang singkat. Ini adalah metode yang sangat orisinal untuk mendeteksi protein PD-L1 eksosom, yang sangat penting untuk pengembangan metode deteksi protein PD-L1 eksosomal yang baru memiliki nilai yang mencerahkan.

Anti-tumor: suplemen cistanche

Exosomal PD-L1 memiliki prospek aplikasi yang luas di bidang imunoterapi tumor ganas dan telah menjadi salah satu hotspot di bidang penelitian eksosom. Dibandingkan dengan deteksi ekspresi PD-L1 jaringan, deteksi PD-L1 eksosomal yang bersirkulasi lebih mudah untuk mendapatkan spesimen dan melakukan deteksi waktu nyata, sambil menghindari masalah heterogenitas jaringan yang disebabkan oleh pengambilan sampel patologis; PD-L1 eksosom juga menyebabkan kekebalan tumor. Ini adalah penyebab penting untuk melarikan diri dan terkait dengan perkembangan tumor ganas, dan dapat menjadi indikator penting untuk penilaian penyakit dan prediksi prognosis. Selain itu, kadar PD-L1 eksosomal plasma juga diharapkan dapat digunakan untuk menyaring pasien yang cocok untuk imunoterapi anti-PD-L1 dan memprediksi respons mereka terhadap pengobatan. Namun, masih ada kekurangan metode yang diakui dan efektif untuk mendeteksi eksosom PD-L1 yang bersirkulasi. Hal ini diperlukan untuk membangun eksosom sirkulasi yang ideal dengan pemisahan sederhana atau tanpa pemisahan, permintaan sampel lebih sedikit, sensitivitas tinggi, pengulangan yang baik, dan sinyal deteksi yang kurang rentan. Sebuah metode untuk mendeteksi PD-L1 in vivo. Metode deteksi PD-L1 eksosomal yang bersirkulasi masih memerlukan penelitian lebih mendalam, tetapi diyakini bahwa dengan pengembangan dan penerapan metode deteksi baru di masa mendatang, PD-L1 eksosomal yang bersirkulasi akan dapat memandu imunoterapi anti-PD1 dengan lebih baik. dan digunakan dalam diagnosis dan pengobatan tumor ganas. memainkan peran yang lebih penting.