Identifikasi Target Dan Analisis Mekanisme Aktivasi Makrofag Sakarida Berat Molekul Rendah Dari Cistanche Deserticola Berdasarkan Kromatografi Afinitas Molekuler

[Abstrak]Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki target dan mekanisme yang terlibat target untuk aktivasi makrofag sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola ( LMSC) . Aktivitas fagositik dan pelepasan NO dari RAW264. 7 sel terdeteksi, dan hasilnya menunjukkan bahwa LMSC memberikan efek aktivasi kekebalan dengan meningkatkan aktivitas fagositik dan pelepasan NO secara signifikan. Manik-manik sepharose terkonjugasi epoksi terkonjugasi LMSC disiapkan sebagai reagen afinitas untuk menangkap protein target. Dua puluh empat protein seperti Eef2 diidentifikasi dengan analisis LC-MS/MS. Analisis pengayaan jalur menunjukkan RAW264 yang diaktifkan LMSC. 7 sel dengan mengatur fagositosis yang bergantung pada reseptor Fcgamma, jalur pensinyalan TNF-alpha NF-κB, glikolisis/glukoneogenesis dan siklus asam sitrat dan jalur transpor elektron pernapasan．

［Kata Kunci］Cistanche deserticola; sakarida dengan berat molekul rendah; aktivasi makrofag; kromatografi afinitas molekul; identifikasi sasaran; analisis mekanisme

Ginseng gurun

Cistanches Herba adalah obat tradisional Tiongkok yang terkenal untuk mengencangkan ginjal dan Yang, bermanfaat bagi saripati dan darah, serta menyehatkan usus dan buang air besar. Ini dikenal sebagai "ginseng gurun". Penelitian kimia analitik modern menunjukkan bahwa Cistanche deserticola mengandung berbagai komponen karbohidrat, termasuk senyawa monosakarida terutama meliputi fruktosa, senyawa oligosakarida seperti sukrosa, dan polisakarida seperti ACDP-2, yang merupakan zat efektif untuk Cistanche deserticola untuk berperan dalam regulasi kekebalan, buang air besar, dll. [2-5]. Polisakarida deserticola cistanche telah banyak dilaporkan sebagai kelas bahan aktif dengan efek imunomodulator, sementara gula dengan berat molekul rendah (LMSC) seperti oligosakarida dan monosakarida jarang dipelajari. Sebuah studi oleh kelompok penelitian kami tentang aktivasi makrofag dari komponen aktif utama di Cistanche deserticola menemukan bahwa gula molekul rendah adalah jenis komponen aktif dengan aktivasi makrofag, tetapi target aktivasi kekebalannya dan mekanisme kerjanya masih belum jelas.

Efek Dari Cistanche-Meningkatkan kekebalan tubuh

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Kromatografi afinitas molekuler adalah metode kromatografi yang mencapai pemisahan dan pemurnian molekul target dengan mengikatnya secara khusus ke fase diam [6]. Metode ini memiliki afinitas dan spesifisitas yang tinggi dan sangat cocok untuk sistem organik kompleks dengan konsentrasi produk target yang sangat rendah [7]. Dalam beberapa tahun terakhir, secara bertahap berkembang menjadi alat yang ampuh untuk mengidentifikasi target obat alami. Dalam penelitian ini, teknologi penangkap protein target molekul kecil berdasarkan kromatografi afinitas molekul digunakan untuk mengidentifikasi protein target LMSC dengan aktivasi makrofag. Melalui analisis bioinformatika, informasi jalur pengaturan sinyal dari kelompok sasaran diperoleh untuk mengeksplorasi aktivitas pengaturan kekebalan dan mekanisme terkait LMSC.

1 Bahan

1.1 Sel

Mouse macrophage line RAW264 7 Dibeli dari Cell Center of Chinese Academy of Medical Sciences.

