Pola Ekspresi MRNA Arc di Otak Tikus Mengikuti Penarikan Ganda Informasi yang Diperoleh Secara Sosial Berbasis Ketakutan dan Penghargaan(2)

Busur dalam mengingat asosiasi ketakutan yang diperoleh langsung dan secara sosial.

Kemampuan kami untuk menginterpretasikan temuan kami tentang tikus kami yang mengalami penarikan kembali rasa takut yang diperoleh melalui pembelajaran langsung secara signifikan dibantu oleh seberapa baik karakteristik sistem yang mendasari pembelajaran dan penarikan rasa takut. Sejumlah area yang kami periksa terlibat dalam pembelajaran ketakutan atau kepunahan (yang terakhir kami anggap dimulai di Demonstran, karena mereka telah menjalani presentasi CS tanpa penguatan selama FCbP) khususnya ACC, PLC, dan ILC30–32 ,37. Meskipun kumpulan penelitian yang sedikit lebih kecil tersedia mengenai mekanisme saraf ketakutan sosial, model pembelajaran ketakutan sosial yang diusulkan mengandaikan bahwa sistem serupa mendasari pembelajaran ketakutan sosial dan langsung28. Temuan kami menunjukkan tidak ada peran keseluruhan dari ACC, PLC, atau ILC baik mengingat asosiasi rasa takut yang diperoleh secara sosial atau asosiasi rasa takut yang diperoleh secara langsung (walaupun lihat juga "Diskusi" tentang perbedaan jenis kelamin dalam aktivitas PLC di bawah). Namun, seperti yang dibahas di bagian sebelumnya, kemungkinan ini hanya menunjukkan bahwa Arc tidak berfungsi sebagai indikator aktivitas yang andal dalam kasus ini. Pemeriksaan area-area ini pasca-ketakutan kemungkinan besar akan menceritakan kisah yang berbeda. Penelitian eksplisit yang sulit dalam aktivitas Arc setelah mengingat rasa takut terbatas, ada beberapa penelitian sebelumnya yang dapat diambil. Chia dan Otto35 menemukan bahwa pada tikus pengkondisian rasa takut memiliki ekspresi protein Arc yang secara signifikan lebih tinggi di hippocampus dorsal dan ventral bila dibandingkan dengan kontrol tanpa kondisi. Khususnya, Arc dikuantifikasi dengan analisis Western Blot dari hippocampus ventral dan dorsal yang dihomogenkan dalam percobaan ini, sehingga lokalisasi yang tepat dari aktivitas hippocampal tidak tersedia. Temuan ini mungkin menunjukkan bahwa, seperti dalam STFP, transkripsi Arc mungkin diinduksi di area tertentu di hippocampus pada 48- titik waktu penarikan kembali untuk memori rasa takut yang diisyaratkan. Hasil nol kami mungkin juga berpotensi karena gagal mengingat di pihak pengamat, karena tidak seperti penelitian sebelumnya di lab12-14,26 kami, kami tidak melihat pembekuan yang lebih tinggi pada CS pada pengamat dibandingkan dengan kontrol. Apakah ini sebenarnya karena gagal mengingat pengamat atau karena prosedur penarikan CS tunggal kami dan pra-paparan kontrol ke CS tidak jelas.

Apa yang dilakukan cistanche-Meningkatkan Memori

Peran potensial korteks orbitofrontal ventral dalam mengingat informasi yang diperoleh secara sosial.

Dalam studi tengara, Lesburguères et al.24. dapat menunjukkan bahwa sementara aktivitas dorsal hippocampal (dHPC) diperlukan untuk akuisisi dan penarikan jangka pendek dari STFP yang diperoleh, memori STFP akhirnya dipindahkan ke OFC untuk penyimpanan jangka panjang. Selain itu, Lesburguères et al. dapat menunjukkan bahwa penandaan neuron di korteks orbitofrontal selama akuisisi STFP diperlukan untuk penyimpanan jangka panjang dari preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial dan bahwa gangguan pada aktivitas OFC setelah akuisisi mengganggu daya ingat 30 hari pasca akuisisi (meskipun lihat juga38). Temuan ini akan menyarankan komunikasi antara dHPC dan OFC pada hari atau minggu pertama setelah akuisisi STFP dan reorganisasi OFC yang sedang berlangsung pada titik waktu ini untuk mengakomodasi penyimpanan memori STFP jangka panjang. Sementara kurangnya perbedaan keseluruhan dalam ekspresi OFC Arc ventral atau lateral antara Demonstran, Kontrol, dan Pengamat dalam penelitian ini akan menantang interpretasi itu, kami mendeteksi korelasi negatif yang signifikan antara ukuran gabungan kami dari keseluruhan kinerja pembelajaran sosial dan sel pengekspresian busur ganda. di VOC. Selain itu, korelasi ini tidak diamati antara metrik serupa yang dibentuk untuk Peraga berdasarkan kinerja tes pilihan dan pembekuan ke CS. Karena ketergantungan pada informasi yang diperoleh secara sosial dapat dianggap sebagai memilih antara informasi sosial yang berpotensi tidak dapat diandalkan dan bahaya belajar melalui pengalaman langsung, peran suara yang menghambat dalam ekspresi informasi yang diperoleh secara sosial ini mungkin terkait dengan peran nilai OFC yang lebih luas. pengambilan keputusan berbasis-39–42.

Eksperimen Cistanche deserticola

Perbedaan jenis kelamin dalam transkripsi Arc.

beberapa alasan statistik dan metodologis. Pertama, ukuran sampel kami yang terkadang rendah untuk betina, dengan ukuran kelompok untuk kombinasi jenis kelamin/kondisi mulai dari n=2 hingga n=9 setelah pemindahan tikus tanpa bagian yang cukup layak (walaupun terutama, n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Meskipun ada sedikit penyelidikan tentang perbedaan jenis kelamin dalam ekspresi Arc, ada beberapa temuan yang menunjukkan bahwa tikus betina mengekspresikan lebih banyak Arc di daerah tertentu dari hippocampus dorsal setelah paparan berulang ke lingkungan yang relatif diperkaya43, meskipun kecenderungan ke arah yang berlawanan juga telah terjadi. diamati pada tikus yang diuji tanpa intervensi perilaku sebelumnya43. Temuan kami mungkin menunjukkan bahwa perbedaan jenis kelamin dalam transkripsi Arc hadir setelah tugas atau pengalaman perilaku umum tertentu. Di wilayah CG1 ACC, kami menemukan bahwa laki-laki, secara keseluruhan, memiliki lebih banyak sel yang aktif pada kedua titik waktu, mungkin karena Transkripsi awal yang lebih tinggi di ACC laki-laki atau peningkatan transkripsi mengikuti perubahan konteks/paparan ulang (kandang rumah → STFP ruang pengujian → ruang pengkondisian) karena ada beberapa bukti — meskipun terbatas — untuk peran ACC dalam mengingat ingatan kontekstual jangka panjang44. Tikus jantan juga menunjukkan jumlah Arc nuklir dan ganda yang lebih tinggi di ILC. Ini mungkin dijelaskan oleh peran ILC dalam kepunahan dan penghambatan ketakutan31,45,46 dan gangguan yang diamati dalam penghambatan dan kepunahan ketakutan yang dipelajari pada wanita47-49. Jika ini masalahnya, itu menimbulkan pertanyaan mengapa tidak ada perbedaan keseluruhan yang diamati antara tikus Kontrol, Pengamat, dan Peraga kami jika ekspresi Busur dipicu oleh aktivitas infralimbik yang ditimbulkan oleh CS.

