Ekstrak Kelopak Mawar (Rosa Gallica) Memberikan Efek Pemutih Kulit Dan Anti Kerut Kulit

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Young-Ran Song,1,* Won-Chul Lim,1,* Ahram Han,1 Myung-hee Lee,1 Eun Ju Shin,1Kwang-Min Lee,1,2 Tae-Gyu Nam,1 and Tae-Gyu Lim1, 3

ABSTRAK

Kami berusaha untuk menyelidiki efek ekstrak dariKelopak Rosa gallica(RPE) aktifpemutih kulitdananti-kerutaktivitas. Aktivitas tirosinase dilemahkan oleh pengobatan RPE, bersamaan dengan pengurangan akumulasi melanin pada melanoma B16F10 manusia. Perawatan kulit wajah sukarelawan dalam uji klinis dengan formulasi yang mengandung RPE meningkatkan kecerahan kulit (nilai L*) secara signifikan. Mekanisme yang mendasari bertanggung jawab ditentukan terkait dengan aktivasi mitogen-activated protein kinase (MAPK). Sebagai tambahan,RPEdipamerkananti-kerutaktivitas pembentukan fibroblas kulit manusia dengan menekan level matrix metalloproteinase (MMP)-1. Studi in vivo, RPE juga menghambat tingkat MMP yang dirangsang ultraviolet matahari dengan regulasi c-Jun. Secara keseluruhan, temuan kami menunjukkan bahwa RPE membangkitkanpemutih kulitdan aktivitas pembentukan anti-kerut dengan mengatur sinyal intraseluler, mendukung kegunaannya sebagai bahan untuk pemutih kulit dan produk kosmetik anti-kerut.

KATA KUNCI: melanin, MMP-1, Rosa gallica, pemutih kulit, pembentukan kerutan

Ekstrak Cistanche: pemutih kulit

PENGANTAR

Meskipun penuaan kulit memiliki tingkat dasar yang ditentukan secara genetik, itu adalah proses yang kompleks dan multifaktorial yang dapat dipercepat oleh berbagai faktor lingkungan.1 Penuaan kulit normal adalah proses kronologis yang terjadi secara alami dari waktu ke waktu yang diperburuk oleh penuaan eksogen, dipicu oleh tekanan eksternal karena sinar matahari, polutan atmosfer , dan suhu ekstrim.2 Dari jumlah tersebut, paparan ultraviolet matahari (SUV) (khususnya, ultraviolet B [UVB]) adalah penyebab utama fotoaging kulit, ditandai dengan hiperpigmentasi (produksi melanin berlebih) danpembentukan kerutan.3 Radiasi SUV merangsang pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS)/spesies nitrogen reaktif dan kerusakan DNA, yang menyebabkan berbagai proses terkait penuaan pada sel-sel kulit seperti peradangan, remodeling matriks ekstraseluler (ECM), kematian sel, dan hiperpigmentasi.4Melanin (pigmentasi hitam atau coklat) melindungi kulit dari kerusakan akibat sinar UV.5 Namun, produksi melanin yang tidak teratur atau berlebihan di kulit dapat menyebabkan gangguan hiperpigmentasi termasuk chloasma, bintik-bintik, dan lentigin pikun.6 Arbutin dan asam kojic, yang telah dikembangkan untuk mengobatinya. penyakit, diketahui menimbulkan risiko kanker usus atau kanker hati, masing-masing.7 Untuk alasan ini, telah ada minat dalam pemanfaatan bahan alami yang sangat baik dalam menghambat produksi melanin tanpa efek samping yang serius. Melanogenesis dirangsang oleh tirosinase, yang memainkan peran penting dalam langkah penentu laju awal jalur biosintesis melanin, dan enzim ini distabilkan dan diaktifkan oleh TRP-1 dan TRP 2.8 Transkripsi protein melanogenik ini dimodulasi oleh faktor transkripsi terkait mikroftalmia (MITF). Paparan UV mengaktifkan promotor MITF dan menginduksi ekspresi gen tirosinase, sehingga menghasilkan akumulasi melanin dalam melanosit. Selain itu, mitogen-activatedprotein kinases (MAPKs), yang terdiri dari ekstraseluler signal-regulated kinase (ERK), c-Jun-N-terminal kinase (JNK), dan p38, menyebabkan kontrol transkripsi melanogenesis.8 Khususnya, ERK dan JNK diketahui meregulasi ekspresi MITF secara negatif, 9 sedangkan p38 MAPK menginduksi dekomposisi proteasomal dari enzim melanogenik. P38 MAPK terfosforilasi, pada gilirannya, mengaktifkan ekspresi MITF dan enzim melanogenik