1.2 Obat dan reagen

Fetal bovine serum (FBS) dibeli dari PAN Biotech di Jerman; Antibiotik, media gula tinggi DMEM, dan 6 × Penyangga pengambilan sampel protein dibeli dari Zhongke Maichen Technology Co., Ltd. Gula dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola dibuat sendiri oleh kelompok penelitian kami dan ditentukan oleh HPLC untuk terutama mengandung manitol ( 16 53 persen ), sukrosa (8 34 persen ), Fruktosa (25 38 persen ), glukosa (7 75 persen ) dan komponen monomer lainnya. Lipopolisakarida dari Escherichia coli O55: B5, LPS, 3 - (4,5-dimethyl thiazole-2) - 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) dan {{ 14}} persen larutan merah netral dibeli dari Sigma Aldrich di Amerika Serikat. Kit reagen oksida nitrat (NO) dibeli dari Institut Penelitian Bioteknologi Nanjing Jiancheng. Gel Sepharose yang diaktifkan-epoksi (6B) dibeli dari perawatan kesehatan GE di Swedia. Kit pewarnaan perak cepat dibeli dari Biyuntian Biotechnology Research Institute. Baik asam format dan asetonitril untuk spektrometri massa dibeli dari Thermo Fisher Scientific di Amerika Serikat. Semua reagen lainnya murni analitik domestik.

bubuk cistanche

1.3 Instrumen

inkubator sel CO2 (SANYO, Jepang); Mikroskop CIX100 (Olympus Corporation, Jepang); Mesin sentrifugal 5424R (Eppendorf, Jerman); Pemurni air otomatis (Millipore, USA); Sunrise Basic ELISA (TECAN, Swiss); Osilator suhu konstan desktop THZ-C (Suzhou Peiying Experimental Equipment Co., Ltd.); EAS Y-nLC - Kromatografi cair II (Thermo Fisher Scientific, USA); Spektrometri massa tandem perangkap ion LTQ-Orbitrap (Thermo Fisher Scientific, USA); Kolom kromatografi cair kapiler (Michrom Bioresources, USA).

2 Metode

2.1 Kultur dan Administrasi Sel

RAW264. 7 sel dikultur dalam DMEM media glukosa tinggi yang mengandung 10 persen serum janin sapi dan 1 persen antibodi ganda, dan ditempatkan dalam inkubator suhu konstan kelembaban jenuh 37 derajat yang mengandung 5 persen CO2. Lewati sekali setiap 2-3 hari dan lakukan percobaan saat sel memasuki fase pertumbuhan logaritmik. Membagi sel menjadi kelompok kosong, kelompok lipopolisakarida, atau kelompok gula berat molekul rendah dari Cistanche deserticola. Sel kelompok LPS diperlakukan dengan larutan LPS 1 mg · L-1 sebagai kontrol positif; Sel kelompok LMSC ditambahkan dengan larutan LMSC dengan konsentrasi massa yang berbeda (0 25,0.5,1,2 g·L － 1; Saring dengan membran penyaring sebelum pemberian); Tambahkan media biakan bebas serum dengan volume yang sama ke sel kelompok kosong.

2.2 Penentuan aktivitas fagositik makrofag menggunakan metode neutral red

RAW264. 7 sel diunggulkan pada pelat sumur 96-dan dikultur semalaman sebelum diganti dengan media bebas serum atau media bebas serum yang mengandung LPS atau konsentrasi LMSC yang berbeda. Setelah 48 jam kultivasi, sel diganti dengan 0 075 persen larutan merah netral dan dilanjutkan diinkubasi pada suhu 37 derajat selama 4 jam. Serap dan buang supernatan, cuci dua kali dengan PBS, dan gunakan larutan lisis sel (asam asetat glasial etanol 1:1) untuk melisiskan sel pada suhu 4 derajat . Setelah lisis sempurna, ukur absorbansi masing-masing sumur (A540 nm).

2.3 Deteksi pelepasan NO dalam supernatan sel

RAW264. 7 sel diunggulkan pada pelat sumur 48-dan dikultur semalaman sebelum diganti dengan media bebas serum atau media bebas serum yang mengandung LPS atau konsentrasi LMSC yang berbeda. Setelah 24 jam biakan induksi, kumpulkan supernatan dan ukur kandungan NO dalam supernatan tiap sel baik sesuai petunjuk kit reagen.

2.4 Uji MTT untuk viabilitas makrofag

RAW264. 7 sel diinokulasi pada pelat sumur 96-, dan setelah penanaman semalaman, mereka diganti dengan media bebas serum atau media bebas serum yang mengandung LPS atau konsentrasi LMSC yang berbeda dan terus dikultur selama 24 jam. Ganti setiap sel yang baik dengan 0 Inkubasi 5 g · L-1 larutan MTT pada suhu 37 derajat C selama 4 jam, kemudian larutkan produk reaksi MTT dengan dimetil sulfoksida, dan ukur absorbansi setiap sumur pada panjang gelombang 570 nm menggunakan uji imunosorben terkait-enzim.

Persiapan 2,5 Cistanche deserticola medium afinitas gula molekul rendah

Metode referensi [8], timbang resin agarosa yang diaktifkan dengan epoksi 0 5 g, larutkan dalam air deionisasi selama 40 menit, sentrifus dan buang supernatannya, dan ulangi proses tersebut tiga kali untuk membuat gel sepenuhnya bengkak (volumenya sekitar 1 mL), untuk standby. Ambil 0 Campurkan 5 mL gel agarosa yang telah diaktivasi epoksi dengan 1 mL larutan LMSC (1 g · mL − 1) atau volume pelarut yang setara, dan inkubasi dalam pengocok suhu konstan pada suhu 37 derajat semalaman. Cuci blanko atau media agarosa yang digabungkan LMSC beberapa kali dengan air deionisasi sampai supernatan tidak berwarna, lalu tambahkan 1 mL larutan etanolamin (1 mol · L-1) dan tutup di atas meja pengocokan suhu konstan pada 37 derajat selama 2 hari. Setelah reaksi selesai, bersihkan masing-masing 5 kali dengan air suling ganda, buffer NaCl Hac, dan buffer NaCl Tris HCl, dan terakhir gunakan 0 Wash dua kali dengan eluen NP40 01 persen untuk cadangan.

2.6 Pengayaan dan Identifikasi kelompok sasaran

Ke RAW264 Total ekstrak protein dari 7 sel (0 Tambahkan 50 ke 5 g · L-1 masing-masing μ L media kosong atau media afinitas LMSC, sebagai grup kontrol kosong dan grup pengikat LMSC ; Buat grup kompetitif yang secara bersamaan menambahkan larutan LMSC dan media afinitas LMSC. Setelah mencampur setiap grup, inkubasi pada suhu 4 derajat semalam untuk mengikat LMSC sepenuhnya ke protein target. Setelah reaksi, gunakan 0 Cuci media afinitas 6 kali dengan 01 persen eluen NP40 untuk menghilangkan sisa protein bebas dari media afinitas.Tambahkan media afinitas yang telah dicuci ke volume yang sama dari 2 × Buffer pemuatan sampel, didenaturasi pada 98 derajat selama 8 menit untuk memisahkan protein pengikat. Sedot supernatan, lakukan gel SDS-PAGE elektroforesis, lalu lakukan analisis pewarnaan perak sesuai petunjuk kit.