Wanita menunjukkan tingkat ekspresi Arc yang lebih tinggi untuk semua hitungan di vCA3. Perbedaan jumlah nuklir berpotensi menjadi hasil dari aktivasi yang lebih besar setelah paparan CS atau paparan ulang ke ruang pengkondisian pada wanita, sedangkan tingkat ekspresi Arc sitoplasma yang lebih tinggi dalam vCA3 setelah tugas makanan dapat menunjukkan perbedaan jenis kelamin dalam peran Arc dalam vCA3 baik pengenalan makanan "familiar" (bahkan untuk Pengamat aromanya akan familier karena interaksi mereka sebelumnya dengan Demonstran) atau penghargaan/proses konsumsi umum. Wanita itu juga menunjukkan pelabelan ganda yang jauh lebih tinggi di vCA3 — meskipun efek ini kecil — mungkin juga menunjukkan peningkatan umum dalam transkripsi vCA3 Arc pada wanita. Tikus betina juga menampilkan transkripsi Arc nuklir yang lebih tinggi di vOFC dan tingkat ganda mRNA Arc yang lebih tinggi di lOFC, meskipun hasil ini lebih sulit untuk ditafsirkan karena rendahnya jumlah tikus kontrol betina yang jaringan otaknya cukup utuh untuk menghitung OFC (n=2 dan 3 untuk OFC lateral dan ventral, masing-masing). Data dari tikus Kontrol yang tersedia menunjukkan kemungkinan peningkatan produksi mRNA OFC Arc yang dimediasi seks, tetapi mungkin saja efek ini tidak akan bertahan dengan n yang lebih tinggi. Khususnya, beberapa penelitian sebelumnya telah menunjukkan perbedaan struktural dalam OFC dan perbedaan fungsional dalam perilaku yang dimediasi OFC antara hewan pengerat betina dan jantan50–52.

bubuk ekstrak Cistanche

Mungkin perbedaan jenis kelamin kami yang paling menarik di Arc mRNA terdeteksi di PLC. Tere, laki-laki secara keseluruhan menunjukkan jumlah sel yang mengekspresikan Arc lebih tinggi di sitoplasma dan di sitoplasma dan nukleus (pengekspresian ganda) daripada perempuan. Kami juga menemukan bahwa sementara Demonstran dan Pengamat pria tidak menunjukkan peningkatan transkripsi Arc di atas Kontrol pada titik waktu mengingat-takut, Demonstran wanita menunjukkan transkripsi Arc nuklir yang jauh lebih tinggi daripada Kontrol sementara Pengamat wanita berada di tengah-tengah antara keduanya. Efek seks ini mungkin didorong oleh defisit yang disebutkan di atas yang diamati dalam penghambatan dan kepunahan rasa takut yang dipelajari yang diamati pada wanita 47-49, karena penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa PLC secara kritis terlibat dalam merangsang perilaku rasa takut45,53,54. Selain itu, beberapa penelitian telah melibatkan perbedaan dalam pensinyalan dan struktur PLC sebagai faktor pendorong potensial untuk gangguan spesifik jenis kelamin ini dalam penghambatan dan kepunahan rasa takut55-58. Meskipun kami tidak menemukan perbedaan yang signifikan dalam perilaku pembekuan wanita dan pria terhadap isyarat, peningkatan regulasi mRNA Arc sebagai respons terhadap CS terkait ketakutan yang tidak diperkuat pada Demonstrasi khusus wanita dapat menjadi indikasi restrukturisasi saraf diferensial dalam PLC yang pada akhirnya dapat menyebabkan perbedaan jenis kelamin dalam ekspresi ketakutan.

Kesimpulan

Sementara temuan penelitian ini tidak memperluas pemahaman kita tentang mekanisme otak yang terlibat dalam pengambilan ingatan yang diperoleh secara sosial sebanyak yang kita harapkan, hasil kami memang memberikan beberapa wawasan potensial tentang perbedaan jenis kelamin dalam ekspresi Arc serta peran (atau ketiadaan) dari Arc dalam mengingat memori jangka panjang. Temuan kami menunjukkan bahwa — setidaknya di korteks prefrontal dan vCA3 — induksi aktivitas otak melalui mengingat informasi yang diperoleh secara sosial tampaknya tidak cukup untuk menyebabkan peningkatan ekspresi Arc dibandingkan yang disebabkan oleh prosedur pengujian saja. Namun, validitas dari takeaway ini tentu saja dipertanyakan oleh hasil tes perilaku kami yang tidak meyakinkan, karena retensi yang buruk dari informasi yang diperoleh secara sosial dapat menjadi kesalahan karena kurangnya efek ini. Kami berteori bahwa ini mungkin karena restrukturisasi saraf minimal dipicu saat penarikan terjadi sebelum konsolidasi sistem. Penelitian lebih lanjut tentang peran protein Arc dalam proses mengingat pembelajaran sosial masih diperlukan mengingat bahwa hasil perilaku kami tidak menunjukkan pembelajaran sosial pada tikus Pengamat. Penelitian di masa depan yang memeriksa tumpang tindih dalam mekanisme saraf yang mengatur berbagai bentuk pembelajaran sosial mungkin juga mendapat manfaat dari penyertaan hewan yang menjalani prosedur akuisisi dan hewan yang menjalani prosedur penarikan jarak jauh, karena titik waktu ini mungkin lebih cenderung menyebabkan perubahan plastisitas dan dengan demikian mengubah ekspresi Arc. .