Protein ECM seperti kolagen, elastin, dan proteoglikan terdapat dalam matriks dermal, yang memberikan kekuatan dan ketahanan pada kulit.11 Selama proses penuaan kulit, perubahan matriks dermal termasuk perubahan proporsi kolagen terjadi, yang pada akhirnya menyebabkan pembentukan kerutan. Selanjutnya, penyinaran UV juga memicu dekomposisi kolagenase, di mana stres oksidatif yang dihasilkan memfasilitasi ekspresi proteolytic matrix metalloproteinase (MMPs) yang mengurangi sintesis kolagen dan mempercepat degradasi kolagen.2 Stres oksidatif merangsang berbagai jalur biologis terkait fotoaging, serta kinase sitoplasma dan MAPK.4 MAPK mensimulasikan aktivator protein 1 (AP-1; c-Fos/c-Jun), sebuah faktor transkripsi yang selanjutnya meningkatkan regulasi tingkat MMPs.12 Protein-protein ini terutama bertanggung jawab atas degradasi kolagen.7 Dari MMPs, MMP-1 adalah dikenal sebagai enzim penting yang terlibat dalam pemecahan ECM dengan menguraikan kolagen tipe I, komponen utama dalam dermis.3 Dengan demikian, penghambatan MMP-1 telah dianggap sebagai strategi yang layak untuk terapi anti-penuaan kulit.

Spesies Rosa (R.) termasuk dalam famili Rosaceae dan genus Rosa adalah salah satu tanaman yang tersebar luas. Ini adalah tanaman komersial penting yang digunakan untuk berkebun, dekorasi, dan parfum. Sebagai bunga yang dapat dimakan, kelopak bunga juga biasa digunakan sebagai bahan pangan fungsional karena warnanya yang kaya, rasa yang kaya, dan nilai gizi yang tinggi.13 Sementara itu, bunga mawar telah dimanfaatkan sebagai obat herbal untuk mengobati dismenore, diare, dan nefritis, memperlancar peredaran darah, meredakan nyeri, dan hemostasis.13,14 Sifat fisiologis yang diamati mungkin disebabkan oleh banyaknya fitokimia termasuk senyawa fenolik, flavonoid, dan antosianin.15 Memang, beberapa penelitian telah menunjukkan fungsi biologis yang mengandung anti-oksidasi, anti-mikrobiologi, anti-inflamasi, dan anti-alergi yang kuat. .15-17 Baru-baru ini, kami melaporkan bahwa ekstrak etanol kelopak mawar memunculkan potensi anti-inflamasi kulit.18 Selain itu, kondisi ekstraksi kelopak mawar yang optimal yang memiliki efek anti-penuaan pada kulit telah diselidiki untuk aplikasi industri. ketersediaan luas, potensi sifat anti-penuaan dari ekstrak kelopak mawar (RPEs) forsk perawatan tetap kurang dipahami. Dalam penelitian ini, kami menilai aplikasi potensial dariRPEdalam perawatan kulit dan mekanisme molekuler mereka bertanggung jawab.

