Signifikansi Prediktif Ekspresi Protein 8 Terkait Myeloid Ginjal pada Pasien Dengan Obesitas- Atau Tipe 2 Penyakit Ginjal Terkait Diabetes

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Takashige Kuwabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imamaki¹, Akira Ishii¹, Kenichi Koga¹, Akira Sugawara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Ueshima³, Takashi Morikawa⁵, Yoshio Konishi⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nishiyama⁶, Kazuwa Nakao^1,2, Masashi Mukoyama¹

¹Departemen Kedokteran dan Ilmu Klinis, Sekolah Pascasarjana Kedokteran Universitas Kyoto, Kyoto, Jepang,

²Pusat Inovasi Medis, Fakultas Kedokteran Universitas Kyoto, Kyoto, Jepang,

³Departemen Penelitian EBM, Institut Kemajuan Ilmu Klinis dan Terjemahan, Rumah Sakit Universitas Kyoto, Kyoto, Jepang,

⁴Departemen Nefrologi, Rumah Sakit Palang Merah Osaka, Osaka, Jepang,

5 Divisi Nefrologi dan Hipertensi, Rumah Sakit Umum Kota Osaka, Osaka, Jepang,

6 Departemen Farmakologi, Sekolah Kedokteran Universitas Kagawa, Kagawa, Jepang

Abstrak

Latar Belakang dan Tujuan: Kami telah melaporkan bahwa reseptor seperti tol 4 (TLR4) dan salah satu ligan endogennya, protein terkait myeloid 8 (MRP8 atau S100A8), memainkan peran penting dalam perkembangan nefropati diabetik pada tikus. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi pentingnyaginjalEkspresi MRP8 pada pasien dengankegemukan- atau terkait diabetes tipe 2penyakit ginjal. Metode: Pada subjek diabetes, obesitas, atau kontrol, mRNA MRP8 dan tingkat ekspresi protein dalam sampel biopsi ginjal ditentukan oleh RT-PCR waktu nyata dan imunohistokimia (n=28 dan 65, masing-masing), dan hubungannya dengan baseline dan parameter prognostik dianalisis. Efek MRP8 pada ekspresi gen pro-inflamasi diperiksa menggunakan makrofag. Hasil:GinjalGen MRP8 dan tingkat ekspresi protein meningkat pada kelompok obesitas atau diabetes dibandingkan dengan kelompok kontrol. Di antara semua subjek, dengan analisis regresi linier univariat, glomerulus MRP8-jumlah sel positif dan MRP tubulointerstitial8-area positif pada awal keduanya, masing-masing, berkorelasi tidak hanya dengan berbagai faktor risiko yang diketahui untuk nefropati diabetik (seperti seperti tekanan darah sistolik, proteinuria, dan kreatinin serum) tetapi juga dengan tingkat glomerulosklerosis dan fibrosis tubulointerstitial. Faktor independen yang memprediksi kadar protein urin setahun kemudian diperiksa dengan analisis multivariat, dan termasuk glomerulus MRP8-jumlah sel positif (b=0.59, P,0.001), proteinuria (b=0.37, P=0.002) dan tekanan darah sistolik (b=0.21, P=0.04) pada awal, setelah penyesuaian untuk risiko yang diketahui faktor. Ekspresi MRP8protein diamati pada CD68-makrofag positif dan tubulus atrofi. Dalam makrofag tikus yang dikultur, ekspresi sitokin proinflamasi yang diinduksi protein MRP8 juga memicu induksi otomatis MRP8 dengan cara yang bergantung pada TLR4-.

Kesimpulan: Ekspresi MRP8 glomerulus tampaknya terkait dengan perkembangan proteinuria pada pasien obesitas atau diabetes tipe 2, kemungkinan dengan menginduksi perubahan inflamasi pada makrofag melalui pensinyalan TLR4.

Efek cistanche: mengobati penyakit ginjal

pengantar

Peradangan kronis memainkan peran penting dalam patogenesis diabetes ataukegemukandan komplikasi kardiovaskularnya [1]. Keterlibatan reseptor imun bawaan dan ligan endogen dalam proses peradangan kronis telah terlibat. Myeloid-related protein 8 (MRP8, juga dikenal sebagai S100A8 atau calgranulin A) awalnya diidentifikasi sebagai protein pengikat kalsium sitoplasma dalam neutrofil dan monosit [2] dan telah dikenal luas sebagai ligan endogen kuat untuk reseptor seperti tol 4 (TLR4). ) pada berbagai penyakit termasuk syok septik, gangguan vaskular dan autoimun [3,4,5]. Kami baru-baru ini mengusulkan bahwa pensinyalan MRP8/TLR4 memainkan peran penting dalam perkembangan nefropati diabetik yang diinduksi hiperlipidemia [6]. Makrofag glomerulus dan sel duktus pengumpul merupakan sumber utama MRP8 pada model tikus nefropati diabetik [6] dan fibrosis ginjal [7]. Kadar plasma MRP8, yang biasanya membentuk kompleks heterodimerik dengan pasangan pengikat MRP14 dalam aliran darah, meningkat pada subjek obesitas [8,9]. Namun, belum ada laporan yang menyelidiki ekspresi ginjal MRP8 pada pasien dengan obesitas atauTipe2diabetesdan hubungannya dengan prognosis ginjal.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui tingkat ekspresi mRNA dan protein MRP8 padaginjalpasien Jepang dengan nefropati diabetik (DN),kegemukanglomerulopati terkait (ORG), sindrom nefrotik perubahan minimal (MCNS) atau kelainan glomerulus minor (MGA), yang semuanya didiagnosis dengan biopsi ginjal, dan untuk mengevaluasi apakah ekspresi MRP8 ginjal dapat memprediksi hasil ginjal.