Suplemen Cistanche di dekat saya-Meningkatkan Memori

Klik di sini untuk melihat produk-produk Cistanche Improve Memory

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Metode

Subyek. Subjek adalah tikus Sprague-Dawley jantan dan betina yang dibiakkan di rumah di Pusat Sumber Daya Hewan Universitas Texas di Austin. Tujuh pasangan berkembang biak menghasilkan subjek untuk Kelompok 1 (n=27 betina, n=36 jantan), dan delapan pasangan berkembang biak menghasilkan subjek untuk Kelompok 2 (n=27 jantan, tidak ada betina). Peternak betina adalah tikus Sprague-Dawley (antara 215 dan 260 g pada saat kedatangan) yang diperoleh dari Charles-Rivers (Wilmington, MA, USA) sedangkan peternak jantan adalah tikus Sprague-Dawley (antara 230 dan 300 g pada saat kedatangan) yang diperoleh dari Harlan (sekarang Envigo) (Houston, TX, AS). Semua tikus ditempatkan dengan pasangan kandang lawan jenis sampai betina menunjukkan tanda-tanda kehamilan yang jelas, di mana betina ditempatkan sendiri-sendiri. Anak anjing disapih menjadi tiga serangkai saudara kandung sesama jenis pada hari ke-21 pascakelahiran (P21) untuk membantu memastikan pembelajaran ketakutan sosial26. Anak anjing cadangan disapih menjadi triad atau diad dengan tikus yang tidak berkerabat dan digunakan dalam eksperimen lain di University of Texas di Austin. Anak anjing betina dari kelompok kedua kami digunakan dalam percobaan lain. Anak anjing dibiarkan dewasa dengan gangguan minimal selain dari prosedur peternakan rutin (misalnya, perubahan kandang) sampai prosedur habituasi (triad betina) atau prosedur penilaian dominasi (triad jantan) dimulai (prosedur dominasi dan hasil yang dirinci dalam Bahan Pelengkap). Tikus kohort 1 memulai prosedur antara usia P106-P112 hari dan tikus kohort 2 dimulai antara usia P99-P118 hari. Semua subjek disimpan dalam 12-h siklus gelap-terang terbalik dengan lampu mati pada pukul 15.00. Semua prosedur eksperimental diselesaikan selama siklus gelap subjek di bawah lampu merah. Semua bagian dari percobaan ini dilakukan sesuai dengan Panduan Institut Kesehatan Nasional untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Eksperimental dan telah disetujui untuk digunakan oleh The University of Texas di Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Austin.

Peralatan dan rangsangan. Pengondisian rasa takut. Semua prosedur by-proxy pengondisian rasa takut dan pengondisian rasa takut diselesaikan di ruang pengkondisian standar (30,48 cm×25,4 cm×30,48 cm) yang terbuat dari dinding plexiglass bening di depan dan belakang, dua dinding baja di samping, dan langit-langit plexiglass dengan lubang di tengah. Lantai ruangan adalah deretan batang baja tahan karat yang terhubung ke generator kejut (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Semua ruangan ditutup dalam kotak isolasi akustik (Instrumen Coulbourn) dan diterangi dengan lampu merah internal. Perilaku direkam oleh kamera sirkuit tertutup (Panasonic™ WV-BP334) yang dipasang di atas ruang pendingin dengan lensa dimasukkan melalui lubang di langit-langit plexiglass. Kamar-kamar sepenuhnya dibersihkan dengan larutan alkohol 70 persen di antara setiap subjek. Semua pengiriman stimulus dikendalikan menggunakan perangkat lunak Freeze Frame (Coulbourn Instruments). CS adalah 20 batu (5 kHz, 80 dB) dan, dalam prosedur dengan beberapa presentasi CS, interval antar percobaan variabel (ITI) rata-rata 180 detik. Stimulus tanpa syarat (AS) adalah kejutan 1 mA dengan durasi 500 ms dan diakhiri bersama dengan stimulus terkondisi.

Transmisi sosial preferensi makanan. Semua prosedur STFP dilakukan di ruangan yang bersebelahan dengan ruangan yang berisi ruang pendingin. Diet baru disusun dengan mencampurkan 100 g makanan hewan pengerat 5LL2 Purina bubuk dengan 1 g bubuk kayu manis McCormick (diet Cin) atau 2 g bubuk kakao Hershey (diet Co). Makanan Biasa, yang diberikan kepada semua tikus selama periode pembatasan makanan dan untuk tikus Kontrol pada hari terakhir prosedur percobaan, adalah makanan hewan pengerat 5LL2 Purina bubuk murni. Semua makanan bubuk — baik selama pembatasan makanan maupun prosedur eksperimental — disajikan dalam cangkir makanan gantung yang dibuat dari 4 ons. stoples kaca dan 12-kawat utilitas baja pengukur. Gelas makanan dibilas dan kemudian dilap dengan larutan etanol 70 persen sebelum dicuci bersih dengan sabun dan air di antara setiap penggunaan. Semua fase penyempurnaan prosedur percobaan STFP berlangsung di kandang tikus standar (26,7 cm×48,3 cm×20,3 cm), dengan setiap tikus menerima kandang baru. Fase interaksi (fase akuisisi STFP) berlangsung di tempat sampah plastik besar (50,5 cm×39,4 cm×37,5 cm) dengan alas lantai serpihan kayu yang diganti di antara setiap kelompok. Tempat sampah plastik dibersihkan secara menyeluruh dengan Windex di antara setiap sesi.

Tinjauan desain eksperimental dan prosedur pembelajaran sosial.

(Lihat Gambar 2 untuk ikhtisar grafis).

Semua tikus dibatasi makanannya selama lima hari dan terbiasa dengan penanganan dan ruangan tempat prosedur STFP akan berlangsung selama empat hari segera sebelum hari pertama prosedur percobaan. Sementara prosedur pembiasaan berakhir sebelum hari pertama prosedur percobaan, pembatasan makanan berlanjut hingga akhir percobaan. Satu tikus dari setiap triad ditugaskan ke salah satu dari tiga kondisi: Demonstran, Pengamat, atau Kontrol. Kelompok 2 triad laki-laki telah dinilai dominasinya dan semuanya menunjukkan hierarki yang jelas dan ditugaskan sedemikian rupa sehingga tikus yang dominan adalah Demonstran dan bawahannya adalah Pengamat untuk meningkatkan transmisi sosial ketakutan13. Triad individu selanjutnya dibagi secara acak menjadi kelompok-kelompok di mana Demonstran dan Pengamat akan menerima tes pilihan pada penarikan STFP (Pilihan) dan kelompok di mana mereka hanya akan menerima makanan yang didemonstrasikan (Cin).

