Asam Askorbat Mengatur Kekebalan, Anti Oksidasi Dan Apoptosis Pada Abalone Haliotis Discus Hannai Ino Bagian 2

3.5. Ekspresi Gen dan Protein Terkait Kekebalan Tubuh Pada Kelenjar Pencernaan Abalon dan Insang

Glikosida cistanche juga dapat meningkatkan aktivitas SOD di jaringan jantung dan hati, dan secara signifikan mengurangi kandungan lipofuscin dan MDA di setiap jaringan, secara efektif mengais berbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi dari kerusakan DNA yang disebabkan oleh radikal OH. Cistanche phenylethanoid glycosides memiliki kemampuan pemulungan radikal bebas yang kuat, kemampuan reduksi yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktivitas SOD dalam suspensi sperma, mengurangi kandungan MDA, dan memiliki efek perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida Cistanche dapat meningkatkan aktivitas SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan jaringan paru-paru tikus tua yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangi kandungan MDA dan kolagen di paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, memiliki efek pemulungan yang baik pada DPPH, memperpanjang waktu hipoksia pada tikus tua, meningkatkan aktivitas SOD dalam serum, dan menunda degenerasi fisiologis paru-paru pada tikus tua eksperimental Dengan degenerasi morfologi seluler, percobaan telah menunjukkan bahwa Cistanche memiliki kemampuan antioksidan yang baik dan berpotensi menjadi obat untuk mencegah dan mengobati penyakit penuaan kulit. Pada saat yang sama, echinacoside di Cistanche memiliki kemampuan yang signifikan untuk mengais radikal bebas DPPH dan memiliki kemampuan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah degradasi kolagen yang diinduksi radikal bebas, dan juga memiliki efek perbaikan yang baik pada kerusakan anion radikal bebas timin.

Klik Pada Cistanche Reddit untuk Anti Penuaan

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Level mRNA dari gen-gen penting dalam jalur pensinyalan toll-like receptor (TLR) di kelenjar pencernaan abalone ditunjukkan pada Tabel 6 dan 7. Level ekspresi tlr2 dan tlr4 di kelenjar pencernaan menurun secara signifikan (p < { {5}}.05) dan memiliki level terendah di AA1000 dan AA500{{43 }} kelompok, masing-masing (Tabel 6). Level mRNA the-a diregulasi secara signifikan (p < 0.05), dan the-b tidak dipengaruhi oleh level graded diet AA (p > 0.05 ). Ekspresi myd88, molekul adaptor terkait perjalanan (trem), interleukin 1 receptor-associated kinase 4 (irak4), dan tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (traf6) berkurang secara signifikan setelah suplemen diet AA (p <0,05). Traf4 tidak dipengaruhi oleh kadar suplementasi AA (p > 0,05). Kadar mRNA iκb kinase (ikk ) dan nf-κb inhibitor (iκb ) pada kelenjar pencernaan abalon tidak dipengaruhi oleh diet AA (p > 0,05) (Tabel 7). Namun, ekspresi protein kinase teraktivasi mitogen p38 (tanda p38) dan sampah diturunkan secara signifikan dengan peningkatan diet AA (p <0,05). Diet AA secara signifikan dapat mengurangi tingkat ekspresi nf-κb, aktivator protein 1 (ap-1), dan faktor nekrosis tumor (tnf- ) (p <0,05), dan tingkat interleukin 16 (il 16) tidak tunduk pada diet AA (p> 0,05). Ekspresi protein MyD88, JNK, IL matang-1 , dan NF-κB p65 nuklir ditunjukkan pada Gambar 2. Tingkat protein MyD88, IL matang-1 , dan NF-κB p65 nuklir dalam pencernaan kelenjar abalon diturunkan secara signifikan oleh diet AA (p <0,05). Sebaliknya, kadar protein JNK tidak dipengaruhi oleh AA (p > 0,05).

Level mRNA tlr2, tlr4, dan the-b pada insang abalon tidak berbeda nyata (p > 0.05), dan level tar-a berkurang secara signifikan setelah level bertingkat diet AA (p < 0.05) (Tabel 8). Selain itu, tingkat ekspresi myd88, irak4, dan traf6 dalam insang abalon diturunkan secara signifikan dengan peningkatan tingkat diet AA (p < 0.{{20}}5). Alih-alih, tidak ada perbedaan signifikan dalam ekspresi trem dan traf4 yang diamati (p > {{30}}.05). Diet AA secara signifikan menurunkan tingkat mRNA ikk (p <0,05), dan ekspresi iκb, p38 mark, dan sampah di insang tidak terpengaruh oleh AA (p> 0,05) (Tabel 9). ANOVA satu arah mengungkapkan bahwa tingkat ekspresi nf-κb, ap-1, dan tnf- berkurang secara signifikan dengan diet AA (p <0,05), dan tidak ada perbedaan signifikan dalam tingkat 16 yang diamati (p > 0,05). Tingkat protein MyD88 dan nuklir NF-κB p65 diturunkan secara signifikan oleh tingkat bertahap diet AA (p <0,05) (Gambar 3). Namun, ekspresi protein JNK dan IL dewasa-1 pada insang abalon tidak dipengaruhi oleh diet AA (p > 0,05).

Ekspresi -defensin, pembuatan mitos 6, dan arginase-I di kelenjar pencernaan dan insang abalon diberikan pada Tabel 10. Tingkat -defensin dan arginase-I di kelenjar pencernaan meningkat secara signifikan setelah diet AA (p < 0.05), sedangkan ekspresi pembuatan mitos 6 tidak dipengaruhi oleh diet AA (p > 0,05). Sebaliknya, tingkat mRNA -defensin dan arginase-I dalam insang tidak berbeda secara signifikan, dan ekspresi pembuatan mitos 6 secara signifikan diregulasi oleh diet AA (p <0,05).

3.6. Ekspresi Gen Terkait Kekebalan di Kelenjar Pencernaan dalam Menanggapi Vibrio Parahaemolyticus

Tingkat ekspresi beberapa gen kritis pada jalur pensinyalan TLR, yang mengandung tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1, dan tnf- pada kelenjar pencernaan abalon setelah infeksi V. parahaemolyticus disajikan pada Gambar 4 Ekspresi mRNA dari tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1, dan tnf- diregulasi secara signifikan setelah pemberian V. parahaemolyticus (p < 0.05). Perubahan lipatan tlr4 tertinggi pada kelompok AA0 (10.24-kali lipat) pada 24 jam pasca infeksi, dan selanjutnya, level tertinggi menurun menjadi 3.{{ 20}}kali lipat dalam grup AA5000 pada 6 jam. Tingkat mRNA myd88 diregulasi secara signifikan pada 12–72 jam pada kelompok AA0 (6.86-kali lipat) dan pada 6–12 jam pada kelompok AA5000 (3.88-kali lipat) setelah V. infeksi parahaemolyticus. Ekspresi trem pada kelenjar pencernaan abalon setelah infeksi V. parahaemolyticus meningkat secara signifikan dari 12 jam menjadi 72 jam pada kelompok AA0 dan dari 12 jam menjadi 24 jam pada kelompok AA5000. Perubahan lipatan nf-κb mencapai level tertinggi pada 48 jam di grup AA0 (10.55-kali lipat), diikuti dengan penurunan level tertinggi pada 12 jam di grup AA5000 (3.{{48 }}perubahan lipat). Level ekspresi ap-1 diregulasi secara signifikan dari 6 jam menjadi 72 jam pada kelompok AA0 dan AA50 sebelum pulih ke level normal pada 72 jam setelah suplementasi AA terus menerus. Perubahan lipatan TNF- mencapai puncaknya pada 24 jam setelah infeksi V parahaemolyticus pada kelompok AA0, AA50, AA100, AA200, dan AA500, dan mencapai tingkat tertinggi pada 12 jam pada kelompok AA1000 dan AA5000.

Hasil kadar -defensin dan pembuatan mitos 6 pada kelenjar pencernaan setelah infeksi V. parahaemolyticus ditunjukkan pada Gambar 5. Ekspresi kadar -defensin dan pembuatan mitos 6 pada kelenjar pencernaan abalon meningkat secara signifikan setelah infeksi V. parahaemolyticus ( p < 0.05). Tingkat mRNA -defensin meningkat secara signifikan pada kelompok AA0, AA50, AA100, dan AA200 pada 12 jam dan 24 jam, dan mencapai puncaknya pada 12 jam pada kelompok AA200, AA500, AA1000, dan AA5000 dengan 4 .51-lipat, 4.74-lipat, 5.20-lipat dan 5.47-lipat, masing-masing. Perubahan lipatan pembuatan mitos 6 di kelenjar pencernaan abalon secara signifikan diregulasi dari 12 jam menjadi 24 jam pada kelompok AA0, AA50, AA100, AA200, dan AA500, dan dari 6 jam menjadi 72 jam pada kelompok AA1000 dan AA5000. Tingkat ekspresi tertinggi pembuatan mitos 6 diamati pada 12 jam pada kelompok AA5000 dengan 5.82-kali lipat.

3.7. Ekspresi Gen dan Protein Terkait Anti-Oksidasi dan Terkait Apoptosis di Kelenjar Pencernaan dan Insang

Tingkat mRNA nf-e2-faktor terkait-2 (nrf2), gpx, kucing, dan cuznsod dalam kelenjar pencernaan abalon meningkat secara signifikan dengan tingkat bertahap diet AA (p < {{4 }}.05) (Tabel 11). Sebaliknya, tingkat mRNA dan protein Keap1 berkurang secara signifikan setelah diet AA (p <0.05), dan glutathione-s-transferase (GST) tidak terpengaruh oleh AA (Gambar 6, Tabel 11) (p > 0.05). Pada insang, kadar mRNA nrf2 dan gpx meningkat secara signifikan dengan diet AA (p <0,05) (Tabel 11). Namun, ekspresi keap1, cat, GST, dan cuznsod di insang tidak tunduk pada tingkat diet AA (p> 0,05). Tidak ada efek signifikan dari diet AA pada ekspresi protein Keap1 pada insang abalon yang diamati (p > 0,05) (Gambar 6).

Apa yang menonjol pada Tabel 12 adalah bahwa tingkat ekspresi Bax dan caspase3 dalam kelenjar pencernaan abalon menurun secara signifikan setelah tingkat kadar AA diet (p < 0.05). Sementara itu, level mRNA bcl-2 diregulasi secara signifikan (p < 0.05). Namun, ekspresi caspase7 tidak dipengaruhi oleh diet AA (p > 0.{{20}}5). Protein cleavedcaspase3 dalam kelenjar pencernaan berkurang secara signifikan setelah suplementasi AA (p <0,05) (Gambar 6). Pada insang, kadar mRNA caspase7 dan bcl-2 masing-masing menurun dan meningkat secara signifikan, setelah diet AA (p <0,05) (Tabel 12). Meskipun demikian, ekspresi Bax dan caspase3 tidak berbeda nyata pada semua perlakuan (p > 0,05). Selain itu, ekspresi protein cleaved-caspase3 pada insang abalon tidak dipengaruhi oleh kadar AA diet (p > 0,05) (Gambar 6).

4. Diskusi

4.1. Kandungan Asam Askorbat di Berbagai Jaringan

Dalam penelitian ini, kandungan AA di otot, insang, dan kelenjar pencernaan meningkat dengan meningkatnya kadar AA makanan. Hasil serupa juga ditemukan di Vundu (Heterobranchus logfiles), belut Jepang, dan croaker Chu (warna Nibea) [27,56,57]. Kandungan AA tertinggi terdapat pada insang, diikuti oleh kelenjar pencernaan abalon. Namun, kandungan AA pada insang, kelenjar pencernaan, dan otot abalon tidak mencapai kejenuhannya setelah 4821,17 mg/kg diet AA. Pada pengisap Cina (Myxocyprinus asiaticus), kandungan AA di hati meningkat secara signifikan dengan diet AA [58]. Kandungan AA yang meningkat di hati pengisap Cina setelah diet AA berkorelasi dengan kesehatan hati. Pada ikan mas, kandungan AA di ginjal kepala, limpa, dan kulit meningkat secara signifikan dengan meningkatnya suplementasi AA [35]. Ginjal kepala, limpa, dan kulit adalah organ kekebalan penting pada hewan air [59-61]. Hasil ini menunjukkan bahwa peningkatan kandungan AA di kelenjar pencernaan dan insang abalon terkait erat dengan kesehatan abalon setelah diet AA dan bahwa akumulasi AA mencerminkan tingkat paparan AA makanan.

4.2. Peran Asam Askorbat dalam Pengaturan Kekebalan Abalon

Hemosit, sebagai komponen seluler serbaguna dari hemolymph pada moluska, bertanggung jawab atas banyak aspek kehidupan moluska, seperti respon imun, biomineralisasi, komunikasi sel-sel, dan regenerasi [62,63]. Oleh karena itu, THC, RB, dan PA hemolymph dapat secara langsung mencerminkan kekebalan organisme tersebut. AA terkait erat dengan THC, RB, dan PA hemosit, menghasilkan aktivasi sistem imun adaptif [64,65].

Dalam penelitian ini, THC, RB, dan PA dalam hemolymph abalone meningkat secara signifikan dengan diet AA. Diindikasikan bahwa kadar AA diet bertingkat berhasil meningkatkan fungsi kekebalan pada abalon. Hasil serupa diamati pada ikan nila dan udang rumput (Penaeus monodon) [64,66]. RB dalam serum udang karang rawa merah (Procambarus clarkii) dan PA dalam serum ikan lele sorubim hibrida (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) secara signifikan menurun setelah suplementasi AA tingkat tinggi (321,38 mg/kg dan 850 mg/ kg, masing-masing) [67,68]. Namun, tidak ada penurunan yang signifikan pada THC, RB, dan PA pada hemolimf abalon yang diamati pada pengobatan dengan suplementasi AA tingkat tinggi (4821,17 mg/kg).

Lisozim, C3, dan C4 memainkan peran penting dalam imunitas bawaan dan melindungi hewan dari infeksi patologis [69-71]. Dalam penelitian ini, LZM dalam CFH abalon meningkat secara signifikan setelah kadar AA makanan dinilai. Hal ini mirip dengan hasil penelitian sebelumnya pada cobia (Rachycentron canadum), Korean rockfish (Sebastes schlegelii), dan kerapu (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. Defisiensi AA menurunkan kandungan C3 dan C4 pada ikan mas, dan diet AA dapat secara signifikan meningkatkan parameter imun seperti C3 dan C4 pada bass mulut besar [35,74]. Namun, dalam penelitian ini, kandungan C4 dalam CFH abalon tidak dipengaruhi oleh kadar AA makanan. Ada kecenderungan peningkatan kandungan C3 dalam CFH abalon, meskipun kandungan C3 tidak meningkat secara signifikan dengan diet AA. Hasil ini mengungkapkan bahwa suplemen diet AA dapat meningkatkan kemampuan untuk menghilangkan infeksi patogen oleh LZM dan C3, bukan C4, untuk meningkatkan pertahanan kekebalan abalon.

Kekebalan bawaan sangat penting untuk abalon karena tidak adanya kekebalan adaptif pada invertebrata [43,49]. TLRs memainkan peran penting dalam sistem kekebalan tubuh bawaan terhadap berbagai mikroba [75]. TLR yang diaktifkan PAMP merekrut molekul adaptor khusus untuk mengaktifkan faktor transkripsi, seperti NF-κB dan AP-1, yang menentukan hasil dari respon imun bawaan [76]. Pensinyalan TLR diklasifikasikan menjadi dua jalur berbeda: MyD88- dependen dan MyD88-independent, yang menginduksi berbagai sitokin seperti TNF- dan IL-1 pada mamalia dan hewan air lainnya [77,78 ]. Di jalur yang bergantung88-MyD, MyD88 berinteraksi dengan IRAK4 dan kemudian berinteraksi dengan TRAF6 [79]. TRAF6 dapat mengaktifkan TGF- -activated kinase 1 (TAK1) dan protein pengikat TAK1-(TAB) [80]. TAK1 mengaktifkan kompleks IKK, yang dapat memfosforilasi IκB yang berikatan dengan subunit NF-κB (terdiri dari p50 dan p65) dan memfosforilasi MAPK dan JNK, yang mendorong translokasi AP-1 ke dalam nukleus [81]. Penghancuran IκB memfasilitasi translokasi nuklir NF-κB [82]. Nuklir NF-κB dan AP-1 menargetkan transkripsi sitokin, seperti TNF- dan IL-1 , yang dikenal baik sebagai mediator proinflamasi yang memicu inflamasi [76,77,83] . Di jalur MyD88-independen, TRAM diperlukan dan menempati peran penting dalam jalur ini [84]. Komponen intraseluler hilir jalur pensinyalan TLR umumnya dan sangat terkonservasi antara vertebrata dan invertebrata [60,85]. Ekspresi TLR4 intrahepatik diturunkan regulasinya pada tikus yang diberi AA (Mus musculus) [86]. AA memberikan manfaat hepatoproteksi terhadap cedera hati imunologi yang diinduksi concanavalin A pada tikus dengan menghambat jalur sinyal NF-κB [87,88]. Dengan demikian, dapat disimpulkan dari hasil ini bahwa AA dapat mempengaruhi jalur pensinyalan TLR. Namun, masih belum diketahui bagaimana AA mengatur jalur pensinyalan TLR pada hewan air, terutama pada moluska.

