Studi Fungsi Neuroendokrin-Imun Cistanche Deserticola Dan Produk Pengukusan Anggur Berasnya pada Model Tikus yang Diinduksi Glukokortikoid-Ⅱ

3.2.4. Imunohistokimia

Apoptosis neuron dikendalikan oleh banyak gen apoptosis dan antiapoptosis, terutama gen Bax yang mendorong apoptosis dan gen antiapoptosis dari keluarga gen Bcl-2. Bcl-2 terlokalisasi di organel penghasil oksigen reaktif seperti mitokondria, retikulum endoplasma, dan membran inti. Bcl-2 berdampak kecil terhadap radikal bebas oksigen tetapi bisamencegah kerusakan oksidatif pada sel. Bax mengangkut dari sitoplasma ke membran mitokondria, mengubah struktur membran mitokondria, dan mendorong pelepasan sitokrom c dan induksi apoptosis.

CISTANCHE TUBULOSA ALAMI UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Terdapat ekspresi protein Bax dan Bcl-2 di sitoplasma adrenal. Pewarnaan menunjukkan semua partikel berwarna kuning. Dibandingkan dengan kelompok BC, kepadatan optik rata-rata protein Bax pada kelompok MC meningkat secara signifikan (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Gambar 5(b) menunjukkan bahwa dibandingkan dengan kelompok BC, rata-rata kepadatan optik protein Bcl-2 pada kelompok MC menurun secara signifikan (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Protein caspase-3 terlokalisasi terutama di sitoplasma dalam bentuk aslinya di jaringan normal dan memiliki ekspresi rendah. Sinyal positif berwarna kuning pucat atau kuning kecoklatan. Dibandingkan dengan kelompok BC, ekspresi caspase-3 pada kelompok MC meningkat secara signifikan (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Pada jaringan normal, ekspresi gen Fas berkurang, dan sinyal positif untuk hibridisasi in situ berwarna kuning kecoklatan. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5 (d), dibandingkan dengan kelompok BC, kepadatan optik rata-rata protein Fas pada kelompok MC meningkat (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Protein FasL terletak terutama di membran sel atau sitoplasma, dan sinyal positifnya berwarna coklat. Dibandingkan dengan kelompok BC, kepadatan optik rata-rata gen FasL pada kelompok MC meningkat secara signifikan (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Hasilnya menunjukkan bahwa CD dan WCD bisamenginduksi apoptosis pada sel inflamasidan mengurangi kerusakan adrenal dengan meningkatkan ekspresi protein FasL dan mengikat protein Fas, mengaktifkan protein caspase-3 dan memicu kaskade caspase. Efek dari grup WCD-HD adalah yang terbaik.

3.3. Penentuan Fungsi Kekebalan Tubuh

3.3.1. Indeks Organ Kekebalan Tubuh

Dibandingkan dengan kelompok BC, koefisien timus dan indeks limpa pada kelompok MC menurun secara signifikan (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

CISTANCHE TUBULOSA ALAMI UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Deteksi Subset Limfosit T Dalam Darah Perifer

Persentase sel CD4+ di kuadran kiri atas dan sel CD8+ di kuadran kanan bawah pada kelompok BC dan masing-masing obat lebih tinggi dibandingkan pada kelompok MC. Dibandingkan dengan kelompok BC, rasio CD4+ThCD8+ menurun secara signifikan pada kelompok MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Penentuan Kadar IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α, Dan IFN-C Dalam Serum

Gambar 8 menunjukkan bahwa dibandingkan dengan kelompok BC, kadar IL-6, TNF- , dan IFN-c meningkat secara signifikan (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Hasil Percobaan Pengamatan Mikroskop Jaringan Lymus

Gambar 9 menunjukkan bahwa pada kelompok BC, terdapat sejumlah besar limfosit. Limfosit dan retikulosit tersusun longgar di tengah dengan timosit bulat atau oval tersebar. Tidak ada nekrosis, tidak ada infiltrasi sel inflamasi, dan tidak ada perubahan abnormal.

Kelompok MC menunjukkan sejumlah besar jaringan nekrosis limfoid, dengan susunan limfosit dan retikulosit yang tidak teratur di tengahnya. Timosit bulat atau oval menghilang, degenerasi sel masif atau nekrosis terlihat jelas, dan terdapat infiltrasi sel inflamasi dengan perubahan patologis yang abnormal.

Pada kelompok CD, ciri morfologi limfosit telah kembali normal, dan susunan limfosit sentral serta retikulosit hampir normal. Timosit berbentuk bulat atau oval telah pulih, namun sejumlah kecil limfosit degeneratif atau nekrotik dan sel inflamasi yang menginfiltrasi tetap ada.