Cistanche dapat meningkatkan fungsi ginjal

Bahan dan metode

Pernyataan etika

Penelitian pada manusia dilakukan sesuai dengan prinsip-prinsip yang dinyatakan dalam Deklarasi Helsinki dan telah disetujui oleh Komite Etik Penelitian Manusia dari Fakultas Kedokteran Universitas Kyoto dan Rumah Sakit Umum Kota Osaka. Semua peserta memberikan persetujuan tertulis. Protokol penelitian hewan telah disetujui oleh Komite Penelitian Hewan dari Sekolah Pascasarjana Kedokteran Universitas Kyoto (Nomor Izin: Med Kyo 13318). Semua operasi hewan dilakukan di bawah anestesi natrium pentobarbital, dan semua upaya dilakukan untuk meminimalkan penderitaan.

mata pelajaran

Pasien proteinurik dengankegemukanatau diabetes tipe 2 yang menjalani biopsi ginjal terdaftar dalam penelitian ini. Pasien dengan penyakit menular, kanker, penyakit hati atau penyakit kolagen dikeluarkan. Proteinuria didefinisikan sebagai protein urin lebih besar dari 0.5 g/g kreatinin atau albumin urin lebih besar dari 300 mg/g kreatinin dalam setidaknya dua pengukuran berturut-turut.Kegemukandidefinisikan sebagai indeks massa tubuh (BMI) lebih besar dari 25.0 (kg/m²). Diabetes tipe 2 didiagnosis sesuai dengan kriteria Organisasi Kesehatan Dunia. Pengukuran biokimia saat masuk untuk biopsi ginjal digunakan sebagai karakteristik dasar untuk analisis cross-sectional. Perkiraan laju filtrasi glomerulus (eGFR) dihitung menggunakan persamaan prediksi sederhana yang diusulkan oleh Japanese Society of Nephrology: eGFR (ml/min/1,73 m²)=1946 [usia (tahun)]20.287 6 [kreatinin serum (mg perdl)]21.094 60.739 (untuk wanita), yang merupakan modifikasi lokal MDRD yang divalidasi [ 10]. Konsentrasi serum kreatinin diukur menggunakan metode enzimatik.

Untuk imunohistokimia, 65 pasien Jepang yang menjalani biopsi ginjal di Departemen Kedokteran dan Ilmu Klinis, Rumah Sakit Universitas Kyoto antara tahun 2000 dan 2011 dianalisis. Diagnosis yang terbukti dengan biopsi dari semua pasien selama periode ini tercantum dalam Tabel S1 di File S1. Subyek yang diperiksa dalam pekerjaan ini termasuk DN (n=19), ORG (n=10) dan subjek kontrol non-obesitas, non-diabetes yang didiagnosis sebagai MGA(n=19) atau MCNS (n=17). Beberapa kasus dalam kategori ini dikeluarkan karena sampel residu yang tersedia mengandung kurang dari 10 glomeruli. Definisi DN terdiri dari (1) durasi lebih dari 5 tahun setelah onset diabetes, (2) adanya mikro atau makro-albuminuria, (3) perubahan histopatologi yang sesuai dengan DN seperti penebalan membran basal glomerulus, ekspansi mesangial, nodular sklerosis (nodul Kimmelstiel-Wilson) dan/atau hyalinosis arteriolar, dan (4) pengecualian penyebab lain untuk gangguan ginjal [11]. ORG didefinisikan secara morfologis sebagai glomerulosklerosis segmental fokal dan/atau glomerulomegali pada subjek yang memiliki keduanya.kegemukandan proteinuria, yang definisinya dijelaskan di atas [12,13].

Untuk analisis ekspresi mRNA, sampel berkualitas rendah, di mana level 18S ribosomal RNA (rRNA) lebih rendah dari batas sensitivitas deteksi oleh RT-PCR waktu nyata, dikeluarkan. Subjek yang terdaftar terdiri dari 22 pasien diabetes tipe 2 yang menjalani biopsi ginjal di Rumah Sakit Umum Kota Osaka antara tahun 2000 dan 2010, dan 6 subjek kontrol non-diabetes, yang memiliki MGA yang terbukti biopsi.

Tabel 1 dan 2 merangkum karakteristik klinis dasar dari pasien yang diperiksa dengan imunohistokimia atau analisis ekspresi gen. Untuk mikroskop cahaya, spesimen jaringan diproses sesuai dengan prosedur standar. Bagian diwarnai dengan hematoxylin-eosin, periodik asam-Schiff, periodik-asam methenamine silver atau Masson trichrome (Gbr. S1). Rasio jumlah glomeruli dengan sklerosis global di antara jumlah glomeruli total dan area relatif fibrosis tubulointerstisial dievaluasi secara independen oleh dua ahli patologi yang tidak mengetahui diagnosis dan data klinis.

Efek cistanche: mengobati penyakit ginjal

Definisi hasil ginjal

Dua indikator prognostik berikut diperiksa dengan regresi linier dan analisis regresi logistik, masing-masing: (1) tingkat proteinuria yang diukur pada satu tahun pasca-biopsi, dan (2) kejadian ginjal yang didefinisikan sebagai peningkatan tahunan kreatinin serum sebesar 0,50 persen dari awal atau inisiasi dialisis kronis.

