Penelitian Pengaruh Cistanche Terhadap Radikal Bebas

Untuk informasi selengkapnya:Ali.ma@wecistanche.com

Hutan Awan Kedua, Zhang Hongjing Tua

Saat ini, diyakini bahwa penurunan fungsi kekebalan mesin terkait dengan penuaan. Berdasarkan studi bahwaBentengdapat meningkatkan fungsi kekebalan humoral dan seluler tikus dan melawan model penuaan yang disebabkan oleh d-galaktosa, kami mempelajari lebih lanjut efek obat pada tikus. Menghirup ozon<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">Radikal bebasdalam tubuh. Tingkat ekspresi chemiluminescence tikus dalam kelompok obat meningkat, SOD Meningkatkan vitalitas "Kandungan peroksida lipid dalam plasma, jaringan lutut dan paha dan vitalitas MAOB jaringan koridor menurun; ada hubungan dosis-efek antara kelompok dosis yang berbeda. -efek penuaan tikus terhadap penuaan subakut konsisten dengan studiBenteng's peningkatan fungsi kekebalan pada tikus.Bentengdapat meningkatkan fungsi kekebalan tubuh, meningkatkan kemampuan anti-stres tubuh, dan tepat untuk menerima atau secara tidak langsung menghilangkan kerusakanRadikal bebaske tubuh. , Menghambat vitalitas 1WMAO-B. Sehingga mencapai efek menunda penuaan. Eksperimen ini memberikan dasar eksperimental untuk penerapanBentengdalam anti-penuaan dan mengobati penyakit pikun tertentu.

Klik untuk mengetahui manfaat dan efek samping radikal bebas

1 Bahan dan metode

1.1 Bahan

1.1.1 Obat dan reagen:Bentengdeserticola YC Ma direbus dalam air 3 kali, rebusan digabungkan, dipekatkan hingga volume yang sesuai, dan sejumlah etanol ditambahkan. Setelah didiamkan selama 24 jam, disaring. Filtrat diuapkan hingga tidak ada alkohol. Siapkan dengan air kukus sebelum menggunakan 0,25 persen ~0,5 persen konsentrasi. ml mengandung obat mentah sekitar lg). Luminol (luminol), ®National E Merck produk perusahaan Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), standar tetra etoksi propana, semuanya adalah Sigma Produk perusahaan, garam, benzalkonium, Institut Penelitian Biokimia Guangming Changzhou; sikloheksana, produk dari Reagen Shanghai No. 1; Asam tiobarbiturat, produk dari Reagen Shanghai No. 2, LuzhanSuperoksidaDismutase, Shanghai Chinese Academy of Sciences Produk dari Institut Produk Biokimia.

Benteng

1.1. 2 Instrumen Beckman LS-98OO33 hanya menghitung kilau cair, Shimadzu RF-540 spektrofotometer fluoresensi, 752 ultraviolet gratings spectrophotometer-G1-20Sentrifugasi berpendingin berkecepatan tinggi, CPS-1A penghancur ultrasonik.

1.1.3 Hewan tikus ICR, 2 bulan, dengan berat 20±2g, disediakan oleh Pusat Hewan Eksperimental Jiangsu.

1.2 metode

Mencit dibagi menjadi kontrol (tidak masuk lingkungan Q), model, dan kelompok obat, masing-masing 10 ekor, fast water eating tanpa pembatasan. Kelompok obat dibagi menjadi dua kelompok dosis, Volume 2, Edisi 7, 1994, Chinese Journal of Chinese Materia MedicaBentengekstrak100 dan 200 mg/kg (setara dengan obat mentah 20 dan 4Qg/kg) masing-masing diberi makan. Kelompok kontrol dan kelompok model diberi normal saline dengan volume yang sama setiap hari. Kelompok administrasi dan kelompok model diberi O, lingkungan (0,9 X 10-^Oaft degree), terus menerus 2. Hari. Pengujian masing-masing regangan jari dilakukan pada hari ke-21 percobaan.

1. 2.1 Uji Daya Tahan Masukkan mencit pada masing-masing kelompok di atas ke dalam air sedalam 40cm dan 12±l. Dalam wadah Water®L, mulailah mengatur waktu sampai tenggelam ke dasar dan tidak bergerak, yaitu waktu berenang tikus.

   
   

1.2.2 Uji tahan panas Mouse disetel ke 15 terlebih dahulu. Berenang di air selama 2 menit, lalu masukkan freezer 15P untuk mengamati waktu pembekuan lengkap.

1.2.3 Uji toleransi hipoksia atmosfer Masukkan gluten kecil ke dalam botol mulut lebar 250ml yang diisi dengan natrium-kapur, dan catat waktu kelangsungan hidup tikus di setiap kelompok setelah penyegelan.

