BAGIANⅠ:Efek Perlindungan Baru Ekstrak Cistanche Tubulosa Terhadap Retinopati Degeneratif yang Diinduksi Cahaya Biru Bersinar Rendah
Mar 04, 2022
Kontak: Audrey Hu{0}}
Man-Ru Wu Cheng-Hui Lin Jau-Der Hob George Hsiao, Yu-Wen Cheng
Sekolah Farmasi, Sekolah Tinggi Farmasi, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Departemen Oftalmologi, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Departemen Farmakologi, Sekolah Kedokteran, Sekolah Tinggi Kedokteran, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Institut Pascasarjana Ilmu Kedokteran, Sekolah Tinggi Kedokteran, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Ph.D. Program dalam Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi, Sekolah Tinggi Farmasi, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Taiwan
Abstrak
Latar Belakang/Tujuan:Fototoksisitas yang diinduksi dioda cahaya biru (BLL) memainkan peran penting dalam penyakit mata dan menyebabkan degenerasi retina dan apoptosis pada sel epitel pigmen retina manusia (RPE).Ekstrak Cistanche tubulosa (CTE)adalah obat tradisional Tiongkok dengan banyak sifat pelindung yang bermanfaat; Namun, beberapa penelitian telah meneliti peran pelindung mata dari CTE. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki mekanisme yang mendasari efek CTE pada apoptosis yang diinduksi BLL secara in vitro dan in vivo. Metode: Sel RPE diterapkan dalam penelitian in vitro saat ini dan viabilitas sel ditentukan dengan 3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,{{6} } uji difeniltetrazolium bromida. Ekspresi protein terkait apoptosis ditentukan dengan analisis western blot dan pewarnaan imunofluoresensi. Tikus Brown Norwegia digunakan untuk memeriksa paparan BLL yang tersedia secara komersial in vivo. Pewarnaan hematoxylin dan eosin, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL), dan uji western blot digunakan untuk memeriksa deformasi morfologi retina. Hasil: CTE secara signifikan menghambat hidrogen peroksida-, tertbutil hidroperoksida-, natrium azida-, dan kerusakan RPE yang diinduksi BLL. Lebih lanjut, CTE mengurangi ekspresi penanda apoptosis seperti cleaved caspase-3 dan pewarnaan TUNEL setelah paparan BLL dengan menonaktifkan jalur apoptosis, seperti yang ditunjukkan melalui pewarnaan imunofluoresen. Selain itu, CTE menghambat fosforilasi yang diinduksi BLL dari c-Jun N-terminal kinase, kinase 1/2 terkait sinyal ekstra, dan p38 dalam sel RPE. In vivo, pemberian oral CTE menyelamatkan 60-hari penurunan yang diinduksi paparan BLL periodik dalam ketebalan retina dan mengurangi jumlah sel TUNEL-positif dalam model tikus coklat Norwegia. Kesimpulan: CTE adalah agen profilaksis potensial terhadap fototoksisitas yang diinduksi BLL
pengantar
Studi degenerasi makula terkait usia (AMD) telah melaporkan bahwa 8,7 persen populasi dunia menderita penyakit ini [1]. AMD adalah penyakit neurodegeneratif yang menyebabkan deformasi fotoreseptor, atrofi epitel pigmen retina (RPE), apoptosis sel ganglion, dan kehilangan penglihatan sentral pada populasi lanjut usia, dan menjadi beban sosial global. DAL diklasifikasikan menjadi bentuk kering atau basah [2, 3]. Peningkatan teknologi telah mengakibatkan orang menghabiskan lebih banyak waktu menggunakan perangkat digital modern, dan akibatnya, orang terpapar emisi cahaya biru (BL) dalam waktu lama. Namun, masalah fototoksisitas yang diinduksi BL di retina tidak diselidiki dengan baik. Overexposure ke BL gelombang pendek (450-495 nm) menghasilkan generasi spesies oksigen reaktif (ROS), seperti superoksida dan radikal hidroksil, yang menyebabkan peningkatan konsumsi oksigen dan menginduksi kerusakan DNA mitokondria. Akumulasi ROS menghasilkan stres oksidatif dan akumulasi ekstensif adduct retinoid, yang merusak retina lebih lanjut [4]. Penelitian telah menunjukkan bahwa stres oksidatif merupakan faktor utama dalam patogenesis AMD kering [5]. Selanjutnya, iradiasi BL menurunkan ekspresi enzim antioksidan retina, seperti superoksida dismutase dan katalase, dengan memediasi interaksi protein Bax/Bcl-2 dan mendorong produksi ROS endogen. Dengan demikian, sel RPE dan mitokondria segmen luar fotoreseptor menderita cedera akibat iradiasi BL [6, 7]. Selain generasi ROS, iradiasi BL mengaktifkan mitogen-activated protein kinase (MAPKs), yang memainkan peran penting dalam kelangsungan hidup sel dan apoptosis. protein pro-apoptosis terkait-apoptosis yang bergantung pada mitokondria, seperti Bax dan caspase-3, diaktifkan oleh penyinaran BL-emitting diode light (BLL) melalui jalur c-Jun N-terminal kinase (JNK) dan p38 di RPE dan sel ganglion retina [8]. Selain itu, jalur anti-oksidatif yang bergantung pada phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt dan faktor nuklir eritroid 2-terkait faktor 2 (Nrf2) adalah komponen dari sistem pertahanan sel RPE [{{34} }].