Dalam penelitian ini, level mRNA tlr2 dan tlr4 di kelenjar pencernaan diturunkan secara signifikan oleh level bertahap diet AA. Diduga jalur pensinyalan TLR dipicu oleh AA di kelenjar pencernaan abalon (Gambar 7). Istilah-a dan tlr-b memiliki kapasitas pengenalan pola yang lebih luas dan terlibat dalam kekebalan antibakteri dan antivirus abalon [89]; namun, mekanisme yang mendasari the-a/b masih belum diketahui. Namun, tingkat tlr-b tidak dipengaruhi oleh diet AA, dan tlr-a diregulasi secara signifikan oleh AA dalam penelitian ini. Investigasi lebih lanjut diperlukan. Ekspresi myd88, irak4, dan traf6, dan ekspresi protein MyD88, di kelenjar pencernaan abalon diturunkan regulasinya dengan suplementasi AA, dan tingkat traf4 tidak dipengaruhi oleh diet AA. TRAF4 bertindak sebagai peredam dalam pensinyalan yang dimediasi TLR dengan menekan TRAF6 [90]. Diindikasikan bahwa penghambatan jalur TLR oleh diet AA tidak dimediasi melalui traf4 di kelenjar pencernaan abalon. Tingkat mRNA iκb di kelenjar pencernaan tidak dipengaruhi oleh AA. Namun, NF-κB dapat ditransfer ke nukleus hanya setelah degradasi fosfat IκB [91]. Ekspresi mRNA dari nf-κb dan ekspresi protein dari NF-κB p65 nuklir di kelenjar pencernaan diturunkan secara signifikan oleh diet AA. Hasil ini menunjukkan bahwa AA mungkin menekan fosforilasi protein IκB untuk mengurangi NF-κB nuklir. IKK dapat mengaktifkan NF-κB p65 untuk memicu jalur kanonik NF-κB, dan IKK dapat mengaktifkan NF-κB p52 untuk memicu jalur non-kanonik NF-κB [92]. Diindikasikan bahwa diet AA dapat mengaktifkan jalur kanonik NF-κB di kelenjar pencernaan abalon. Selain itu, ekspresi mRNA dari trem, tanda p38, sampah, ap-1, dan tnf- , dan tingkat protein IL dewasa-1 berkurang secara signifikan oleh diet AA. Hasil ini menunjukkan bahwa diet AA dapat menghambat jalur pensinyalan TLR melalui jalur yang bergantung88-Myd melalui NF-κB, p38 mark/ap-1 dan JNK/ap-1, dan Myd{{ 43}}jalur independen untuk meringankan peradangan pada kelenjar pencernaan abalon. Di insang, AA juga memengaruhi jalur pensinyalan TLR (Gambar 7). Namun, tingkat mRNA dari trem, tanda p38, dan sampah, dan ekspresi protein IL dewasa-1 tidak berbeda secara signifikan. Hasil ini menunjukkan bahwa diet AA dapat menekan jalur pensinyalan TLR melalui jalur yang bergantung88-Myd, bukan yang independen88-MyD. Jalur TLR yang terhambat mengurangi peradangan pada insang abalon melalui jalur NF-κB dan p38 mark/ap-1, bukan jalur JNK/ap-1. Diet AA memiliki efek yang lebih kuat pada jalur TLR di kelenjar pencernaan daripada di insang abalon.

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】