Imunohistokimia

Imunohistokimia MRP8 dan CD68 dilakukan menggunakanginjalbagian (ketebalan 4 mm) difiksasi dengan 4 persen buffer paraformaldehyde. Setelah pengambilan antigen oleh buffer sitrat, bagian ginjal diinkubasi dengan serum kambing 10 persen, diikuti oleh MRP8 anti-manusia tikus (1:100; biomedis BMA, Augst, Swiss)[14] atau antibodi CD68 anti-manusia tikus (1:50 ; DAKO, Ely, Inggris), masing-masing. Antibodi primer divisualisasikan dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase lobak dan 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako USA, Carpinteria, CA). Nuclei di counterstain dengan hematoxylin. MRP8-sel positif dihitung di lebih dari 10 glomeruli, dan MRP8-area positif di tubulointerstitium diukur secara kuantitatif untuk mendapatkan rata-rata untuk setiap subjek menggunakan perangkat lunak MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, USA ). Kolokalisasi sel positif CD68- dan MRP8-dievaluasi dengan bagian serial. Tidak ada sinyal MRP8 atau CD68 pada kontrol negatif yang diwarnai tanpa antibodi pertama (Gbr. S2). Dengan preinkubasi antibodi anti-MRP8 dengan kelebihan 20 molar protein MRP8 manusia rekombinan (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) pada 4uC semalam, pewarnaan berkurang secara nyata, jika tidak sepenuhnya, lebih lanjut mendukung spesifisitas antibodi (Gbr.S3) .

Cistanche untuk mengobati ginjal

Evaluasi ekspresi mRNA

Bekuginjalbagian dipisahkan menjadi jaringan glomeruli dan nonglomerulus dengan laser menangkap mikro-diseksi (LM200; Olympus, Tokyo, Jepang) seperti yang dijelaskan sebelumnya [15]. Total RNA diekstraksi dengan RNeasy mini kit (Qiagen, Tokyo, Jepang). Tingkat ekspresi mRNA ditentukan oleh TaqMan real-time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) [16,17]. Tingkat ekspresi semua gen dinormalisasi oleh tingkat 18S rRNA (kontrol internal). Lihat Tabel S2 di File S1 untuk urutan primer dan probe. Eukariotik 18S rRNA dideteksi dengan Reagen Uji TaqMan yang Dikembangkan sebelumnya (Biosistem Terapan).

Tabel 1. Karakteristik klinis dasar pasien pada biopsi ginjal yang dianalisis ekspresi protein MRP8 dengan imunohistokimia.

MGA: kelainan glomerulus minor, MCNS: sindrom nefrotik perubahan minimal, ORG:kegemukanglomerulopati terkait, DN: nefropati diabetik, BMI: indeks massa tubuh, BUN: nitrogen urea darah, CRP: protein C-reaktif. Data berarti 6 SD. *Perbedaan keseluruhan antara kelompok MGA, MCNS, ORG dan DN dibandingkan olehANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

Pengobatan MRP8 untuk makrofag

Makrofag yang berasal dari sumsum tulang dihasilkan dari tikus tipe liar atau tikus knockout (KO) TLR4 [18] pada latar belakang genetik C57BL/6J (Oriental BioService, Kyoto, Jepang) seperti yang dijelaskan sebelumnya [6]. Secara singkat, setelah lisis sel darah merah, sel-sel sumsum tulang disuspensikan kembali dalam media yang mengandung 20 persen serum janin anak sapi dan 50 ng/ml faktor perangsang koloni-makrofag manusia rekombinan (Peprotech, Rocky Hill, NJ, USA), dan dikultur di 37uC dalam 5 persen CO2 atmosfer. Pada hari ke 7, makrofag diinkubasi dengan tikus rekombinan MRP8 (Abnova, Taipei, Taiwan) atau kendaraan selama 4 jam. Polymyxin B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Jepang) ditambahkan ke masing-masing sumur untuk meminimalkan kontaminasi endotoksin seperti yang dijelaskan sebelumnya [3,19]. Noendotoksin terdeteksi pada setiap konsentrasi MRP8 yang diuji selanjutnya inkubasi dengan 25 mg/ml polimiksin B oleh ToxinSensorChromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (GenScript, Piscataway, NJ, USA). Total RNA dari sel diekstraksi dengan RNeasy MiniKit, dan tingkat ekspresi mRNA interleukin-1 beta (IL-1b), tumor necrosis factor-alpha (TNFa), dan MRP8 ditentukan oleh TaqMan real-time RT-PCR. Tingkat ekspresi semua gen dinormalisasi oleh tingkat GAPDH hewan pengerat (kontrol internal, Reagen Uji TaqMan Pra-Dikembangkan). Urutan Primer dan Probe untuk PCR waktu nyata tercantum dalam Tabel S2 di File S1.

Analisis statistik

Data dinyatakan sebagai sarana 6 SD, atau sarana interval kepercayaan 695 persen (CI) bila sesuai. Untuk perbandingan antara empat kelompok, digunakan ANOVA satu arah atau dua arah dengan analisis post-hoc Bonferroni, dan variabel kategori dibandingkan menggunakan uji x2. Uji-t tidak berpasangan siswa diterapkan untuk perbandingan antara dua kelompok yang sesuai. Koefisien korelasi Spearman diperkirakan untuk menentukan hubungan antara dua variabel. Untuk menguji efek dari kovariat awal yang menentukan tingkat ekspresi MRP8 glomerulus atau tubulointerstitial atau tingkat protein urin satu tahun setelah biopsi, analisis regresi linier univariat dan multivariat dilakukan. Analisis regresi logistik digunakan untuk menganalisis variabel penjelas yang memprediksi terjadinya kejadian ginjal. Semua data dianalisis menggunakan perangkat lunak StatView 5.0 (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA). Nilai P,0.05 dianggap signifikan secara statistik.

Efek cistanche: mengobati penyakit ginjal

Hasil

Kami membandingkan tingkat ekspresi protein MRP8 diginjalantara DN, ORG, dan non-obesitas, kelompok kontrol non-diabetes (MGA dan CNS). Analisis imunohistokimia mengungkapkan bahwa baik glomerulus MRP8-jumlah sel positif (Gbr. 1A) dan MRP tubulointerstitial8-area positif (Gbr. 1B) di DN secara signifikan lebih besar daripada kelompok lain termasuk MGA, MCNS, dan ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

Tabel 2. Karakteristik klinis dasar pasien pada biopsi ginjal yang dianalisis ekspresi mRNA MRP8 dengan RT-PCR waktu nyata.