Ekstrak Cistanche tubulosa (CTE)mengandung turunan glikosida fenilethanoid dan telah digunakan sebagai obat tradisional Tiongkok selama beberapa dekade. Echincoside, acteoside, dan isoacteoside adalah tiga senyawa aktif utama CTE yang dicirikan memiliki sifat neuroprotektif, penambah memori, pengatur kekebalan, dan anti-fibrosis hati [13, 14]. Echinacoside adalah pemulung ROS dan melindungi terhadap 1-metil-4-ion fenilpiridinium (MPP plus) yang diinduksi apoptosis pada model hewan penyakit Parkinson [15, 16]. Acteoside melindungi terhadap neurotoksisitas yang diinduksi amiloid- -dan mengurangi peradangan yang dirangsang lipopolisakarida, yang disebabkan oleh translokasi Nrf2 dari sitoplasma ke nukleus dan mengikat elemen respons antioksidan. Terapi yang tersedia saat ini untuk AMD basah, seperti pegaptanib, ranibizumab, bevacizumab, dan aflibercept, digunakan untuk menghambat angiogenesis yang berlebihan [17, 18]. Namun, tidak ada pengobatan yang efektif untuk AMD kering, karena berbagai komplikasi patologis dari penyakit ini.
Dalam penelitian ini, kami mendemonstrasikan efek perlindungan CTE dalam sel RPE dan tikus Brown Norway (BN). Selain itu, kami menerapkan paparan BLL dengan pencahayaan rendah jangka panjang pada model in vitro dan in vivo untuk mengevaluasi efek perlindungan CTE. Kami menemukan bahwa CTE mengurangi ekspresi protein terkait apoptosis setelah terpapar BLL. Selain itu, CTE mengurangi jumlah terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) - sel positif di retina tikus BN setelah paparan jangka panjang ke BLL luminance rendah. Studi ini memberikan wawasan lebih lanjut tentang efek anti-apoptosis baru dari CTE dan informasi mengenai strategi baru untuk pengobatan degenerasi retina.
Ekstrak Cistanche tubulosa (CTE): glikosida fenilethanoid
Bahan dan metode
Bahan kimia dan produk
CTE dengan murah hati disediakan oleh Sinphar Pharmaceutical Company (Yilan, Taiwan). Kit deteksi kematian sel in situ (Kucing No. 11-684-817-910) dibeli dari Roche (Mannheim, Jerman).
Kultur sel RPE
Sel RPE (ARPE{{0}} dan ATCC® CRL-2302™) dibeli dari American Type Culture Collection (Manassas, VA) dan dibiakkan dalam medium Eagle yang dimodifikasi Dulbecco (Gibco, Grand Island, NY) dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi dalam atmosfer yang dilembabkan dari 5 persen CO2 pada 37 derajat . Sel ARPE-19 pada bagian 19–30 dipertahankan pada cawan kultur sel 10-cm (Orange Scientific, Braine-l'Alleud, Belgia). Setelah melewati 0,05 persen asam tripsin-etilendiamin tetraasetat (Gibco), sel-sel itu diganti dengan rasio 1:4. Sebelum pengujian, sel ARPE-19 diunggulkan ke 48-piring sumur (Orange Scientific) untuk analisis viabilitas sel pada kepadatan 1,0 ×105 sel/mL dan ke piring 6-cm (Orange Scientific ) untuk analisis western blotting pada kepadatan 2,0 × 105 sel / mL selama 24 jam. Setelah sel ARPE-19 mencapai konfluensi 80 persen, eksperimen berikut dilakukan.