1.2.4 Penentuan otak tipe B monoamine oxidase (MACXB) Menurut literatur metode oral, ambil seluruh otak tikus, tambahkan sejumlah 0.2mol/L buffer fosfat (PH7.4) yang telah didinginkan sebelumnya. ), homogenat, dan ultrasound (24kC) Hancurkan 3 kali, total dua kali, dengan interval 30sr1000r/menit, 0C selama 30 menit, ambil supernatan pada 17000r/min, 4C selama 30 menit, buang supernatan dan ambil endapannya, dan gunakan jumlah yang sesuai. .2mo(/L PH7.4) Asam disangga dan disuspensikan kembali untuk membuat larutan fermentasi kasar. Ambil larutan fermentasi kasar dalam jumlah yang sesuai, tambahkan 16mmol/L benzamidine 0.3ml, gunakan buffer fosfat di atas untuk membuat 3mL, dan gunakan drum asam fosfat 3ml larutan buffer digunakan sebagai tabung kosong. Semua tabung reaksi ditempatkan pada suhu 37. Kocok dalam penangas air selama 3 jam, keluarkan, tambahkan 6 persen asam peroksi untuk menghentikan reaksi, kemudian tambahkan 3m [sikloheksana, kocok hingga tercampur, sentrifus pada 1000r/menit selama 1 Omin, dan angkat Absorbansi larutan bening diukur pada 242nm, dan tabung kosong harus tetap hangat sebelum menambahkan amina Cina. Kekeruhan protein ditentukan dengan metode Folin-fenol, dengan albumin serum sapi sebagai protein standar. Satu unit aktivitas enzim dan satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai 37P menghasilkan jumlah enzim dengan perubahan absorbansi 0,01/3 jam.'

1. 2. 5 Serumsuperoksidadismutase(SOD) penentuan aktivitas (5 mu I, serum tikus 10M, ditambahkan ke campuran luminescent (dicampur dengan 0, 1mmol/L luminol dan 0,1mmol/L hipoksantin) Dalam 980", simpan dalam inkubator 37C selama 20 menit. Setelah mengeluarkannya, tambahkan Huang Guanyin oksidase untuk memulai reaksi. Dalam media flash cair Beckman LS~98OO, jumlah pendaran pada akhir 1 menit dihitung berdasarkan derajat deteksi foton tunggal. Com digunakan sebagai unit. Laju penghambatan luminesensi dihitung dengan kelompok serum inferior sebagai blanko. Selain itu, standarsuperoksidadismutasikonsentrasi (absis) dan laju penghambatan pendaran (koordinat) digunakan sebagai standar penentuan kadar protein seperti sebelumnya. 1. 2.6 Penentuan Lipid Peroksida (LPO) dalam Plasma, Otak, dan Hati Ambil 50 kaleng plasma tikus, homogenkan hati dan otak (gunakan 0.2mol/L buffer fosfat pH7.4 , dalam homogenizer Dibuat dalam konsentrasi 10 persen) setiap 50 leluhur, tambahkan l/24mol/L asam sulfat 4ml, 1 persen asam fosfat 0,5ml, dicampur dan ditempatkan selama 5 menit, disentrifugasi pada 1000r/mm selama 10 menit, dan aspirasi supernatan. Tambahkan 2ml l/24mol/L asam sulfat dan 0,3ml kalsium fosfat 10 persen ke dalam endapan, aduk rata, sentrifus pada 1000r/menit, dan tambahkan 1ml air pengecut yang ditahan ke endapan, aduk rata untuk membentuk suspensi, tambahkan patah barbital Pereaksi asam 1ml, pada 95. Setelah pendinginan selama 14 dalam penangas minyak, tambahkan 5ml n-butanol, aduk rata *100Or/mnt sentrifugasi 10mtn, ambil fase n-butanol, dan ukur intensitas fluoresensi pada RF{{ 33}}Spektrofotometer OS (panjang gelombang eksitasi 515mn, panjang emisi 553nm), Selain itu, gunakan standar tetra etoksi propana dan intensitas fluoresensi relatif sebagai kurva standar.

   
   

2. 

2 hasil

2.1 Dampak uji daya tahan tikus yang dilukai oleh radikal bebas

Waktu berenang mencit pada kelompok model secara signifikan lebih pendek dibandingkan dengan kelompok kontrol, sedangkan waktu berenang pada kelompok pemberian berlangsung lebih lama, dan kelompok dosis tinggi mirip dengan kelompok kontrol (Tabel 1).

Tabel 1: PengaruhBentengpada uji ketahanan renang model tikus cedera makam gratis

2.2 Dampak pada kemampuan untuk tetap hangat

Tikus pada kelompok model membeku dengan cepat pada suhu rendah, dan waktu yang lebih singkat dibandingkan dengan kelompok kontrol, sedangkan waktu pembekuan pada kelompok dua dosisBentengtidak hanya lebih panjang dari kelompok model tetapi juga lebih panjang dari kelompok kontrol, menunjukkan bahwaBentengtidak hanya memiliki efek anti radikal bebas kerusakan tetapi juga memiliki efek yang jelas. Meningkatkan kemampuan untuk tetap hangat dari dingin (Tabel 2).