Asosiasi antaraginjalSinyal MRP8 dan parameter klinis dasar pada saat biopsi ginjal dianalisis secara cross-sectional (Tabel 3). Dengan analisis univariat, ekspresi protein MRP8 glomerulus dan/atau tubulointerstisial secara signifikan berkorelasi dengan usia, tekanan darah sistolik dan diastolik, protein urin, kadar kreatinin serum, kolesterol BUN dan HDL, eGFR, dan luasnya glomerulosklerosis global dan fibrosis tubulointerstisial. Parameter ini diperiksa lebih lanjut dengan analisis multivariat setelah mengecualikan tekanan darah diastolik, eGFR dan BUN karena kolinearitas. Persentase fibrosis tubulointerstitial secara independen berkorelasi dengan sinyal glomerularMRP8 (b=0.62, P yang disesuaikan=0.02) dan sinyal tubulointerstitialMRP8 (b=0.85, P yang disesuaikan ,0,001), masing-masing. Selain itu, sinyal MRP8 tubulointerstitial juga secara independen berkorelasi dengan proteinuria dasar (b=0.20, P yang disesuaikan=0.01). Analisis plot yang tersebar antara sinyal MRP8 di glomeruli atau tubulointerstitium dan parameter klinis menunjukkan bahwa MCNSgroup memiliki pola distribusi yang berbeda dari kelompok lain, terutama untuk protein urin dan kadar kolesterol LDL serum (Gbr. S5A-D, S6A-D). Pengecualian kelompok MCNS meningkatkan korelasi antara sinyal MRP8 dan protein urin atau kadar kolesterol LDL serum (Gbr. S5E-F, S6E-F). Oleh karena itu, kami melakukan sub-analisis yang mengecualikan pasien MCNS dan menemukan bahwa protein urin merupakan faktor independen yang berkorelasi dengan sinyal MRP8 glomerulus dengan analisis multivariat (Tabel 4; b=0.36, P yang disesuaikan=0.03 ).

Selanjutnya, kami melakukan regresi linier atau analisis regresi logistik untuk mengidentifikasi faktor penjelas yang memprediksi hasil ginjal yaitu tingkat proteinuria setahun kemudian dan kejadian ginjal dalam setahun. Karena ada hubungan yang baik antara sinyal MRP8 glomerulus dan tubulointerstitial (Gbr. S7; R=0.67,P,0.001), parameter ini secara alternatif terdaftar dalam analisis lebih lanjut . Kami mengevaluasi hubungan antara parameter dasar dan protein urin pada 1 tahun setelah biopsi ginjal dengan analisis regresi berganda. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 5, sinyal MRP8 glomerulus (b=0.59, P yang disesuaikan, 0,001) merupakan faktor prediktif untuk tingkat proteinuria setahun kemudian, serta tekanan darah sistolik awal (b {{13} }.21, P yang disesuaikan=0.04) dan proteinuria dasar (b=0.37, P yang disesuaikan=0.002). Parameter ini tidak tergantung pada faktor risiko nefropati diabetik lain yang diketahui termasuk disfungsi ginjal (kreatinin serum) dan luasnya sklerosis global dan fibrosis tubulointerstitial [11,21-24]. Di sisi lain, sinyal MRP8 tubulointerstitial (b=0.34, P yang disesuaikan=0.09) bukan merupakan faktor prediktif independen untuk kadar protein urin setahun kemudian. Kejadian ginjal terjadi pada 7 pasien (6 pada kasus DN dan 1 pada kasus ORG) dalam waktu satu tahun setelah biopsi ginjal. Dengan analisis univariat, tidak hanya tingkat glomerulosclerosis dan fibrosis tubulointerstitial, dan sinyal MRP8 glomerulus dan tubulointerstitial, tetapi juga tekanan darah, disfungsi ginjal, dan kadar protein urin pada awal merupakan faktor prediktif yang signifikan untuk terjadinya kejadian ginjal. Namun, dengan analisis multivariat, kovariatnya dibatalkan satu sama lain (Tabel S3 dalam File S1), kemungkinan karena korelasi yang tinggi di antara parameter ini.

Akhirnya, kami memeriksa potensi MRP8 sebagai ligan endogen untuk TLR4 menggunakan makrofag yang dikultur. Dalam makrofag yang diturunkan dari sumsum tulang dari tikus tipe liar, peningkatan regulasi gen sitokin proinflamasi yang diinduksi protein MRP8 seperti IL-1b danTNFa dan juga memicu induksi otomatis MRP8, dengan cara yang bergantung pada dosis antara 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Efek MRP8 ini ditekan kira-kira oleh dua pertiga dalam makrofag yang diperoleh dari tikus TLR4 KO (P,0,01) (Gbr. 3).