Perawatan obat dan uji viabilitas sel
Sel RPE pada bagian 19–30 diunggulkan ke 48-piring sumur dan diperlakukan bersama selama 24 jam dengan konsentrasi CTE, hidrogen peroksida (H2O2), tert-butil hidroperoksida (t-BHP) yang berbeda, dan natrium azida ( NaN3). Sel-sel kemudian dikultur dengan 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) pada konsentrasi akhir 1 mg /mL dan diinkubasi selama 30 menit. Dimetil sulfoksida (200 L) kemudian ditambahkan ke setiap sumur untuk melarutkan sel. Absorbansi diukur pada 570 nm menggunakan spektrofotometer Sunrise™ enzyme-linked immunosorbent assay reader (MRX-TC; Dynex Technologies, Chantilly, VA). Nilai dikoreksi untuk absorbansi latar belakang dengan mengurangkan blanko yang sesuai. Data berasal dari lima pengujian independen.
Protokol paparan BL in vitro
Sumber cahaya dan pelat sel ditempatkan terpisah 25 cm, seperti yang dijelaskan dalam penelitian kami sebelumnya [19]. Luminance diukur dengan light meter (LM-81LX; Lutron Electronic Enterprise, Taipei, Taiwan). BLL memuncak pada 460 nm (60 lux) untuk waktu yang ditunjukkan (0–48 jam), tergantung pada desain eksperimental.
blotting barat
Setelah 0–48-h pengobatan bersama dengan paparan CTE dan BLL, sel dicuci dua kali dengan saline buffer fosfat (PBS) dingin dan disuspensikan kembali dalam buffer lisis uji radioimmunopresipitasi (1 persen Nonidet P-40, 50 mM Tris-HCl pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM Na3VO4, 1 mM etilena glikol-bis ( -aminoethylether)-N,N,N′,N′-asam tetraasetat, 1 mM NaF , dan koktail penghambat protease/fosfatase). Lysate sel diperoleh melalui sentrifugasi pada 12, 000 × g selama 35 menit, dan supernatan dikumpulkan untuk menentukan konsentrasi protein melalui reagen Bradford (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Jumlah sampel protein yang sama dipisahkan dengan elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida 10-12 persen dan kemudian dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida. Setelah membran diblok dengan 5 persen susu non-lemak dan diinkubasi dalam larutan garam tris-buffered dengan Tween 20 (TBST) selama 1 jam, imunobloting dilakukan dengan antibodi primer spesifik untuk cleaved caspase-3, phospho-JNK, JNK , fosfo-p38, p38, kinase terkait sinyal fosfo-ekstraseluler (ERK), ERK, Bcl-2, Bax, Protein terkait Fas dengan domain kematian (FADD), caspase-8 (GeneTex, Irvine , CA), Fas-ligand (Abcam, Cambridge, UK), dan b-aktin (Sigma- Aldrich, St. Louis, MO). Bercak tersebut kemudian diinkubasi dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase lobak kuda (1:6000 dalam TBST; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) selama 1 jam pada suhu kamar. Menggunakan kit chemiluminescence yang disempurnakan (Millipore, Billerica, MA), intensitas pita pada setiap noda dianalisis dengan perangkat lunak Image J setelah dinormalisasi menjadi b-aktin.
Imunofluoresensi
Sel RPE difiksasi dengan 4 persen paraformaldehyde dalam PBS selama 15 menit. Triton X-100 dalam PBS (0.2 persen) kemudian ditambahkan ke dalam sel selama 15 menit, diikuti dengan 5 persen serum janin sapi dalam PBS selama 30 menit; sel-sel tersebut kemudian diinkubasi dengan antibodi anti-cleaved caspase-3 pada rasio 1:250 selama 24 jam (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Antibodi sekunder IgG anti-kelinci kambing (Dylight 594) digunakan dengan rasio 1:200 (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Inti sel diwarnai dengan 4′-6-diamidino-2-fenilindole (DAPI; AAT Bioquest, Sunnyvale, CA). Perubahan fluoresensi diamati dengan sistem pencitraan mikroskop spektral confocal CS SP5 laser (Leica, Teban Gardens, Singapura).