Tabel 2: PengaruhBentengpada kemampuan Senhan pada model tikus cedera baik gratis

2.3 Dampak pada kemampuan menahan hipoksia pada tekanan atmosfer

Setelah pemberianBenteng, tikus bertahan di bawah tekanan normal dan hipoksia.Bentengefek pada kemampuan model tikus cedera jenis bebas Senhan secara signifikan lebih lama daripada kelompok model dan juga lebih tinggi daripada kelompok kontrol, menunjukkan bahwaBentengdapat meningkatkan toleransi tikus terhadap hipoksia. Angkatan (Tabel 3)

Tabel 3:Benteng's model tikus kerusakan radikal bebas

2.4 Dampak pada vitalitas MAO-B

Setelah menghirup O2, aktivitas MAO-B jaringan otak dari kelompok model secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok pendamping, dan peningkatan aktivitas MAO-B dari kelompok pemberian secara signifikan dihambat.

Tabel 4: PengaruhBentengpada aktivitas 1SB tipe monoamine oxide vine (MAO~B) pada model tikus bebas cedera makam

2. 5 Dampak pada vitalitas SOD

Tingkat penghambatan chemiluminescence serum pada kelompok model secara signifikan lebih rendah daripada kelompok lain, dan aktivitas SOD secara signifikan menurun. Aktivitas SOD kelompok obat meningkat secara signifikan, dan kelompok dosis tinggi lebih tinggi daripada kelompok kontrol (lihat tabel 5 di bawah).

Tabel 5: Model serumsuperoksidaAktivitas dismutase (SOD) paling keras2.6 Pengaruhnya terhadap kandungan lipid peroksida (ZLPO)

2.6 Kandungan lipid peroksida (LFO) dalam plasma, hati dan jaringan otak dari kelompok model meningkat secara signifikan, dan kandungan LPO menurun secara signifikan setelah pemberian. Dosis besar dan kelompok dosis telah mengurangi LPO di jaringan otak ke tingkat kelompok kontrol (Tabel 6).

Tabel 6: Pengaruh daging Axun pada plasma, hati, dan tingkat lipid peroksida (LPO) pada model tikus dari kerusakan radikal bebas

3 Diskusi

Penuaan merupakan fenomena positif dalam proses kehidupan. Obat tradisional ibu pertiwi telah mengumpulkan pengalaman yang kaya dan sumber obat di tahun anti-penuaan. Dalam beberapa tahun terakhir, para sarjana domestik telah berfokus untuk menemukan obat anti-penuaan yang efektif dari pengobatan tradisional Tiongkok. Saat ini, teori radikal bebas penuaan tubuh semakin banyak dilirik. MeskipunRadikal bebasdihasilkan dalam tubuh dalam kondisi normal, sel-sel jaringan dilindungi karena pembuangan SOD dan sistem enzim toksisitas anti-oksigen lainnya secara terus-menerus. Oa adalah oksidan kuat. , Dapat memulai reaksi radikal bebas dalam tubuh. Inhalasi oksigen yang berlebihan menyebabkan pembentukanRadikal bebasdi dalam tubuh, yang melebihi kemampuan anti-toleransi sistem prasasti tubuh, menyebabkan kerusakan asam nukleat, protein, asam amino, karbohidrat, dan senyawa lipid, sehingga merusak pembentukan dan fungsi sel, dan menyebabkan penuaan . Percobaan ini menunjukkan bahwa setelah menghirup oksigen7, kekuatan fisik tikus, kemampuan untuk tetap hangat, dan toleransi terhadap hipoksia semua berkurang, mirip dengan kinerja penurunan fungsi fisiologis hewan tua. Hal ini menunjukkan bahwa tikus muda dapat menyebabkan model penuaan setelah menerima stimulasi d.Bentengtelah secara signifikan meningkatkan perubahan dalam indikator di atas.

SuperoksidaRadikal bebasada dalam tubuh untuk waktu yang singkat dan terutama dihilangkan oleh SOD. Umumnya tingkat atau dicerminkan dengan mengukur aktivitas SOD. Berbagai antioksidan dalam tubuh tikus yang menua secara alami dan tikus yang rusak akibat radikal bebas berkurang, Aktivitas merumput berkurang, sehingga mengurangi kemampuan mengais.Radikal bebas, menyebabkan peningkatan kandungan peroksida lipid. Aktivitas tipe B monoamine oxidase (MA0-B) di otak meningkat seiring bertambahnya usia. MAOB adalah kontrol utama dari jam biologis penuaan di hipotalamus pusat. Jam kerja terkait erat dengan penuaan. . Aktivitas MA0-B di otak tikus dalam kelompok model eksperimental ini meningkat, menunjukkan perubahan biokimia yang konsisten dengan hewan yang menua.