Gambar 1. Analisis imunohistokimia dan mRNA untuk MRP8 inginjalsampel biopsi. Kuantifikasi MRP glomerulus{{0}}jumlah sel positif (A) dan MRP tubulointerstitial8-area positif (B). ekspresi mRNA MRP8 dalam fraksi glomerulus dan non-glomerulus (C). Bar terbuka: kontrol non-obesitas, non-diabetes yang MGA atau MCNS, bar tertutup: ORG atau DN (A–C). Gambar representatif dari grup MGA, MCNS, ORG, dan DN (D–G). MGA: kelainan glomerulus minor, MCNS: sindrom nefrotik perubahan minimal, ORG: glomerulopati terkait obesitas, DN: nefropati diabetik. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Diskusi

Penelitian ini telah menunjukkan bahwa MRP8 banyak diekspresikan dalam glomeruli dan tubulointerstitium pasien dengan DNA dibandingkan dengan ORG dan kontrol non-obesitas, non-diabetes (MGA dan MCNS). Selanjutnya, pada subjek ORG, tingkat ekspresi MRP8 cenderung lebih tinggi daripada subjek MGA atau MCNS. Dalam penyelidikan cross-sectional awal termasuk semua subjek, dengan analisis regresi linier univariat, glomerulus MRP8-jumlah sel positif dan MRP tubulointerstitial8-area positif keduanya, masing-masing, berkorelasi tidak hanya dengan berbagai faktor risiko yang diketahui untuk nefropati diabetik (seperti tekanan darah sistolik, proteinuria, dan kreatinin serum) tetapi juga dengan tingkat glomerulosklerosis dan fibrosis tubulointerstitial. Dengan analisis multivariat, area positif MRP tubulointerstitial 8- secara signifikan berkorelasi dengan proteinuria dan fibrosis tubulointerstisial. MRP glomerulus 8-jumlah sel positif secara signifikan berkorelasi dengan fibrosis tubulointerstitial dalam analisis primer, dan dengan proteinuria dalam sub-analisis tidak termasuk kelompok MCNS. Imunohistokimia menunjukkan bahwa MRP8 diekspresikan, setidaknya sebagian, oleh makrofag yang mengekspresikan CD68( plus ) dan tubulus atrofi. Temuan ini meningkatkan kemungkinan bahwaginjalSinyal MRP8 di glomeruli atau tubulointerstitium dapat berfungsi sebagai penanda baru nefropati diabetik.

Gambar 2. Lokalisasi ekspresi protein CD68 dan MRP8 pada bagian serial kasus nefropati diabetik. Ekspresi CD68(A, B) dan ekspresi MRP8 (C, D) pada spesimen ginjal berpasangan (A dan C, orB dan D). Panah menunjukkan kolokalisasi sinyal CD68 dan MRP8.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

Dalam studi prognostik, analisis multivariat mengungkapkan bahwa kadar protein urin setahun setelah biopsi ginjal secara independen terkait dengan jumlah sel positif MRP8-glomerulus, protein urin, dan tekanan darah sistolik pada awal. Sebagai catatan, ekspresi MRP8 glomerulus menunjukkan korelasi terkuat dengan protein urin setahun kemudian (b= 0.87), bahkan lebih kuat dari protein urin awal (b=0.78), dengan analisis univariat. Hal ini sebagian karena ekspresi MRP8 glomerulus sebagian besar tidak meningkat pada bentuk proteinuria 'jinak' seperti yang diamati pada pasien SNKM, yang kadar proteinurianya sangat tinggi saat didiagnosis dengan biopsi ginjal tetapi biasanya diselesaikan dalam waktu satu tahun setelah memulai terapi imunosupresif. Temuan ini menunjukkan bahwa ekspresi MRP8 glomerulus mungkin memiliki sifat prediktif yang unik sebagai penanda penyakit, yang tidak dapat digantikan oleh proteinuria dasar atau analisis patologis rutin yang mengevaluasi glomerulosklerosis global dan fibrosis tubulointerstitial. Selain itu, kami berspekulasi bahwa ekspresi MRP8 glomerulus bukanlah penanda atau pengamat sederhana tetapi pemain aktif dalam cedera glomerulus seperti yang dibahas di bawah ini.

Koefisien determinasi (R2) yang dihitung dengan parameter penjelas yang terdaftar dalam analisis regresi berganda adalah 0.52* dan 0.74#. y, tahun; TD, tekanan darah; gCr, g kreatinin; T-chol, kolesterol total; HDL-Chol, kolesterol HDL; LDL-kol, kolesterol LDL; GS, glomerulosklerosis; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

Tabel 4. Sub-analisis hubungan antara parameter klinis awal dan sinyal MRP8, setelah pengecualian kelompok MCNS.

Tabel 5. Analisis regresi berganda untuk identifikasi faktor yang memprediksi kadar protein urin 1 tahun setelah biopsi ginjal

Gambar 3. Efek MRP8 pada makrofag yang berasal dari sumsum tulang. Makrofag yang diturunkan dari sumsum tulang (BMDM) dirangsang dengan MRP8 tikus rekombinan selama 4 jam. Bilah kesalahan menunjukkan 95 persen CI dan analisis statistik dilakukan dengan nilai yang diubah log. ANOVA dua arah mengungkapkan efek signifikan dari genotipe, konsentrasi MRP8 dan interaksinya untuk ekspresi ketiga gen (P,0.001 untuk semua perbandingan). n=4. WT, tipe liar; KO, KO; IL-1b, interleukin 1 beta; TNFa, faktor nekrosis tumor-alfa. *P,0.01 di antara konsentrasi yang berbeda, #P,0.01 di antara genotipe.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

Dalam upaya lain dari studi longitudinal, analisis regresi logistik gagal menemukan prediktor independen untuk terjadinya kejadian ginjal dalam waktu satu tahun. Kami berspekulasi bahwa ini sebagian karena ekspresi MRP8 tubulointerstitial dan fibrosis tubulointerstitial adalah dua prediktor kuat untuk kejadian ginjal dalam analisis univariat tetapi signifikansinya dibatalkan satu sama lain dalam analisis multivariat. Kedua parameter ini menunjukkan korelasi yang kuat (R=0.68, P,0.001) (Gbr. S8), menunjukkan bahwa kedua parameter ini mungkin setara dengan memprediksi kejadian ginjal. Memang, ekspresi MRP8 interstisial menunjukkan pola yang sangat mirip dengan fibrosis interstisial yang dievaluasi dengan pewarnaan trikrom Masson. Jumlah MRP8 interstisial sangat bergantung pada sinyal positif di tubulus atrofi daripada di makrofag, yang fiturnya berbeda dari MRP8 glomerulus dalam distribusi belang-belang. Selain itu, ukuran sampel yang kecil, periode pengamatan yang singkat, dan beberapa subjek yang mengalami kejadian ginjal mungkin telah mengurangi daya deteksi. Sejak ekspresi MRP8 dalam sel epitel tubulus memainkan peran penyebab dalam perkembangan peradangan tubulointerstitial pada model tikus fibrosis ginjal, analisis lebih lanjut akan diperlukan untuk memperjelas peran MRP8 tubulointerstitial di DN.