pewarnaan TUNEL
Fragmen DNA, yang dapat dideteksi dengan uji TUNEL, merupakan ciri yang signifikan dari apoptosis. Kami menggunakan Kit Deteksi Kematian Sel In Situ (Nomor Kucing 11-684-817-910; Roche) untuk mengukur kematian sel RPE terprogram apoptosis sesuai dengan protokol pabrikan. Secara singkat, kami memperbaiki sel RPE dengan paraformaldehida 4 persen dan memberi label pada untai DNA yang putus dalam reaksi enzimatik untuk mendeteksi sel TUNEL-positif, yang disajikan dengan noda fluoresen hijau. Sel-sel yang diwarnai kemudian dipindai dan dianalisis dengan Sistem Pencitraan Tissue FAXS-plus (TissueGnostics, Wina, Austria). Sepuluh ribu peristiwa dihitung di wilayah RPE yang terjaga keamanannya, dan kami menganalisis gambar untuk jumlah sel TUNEL-positif dengan perangkat lunak TissueQuest/HistoQuest (TissueGnostics).
Eksperimen hewan
Tikus BN jantan (300-350 g berat badan) dibeli dari National Laboratory Animal Center (Taipei, Taiwan) dan disimpan selama 2-3 bulan. Tikus dipelihara dalam siklus terang/gelap 12-h/{12-h pada 26 ± 1 derajat, rasio kelembaban relatif 35-47 persen, dan akses ad libitum ke air dan makanan. Tikus yang tidak diberi perlakuan dipelihara dalam gelap sebagai kontrol. Protokol penelitian telah disetujui oleh Institutional Animal Care Use Committee dari Taipei Medical University (nomor persetujuan: LAC-2016-0442). Semua prosedur eksperimental yang melibatkan penggunaan hewan mematuhi pernyataan Asosiasi Penelitian dalam Visi dan Oftalmologi untuk penggunaan hewan dalam penelitian eksperimental mata dan penglihatan.
Model tikus degenerasi retina yang diinduksi BLL
Kami menggunakan model degenerasi retina yang diinduksi paparan BLL jangka panjang pencahayaan rendah periodik, seperti yang dijelaskan dalam penelitian kami sebelumnya [19]. Secara singkat, tikus BN dibagi menjadi tiga kelompok: kelompok kontrol, yang dipelihara dalam kondisi gelap; kelompok terpajan BLL, yang terpajan BLL periodik dalam gelap tanpa pelebaran pupil (460 nm, 150 lux) selama 3 jam per hari selama 60 hari; dan kelompok yang diberi perlakuan CTE plus terpajan BLL, yang sebelumnya diberi CTE (100 mg/kg berat badan) selama 14 hari dan kemudian diobati bersama dengan pajanan BLL berkala selama 3 jam per hari selama 60 hari. Semua tikus dikembalikan ke koloni hewan dan siklus terang/gelap normal (250 lux, 12 jam/12 jam) dilanjutkan pada akhir periode percobaan.
Analisis statistik
Perbedaan nyata dihitung dengan menggunakan analisis varians satu arah yang dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey dan uji perbandingan ganda. Signifikansi statistik ditentukan oleh nilai-p dari<>
Produk Cistanche tubulosa
Hasil
CTE melindungi sel RPE dari kerusakan stres oksidatif
Untuk mengevaluasi sitotoksisitas CTE melalui uji MTT, beberapa konsentrasi CTE ({{{{20}}}}}–500 ug/mL) diterapkan pada sel RPE. Perlakuan CTE tidak memiliki efek toksik yang jelas pada viabilitas sel RPE pada konsentrasi mana pun yang diuji (Gbr. 1A). Oleh karena itu, 50 dan 100 ug/mL CTE digunakan dalam percobaan berikutnya. Untuk menyelidiki efek anti-apoptosis CTE, penginduksi oksidatif yang berbeda (H2O2, t-BHP, dan NaN3) diberikan bersama dengan sel CTE ke RPE selama 24 jam. H2O2, NaN3, dan t-BHP menurunkan viabilitas sel dan merusak sel RPE dengan cara yang bergantung pada dosis (batang yang dipotong, Gambar 1B, 1C, dan 1D); viabilitas sel secara signifikan lebih rendah pada sel yang diobati dengan 0,03 mM H2O2, 0,3 mM NaN3, dan 0,3 mM t-BHP dibandingkan pada kelompok kontrol.