Pada hari pertama prosedur eksperimental, tikus yang ditugaskan pada kondisi Demonstran dipindahkan ke ruang pengkondisian rasa takut dan dibiarkan terbiasa selama 10 menit sebelum mereka dipaparkan ke 3 CS yang diakhiri dengan syok yang menyakitkan (lihat "Alat dan rangsangan" untuk spesifik). Mengikuti prosedur pengondisian rasa takut, para demostran dipindahkan kembali ke kandang asalnya. Pada hari ke-2 prosedur eksperimental, 24 jam setelah pengondisian rasa takut, Demonstran dikembalikan ke ruang pengkondisian dengan pasangan kandang mereka yang ditugaskan ke kondisi Pengamat dan menjalani prosedur FCbP (Gbr. 2). Segera setelah prosedur FCbP, tikus Pengamat dikembalikan ke kandangnya sementara Demonstran dipindahkan ke ruangan yang berdekatan dan diberi waktu 1 jam untuk mengkonsumsi bubuk chow yang dibumbui dengan kayu manis. Setelah satu jam berlalu, Pengamat dipindahkan ke tempat interaksi dengan demonstran mereka dan diizinkan untuk berinteraksi dengan mereka selama 30 menit untuk memungkinkan perolehan preferensi makanan yang ditularkan secara sosial. Penelitian sebelumnya dari lab kami telah memvalidasi titik waktu ini sebagai cukup untuk transmisi STFP33. Setelah itu, tikus Pengamat dikembalikan ke kandangnya sementara tikus Demonstran dipindahkan ke kandang tunggal untuk mencegah penularan STFP lebih lanjut ke Pengamat atau Kontrol. Pada hari ke-3 prosedur eksperimental, tikus kontrol dipindahkan ke ruang pengkondisian saja dan, setelah 10 menit pembiasaan ke ruang tersebut disajikan dengan tiga CS 20 detik tanpa syok yang menyertai. Hal ini dilakukan pada hari terpisah untuk meminimalkan kemungkinan feromon alarm yang tersisa—yang diketahui dilepaskan oleh tikus sebagai respons terhadap rangsangan yang mengancam dan memengaruhi pembelajaran yang sama59—masih ada di dalam bilik.

Pada hari terakhir percobaan, hari ke-4, penarikan kembali dimulai untuk preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial dan memori by-proxy pengondisian rasa takut/pengondisian rasa takut. Semua Pengamat dan Demonstran dari triad yang ditugaskan ke kondisi Pilihan diizinkan 10 menit akses ad libitum ke diet yang disukai kayu manis dan kakao, sementara Pengamat dan Demonstran dari triad yang ditugaskan ke kondisi Cin diberi akses ad libitum 10 menit ke diet kayu manis- hanya. Di semua triad, tikus kontrol diberi akses ad libitum 10 menit ke chow bubuk biasa. Segera setelah itu, tikus dikembalikan ke kandangnya dan dibiarkan tidak terganggu selama 10-min periode sebelum dipindahkan kembali ke ruang lab dan ditempatkan di ruang pengkondisian. Semua tikus kemudian diberi 3-periode pembiasaan menit ke dalam bilik sebelum disajikan dengan CS 20 detik tunggal. 5 menit setelah akhir CS, semua tikus ditidurkan melalui injeksi larutan pentobarbital dan fenitoin (Euthasol; Kesehatan Hewan Virbac) dan perfusi. Otak mereka kemudian diproses untuk ekspresi mRNA Arc. Mengingat perjalanan waktu prosedur terminal kami dan kerangka waktu migrasi yang diketahui dari Arc mRNA28, peningkatan ekspresi sitoplasma dari mRNA Arc akan disebabkan oleh prosedur penarikan STFP, sedangkan ekspresi nuklir akan disebabkan oleh prosedur penarikan kembali FC / FCbP, dengan sel yang menunjukkan aktivasi ganda memiliki telah diaktifkan pada kedua kerangka waktu (lihat Gambar 1; juga, lihat "Analisis jaringan" untuk perincian tentang perawatan dan pemrosesan jaringan).

cistanche hidup gurun

Prosedur.

Pembiasaan dan pembatasan makanan. Semua pembiasaan berlangsung tepat sebelum hari pertama prosedur percobaan. Habituasi terdiri dari setiap kandang tikus dipindahkan ke ruangan di mana semua prosedur percobaan STFP akan berlangsung dan diizinkan untuk membiasakan diri ke ruangan selama 15 menit. Selama periode ini, setiap tikus diambil dan ditangani oleh pelaku eksperimen yang akan menjalankan perilaku selama 2 menit untuk membiasakan mereka dengan penanganan dan individu tersebut. Semua prosedur habituasi dilakukan di ruangan gelap di bawah lampu merah, dan semua tikus mendapatkan 4 hari habituasi. Pembatasan makanan dimulai sehari sebelum pembiasaan dimulai dan bertahan hingga akhir percobaan. Pada awal pembatasan pakan, pelet makanan yang telah dimakan semua subjek dikeluarkan dari kandang. Selanjutnya, semua kandang diberi akses ad libitum setiap hari ke stoples gantung yang penuh dengan diet bubuk Purina 5LL2 di kandang mereka selama 1 jam. Tikus ditimbang setiap hari mulai dari awal pembatasan makanan sampai percobaan selesai untuk memastikan tidak ada penurunan berat badan yang tidak biasa.

Penilaian perilaku.

Semua penilaian perilaku untuk percobaan ini diselesaikan dengan menggunakan Perangkat Lunak Interaktif Penelitian Pengamatan Perilaku (BORIS)60.

Pengondisian rasa takut dengan penilaian kontak sosial proksi. Penelitian sebelumnya dari lab kami telah menunjukkan bahwa ada hubungan yang kuat antara jumlah rasa takut yang ditampilkan oleh pengamat pada tes memori jangka panjang dan waktu yang dihabiskan untuk berinteraksi dengan Demonstran mereka selama CS pada pria13 dan setelah CS pada wanita14,26. Dengan demikian, video fase akuisisi sosial dari pengondisian rasa takut oleh proksi diberi skor untuk interaksi sosial antara Pengamat dan Demonstran untuk setiap periode 20- selama presentasi CS dan periode 20- segera setelah setiap Presentasi CS untuk memberikan indeks sekunder akuisisi rasa takut. Kontak sosial dinilai ketika tikus Pengamat dan Peraga melakukan kontak selain lewat selama periode isyarat (selama kontak CS) atau dalam 20 detik setelah CS (kontak pasca CS). Persentase setiap periode penilaian yang dihabiskan untuk berhubungan dengan Demonstran dihitung. Data untuk persen kontak selama periode isyarat untuk laki-laki dan data untuk persen kontak segera setelah periode isyarat untuk perempuan ditarik dan digabungkan menjadi satu ukuran "kontak yang relevan" untuk digunakan dalam semua analisis statistik akhir.