Sesuai dengan penelitian kami sebelumnya [6], mRNA MRP8 diregulasi terutama di fraksi glomerulus subjek DN manusia dibandingkan dengan subjek kontrol dengan MGA. Di sisi lain, ekspresi protein MRP8 diamati tidak hanya di glomerulus tetapi juga di tubulointerstitium. Dalam hal ini, perlu dicatat bahwa ada dua pola pewarnaan MRP8 yang berbeda di tubulointerstitium DN. Salah satunya adalah pewarnaan yang intens dan fokal pada tubulus yang sangat atrofi. Yang lainnya adalah pewarnaan ringan yang didistribusikan di sepanjang batas sikat tubulus proksimal, yang juga ditemukan di ORG dan MCNS. Sinyal yang terakhir kemungkinan mewakili protein MRP8 yang berasal dari darah dan diserap kembali oleh tubulus proksimal, yang tidak boleh disertai dengan peningkatan ekspresi mRNA MRP8. Mengenai protein selain MRP8, kami dan yang lain baru-baru ini melaporkan fenomena serupa dari deteksi protein imunoreaktif di tubulus proksimal yang disebabkan oleh reabsorpsi tetapi tidak oleh sintesis ginjal [25,26]. Di sisi lain, karena sedikit pewarnaan MRP8 yang tersisa dalam tes penyerapan antibodi, terutama pada lesi eksudatif glomerulus dan lesi fibrotik dengan jaringan parut yang parah di sekitar tubulus atrofi, keberadaan sinyal non-spesifik tidak dapat sepenuhnya diabaikan (Gbr. S3).

Sinyal MRP8 glomerulus terutama menunjukkan pola tanda baca pada subjek DN (Gbr. 1, Gbr. S4). Karena CD68 dan MRP8 keduanya dideteksi oleh antibodi monoklonal tikus, lokalisasi molekul-molekul ini dievaluasi oleh bagian serial, bukan dengan imunostaining ganda. Pola pewarnaan MRP8 kompatibel dengan pola pewarnaan pada gangguan ginjal inflamasi lainnya termasuk IgAnephritis [27], glomerulonefritis membranoproliferatif [14], dan glomerulonefritis terkait ANCA [20], di mana makrofag disarankan sebagai sumber utama MRP8, seperti yang kami laporkan dalam model hewan pengerat [6]. Selain itu, neutrofil dapat dianggap sebagai sumber lain dari MRP8 yang mempengaruhi komplikasi vaskular [28]. Saat ini, kami sedang menyelidiki mekanisme molekuler mengapa MRP8 sebagian besar diregulasi dalam sel garis keturunan myeloid yang menginfiltrasi glomeruli. Studi in vitro mengungkapkan bahwa MRP8 menginduksi ekspresi sitokin inflamasi dan juga mempotensiasi ekspresi MRP8 itu sendiri dalam makrofag dengan cara yang bergantung pada TLR4-. Selain itu, sel-sel positif MRP8-tidak ada pada lesi sklerosis nodular, menunjukkan bahwa MRP8 glomerulus mungkin mencerminkan kerusakan glomerulus yang sedang berlangsung [20]. Yang penting, penelitian manusia skala terbesar melaporkan bahwa ekspresi gen MRP8 dalam sel mononuklear darah pasien diabetes tipe 1 meningkat secara signifikan pada subjek dengan komplikasi diabetes termasuk nefropati [29].

Karena penghambatan sistem renin-angiotensin (RAS) merupakan penentu penting dari hasil ginjal, kami memeriksa efek blokade RAS padaginjalekspresi MRP8. Kami tidak menemukan perbedaan yang signifikan dalam ekspresi mRNA MRP8 ginjal antara pasien DN yang diobati dengan atau tanpa blokade RAS (Gbr. S9), mungkin karena kasus yang diobati dengan blokade RAS cenderung memiliki hipertensi dan proteinuria yang lebih parah daripada kasus tanpa blokade RAS.

Pada manusia dan tikus yang obesitas, peningkatan kompleks MRP8/14 plasma mungkin mencerminkan tingkatkegemukandan berasal dari adiposit serta leukosit [8,9]. Kasus ORG kami memiliki pewarnaan MRP8 ringan di tubulus proksimal, menunjukkan peningkatan kadar plasma MRP8. Sebaliknya, tidak ada korelasi yang signifikan antara ekspresi MRP8 tubulointerstitial dan indeks massa tubuh (Gbr. S6G). Oleh karena itu, ekspresi MRP8 lokal dalamginjaldapat berfungsi lebih baik sebagai penanda untuk cedera ginjal daripada untukkegemukan[8,9].