Namun, pengobatan bersama dengan 50 dan 100 ug/mL CTE melemahkan H2O2-, NaN3-, dan kerusakan sel RPE yang diinduksi t-BHP dan membalikkan penurunan viabilitas sel (batang hitam, Gambar .1B, 1C, dan 1D). Data di atas menunjukkan bahwa CTE menyelamatkan sel RPE dari kerusakan stres oksidatif.
CTE menghambat kematian sel RPE yang diinduksi BLL
Dalam penelitian kami sebelumnya, kami menemukan bahwa BLL bersifat sitotoksik terhadap sel RPE, yang disebabkan oleh perubahan ekspresi Bcl-2 dan Bax. Dalam penelitian ini, kami memeriksa lebih lanjut efek perlindungan CTE pada kerusakan sel RPE yang diinduksi BLL. Kami menempatkan dua pelat LED listrik biru dalam inkubator kultur sel. Jarak antara sumber cahaya dan pelat sel adalah 25 cm, dan intensitas BLL adalah 60 lux, yang diukur dengan pengukur cahaya (Gbr. 2A). Uji MTT menunjukkan bahwa paparan BLL untuk periode waktu yang berbeda (6-48 jam) menyebabkan kematian sel RPE dengan cara yang bergantung pada waktu (Gbr. 2B). Pengurangan viabilitas sel yang diinduksi BLL setelah 24 dan 48 jam secara signifikan dilemahkan ketika sel-sel diperlakukan bersama dengan CTE (100 ug/mL) (Gbr. 2C). Data ini menunjukkan bahwa CTE melindungi sel RPE dari fototoksisitas yang diinduksi BLL.
CTE menghambat apoptosis yang diinduksi BLL dalam sel RPE dengan mengatur jalur Bcl-2/Bax dan Fas/FasL
Atas dasar potensi efek perlindungan CTE dalam sel RPE, kami menyelidiki lebih lanjut kemungkinan keterlibatan CTE dalam proses ini. Dua jalur pensinyalan apoptosis diperiksa, yaitu jalur Bax/Bcl{{0}} dan Fas/Fas ligand (FasL), dan protein terkait (misalnya, pro-caspase-8 dan pro-caspase -3; Gambar 3A dan 3B). Paparan BILL (6–48 jam) ditemukan meningkatkan regulasi ekspresi protein Bax/Bcl-2, FasL, dan FADD dengan cara yang bergantung pada waktu (Gbr. 3A). Selain itu, BLL menurunkan regulasi ekspresi protein procaspase-3 dan procaspase-8, menghasilkan lebih banyak bentuk pembelahan caspase-3 dan caspase-8 setelah paparan BLL, yang konsisten dengan penelitian sebelumnya [19]. Untuk mengevaluasi efek perlindungan CTE lebih lanjut, konsentrasi CTE yang berbeda diterapkan pada sel RPE yang terpapar BLL (Gbr. 3B). Setelah 48-h paparan BLL, CTE (50 g/mL) menurunkan rasio Bax/Bcl-2. Lebih lanjut, CTE (100 g/mL) menurunkan ekspresi protein FasL dan FADD, tetapi secara signifikan meningkatkan kadar procaspase-8 dan procaspase-3 (Gbr. 1b). 3C dan 3D). Penelitian telah menunjukkan bahwa aktivasi caspase-3 adalah penanda apoptosis pada sel RPE [20]. Untuk mengkonfirmasi efek perlindungan CTE lebih lanjut, kami melakukan pewarnaan imunofluoresen dari caspase yang dibelah-3. Paparan BILL selama 48 jam ditemukan menginduksi pembelahan caspase-3 dan translokasi ke dalam nukleus, menghasilkan apoptosis sel RPE (panah kuning, Gambar 4A). Namun, ketika sel yang terpapar BLL diperlakukan bersama dengan CTE (100 g/mL), ekspresi caspase yang diinduksi BLL -3 dihambat. Untuk memahami efek anti-apoptosis CTE dengan lebih baik, kami menggunakan pewarnaan TUNEL untuk mendeteksi fragmen DNA dalam sel RPE. Setelah 48-h paparan BLL, sel TUNEL-positif meningkat dari 1,78 ± 0,36 persen menjadi 23,82 ± 0,33 persen ; efek ini dilemahkan oleh pengobatan bersama dengan CTE (23,82 ± 0,33 persen menjadi 2,22 ± 0,11 persen; Gambar 4B, 4C, dan 4D). Hasil ini menunjukkan bahwa pengobatan CTE sangat melindungi sel RPE dari apoptosis yang diinduksi BLL dengan memediasi jalur Bax/Bcl-2 dan FasL/FADD.