Penilaian tes pilihan. Video tes pilihan untuk memulai penarikan kembali preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial diberi skor untuk jumlah waktu yang dihabiskan tikus tertentu untuk berinteraksi dengan cangkir makanan berdasarkan apakah itu berisi makanan yang didemonstrasikan/sudah dikonsumsi (diet Cin) atau novel diet (diet Co). Hal ini dilakukan sebagai pengukuran preferensi makanan sekunder yang potensial, karena kami mengantisipasi bahwa karena tes pilihan menjadi sangat singkat (10 menit) karena kebutuhan, kami mungkin tidak dapat mendeteksi preferensi berdasarkan jumlah yang dimakan saja. Interaksi dengan cangkir makanan dinilai setiap kali tikus secara fisik bersentuhan dengan dan tidak secara aktif menjauh dari cangkir (yaitu, kaki depan bersentuhan dengan toples, kepala di dalam toples, memanjat di atas toples, atau aktif makan). dari toples). Untuk analisis statistik, kami menghitung persentase waktu yang dihabiskan untuk berinteraksi dengan cangkir yang berisi diet tertentu berdasarkan jumlah total waktu yang dihabiskan untuk berinteraksi dengan salah satu cangkir (misalnya, untuk diet Cin, Persen waktu= TimeDiet Cin/ (TimeDiet Co ditambah TimeDiet Cin)). Sesi tes pilihan 10-menit penuh dinilai untuk semua tikus yang menjalaninya.

Analisis jaringan.

Untuk meminimalkan degradasi mRNA oleh ribonuclease (RNase), semua peralatan dan permukaan yang digunakan selama persiapan dan pemrosesan otak dibersihkan secara teratur dengan RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, USA) atau RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , AS).

Persiapan otak. Segera setelah eutanasia, subjek diberikan perfusi intrakardial menggunakan larutan paraformaldehyde (PFA) 4 persen. Otak kemudian diangkat dan direndam dalam PFA 4 persen untuk memungkinkan pasca fiksasi selama 24-48 jam. Setelah pasca-fiksasi selesai, otak dipindahkan ke larutan sukrosa 30 persen dalam saline yang mengandung fosfat untuk krioproteksi. Setelah otak tenggelam ke dasar vial, menunjukkan penyerapan sukrosa yang cukup untuk krioproteksi, mereka dibekukan dalam bubuk es kering dan dipindahkan ke freezer -80 derajat untuk disimpan sampai dipotong. Otak kemudian dipotong secara koronal pada mikrotom geser dengan ketebalan 30 µm menjadi enam seri (sehingga bagian berikutnya dalam satu seri terpisah 180 µm) dan segera dipasang dan dibiarkan mengering sebelum ditempatkan di ruang vakum dengan spons kelembaban di mana mereka ditempatkan. dibiarkan kering sepenuhnya selama 24 jam. Hanya bagian hippocampal (kira-kira − 3,2 hingga − 5,2 dari bregma) atau daerah prefrontal (kira-kira plus 3,7 hingga plus 1,4 dari bregma) yang berisi bidang minat yang dipotong dan diproses. Bagian yang dipasang kemudian ditempatkan dalam kotak slide bebas RNase yang disegel dan disimpan pada -80 derajat hingga diproses.

Pemrosesan jaringan. Semua prosedur dimodifikasi dari protokol yang digunakan dalam Lee et al.61 dan Petrovich et al.62. Sebelum pemrosesan jaringan, probe cRNA untuk mRNA Arc dibangun dimulai dengan plasmid yang berisi cDNA panjang penuh (~3.0 kbp) dari transkrip Arc. Untuk membuat probe, DNA pertama-tama dipotong dengan mencampurkan plasmid dengan buffer pencernaan 10x (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, USA), enzim restriksi 10xEcoRI (Biolabs), dan air bebas nuklease yang dimurnikan sebelum diinkubasi pada suhu 37 derajat selama 2 jam. Pemotongan DNA yang tepat diverifikasi menggunakan elektroforesis, setelah itu DNA dimurnikan semalaman dalam etanol. Setelah pemurnian, pelet DNA diputar dalam sentrifugal, dicuci dalam EtOH, dikeringkan sepenuhnya, dan disuspensikan kembali dalam buffer TE. Untuk memverifikasi bahwa DNA telah dilinierkan dengan benar, hitung konsentrasi Arc, dan periksa apakah tidak ada kontaminan, sampel DNA diuji melalui spektrofotometri (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Probe berlabel Digoxigenin (DIG) ditranskripsi dengan menggabungkan DNA yang dilinearisasi dengan air bebas RNase, buffer transkripsi 10x (Ambion), blok RNAse (Ambion), campuran pelabelan DIG RNA (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) , dan T7 RNA polimerase (Ambion) sebelum menginkubasi larutan pada suhu 37 derajat selama 2 jam. Terakhir, probe diencerkan dalam air bebas nuklease dan dimurnikan dalam kolom Quick-Spin mini (Roche).

Setelah probe cRNA dibuat, slide yang berisi jaringan dari tikus jantan direndam selama 40 menit dalam larutan PFA 4 persen untuk meningkatkan integritas jaringan selama pemrosesan in situ. Jaringan dari tikus betina diproses tanpa pencucian PFA ini. Slide kemudian dicuci dan diinkubasi dalam buffer proteinase K (PK) pada suhu 37 derajat sebelum diberi perlakuan dengan larutan anhidrida asetat 0,5 persen/trietanolamina 1,5 persen yang mengandung asam asetat glasial untuk permeabilisasi. Slide kemudian dicuci dalam buffer saline-sodium citrate (SSC) sebelum didehidrasi dengan perendaman dalam konsentrasi etanol yang naik dan dikeringkan dengan udara. Akhirnya, setiap slide ditutup dalam 300 µL buffer hibridisasi yang mengandung ragi tRNA (Invitrogen; Carlsbad, CA, USA), DNA sperma salmon (Ambion), dithiothreitol (Sigma; St. Louis, MO, USA), dan probe cRNA (1:100). Setiap slide kemudian ditutup dan disegel di sekitar tepinya dengan mount DPX (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, USA) sebelum diinkubasi dalam larutan hibridisasi selama 20 jam pada suhu 60 derajat . Khususnya, kaca penutup melindungi jaringan dari kontak langsung dengan pemasangan DPX, sehingga pengangkatan DPX yang mengeras nantinya tidak menyebabkan kerusakan pada jaringan.