Cistanche untuk meningkatkan disfungsi ginjal

Penelitian kami memiliki beberapa keterbatasan. Jumlah sampel setiap kelompok yang diteliti kecil. Subyek non-identik terdaftar dalam mRNA dan analisis imunohistokimia. Karena kami hanya menganalisis pasien yang menjalani biopsi ginjal, komposisi pasien yang diselidiki di sini mungkin tidak mencerminkan pasien diabetes tipe 2 umum atau kronis umum.ginjalmata pelajaran penyakit. Meskipun usia tidak dipertahankan sebagai faktor independen yang terkait dengan sinyal MRP8 dalam data kami (Tabel 3), diketahui bahwa penuaan terkait dengan peradangan kronis [30]. Efek usia tidak dapat diabaikan sepenuhnya. Meskipun sebagian besar sinyal MRP8 hilang dalam tes penyerapan antibodi, ada beberapa sinyal positif yang tersisa, yang mungkin disebabkan oleh pengikatan antibodi pertama yang tidak spesifik. Seperti dibahas di atas, penyelidikan ekspresi MRP8 ginjal dengan biopsi ginjal membantu kita memahami patofisiologi dan prognosis penyakit ginjal kronis, terutama yang terkait dengankegemukandan diabetes, tetapi memiliki kelemahan untuk penggunaan rutin dan berulang di klinik rawat jalan

Singkatnya, penelitian ini menunjukkan bahwa ekspresi MRP8 diginjalmencerminkan status patologis saat ini dan juga memprediksi hasil ginjal pada pasien dengankegemukanataudiabetes tipe 2. Investigasi lebih lanjut yang mempelajari kadar MRP8 urin di antara pasien obesitas atau diabetes dalam skala besar mungkin diperlukan

informasi pendukung

Gambar S1 Foto representatif yang menunjukkan bagian biopsi ginjal dari pasien DN yang diwarnai dengan (A) asam periodik Schiff, (B) perak methenamine asam periodik atau (C) Masson trichrome. Rasio jumlah glomeruli dengan sklerosis global (panah) di antara jumlah glomeruli total dan area relatif fibrosis tubulointerstisial masing-masing adalah 33 persen dan 65 persen , pada pasien ini. (BERTENGKAR)

Gambar S2 Imunohistokimia untuk protein MRP8 dan CD68 pada pasien DN. Foto di kolom kanan menunjukkan eksperimen kontrol negatif tanpa antibodi pertama. (TIF)

Gambar S3 Tes absorpsi antibodi untuk pewarnaan MRP8. PBS: phosphate-buffered saline, rhMRP8: recombinant humanMRP8.(TIF)

Gambar S4 Foto representatif ekspresi MRP8 dalam grup MGA, MCNS, ORG, dan DN.(TIF)

Gambar S5 Korelasi antara MRP glomerulus8-jumlah sel positif dan parameter klinis. Nilai log-transformed dari sinyal MRP8 digunakan. Korelasi dianalisis menggunakan semua 4 kelompok (A-D, G) atau 3 kelompok tidak termasuk kelompok MCNS (E, F). Lingkaran terbuka: kelainan glomerulus minor (MGA), lingkaran tertutup: sindrom nefrotik perubahan minimal (MCNS), segitiga terbuka:kegemukanglomerulopati terkait (ORG), segitiga tertutup: nefropati diabetik (DN).(TIF)

Gambar S6 Korelasi antara MRP tubulointerstitial8-area positif dan parameter klinis. Nilai log-transformed dari sinyal MRP8 digunakan. Korelasi ini dianalisis menggunakan semua 4 kelompok (A-D, G) atau 3 kelompok tidak termasuk kelompok MCNS (E, F).(TIF)

Gambar S7 Korelasi antara ekspresi MRP8 glomerulus dan tubulointerstitial. Nilai log-transformed dari sinyal MRP8 digunakan. (TIF)

Gambar S8 Korelasi antara MRP tubulointerstitial8-area positif dan fibrosis tubulointerstisial. Nilai log-transformed sinyal MRP8 digunakan.(TIF)

Gambar S9 Ekspresi mRNA ginjal MRP8 pada pasien DN dengan atau tanpa blokade renin-angiotensin.NS: tidak signifikan. n=15 (Ya), 6 (Tidak). Di antara 22 kasus DN, informasi tentang pengobatan tidak tersedia pada satu pasien. (TIF)

Tabel Pendukung File S1.

Tabel S1, Diagnosis patologis dari semua kasus yang menjalani biopsi ginjal di Departemen Kedokteran dan Ilmu Klinis, Rumah Sakit Universitas Kyoto antara tahun 2000 dan 2011. Tabel S2, Primer dan urutan pemeriksaan untuk TaqMan RT-PCR waktu nyata. Tabel S3, Analisis regresi logistik untuk terjadinya kejadian ginjal dalam satu tahun. (DOC)Ucapan Terima Kasih Kami berterima kasih kepada S. Tanaka atas saran statistik, Y. Ogawa, N.Igarashi, dan C. Kimura untuk bantuan teknis, dan A. Yamamoto dan SOgino untuk bantuan sekretaris. Kontribusi Penulis Menyusun dan merancang eksperimen: TK KM MK HY MI AN KNMM. Melakukan percobaan: TK HI AI KK TM YK MI AN. Analisis data: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Kontribusi reagen/bahan/alat analisis: TK KM. Menulis makalah: TK KMMM.

Efek cistanche: mengobati penyakit ginjal

Referensi

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) Diabetes tipe 2 sebagai penyakit inflamasi.Nat Rev Immunol 11: 98–107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L, dkk. (1987) Protein pengikat dua kalsium dalam makrofag infiltrasi rheumatoid arthritis. Sifat 330: 80-82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C, dkk. (2007) Mrp8 danMrp14 adalah aktivator endogen dari Toll-like receptor 4, memicu syok yang diinduksi endotoksin yang mematikan. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M, dkk. (2009) Protein terkait myeloid-8/14 sangat penting untuk respons biologis terhadap cedera vaskular. Sirkulasi 120: 427–436.