manfaat cistanche: Anti-penuaan

BAHAN DAN METODE

Reagen

Kelopak mawar dibeli dari Turki melalui GN Bio (Gyeonggi-do, Korea). Solusi MTS (CellTiter 96 Aqueous OneSolution Cell Proliferation Assay) dibeli dari Promega (Madison, WI, USA). Anti-tirosinase poliklonal, anti-b-aktin, anti-ERK, anti-MKK4, dan anti-JNK dibeli dari Santa Cruz Biotechnology (CA, USA). Anti-fosfo-MEK monoklonal (Ser217/221), anti-MEK, anti-fosfo-MKK4, anti-fosfo-MKK3/6, anti-fosfo ERK, anti-fosfo-JNK, anti-MKK3, anti-fosfo-p38, anti-p38, dan anti-fosfo-c-Jun dibeli dari Teknologi Pensinyalan Sel (Danvers, MA, USA). Kolagen monoklonalanti-MMP-1 dan anti-tipe I diperoleh dari R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) dan Ab cam (Cambridge, United Kingdom), masing-masing. Hormon perangsang melanosit alfa (a-MSH), jamur tirosinase, dan l-3,4-dihidroksifenilalanin (l-DOPA) diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

Persiapan RPE

Kelopak mawar (10 g) dikeringkan dengan udara, digiling, dan dicampur dengan 1000 mL etanol 70 persen (v/v) dan diekstraksi pada 70 C selama 3 selubung ekstraktor soxhlet. Produk kemudian disaring melalui kertas saring No. 2 (Whatman, Maidstone, UnitedKingdom). Pelarut terus menerus dipekatkan vakum, dan residu diliofilisasi menggunakan pengering beku.

Uji aktivitas tirosinase jamur in vitro

Uji enzimatik dilakukan dengan mengukur pembentukan DOPAchrome seperti yang dijelaskan sebelumnya.20 Singkatnya, 40 lLofRPEsampel (12,5, 25, 50, dan 100 LG/mL) diencerkan menjadi 20 lL buffer PBS. Setelah ditambahkan 20 lL tirosinase jamur (0,02 mg/mL), inkubasi dilakukan selama 30 menit. Substrat l-DOPA ditambahkan ke dalam campuran yang mengandung enzim kemudian diinkubasi selama 15 menit. Produk krom dopa kemudian diukur pada 475 nm. Arbutin dan vitamin C digunakan sebagai kontrol positif.

Ekstrak Cistanche mengurangi aktivitas tirosinase

Budaya sel

Sel murine melanoma B16F10 dan dermalfibroblasts manusia primer (HDFs) diperoleh dari Korean Cell LineBank (Seoul, Korea) dan ScienCell Research Laboratories (Carlsbad, CA, USA), masing-masing. Kedua sel dipertahankan dalam medium Eagle modifikasi Dulbecco (DMEM) (GIBCO Invitrogen, Auckland, Selandia Baru) yang dilengkapi dengan 10 persen (v/v) serum janin sapi (FBS) dan 1 persen streptomisin-penisilin (GIBCO Invitrogen) pada suhu 37 C dan 5 persen CO2 inkubator.

Uji viabilitas sel

Uji MTS digunakan untuk mengukur proliferasi sel B16F10 melanoma manusia yang diinduksi RPE. Singkatnya, sel-sel diunggulkan dan dibiakkan dengan DMEM yang mengandung 10 persen FBS dan 1 persen antibiotik dalam cawan sumur 96-. Sel-sel kemudian serum-kelaparan selama 12 jam dan ditambahkan denganRPEsampel (50–1000 LG/mL) selama 24 jam. Selanjutnya, larutan MTS 10 persen termasuk phenazine methosulfate diperlakukan ke sel selama 1 jam. Tingkat sel yang layak diukur pada 490 nm.

Uji produksi melanin

Pembentukan melanin dalam sel melanoma manusia B16F10 dinilai seperti yang dilaporkan sebelumnya.20 Singkatnya, sel (8 · 103 sel/sumur) dikultur dalam piring enam lubang dalam 2 mL DMEM. lg/mL) selama 1 jam sebelum a-MSH 100 nM ditambahkan dan kemudian diinkubasi lebih lanjut selama 72 jam. Melanin ekstraseluler diselidiki pada 495 nm.

Analisis Western blot

Sampel protein dari sel B16F10, HDF, dan jaringan kulit manusia dilisis dengan buffer RIPA [20 mM Tris-HCl (pH 7,5)150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA 1 mM EGTA 1 persen NP-40 1 persen natrium deoksikolat 2,5 mM natrium pirofosfat 1 mM b gliserofosfat 1 mM Na3VO4 1 lg/ml leupeptin] dan diukur dengan Pierce BCA Protein Assay Kit. Protein dipisahkan oleh 10 persen natrium dodesil sulfat akrilamidagel berdasarkan berat molekul dan kemudian dipindahkan ke membran nitroselulosa. Membran diblokir dengan larutan albumin serum sapi selama 1 jam dan diinkubasi dengan antibodi primer yang ditunjukkan pada suhu 4C selama 12 jam. Setelah bereaksi dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase lobak selama 1 jam, intensitas ekspresi protein divisualisasikan menggunakan pembaca chemiluminescence (UVITEC Cambridge).

Subyek dan perawatan

Kemampuan dariRPEuntuk memperbaiki wajahpemutih kulit was assessed in a double-blind clinical trial in 10 women (>20tahun). Formulasi dasar dibuat menggunakan air murni, asam poliakrilat, 1,2-heksanadiol, dan natrium hidroksida. RPE ditambahkan pada konsentrasi 0,05 persen (v/v). Selama periode suplementasi 6-minggu, subjek menerapkan formula RPE ke satu sisi wajah mereka, dan sisi lain wajah dirawat sekali sehari dengan hanya formulasi dasar sebagai kontrol. Selama masa percobaan, para relawan dilarang menggunakan kosmetik lain.

Evaluasi kondisi kulit

Kondisi kulit dievaluasi sesuai dengan protokol operasi standar Institut Ilmu Dermatologi Korea (Seoul, Korea) dan dilakukan pada 22 C – 2 Cand 50 persen – 5 persen kelembaban. Setelah mencuci wajah selama 30 menit, keadaan kulit setiap subjek diselidiki menggunakan Skin ColorCatch (Delfin Technologies, Kuopio, Finland) dan komentar dikumpulkan. Skor ditentukan dengan nilai L* (kecerahan) dan diukur segera sebelum tes dan pada 3 dan 6 minggu kemudian.

iradiasi SUV

Penyinaran SUV dilakukan dengan menggabungkan lampu ultraviolet A (UVA) dan UVB (Q-Lab Corporation, Cleveland, OH, USA); lampu mereka memancarkan pada 340 nm, yang meniru sinar matahari optimal yang dipancarkan antara 365 dan 295 nm. Rasio UVA terhadap UVB yang dihasilkan oleh lampu ini masing-masing adalah 94,5 persen dan 5,5 persen . HDF dan jaringan setara kulit manusia dalam media bebas serum dirangsang oleh penyinaran SUV masing-masing pada 23 dan 46 kJ/m2 menggunakan lampu UVB.

Persiapan sampel kulit manusia

Bagian kulit perut diperoleh dari pasien wanita Kaukasia (Biopredic International, Saint Gregoire, Prancis). Singkatnya, sampel jaringan dikumpulkan dari perut setelah operasi plastik sesuai dengan FrenchLaw L.1245-2 CSP. Studi ini mengikuti semua prinsip yang ditetapkan dalam Deklarasi Helsinki. Jaringan kulit diinkubasi dalam media yang tepat 10 persen FBS yang disediakan dari Biopredic International pada 37 C di bawah 5 persen CO2 selama 10 hari di mana media diganti setiap 2 hari. Selama periode berjalan, jaringan juga terpapar denganRPEsampel 1 jam sebelum penyinaran SUV 46 kJ/m2 dua kali sehari. Pada akhir perawatan, jaringan digunakan untuk analisis imunohistokimia (IHC) atau analisis imunoblot.

Observasi IHC

Analisis IHC dilakukan oleh lembaga penelitian kontrakABION (Seoul, Korea). Jaringan kulit direndam dalam 10 persen formaldehida, didehidrasi melalui gradien konsentrasi etanol, dan dibenamkan dalam lilin parafin. Peroksidase endogen dari bagian tersebut diinaktivasi dengan 0,3 persen H2O2 selama 15 menit dan kemudian diinkubasi dengan antibodi anti-MMP-1 (R&D Systems, Inc., USA, Canada) selama satu jam. Setelah dicuci lima kali, bagian diinkubasi dengan antibodi sekunder selama 20 menit. Bagian diwarnai dengan reagen deteksi DAB (3,30-diaminobenzidine) (K3468; DAKO, Glostrup, Denmark) dan diamati dan difoto menggunakan mikroskop cahaya (BX40; Olympus,Tokyo, Jepang).

Analisis statistik

Semua percobaan dilakukan setidaknya tiga kali dan data dinyatakan sebagai mean – standar deviasi. Signifikansi statistik dievaluasi dengan menggunakan Student's t-test dalam program SPSS (Chicago, IL, USA) dan perbedaan signifikan dinyatakan sebagai P <>

cistanche tubulosa

HASIL

RPE menekan produksi melanin melalui penghambatan tirosinase

Tirosinase adalah satu-satunya enzim pembatas laju untuk melanogenesis yang ada dalam sel kulit manusia.8 Dalam melanosit, DOPA diproduksi dari tirosin oleh tirosinase, yang selanjutnya dioksidasi menjadi dopakuinon dalam jalur sintesis melanin.7 Dalam penelitian ini, uji tirosinase jamur digunakan untuk menentukan aktivitas anti-melanogenik dariRPE. Seperti yang diberikan pada Gambar 1A, RPE menimbulkan efek penghambatan tergantung dosis yang signifikan pada aktivitas tirosinase dan efek penghambatan pada 50-100 lM RPE lebih tinggi daripada arbutin dan vitamin C. Hasil ini lebih lanjut dikonfirmasi dengan mengevaluasi efek RPE pada sekresi melanin dan ekspresi tirosinase dalam sel melanoma B16F10 yang diobati dengan a-MSH. Keratinosit mensekresi a-MSH untuk melindungi kulit dari paparan sinar UV yang berlebihan, yang menginduksi aktivasi melanosit untuk memproduksi melanin.5 Telah dikonfirmasi bahwa pengobatan a-MSH menginduksi ekspresi tirosinase dan produksi melanin dalam melanosit (Gbr. 1B, C). Namun, ekspresi tirosinase dalam sel B16H10 yang diinduksi a-MSH ditekan tergantung dosis oleh pengobatan RPE (Gbr. 1B), konsisten dengan hasil yang dijelaskan sebelumnya. Selain itu, RPE (100 dan 200 LG/mL) secara signifikan mengurangi kandungan melanin yang meningkat dalam melanosit yang dirangsang oleh a-MSH (Gbr. 1C). Selain itu, kami mengkonfirmasi bahwa ekstrak tidak menginduksi sitotoksisitas sel pada konsentrasi £1000 LG/mL dalam sel B16F10 (Gbr. 1D).

RPE menurunkan regulasi ekspresi MITF dengan menginduksi aktivasiMAPK dalam sel melanoma B16F10

Berbagai jalur sinyal dapat memediasi pembentukan pigmen melanin. Melanogenesis dikendalikan oleh MAPK yang dikategorikan menjadi tiga subtipe yang terdiri dari ERK, JNK, dan p38, dan aktivator hulu MEK, MKK4, atau MKK3/6, dengan mengatur ekspresi MITF dan tirosinase secara transkripsi.21 Fosforilasi p38 MAPK mengatur melanogenesis dengan merangsang degradasi proteasomal dari enzim melanogenik.6 ERK diketahui menurunkan regulasi ekspresi MITF dan melanogenesis melalui fosforilasi lebih dari 160 protein.10 Selain itu, JNK terlibat dalam proliferasi dan apoptosis sel kanker dan juga mengontrol melanogenesis dengan menurunkan regulasi ekspresi MITF.

Untuk memperjelas mekanisme yang bertanggung jawab atas aktivitas biologisRPE, kami menyelidiki efek RPE pada jalur pensinyalan MAPK melalui analisis western blot. Seperti yang diberikan pada Gambar 2, pengobatan RPE juga ditunjukkan untuk memfosforilasi MEK-ERK, MKK4/7-JNK, dan MKK3/6- jalur p38 MAPK dalam sel B16F10. Selain itu, fosforilasi MAPKKs-MAPKs secara signifikan ditingkatkan dengan meningkatnya konsentrasi RPE. Selanjutnya, kami mengamati bahwa RPE mengurangi ekspresi MITF. Hasil ini menunjukkan bahwa RPE menghambat ekspresi MITF dan tirosinase dengan mengaktifkan jalur pensinyalan MAPK.

RPE memunculkan efek pemutih kulit pada kulit manusia

Dalam penelitian ini, efek dariRPEpada kecerahan kulit manusia dikonfirmasi lebih lanjut dalam uji klinis double-blind. Setiap subjek menerima penerapan dua formulasi berbeda, satu dengan 0.05 persen (v/v) RPE dan satu tanpa RPEon setiap setengah dari wajah mereka sekali sehari selama 6 minggu. Kecerahan kulit yang dinilai dengan nilai L* dievaluasi menggunakan SkinColorCatch (Delfin Technologies). Seperti yang diberikan pada Gambar 3, kecerahan kulit dengan adanya perlakuan dengan formulasi yang mengandung RPE 0,05 persen (v/v) meningkat secara signifikan dibandingkan dengan kontrol. Perawatan RPE selama 3 minggu menghasilkan peningkatan nilai L* yang signifikan, dan efeknya semakin meningkat seiring dengan waktu perawatan yang dilanjutkan.

RPE mencegah degradasi kolagen melalui penghambatan MAPK-MMP-1 di HDFs

Iradiasi UV menghasilkan stres oksidatif dan dengan demikian memicu dekomposisi kolagen dengan menginduksi aktivasi MMPs.2 MMP-1 merupakan faktor penting dalam proses photoaging karena secara spesifik memotong kolagen tipe I.3 Ekspresi MMP-1 dimediasi oleh MAPK seperti ERK, p38 MAPK, dan JNK, selanjutnya meningkatkan aktivasi faktor transkripsi AP-1.22 Sebagai subunit AP-1, c-Jun juga diinduksi sebagai respons terhadap aktivasi MAPK yang dirangsang oleh radiasi UV .23 Kami berusaha untuk menyelidiki apakahmengurangi kerutanefek RPE ditentukan oleh tingkat penekanan transduksi pensinyalan hulu yang dimediasi MMP-1 dan MMP-1-dalam HDF yang disinari SUV. Tingkat ekspresi kolagen tipe I yang mencerminkan jumlah kolagen yang disintesis dalam sel juga dievaluasi. Seperti yang diberikan pada Gambar 4A, B, iradiasi SUV menghasilkan pengurangan ekspresi kolagen tipe dan peningkatan ekspresi MMP-1 dalam HDF. Namun, ekspresi kadar kolagen tipe I yang dikurangi dengan iradiasi SUV dipulihkan secara dramatis oleh pengobatan RPE, yang juga secara signifikan melemahkan peningkatan level ekspresi MMP-1 yang disebabkan oleh iradiasi SUV. Selain itu, efek RPE pada fosforilasi AP-1 dan MAPK yang diinduksi SUV diperiksa untuk menjelaskan jalur pensinyalan yang terlibat dalam ekspresi MMP yang dimediasi SUV-1. Hasil menunjukkan bahwa peningkatan fosforilasi c-Jun dalam HDF yang diinduksi SUV sangat ditekan olehRPEdengan cara yang bergantung pada dosis (Gbr. 4C). Selanjutnya, RPE menghambat fosforilasi yang diinduksi SUV dari MEK ERK, MKK4/7-JNK, dan MKK3/6-p38 (Gbr. 4D–F). Hasil ini menunjukkan bahwa RPE mengurangi degradasi kolagen yang diinduksi SUV dengan menekan ekspresi MMP-1 melalui downregulasi jalur pensinyalan AP-1 hulu dan jalur pensinyalan MAPK di HDF.

RPE mengurangi ekspresi MMP-1 yang diinduksi SUV dengan menurunkan regulasi pensinyalan AP-1 dan MAPKK-MAPK di jaringan kulit manusia

Untuk mengkonfirmasi lebih lanjut sifat anti-photoaging dari RPEin vivo, kami melakukan pra-perawatan sampel jaringan kulit manusia selama 1 jam, diikuti dengan 46 kJ/m2 penyinaran SUV. Seperti yang diberikan pada Gambar 5A, ekspresi MMP-1 meningkat secara nyata oleh paparan SUV, sedangkanRPEpengobatan menekan tingkat ekspresi MMP-1 yang diinduksi SUV. Selain itu, analisis pewarnaan IHC mengungkapkan efek protektif RPE pada ketebalan epidermis oleh paparan SUV dengan menunjukkan tingkat ekspresi MMP-1 di jaringan kulit. Ekspresi MMP-1 dalam model kulit manusia yang dirawat dengan SUV meningkat secara nyata, sedangkan pengobatan RPE mengurangi ekspresi MMP-1 yang diinduksi SUV (Gbr. 5B). AP-1 merangsang ekspresi MMP-1,24 dan MAPK adalah mediator utama ekspresi MMP-1 yang diinduksi UV melalui regulasi transaktivasi AP-1.25 Seperti yang diberikan pada Gambar 5C, RPE menghambat fosforilasi c-Jun yang diinduksi oleh SUV dalam jaringan kulit manusia, yang menunjukkan penurunan regulasi aktivasi transkripsional AP-1 olehRPE. Selain itu, RPE menekan fosforilasi yang diinduksi SUV dari MEK-ERK, MKK4/7-JNK, dan MKK3/6-p38 (Gbr. 6). Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa RPE menekan produksi kolagen yang diinduksi SUV dalam sel kulit dan jaringan kulit.

ekstrak cistanche tubulosa

DISKUSI

Banyak kultivar mawar hias yang ada saat ini telah lama digunakan untuk tujuan makanan dan pengobatan. Memang, berbagai senyawa bioaktif yang menarik hadir di tanaman mawar, termasuk senyawa fenolik.26 Sebelumnya, kami melaporkan aktivitas anti inflamasi kulit dariRPEmenggunakan sel epidermis tikus, di mana RPE mengurangi ekspresi COX-2 yang diinduksi SUV dengan menghambat jalur pensinyalan MAPK.

Hubungan erat antara peradangan dan proses penuaan sudah mapan,28 dan kami berusaha untuk menyelidiki hubungan ini dalam kontekspemutih kulitdananti-kerutkegiatan formasi. Seperti yang diberikan pada Gambar 1, aktivitas tirosinase in vitro yang bergantung pada dosis ditekan RPE dan ekspresinya dalam sel B16F10. Selanjutnya, hasil akhir pigmentasi kulit, produksi melanin, dihambat oleh pengobatan RPE pada sel B16F10. RPE juga menginduksi fosforilasi MAPKs dan upstreamactivator MAPKKs, diikuti oleh penurunan ekspresi MITF (Gbr. 2). MAPK diketahui sebagai faktor pensinyalan kunci yang mengatur melanogenesis dalam melanosit.21 Jalur TheERK dan JNK terlibat dalam banyak langkah transduksi sinyal, dan juga berpartisipasi dalam regulasi MITF, yang secara berurutan mengarah pada penghambatan tirosinase dan melanogenesis.9 Sementara itu, aktivasi p38 MAPK menyebabkan penghambatan sintesis melanin dengan menginduksi degradasi protein tirosinase.6 Secara bersama-sama, hasil ini menunjukkan bahwa RPE menghambat melanogenesis dalam sel melanoma B16F10 melalui penghambatan MITF dan transkripsi tirosinase, dan efek RPE terjadi terkait dengan aktivasi jalur pensinyalan MAPKK-MAPK.