Setelah hibridisasi selesai, kaca penutup dilepas dengan hati-hati, dan slide diinkubasi dalam buffer 4xSSC yang dicampur dengan natrium tiosulfat (ST) pada suhu 60 derajat selama satu jam sebelum diberi perlakuan dengan larutan berbasis asam etilendiamintetraasetat untuk menghambat aktivitas RNAse pada suhu 37ºC. Setelah ini, slide dicuci dalam konsentrasi larutan SSC yang menurun dicampur dengan ST lagi pada 60 derajat. Jaringan kemudian dicuci dalam larutan deterjen (Tween20) sebelum diwarnai dengan sistem PerkinElmer TSA Fluorescein (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Slide ditempatkan di ruang lembab dan diperlakukan dengan buffer pemblokiran diikuti oleh konjugat anti-DIG-HRP selama 2 jam. Slide kemudian dicuci sebentar dalam larutan deterjen sebelum dikembalikan ke ruang lembab yang gelap dan dilapisi dengan larutan yang mengandung reagen fluorescein tyramide (FITC) dan didiamkan selama 30 menit. Terakhir, slide dicuci, dibiarkan mengering di udara, dan ditutup dengan mount yang mengandung noda nuklir 4′,6-diamidino-2-phenylinodole (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, USA) . Slide disimpan dalam gelap pada -20 derajat sampai pencitraan.

Pencitraan. Semua pencitraan diselesaikan menggunakan mikroskop Axio Scope A1 (Zeiss; Tornwood, NY, USA). Daerah yang diminati diidentifikasi melalui pewarnaan DAPI menggunakan tujuan 10× dengan bantuan atlas63 otak Paxinos dan Watson, lalu dicitrakan di bawah tujuan 40× (perbesaran aktual~900×). Gambar diambil untuk pewarnaan DAPI dan FITC dan kemudian diwarnai dan digabungkan secara otomatis menggunakan makro khusus dalam perangkat lunak ImageJ dengan FIJI (NIH, Bethesda, MD). Karena degradasi jaringan yang terjadi di seluruh in situ, tidak semua bagian atau area yang berpotensi diminati dapat bertahan. Dengan demikian, gambar tidak dapat ditumpuk-z secara andal dan, sebagai gantinya, diambil pada satu bidang. Daerah berikut dicitrakan dan dihitung: korteks prelimbik (ditambah 3,72 hingga ditambah 2,52 dari bregma), korteks infralimbik (ditambah 3,52 hingga ditambah 2,2 dari bregma), lateral (ditambah 3,72 hingga ditambah 3,2 dari bregma) dan ventral (ditambah 3,72 hingga plus 3.0 dari bregma) orbitofrontal cortex, wilayah CG1 dari korteks cingulate anterior (plus 3.72 hingga plus 2.52 dari bregma), dan wilayah CA3 dari hippocampus ventral (− 4.3 hingga − 4.8 dari bregma) (Gbr. S6). Meskipun inti amygdalar juga menjadi perhatian khusus karena perannya yang mapan dalam pembelajaran rasa takut, kerusakan jaringan yang disebutkan di atas cenderung sangat parah di area ini. Dengan demikian, kami tidak dapat memperoleh ukuran sampel yang cukup besar untuk menyertakan wilayah tersebut (minimal 6 gambar/wilayah yang layak diperlukan agar seekor tikus dapat dimasukkan dalam analisis statistik pada area tertentu).

Penghitungan diselesaikan wilayah demi wilayah dan semua file gambar diberi kode numerik acak untuk membutakan eksperimen yang menyelesaikan penghitungan dari detail apa pun terkait gambar pada saat penghitungan. Semua jumlah sel diambil di ImageJ dengan paket FIJI dan dibuat menggunakan alat penghitung sel. Sel dihitung untuk ekspresi mRNA Arc nuklir dan sitoplasma secara terpisah dan sel yang menunjukkan ekspresi tumpang tindih dihitung sebagai pengekspresian ganda. Penghitungan terakhir untuk sel pengekspresian Arc nuklir dan sel pengekspresian Arc sitoplasma hanya mencakup sel-sel yang diekspresikan hanya di wilayah itu (yaitu, tidak termasuk sel pengekspresian ganda). Jumlah penuh untuk sel-sel yang diwarnai DAPI diambil dan persentase sel yang menunjukkan ekspresi di setiap area tertentu dihitung diikuti dengan persentase rata-rata sel yang menunjukkan setiap jenis aktivasi pada masing-masing tikus. Untuk mencegah skor tikus dengan jumlah gambar yang lebih besar memiliki efek yang tidak proporsional pada statistik kami dan untuk mencegah inflasi ukuran sampel, hanya rata-rata ini yang digunakan dalam analisis akhir kami.

Ikhtisar analisis statistik. Semua analisis statistik diselesaikan menggunakan perangkat lunak pengkodean R. Kode lengkap tersedia secara gratis untuk dilihat di repositori data kami di https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. Kecuali dinyatakan lain, batasan untuk pengujian yang dianggap signifikan secara statistik ditetapkan ke p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Korelasi bivariat dihitung untuk tikus Pengamat dan Peraga untuk menilai hubungan potensial antara tindakan perilaku dan jumlah sel Arc untuk ekspresi yang terjadi pada titik waktu yang tepat (misalnya, jumlah Arc sitoplasma untuk persen kayu manis yang dimakan). Koefisien korelasi Pearson digunakan jika tidak ada outlier di salah satu set data yang terdeteksi dengan uji Grubbs. Jika outlier terdeteksi, koefisien korelasi Spearman digunakan sebagai gantinya. Untuk mengukur apakah hubungan antara pembelajaran sosial dan Arc dalam sel pengekspresian ganda di Pengamat, metrik keseluruhan pembelajaran sosial — selanjutnya disebut sebagai metrik pembelajaran sosial (SLM) —dihitung dengan mengambil rata-rata skor standar ( z-score) untuk persentase total yang dimakan yang merupakan makanan yang didemonstrasikan dan persentase waktu yang dihabiskan untuk berhubungan dengan Demonstran selama fase pembelajaran sosial FCbP selama presentasi CS (pria) atau setelah presentasi CS (wanita). Khususnya, persentase pembekuan isyarat pada hari terakhir tidak digunakan untuk tikus Pengamat karena hasil kami dan hasil percobaan tindak lanjut kami (lihat Bahan Tambahan) menunjukkan bahwa kondisi prosedur pengujian perilaku kami menghasilkan beberapa perilaku pembekuan bahkan di Mengontrol tikus—setidaknya pada jantan—dan, dengan demikian, mungkin bukan ukuran terbaik dari kekuatan respons rasa takut yang diperoleh secara sosial. Dengan demikian, mengingat temuan kami sebelumnya bahwa interaksi dengan Demonstran selama atau setelah CS (tergantung pada jenis kelamin) sangat diprediksi kemudian membekukan isyarat12–14, interaksi dengan Demonstran pada titik waktu yang sesuai jenis kelamin diuji untuk korelasi terhadap aktivitas Busur nuklir daripada membeku pada isyarat pada hari terakhir untuk tikus Pengamat. Untuk Demonstran, metrik serupa dihitung berdasarkan pembekuan standar pada isyarat pada hari terakhir dan persentase total yang dimakan yang merupakan diet yang biasa (Diet Cin) dan diperiksa terhadap aktivitas Arc ganda. Untuk mengoreksi beberapa tes yang dijalankan pada setiap kumpulan data perilaku (6, untuk setiap wilayah otak), nilai p penting untuk korelasi adalah Bonferroni disesuaikan dengan 0.0083.