2.7 Metode LC-MS/MS untuk mengidentifikasi kelompok protein target

Metode referensi [8] digunakan untuk mengidentifikasi protein pengikat spesifik menggunakan dua dimensi nano HPLC-LTQ-Orbitrap/MS tandem spektrometri massa perangkap ion linier (nano HPLC-LTQ-Orbitrap/MS). Metode spesifiknya adalah sebagai berikut: Pertama, trypsin digunakan untuk menghidrolisis pita protein yang diekspresikan secara berbeda di dalam gel untuk mendapatkan campuran segmen peptida target. Campuran peptida dikenai 0 dua puluh dua μ Setelah filtrasi dengan membran mikropori, ekstrak 10 persen μ Tambahkan larutan sampel L ke kolom kromatografi cair kapiler. Kondisi kromatografi: fase gerak 0 1 persen asam format larutan berair (A) - asetonitril (B), kondisi elusi gradien ditunjukkan pada Tabel 1. Kondisi spektrum massa: tegangan semprotan listrik adalah 1 8 kV, ion positif pengumpulan data mode, rentang pemindaian penuh disetel ke m/z 350-2 000; Lakukan pemindaian MS/MS pada 15 puncak terkuat, dengan energi tabrakan sekunder ditetapkan pada 35 V. Terakhir, gunakan perangkat lunak pencarian SEQUEST untuk mencari dan mencocokkan data segmen peptida yang diperoleh.

Tabel 1 Profil gradien analisis nano-HPLC

Catatan: Laju aliran semuanya 300 nL · mnt-1.

2.8 Jalur kelompok sasaran tindakan dan analisis fungsional

Impor protein target yang teridentifikasi ke dalam Cytoscape 3 Pada perangkat lunak 5.1, plugin ClueGO digunakan untuk analisis KEGG, REACTOME Pathways, dan Wiki Pathways, dan spesies ditetapkan sebagai tikus dengan P<0 05 as the significance threshold, and the rest use default parameters.

2.9 Analisis statistik

Semua data eksperimen dinyatakan dalam bidang x ± s. Menggunakan GraphPad Prism-6 02 Perangkat lunak statistik digunakan untuk analisis varian satu arah (ANOVA), dengan P<0 01 having a very significant difference.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1 Gula molekul rendah dari Cistanche deserticola memengaruhi RAW264 Efek 7-aktivitas fagositik sel

Dalam studi lain oleh kelompok penelitian kami pada komponen aktif aktivasi makrofag di Cistanche deserticola, LMSC mungkin merupakan jenis komponen dengan aktivasi makrofag..

Studi Eksperimental pada Cistanche deserticola

Eksperimen ini pertama kali menggunakan metode merah netral untuk menentukan RAW264 Sistem kultur in vitro dari 7 makrofag peritoneum tikus distimulasi dengan konsentrasi LMSC yang berbeda untuk menyelidiki efek LMSC pada RAW264 Efek aktivitas fagositik 7 sel. Dibandingkan dengan kelompok kontrol kosong, obat kontrol positif LPS menstimulasi sel selama 48 jam secara signifikan meningkatkan aktivitas fagositik seluler (P<0 01); LMSC at 0 Each administration group of 25-2 g · L-1 significantly increased RAW264 The phagocytic activity of 7 cells (P<0 01), and exhibit dose-dependent characteristics. The above results suggest that LMSC may have activated RAW264 The role of 7 cells is shown in Figure 1.

Dibandingkan dengan kelompok kontrol kosong, 1) P<0 01 (same as Figure 2).

Gambar. 1 Efek dari sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola pada aktivitas fagositik RAW264. 7 sel

3.2 Gula molekul rendah dari Cistanche deserticola memengaruhi RAW264 Efek pelepasan NO dalam 7 sel

NO adalah sitokin penting dengan efek regulasi imun dalam tubuh [9], dilaporkan secara luas terlibat dalam regulasi respons aktivasi sel264 7-RAW. Untuk menyelidiki lebih lanjut dampak LMSC pada RAW264 Efek aktivasi 7 sel ditentukan, dan kandungan NO dalam supernatan sel setelah stimulasi LMSC diukur. Pelepasan NO pada kelompok LPS dengan obat positif aktivasi makrofag secara signifikan lebih tinggi dibandingkan pada kelompok kontrol blanko (P<0. 05) 01), similar to it, 0 RAW264 in the LMSC administration group with 3 doses of 5, 1, 2 g · L-1 The NO release of 7 cells was significantly higher than that of the blank control group (P<0. 05) 01), and it is dose-dependent, as shown in Figure 2. The above results indicate that LMSC can promote RAW264 The effect of 7 cells releasing NO confirms its macrophage activation effect.

Gambar. 2 Efek sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola pada pelepasan NO dari RAW264. 7 sel

3.3 Gula molekul rendah dari Cistanche deserticola memengaruhi RAW264 Dampak 7-kelangsungan hidup sel

Sitotoksisitas merupakan faktor penting yang membatasi pengembangan obat baru dan mempengaruhi kemanjurannya. Untuk menyelidiki apakah dosis LMSC yang digunakan dalam percobaan ini memiliki potensi sitotoksisitas, metode MTT digunakan untuk mendeteksi RAW264 setelah pemberian LMSC viabilitas 7 Sel. LMSC pada 0 25-2 g · L-1 intervensi RAW264 Setelah 24 jam dari 7 sel, tidak ada pengaruh yang signifikan terhadap viabilitas sel, dan hasil di atas menunjukkan bahwa 0 25-2 g · L{{8 }} LMSC vs. RAW264 7 tidak memiliki sitotoksisitas, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3.

Gambar. 3 Efek sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola pada RAW264. 7 kelangsungan hidup sel

3. 4 Pengayaan dan Identifikasi Kelompok Sasaran Aktivasi Makrofag Gula Berat Molekul Rendah di Cistanche deserticola

Gel agarosa yang diaktifkan epoksida adalah pembawa fase padat yang banyak digunakan untuk menggabungkan sakarida, protein, dan molekul lain yang mengandung gugus hidroksil atau amino. LMSC terutama terdiri dari fruktosa kaya hidroksil, manitol, dan komponen lainnya. Dalam penelitian ini, hidroksil yang terkandung dapat bereaksi dengan gugus aktif epoksi untuk mengikat gula molekul rendah Cistanche deserticola ke permukaan mikrosfer gel agarosa yang diaktifkan epoksi untuk membangun media afinitas LMSC, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4A. Menggunakan teknologi kromatografi afinitas molekul, media afinitas LMSC dicampur dengan RAW264 Inkubasi ekstrak protein total 7 sel untuk menangkap kelompok protein target secara langsung. Pewarnaan perak dilakukan pada kelompok sasaran, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4B. Pita protein dari kelompok pengikat media afinitas LMSC secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok media kosong LMSC yang tidak digabungkan, sedangkan kelompok kompetitif LMSC secara signifikan mengurangi jumlah target yang ditangkap media afinitas karena ikatan kompetitif LMSC bebas yang berlebihan dengan protein target. Selanjutnya, metode HPLC MS/MS digunakan untuk mengidentifikasi setiap pita protein, dan total 24 protein target seperti Eef2 diperoleh, menunjukkan bahwa gula molekul rendah dari Cistanche deserticola dapat menyebabkan aktivasi makrofag melalui aksi gabungan dari protein target ini.

3. 5 Analisis mekanisme aksi terkait aktivasi kelompok target makrofag gula molekul rendah di Cistanche deserticola

Untuk menyelidiki protein target gula molekul rendah dari Cistanche deserticola yang menyebabkan RAW264 Mekanisme aktivasi makrofag dianalisis dalam penelitian ini menggunakan database jalur pensinyalan KEGG, REACTOME, dan Wiki untuk menyelidiki jalur biologis yang terlibat dalam kelompok protein target LMSC. Hasil analisis pengayaan jalur sinyal ditunjukkan pada Gambar 5 dan Tabel 2. Protein target aktivasi makrofag LMSC terutama berpartisipasi dalam 10 jalur sinyal terkait aktivasi makrofag, yang dapat diringkas menjadi 4 kategori berikut: Fagositosis yang bergantung pada reseptor Fc, TNF-NF - Jalur pensinyalan κ B, glikolisis/glukoneogenesis, siklus asam sitrat (TCA), dan transpor elektron pernapasan.

4. Diskusi

Penelitian modern melaporkan bahwa pengobatan tradisional Tiongkok dan obat alami memiliki aktivitas biologis yang luas, namun karena komposisi kimianya yang kompleks, masih ada tantangan dalam menjelaskan mekanisme kerja sistem komponen kompleks pengobatan tradisional Tiongkok dan obat alami. Berdasarkan teknologi penangkapan protein target molekul kecil dari kromatografi afinitas molekul, penelitian ini dikombinasikan dengan kesamaan komposisi kimia bahwa komponen utama dari gula molekuler Cistanche deserticola (LMSC) semuanya memiliki gugus hidroksil, dan membangun mikrosfer gel agarosa teraktivasi epoksi terikat LMSC. sebagai media afinitas, untuk mengidentifikasi kelompok protein target LMSC dengan aktivasi makrofag dan menganalisis jalur transduksi sinyal yang terkait dengan kelompok target. Selanjutnya, mekanisme aktivasi makrofag LMSC terungkap.

Efek Dari Cistanche-Meningkatkan kekebalan tubuh

Makrofag adalah jenis sel respons imun penting dalam tubuh yang dapat memfagositosis antigen granular. Aktivasi makrofag yang disebabkan oleh rangsangan eksogen terutama dimanifestasikan oleh peningkatan fungsi fagosit dan pelepasan NO dan faktor lain yang disebabkan oleh serangkaian jalur pensinyalan. Peningkatan tergantung dosis LMSC RAW264 Aktivitas fagositik dari 7 sel dan peningkatan yang signifikan dalam pelepasan NO menunjukkan bahwa LMSC memiliki efek aktivasi makrofag. Analisis pengayaan jalur sinyal target aktivasi makrofag LMSC yang ditangkap oleh kromatografi afinitas molekuler menggunakan sarana bioinformatika menunjukkan bahwa LMSC mengatur Fc melalui fagositosis yang bergantung pada reseptor, TNF-NF- κ Jalur pensinyalan B, glikolisis/glukoneogenesis, siklus asam sitrat (TCA), dan transpor elektron pernapasan memainkan peran aktivasi makrofag.

A. Karakterisasi mikroskopis medium afinitas (bar=25 μm); B. Elektroforesis gel pewarnaan perak dari target yang diperkaya.

Gambar 4 Identifikasi target untuk sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola

Gambar 5 Analisis pengayaan jalur untuk target sakarida dengan berat molekul rendah dari Cistanche deserticola

Reseptor Fc adalah reseptor permukaan sel dan salah satu reseptor pengenalan pola makrofag [11]. Mereka terletak di permukaan sel dan secara khusus dapat mengenali partikel eksogen, menyebabkan mereka berikatan dengan permukaan sel. Transduksi sinyal fagositosis yang dimediasi reseptor Fc dapat menyebabkan polimerisasi aktin hilir dan pembentukan fagosit [11]. LMSC secara signifikan meningkatkan aktivitas fagositik sel RAW264 7, yang mungkin terkait dengan pengikatan berbagai Fc seperti protein terkait pensinyalan reseptor Hsp90 mengatur fagositosis yang bergantung pada reseptor Fc. NF-κ Jalur pensinyalan B dianggap sebagai jalur pensinyalan kunci untuk aktivasi makrofag [12]. NF- κ B merupakan faktor pengatur transkripsi penting dalam nukleus, NF- κ Aktivasi jalur pensinyalan B dapat menyebabkan NF dalam sitoplasma- κ B teraktivasi dan ditranslokasikan ke nukleus, sehingga memediasi ekspresi gen dari berbagai sitokin, dan NO mediator. Stimulasi LMSC dapat menyebabkan sel RAW264 7 melepaskan NO dalam jumlah besar, yang mungkin terkait dengan TNF dengan mengikat berbagai faktor seperti jalur pensinyalan Eef2- NF- κ B dan protein terkait lainnya mengaktifkan NF - κ Jalur pensinyalan B dan proses inisiasi dan ekstensi eukariotik terkait diimplementasikan. Selain itu, target terkait LMSC juga melibatkan dua jalur metabolisme karbohidrat: glikolisis/glukoneogenesis, siklus asam sitrat (TCA), dan transpor elektron pernapasan. Diperkirakan bahwa LMSC mengandung berbagai gula bermolekul rendah seperti fruktosa dan manitol, yang dapat memengaruhi sel RAW264 7 memberikan energi, dan mengikat protein seperti Aldoa yang terkait dengan metabolisme glukosa, sehingga mengatur jalur yang terkait dengan metabolisme glukosa.