Untuk mengkonfirmasi apakahpemutih kulitdan aktivitas anti-kerutan RPE berlaku untuk kulit manusia, kami merawat sukarelawan dengan RPE selama 6 minggu untuk mengevaluasi aktivitas pemutihan kulit. Kami juga mengevaluasi jaringan kulit manusia ex vivo selama 10 hari untuk menilaianti-kerutefek formasi. Pengobatan dengan formulasi yang mengandung RPE secara signifikan meningkatkan nilai L*, satuan ukuran untuk keputihan kulit (Gbr. 3). Lebih lanjut, sebagian besar sukarelawan menjawab bahwa kondisi kulit mereka, termasuk keputihan, ditingkatkan dengan formulasi yang mengandungRPE, berdasarkan survei kuesioner (data tidak ditampilkan).

Radiasi SUV dianggap sebagai faktor utama dalam proses terkait penuaan kulit.4 Dalam penelitian ini, RPE tidak hanya memulihkan sintesis prokolagen tetapi juga menekan ekspresi MMP-1 yang diinduksi SUV dalam HDF (Gbr. 4). Lebih lanjut, analisis pewarnaan IHC menunjukkan bahwa RPE dapat melemahkan ekspresi MMP1 yang diinduksi SUV di jaringan kulit (Gbr. 5B). Selain itu, kami menyelidiki apakah faktor transkripsi seperti MAPK dan AP-1dipengaruhi oleh RPE. Kami menemukan bahwa kadar protein meningkat pada HDF dan jaringan kulit yang diiradiasi SUV, sedangkanRPEsecara signifikan menghambat jalur MAPKK-MAPK dan aktivasi AP-1. Setelah paparan SUV, ROS yang dihasilkan dapat bertindak sebagai aktivator untuk beberapa jalur molekuler, termasuk jalur MAPK yang mengaktifkan AP-1 dan transkripsi faktor-kappaB nuklir.29 Jalur ini berkontribusi pada ekspresi banyak gen termasuk MMP, yang menyebabkan defisiensi kolagen dan kerutan.12 Dalam penelitian sebelumnya, kami juga menunjukkan bahwa RPE mengandung konsentrasi tinggi antioksidan seperti antosianin, polifenol, dan flavonoid, sehingga memberikan beberapa tingkat kapasitas antiinflamasi terhadap paparan SUV.27 Oleh karena itu, efek perlindungan RPE pada kerusakan kulit oleh radiasi SUV ditunjukkan dalam penelitian ini mungkin disebabkan oleh kapasitas antioksidannya.

Sebagai kesimpulan, kami mengamati bahwaRPEmenunjukkan pemutihan kulit dananti-kerutefek sementara menghambat aktivitas tirosinase dan pembentukan melanin dalam melanosit. Sifat anti-melanogenik RPE dapat ditimbulkan melalui aktivasi jalur pensinyalan MAPKK-MAPK. Selain itu, RPE tidak hanya mendorong sintesis prokolagen tetapi juga menghambat ekspresi MMP yang diinduksi oleh paparan SUV di fibroblas kulit dan jaringan, dengan menekan jalur MAPKK-MAPK dan aktivasi AP-1. Selain itu, tidak ada efek negatif yang terkait dengan stabilitas formulasi yang terdeteksi pada sukarelawan. Temuan kami menunjukkan bahwa RPE mungkin merupakan biomaterial pelindung kulit yang efektif, dengan aplikasi dalam perawatan klinis dan/atau kosmetik pigmentasi kulit dan kerutan.

suplemen cistanche