Referensi

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. Anak-anak autis gagal mengarahkan rangsangan sosial yang terjadi secara alami. J. Pengembang Autisme. Gangguan. 28, 479–485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dapreto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Pemrosesan hadiah dalam autisme. Autisme Res.

3, 53–67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Teori motivasi sosial autisme. Tren Cogn. Sains. 16, 231–239 (2012).

4. Ost, L.-G. Cara memperoleh fobia dan hasil perawatan perilaku. Perilaku. Res. Ter. 23, 683–689 (1985).

5. Ollendick, TH & King, NJ Asal mula ketakutan masa kanak-kanak: Evaluasi teori akuisisi rasa takut Rachman. Perilaku. Res. Ter. 29, 117–123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. Mengkondisikan pengalaman dalam fobia laba-laba. Perilaku. Res. Ter. 29, 333–335 (1991).

7. Jeon, D. dkk. Pembelajaran rasa takut observasional melibatkan sistem nyeri yang rusak dan saluran Cav1.2 Ca2 plus di ACC. Nat. Ilmu saraf. 13, 482–488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA Isolasi sosial pasca penyapihan merusak pengondisian rasa takut observasional. Perilaku. Otak Res. 242, 142–149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD Belajar dari orang lain untuk mengatasi lalat yang menggigit: Pembelajaran sosial tentang analgesia terkondisi yang diinduksi rasa takut dan penghindaran aktif. Perilaku. Ilmu saraf. 115, 661–674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Belajar untuk takut dan mengatasi stresor alami: Kortikosteron yang diperoleh secara individu dan sosial dan tanggapan penghindaran untuk menggigit lalat. Horm. Perilaku. 43, 99–107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Kekerabatan, keakraban, dan status sosial memodulasi pembelajaran sosial tentang "predator mikro" (lalat yang menggigit) pada tikus rusa. Perilaku. Ekol. Sosiobiol. 58, 60–71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. Pengondisian rasa takut dengan proksi: Transmisi sosial rasa takut selama pengambilan memori. Perilaku. Otak Res. 214, 80–84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. Status dominasi memprediksi penularan ketakutan sosial pada tikus laboratorium. Animasi. Cogn. 19, 1051–1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. Efek berbeda dari keakraban / kekerabatan dalam transmisi sosial dari asosiasi rasa takut dan preferensi makanan pada tikus. Animasi. Cogn. 22, 1013–1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR Keterbatasan prosedur kontrol dua arah untuk investigasi peniruan pada tikus: Bau isyarat pada manipulandum. QJ Exp. Psikol. B 52, 193–202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW Transfer informasi mengenai makanan jauh: Sebuah penyelidikan laboratorium dari hipotesis 'pusat informasi'. Animasi. Perilaku. 31, 748–758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ Karbon disulfida: Pilihan diet semiokimia yang diinduksi secara sosial pada tikus. Fisik. Perilaku. 42, 119–124 (1988).

18. Galef, BG Studi kasus dalam analisis perilaku, sintesis, dan perhatian terhadap detail: Pembelajaran sosial tentang preferensi makanan. Perilaku. Otak Res. 231, 266–271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ Transmisi sosial preferensi makanan pada tikus dewasa. Animasi. Perilaku. 31, 265–271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, fosforilasi PJ CREB dan ekspresi c-Fos di hippocampus tikus selama akuisisi dan mengingat preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial. Hippocampus 15, 56–67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Efek stimulasi nukleus basalis magnocellularis pada preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial dan c -Fos ekspresi. Mempelajari. Mem. 13, 783–793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. Dinamika hippocampal dan aktivasi kortikal selama konsolidasi memori nonspasial. J. Neurosci. 26, 4852–4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ Time-courses dari ekspresi Fos di hippocampus tikus dan neokorteks setelah akuisisi dan mengingat preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial. Neurobiol. Mempelajari. Mem. 88, 65–74 (2007).

24. Lesburguères, E. et al. Penandaan awal jaringan kortikal diperlukan untuk pembentukan memori asosiatif yang bertahan lama. Sains 331, 924–928 (2011).

25. Knapska, E. et al. Transfer informasi emosional antar-subjek membangkitkan pola spesifik aktivasi amigdala. Proses Natl. Acad. Sains. 103, 3858–3862 (2006).

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. Transmisi sosial dari ketakutan Pavlovian: Pengondisian ketakutan oleh proxy pada tikus betina terkait. Animasi. Cogn. 17, 827–834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA Sirkuit intra-amigdala secara khusus mengatur pembelajaran ketakutan sosial. Nat. Ilmu saraf. 20, 459–469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Sistem saraf dan komputasi pembelajaran sosial. Nat. Pendeta Neurosci. 21, 197–212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF Ekspresi khusus lingkungan dari Arc gen awal langsung dalam ansambel neuron hippocampal. Nat. Ilmu saraf. 2, 1120–1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW Sirkuit saraf dan mekanisme yang terlibat dalam pengondisian rasa takut Pavlovian: Tinjauan kritis. Ilmu saraf. Biobehav. Wahyu 30, 188–202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Inaktivasi infralimbik tetapi bukan korteks prelimbik merusak konsolidasi dan pengambilan kepunahan rasa takut. Mempelajari. Mem. 16, 520–529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. Sirkuit saraf untuk ketakutan dan kecemasan. Nat. Pendeta Neurosci. 16, 317–331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. Pengaruh reliabilitas demonstran dan kebaruan demonstrasi terakhir pada perolehan preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial. R. Soc. Buka Sains. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Protein busur: Hub fleksibel untuk plastisitas sinaptik dan kognisi. Sem. Pengembang Sel. Biol. 77, 33–42 (2018).