Pada kelompok WCD dan kelompok PC, karakteristik morfologi limfosit diperbaiki lebih baik. Limfosit dan retikulosit di bagian tengah sejajar dengan baik, timosit bulat atau oval hampir normal, namun masih terdapat sejumlah kecil limfosit infiltrasi dan degeneratif.

3.4. Ekspresi Gen Protein CaM

Nilai RQ (CaM mRNA -actin mRNA) dianggap untuk menguji ekspresi CaM mRNA. RQ kelompok BC adalah 1. Ekspresi CaM mRNA di hipotalamus pada kelompok MC meningkat secara signifikan (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskusi

Farmakope Tiongkok [2] mencatat bahwa CD dan WCD dapat digunakan di klinik sebagai jenis utama ramuan. Setelah dikukus dengan arak beras,antipenuaan dan mengencangkan efek ginjal-yangditingkatkan. Melalui UPLC-QqQ-MS, kami mendeteksi perubahan kuantitatif bahan kimia dasar selama proses pengukusan arak beras. Glikosida iridoid tidak stabil dan kandungan glikosida tersebut menurun bahkan menjadi tidak terdeteksi. Kandungan glikosida feniletanol juga mengalami perubahan sehingga dapat menyebabkan perubahan farmakodinamik dan efek klinis.

CISTANCHE TUBULOSA ALAMI UNTUK MENINGKATKAN FUNGSI SEKSUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Model klasik defisiensi ginjal-yang direplikasi dengan injeksi kortikosteron subkutan [19]. Kortikosteron yang overdosis dapat menghambat sekresi CRH di hipotalamus. Sementara itu, rahasia ACTH juga terhambat. Tingkat hormon korteks adrenal menurun, sehingga fungsi sumbu HPA menurun. Hipofungsi sumbu HPA adalah karakteristik umum dari defisiensi ginjal-yang [20]. Kemudian tikus tersebut menunjukkan fenomena “deplesi” dan gejalanya sesuai dengan gejala defisiensi ginjal-yang di klinik.

Pada kelompok MC, kadar CRH, ACTH, T, dan CORT dalam serum tikus menurun secara signifikan (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Memodulasi proporsi anggota keluarga Bcl-2 adalah salah satu mekanisme inti dimana FasThFasL memediasi jalur reseptor kematian, dan keluarga Bcl-2 mengatur jalur mitokondria [21]. Faktor penghambat apoptosis Bcl-2 dan faktor pemicu apoptosis, seperti Bax, semuanya termasuk dalam keluarga Bcl-2 [22]. Apoptosis sel dapat ditentukan oleh rasio relatif faktor penghambat apoptosis dan faktor pemicu apoptosis [23]. Mitokondria memiliki fungsi sebagai pos pemeriksaan sentral untuk berbagai bentuk apoptosis [24]. Penelitian ini menunjukkan bahwa CD-MD dan WCD dapat menyimpulkan ekspresi Bax dan meningkatkan Bcl-2 menjadimemperbaiki defisiensi ginjal-yang. Fas adalah reseptor kematian utama yang menginduksi apoptosis melalui ligasi dengan ligan Fas (FasL) (25). Ekspresi Fas dan FasL pada kelompok MC meningkat, sedangkan ekspresi ini meningkat secara signifikan pada kelompok WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Defisiensi fungsi imun merupakan salah satu manifestasi penting dari defisiensi ginjal-yang [28]. Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa indeks limpa dan timus kelompok WCD-MD pulih secara signifikan (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

Sumbu HPA merupakan sistem pengaturan yang paling penting karena mengatur sekresi glukokortikoid dan sistem endokrin untuk mempertahankan fungsi sekresi korteks adrenal (32). Ekspresi berlebih CaM mRNA di jaringan hipotalamus berhubungan dengan defisiensi Yang ginjal. CD dan WCD dapat memblokir saluran kalsium, menghambat ekspresi mRNA CaM di hipotalamus, dan menurunkan masuknya kalsium, sehingga menurunkan aktivitas kompleks Ca2+·CaM.

Terbentuknya defisiensi Yang pada ginjal merupakan proses perkembangan penyakit kronis. Ginjal tidak lagi merupakan konsep anatomi murni, dan merupakan istilah umum untuk imunitas neuroendokrin dan sistem genitourinari. Jaringan neuroendokrin-imun (NEI) adalah sistem regulasi terintegrasi yang penting [33]. CD dan WCD dapat mengatur fungsi sumbu HPAT dan meningkatkan pemulihan defisiensi Yang ginjal. Hasil ini memberikan dasar eksperimental untuk pencegahan klinis dan pengobatan defisiensi ginjal-yang.