Singkatnya, penelitian ini mengidentifikasi 24 protein target fungsional yang berbeda untuk aktivasi makrofag LMSC menggunakan teknologi pengenalan protein target terkait kromatografi afinitas molekuler; Analisis pengayaan jalur pensinyalan terkait protein target menunjukkan bahwa LMSC bekerja pada fagositosis yang bergantung pada reseptor Fc, TNF-NF- κ Jalur pensinyalan B dan proses metabolisme glukosa pada akhirnya menggunakan RAW264 7. Aktivasi makrofag. Studi ini memberikan dukungan teoretis untuk mengungkap komponen aktif dan mekanisme terkait pengaturan kekebalan pada Cistanche deserticola dan juga memberikan gagasan untuk pengenalan target dan penelitian mekanisme komponen aktif kompleks dalam obat alami.

Tabel 2 Analisis pengayaan jalur untuk target LMSC

[Referensi]

［1］ Farmakope Cina Bagian 1 [S]. 2010:126

［2］ Xu Wenhao, Qiu Shengxiang, Zhao Jihong, dkk Studi tentang Konstituen Kimia Cistanche deserticola ［ J ］. Pengobatan Herbal Cina, 1994, 25 (10): 509

［3］ Wu XM,Gao XM,Tsim KW,dkk. Sebuah arabinogalactan diisolasi dari batang Cistanche deserticola menginduksi proliferasi limfosit berbudaya［J］． Int J Biol Macromol,2005,37 ( 5) : 278．

［4］ Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, dkk Aktivasi makrofag polisakarida dari Cistanche deserticola ［ J ］. Buletin Farmakologi Cina, 2009, 25 (6): 787

［5］ Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, dkk Studi tentang Zat Farmakodinamik Cistanche deserticola dalam Menutrisi Usus dan Menghilangkan Kotoran ［ J ］. Pengobatan Tiongkok Modern, 2015, 17 (4): 307

［6］ Liu Wangcai, Zhu Jiawen Kemajuan penelitian dalam teknologi kromatografi afinitas [J]. Industri Kimia Shanghai, 2007, 32 (4): 27

［7］ Kromatografi Afinitas Hong Minghan. Dunia Kimia, 1981, 9:281

［8］ Liao LX,Song XM,Wang LC,dkk. Penghambatan IMPDH2 yang sangat selektif memberikan dasar terapi antineuroinflamasi［J］． Proc Natl Acad Sci USA,2017,114 ( 29) : E5986．

［9］ Wang Jing, Zhang Chundan, Yang Limin, dkk Efek aktivasi polisakarida ekstraseluler dari Pleurotus ferulae pada makrofag tikus [J]. Teknologi Industri Pangan, 2016, 37 (10): 356

［10］ Zhang Pengyu, Ruan Yingxin, Wang Yinan, dkk Activin A mempromosikan aktivitas fagositik makrofag peritoneal tikus ［ J ］. Jurnal Akademi Ilmu Kedokteran Militer, 2009, 33 (4): 330

［11］ Xie Zhijian, Xiong Xiaodong, Zuo Yun Fc Mekanisme transduksi sinyal dari fagositosis makrofag yang dimediasi R ［ J ］. Imunologi Obat Asing, 2002, 25 (1): 5

［12］ Yuan Xiaolin, Zhang Chunlei, Li Dianjun Kemajuan penelitian tentang aktivasi makrofag dan mekanisme pensinyalannya ［ J ］. Jurnal Internasional Imunologi, 2007, 30 (5): 333