35. Ekspresi Chia, C. & Otto, T. Hippocampal Arc (Arg3.1) diinduksi oleh daya ingat dan diperlukan untuk rekonsolidasi memori dalam jejak pengkondisian rasa takut. Neurobiol. Mempelajari. Mem. 106, 48–55 (2013).

36. Pilarzyk, K. et al. Hilangnya fungsi fosfodiesterase 11A4 menunjukkan bahwa ingatan jangka panjang baru-baru ini dan jarak jauh dapat dipisahkan. Kur. Biol. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Transmisi Sosial Ketakutan Asosiatif pada Hewan Pengerat—Perbedaan Individu dalam Pengondisian Rasa Takut oleh Proxy Vol. 17 (Musim semi, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Korteks orbitofrontal tidak diperlukan untuk perolehan atau penarikan jarak jauh preferensi makanan yang ditransmisikan secara sosial. Perilaku. Otak Res. 208, 243–249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS Jalur saraf terpisah memproses biaya keputusan yang berbeda. Nat. Ilmu saraf. 9, 1161–1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Te orbitofrontal cortex dan seterusnya: Dari pengaruh hingga pengambilan keputusan. Prog. Neurobiol. 86, 216–244 (2008).

41. Wallis, JD Studi lintas spesies tentang korteks orbitofrontal dan pengambilan keputusan berbasis nilai. Nat. Ilmu saraf. 15, 13–19 (2012).

42. Izquierdo, A. Heterogenitas fungsional dalam korteks orbitofrontal tikus dalam pembelajaran penghargaan dan pengambilan keputusan. J. Neurosci. 37, 10529–10540 (2017).

43. Randesi, M. dkk. Perbedaan jenis kelamin setelah stres kronis dalam ekspresi gen terkait opioid, stres, dan neuroplastisitas di hippocampus tikus. Neurobiol. Stres 8, 33–41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Otak kontekstual: implikasi untuk pengondisian rasa takut, kepunahan, dan psikopatologi. Nat. Pendeta Neurosci. 14, 417–428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Mikrostimulasi mengungkapkan pengaruh berlawanan dari korteks prelimbik dan infralimbik pada ekspresi ketakutan terkondisi. Mempelajari. Mem. 13, 728–733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ Peran terpisah dari korteks prelimbik dan infralimbik, hippocampus ventral, dan amigdala basolateral dalam ekspresi dan kepunahan ketakutan terkondisi. Neuropsikofarmakologi 36, 529–538 (2011).

47. Baran, SE, Armstrong, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD Stres kronis dan perbedaan jenis kelamin pada ingatan akan pengondisian dan kepunahan rasa takut. Neurobiol. Mempelajari. Mem. 91, 323–332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. Perbedaan jenis kelamin dalam regulasi rasa takut dan perilaku mencari imbalan dalam tugas diskriminasi rasa takut-keselamatan-hadiah. Perilaku. Otak Res. 368, 111903 (2019).

49. Day, HLL & Stevenson, CW Dasar neurobiologis perbedaan jenis kelamin dalam ketakutan yang dipelajari dan hambatannya. eur. J. Neurosci. 52, 2466–2486 (2020).

50. van Hasselt, FN dkk. Variasi individu dalam perawatan ibu di awal kehidupan berkorelasi dengan pengambilan keputusan di kemudian hari dan ekspresi c-fos di subregion prefrontal tikus. PLoS SATU 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM Perbedaan jenis kelamin dalam kadar protein terkait mielin di dalam dan kepadatan proyeksi antara korteks frontal orbital dan striatum dorsal tikus dewasa: Implikasi untuk kontrol penghambatan. Ilmu saraf 300, 286–296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. Perbedaan jenis kelamin pada hewan model pengambilan keputusan. J. Neurosci. Res. 95, 260–269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ Aktivitas di korteks prelimbik diperlukan untuk ekspresi yang dipelajari, tetapi bukan bawaan. Ketakutan. J. Neurosci. 27, 840–844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ Respon terkondisi yang berkelanjutan pada neuron prefrontal prelimbik berkorelasi dengan ekspresi ketakutan dan kegagalan kepunahan. J. Neurosci. 29, 8474–8482 (2009).

55. Fenton, GE dkk. Aktivitas korteks prelimbik yang terus-menerus berkontribusi pada peningkatan ekspresi ketakutan yang dipelajari pada wanita. Mempelajari. Mem. 21, 55–60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW Perbedaan jenis kelamin dalam ekspresi ketakutan yang dipelajari dan kepunahan melibatkan perubahan osilasi gamma di korteks prefrontal medial. Neurobiol. Mempelajari. Mem. 135, 66–72 (2016).

57. Kirry, AJ dkk. Pensinyalan hipofisis adenilat siklase-aktivasi polipeptida (PACAP) di korteks prefrontal memodulasi pembelajaran rasa takut, tetapi bukan memori kerja spasial, pada tikus betina. Neurofarmakologi 133, 145–154 (2018).

58. Hari, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW Perbedaan jenis kelamin dalam diskriminasi rasa takut pendengaran dikaitkan dengan perubahan fungsi korteks prefrontal medial. Sains. Rep.10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. Feromon alarm meningkatkan hipertermia yang diinduksi stres pada tikus. Fisik. Perilaku. 72, 45–50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: Perangkat lunak pencatatan peristiwa open-source gratis dan serbaguna untuk pengkodean video/audio dan pengamatan langsung. Metode Ekol. Evol. 7, 1325–1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. Kepunahan dan pengambilan ditambah kepunahan rasa takut terkondisi secara berbeda mengaktifkan korteks prefrontal medial dan amigdala pada tikus. Depan. Perilaku. Ilmu saraf. 9, 1–10 (2016).

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar dan jalur prefrontal ke hipotalamus lateral diaktifkan oleh isyarat yang dipelajari yang merangsang makan. J. Neurosci. 25, 8295–8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Otak Tikus dalam Koordinat Stereotaxic: Sampul Keras. (Elsevier, 2006).