CTE menghambat fosforilasi protein respons stres yang diinduksi BLL dalam sel RPE
Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa jalur MAPK, seperti ERK, JNK, dan p38 MAP, diaktifkan di sel RPE dan di retina setelah terpapar sinar ultraviolet atau BL [21, 22]. Oleh karena itu, untuk menyelidiki efek regulasi CTE pada jalur respons stres MAPK setelah paparan BLL, 100 g/mL CTE diterapkan pada sel RPE di bawah waktu paparan BLL yang berbeda (Gbr. 5A). Analisis Western blot menunjukkan bahwa ERK terfosforilasi, JNK, dan p38 diaktifkan pada paparan BLL, tetapi secara signifikan dihambat pada pengobatan bersama dengan CTE dalam sel RPE (Gbr. 5B). Hasil di atas menunjukkan bahwa CTE menghambat kerusakan sel RPE yang diinduksi BLL, yang mungkin terkait dengan penghambatan MAPK dalam sel RPE.
CTE menyelamatkan kerusakan retina yang diinduksi BLL setelah paparan periodik jangka panjang pada model tikus
Untuk mengevaluasi efek perlindungan CTE, kami memaparkan tikus BN pada paparan BLL jangka panjang selama 60 hari dan mengevaluasi efek CTE. Seperti yang ditunjukkan pada skema yang disajikan pada Gambar. 6A, tikus BN dibagi menjadi tiga kelompok: kelompok kontrol, kelompok yang terpapar BLL, dan kelompok CTE plus BLL (Gbr. 6A). Pada kelompok CTE plus BLL, tikus BN secara terus menerus diberi suplemen CTE (100 mg/kg berat badan) secara oral sekali sehari selama 14 hari sebelum paparan BLL. Pada hari 0, tikus BN diberi perlakuan bersama CTE (100 mg/kg BB) dan dipapar BLL selama 3 jam per hari selama 60 hari. Setelah 60 hari paparan BLL, hewan dikorbankan untuk analisis western blot dan pewarnaan imunohistokimia. Pada kelompok CTE plus BLL, ekspresi protein procaspase-3 pada homogenat mata tikus lebih tinggi setelah pengobatan CTE dibandingkan pada kelompok BLL (Gbr. 6B dan 6C). Data ini menggambarkan bahwa CTE mencegah fototoksisitas dan apoptosis retina yang diinduksi BLL pencahayaan rendah jangka panjang dengan menghambat aktivasi caspase yang dibelah-3. Pewarnaan imunohistokimia memberikan lebih banyak bukti mengenai efek perlindungan CTE pada struktur dan jalur fisiologis retina (Gbr. 7). Lebih lanjut, setelah paparan BLL kami menemukan bahwa lapisan neuron dalam berkurang dan mengamati deformasi morfologis pada lapisan neuron luar (ONL), termasuk segmen dalam/segmen luar di retina pusat dan perifer, yang konsisten dengan penelitian kami sebelumnya ( Gambar 7B). Yang penting, CTE mencegah deformasi sel RPE, kerusakan sel saraf, dan penipisan retina secara keseluruhan pada kelompok CTE plus BLL (Gbr. 7C). Selanjutnya, kami tidak mengamati sel TUNEL-positif di retina sentral dan perifer tikus normal (Gbr. 8Ab dan 8Bb). Sebaliknya, setelah paparan BLL selama 60 hari, sel TUNEL-positif sering terdeteksi di ONL retina sentral dan perifer (Gbr. 8Ae dan 8Be). Pewarnaan DAPI dari ONL retina sentral sangat menurun pada kelompok BLL (Gbr. 8Ad). Namun, keberadaan sel-sel TUNEL-positif dilemahkan dan pewarnaan DAPI pada retina sentral dan perifer ONL meningkat pada kelompok CTE plus BLL (Gbr. 8Ai dan 8Bi).
Produk Cistanche tubulosa