5. Pecundang K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V, dkk. (2010) Toll-like receptor 4 ligan Mrp8 dan Mrp14 sangat penting dalam pengembangan autoreactive CD8 plus sel T. Nat Med 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, dkk. (2012) Eksaserbasi nefropati diabetik oleh hiperlipidemia dimediasi oleh reseptor seperti Toll 4 pada tikus. Diabetes 55: 2256–2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Sel epitel saluran pengumpul ginjal mengatur peradangan pada kerusakan tubulointerstitial pada tikus. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T, dkk. (2012) Tingkat sirkulasi kompleks S100A8/A9 (calprotectin) yang tinggi pada pria Jepang dengan adipositas perut dan ekspresi S100A8 dan S100A9 yang tidak teratur dalam jaringan adiposa tikus gemuk. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP, dkk. (2009) Calprotectin—penanda baru darikegemukan. PLoS Satu 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K, dkk. (2009) Revisi persamaan untuk estimasi GFR dari serum kreatinin di Jepang. Apakah JGinjalDis53: 982–992.

11. Kotor JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, dkk. (2005) Nefropati diabetik: diagnosis, pencegahan, dan pengobatan. Perawatan Diabetes 28:164-176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)Kegemukanglomerulopati terkait: epidemi yang muncul.GinjalInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)Kegemukan, proteinuria, dan progresi gagal ginjal. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M, dkk. (2005) Ekspresi protein 8 terkait myeloid pada makrofag adalah penanda prognostik yang berguna untuk disfungsi ginjal pada anak-anak dengan MPGN tipe 1. Am JGinjalDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M, dkk. (2011) Angiotensinogen urin mencerminkan aktivitas sistem renin-angiotensin intrarenal pada pasien dengan nefropati IgA. Transplantasi Dial Nephrol 26: 170-177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K, dkk. (2012) Reseptor peptida natriuretik guanylyl cyclase-A melindungi podosit dari cedera glomerulus yang diinduksi aldosteron. J Am Soc Nephrol 23: 1198–1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T, dkk. (2008) Overekspresi faktor pertumbuhan jaringan ikat dalam podosit memperburuk nefropati diabetik pada tikus.GinjalInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T, dkk. (1999) Kecanggihan: Tikus yang kekurangan reseptor seperti tol 4 (TLR4) hiporesponsif terhadap lipopolisakarida: bukti untuk TLR4 sebagai produk gen Lps. J Imunol162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X, dkk. (2007) Peran jalur Toll-like receptor 4/NF-kappaB dalam perubahan inflamasi yang diinduksi asam lemak jenuh dalam interaksi antara adiposit dan makrofag. Arterioskler Tromb Vasc Biol 27: 84–91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N, dkk. (2013) Ekspresi leukosit dan serum S100A8/S100A9 mencerminkan aktivitas penyakit pada vaskulitis dan glomerulonefritis terkait ANCA.GinjalInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) Faktor risiko utama nefropati pada diabetes mellitus tipe 2 adalah kadar kolesterol plasma, tekanan darah rata-rata, dan hiperglikemia. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR, dkk. (2000) Asosiasi tekanan darah sistolik dengan komplikasi makrovaskular dan mikrovaskular diabetes tipe 2 (UKPDS 36): studi observasional prospektif. BMJ 321: 412-419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Nefropati tipe-2 diabetes mellitus. J Assoc Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Korelasi klinis dan histologis dari penurunan fungsi ginjal pada pasien diabetes dengan proteinuria. Diabetes 43: 1046–1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, dkk. (2012) Liverangiotensinogen adalah sumber utama angiotensin II ginjal. J Am Soc Nephrol23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, dkk. (2009) tingkat lipocalin terkait neutrofil gelatinase urin mencerminkan kerusakan glomeruli, tubulus proksimal, dan nefron distal.GinjalInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, dkk. (2009) Akumulasi makrofag mengekspresikan protein terkait myeloid 8 terkait dengan perkembangan perubahan sklerotik pada anak-anak dengan nefropati IgA.Tohoku J Exp Med 218: 49-55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S, dkk. (2013) Hiperglikemia mempromosikan myelopoiesis dan merusak resolusi aterosklerosis. Metab Sel 17: 695–708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X, dkk. (2013) Ekspresi Gen inflamasi Diregulasi dalam Darah Perifer Pasien dengan Diabetes Tipe 1. Perawatan Diabetes.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Pengobatan evolusioner: dari sistem model kerdil hingga orang berusia seratus tahun yang sehat? Sains 299: 1342–1346.

Kutipan: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H, dkk. (2014) Signifikansi Prediktif dariGinjalEkspresi Protein 8 Terkait Myeloid pada Pasien denganKegemukan- atau Penyakit Ginjal Terkait Diabetes Tipe 2. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Editor: Utpal Sen, Universitas Louisville, Amerika Serikat

Diterima 11 September 2013; Diterima 14 Januari 2014; Diterbitkan 18 Februari 2014

Hak Cipta: 2014 Kuwabara dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan penulis dan sumber aslinya dicantumkan.

Pendanaan: Pekerjaan ini sebagian didukung oleh Grant-in-Aid for Diabetic Nephropathy and Nephrosclerosis Research dari Kementerian Kesehatan, Tenaga Kerja dan Kesejahteraan Jepang (untuk KM), hibah penelitian dari Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Olahraga, Sains Jepang , dan Teknologi (ke TK, KM, dan MM), dari Japan Foundation for Applied Enzymology (ke TK) dan dari Smoking Research Foundation (ke MM). Para penyandang dana tidak memiliki peran dalam desain studi, pengumpulan data, dan analisis, keputusan untuk menerbitkan, atau persiapan naskah.

Kepentingan yang Bersaing: Para penulis telah menyatakan bahwa tidak ada kepentingan yang bersaing.

* Email: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp