Gambaran Umum Konstituen Phlorotannins di Fucales Bagian 3

Glikosida cistanche juga dapat meningkatkan aktivitas SOD di jaringan jantung dan hati, dan secara signifikan mengurangi kandungan lipofuscin dan MDA di setiap jaringan, secara efektif mengais berbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi dari kerusakan DNA yang disebabkan oleh radikal OH. Cistanche phenylethanoid glycosides memiliki kemampuan pemulungan radikal bebas yang kuat, kemampuan reduksi yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktivitas SOD dalam suspensi sperma, mengurangi kandungan MDA, dan memiliki efek perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida Cistanche dapat meningkatkan aktivitas SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan jaringan paru-paru tikus tua yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangi kandungan MDA dan kolagen di paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, memiliki efek pemulungan yang baik pada DPPH, memperpanjang waktu hipoksia pada tikus tua, meningkatkan aktivitas SOD dalam serum, dan menunda degenerasi fisiologis paru-paru pada tikus tua eksperimental Dengan degenerasi morfologi seluler, percobaan telah menunjukkan bahwa Cistanche memiliki kemampuan antioksidan yang baik dan berpotensi menjadi obat untuk mencegah dan mengobati penyakit penuaan kulit. Pada saat yang sama, echinacoside di Cistanche memiliki kemampuan yang signifikan untuk mengais radikal bebas DPPH dan dapat mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah degradasi kolagen yang diinduksi radikal bebas, dan juga memiliki efek perbaikan yang baik pada kerusakan anion radikal bebas timin.

Klik Dimana Saya Dapat Membeli Cistanche

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Adapun Eckols, karena adanya struktur dibenzodioxin, ini dapat dibedakan dari kelompok lain berdasarkan ion molekul terdeprotonasinya, yang biasanya 2 Da lebih rendah dari PT lain dengan DP yang sama, untuk setiap motif dibenzodioxin yang ada dalam struktur (Gambar 5D). Misalnya, eckol menghadirkan [MH]− pada m/z 371, sementara trifocal, triphlorethol, dan fucophlorethol semuanya hadir [MH]− pada m/z 373. Pada gilirannya, mengundang, yang memiliki dua struktur dibenzodioksin di tulang punggungnya, menyajikan [MH]− pada m/z 741, sedangkan ekuivalen heksamernya menunjukkan [MH]− pada m/z 745. Hal yang sama berlaku untuk karmalol, yang pada dasarnya adalah aula yang mengandung struktur dibenzodioksin [120]. Akhirnya, beberapa PT yang mengandung cincin furan, seperti fucofuroeckol dan phlorofucofuroeckol, ditandai dengan ion molekul terdehidrasi-deprotonasi, yaitu, [MH]− yaitu 18 Da lebih rendah, dibandingkan dengan padanannya yang tidak mengandung furan dengan DP yang sama. (misalnya, struktur fucofuroeckol vs. phloroeckol hanya berbeda pada ada/tidaknya cincin furan dan menunjukkan [MH]− masing-masing pada m/z 496 dan 478) [120]. Tabel 3 menunjukkan data MS yang dikumpulkan dari berbagai penelitian yang berfokus pada identifikasi PT di Fucales.

Meskipun dasar-dasar ini mungkin berguna untuk mencapai identifikasi struktural yang masuk akal dari PT dengan berat molekul rendah, kesulitan besar muncul ketika menyangkut oligomer dan polimer dengan berat molekul tinggi karena isomerisasinya meningkat secara eksponensial, dan banyak kemungkinan untuk pengaturan dan kombinasi phloroglucinol hampir tidak dapat dilakukan. dijelaskan oleh MS atau MS/MS. Namun demikian, dalam kasus seperti itu, MS masih dapat memberikan informasi berharga tentang DP senyawa yang ada dalam campuran florotanin. Dalam hal ini, matriks-assisted laser desorpsi/ionization-time of flight MS (MALDI-TOF-MS) merupakan pendekatan yang lebih cocok untuk analisis oligomer yang lebih besar karena dapat mendeteksi molekul dengan m/z di atas batas atas ESI- MS. Teknik ini telah digunakan untuk mempelajari fraksi phlorotannin dari Sargassum wightii, yang memungkinkan untuk mengkonfirmasi adanya dimer, trimer, dan hexamers dari phloroglucinol [125]. MS resolusi tinggi (HRMS) adalah pendekatan alternatif yang juga dapat digunakan untuk analisis PT dengan berat molekul tinggi, bergantung pada ion bermuatan ganda, dan perubahan pola isotop 1 13C plus. Dengan kata lain, ketika suatu senyawa bermuatan dua kali lipat atau tiga kali lipat, senyawa tersebut menunjukkan pola isotop 1 13C plus dengan perbedaan m/z masing-masing sebesar 0.5 dan 0.33 . Pada prinsip ini, Steevensz et al. [78] mampu membuat profil komposisi PT dari P. canaliculata, F. spiralis, F. vesiculosus, dan A. nodosum dalam hal DP, mendeteksi senyawa dengan berat molekul hingga 6000 Da yang, jika tidak, akan melebihi rentang massa. dari ESI-MS.

Secara keseluruhan, meskipun spektrometri massa dapat menjadi teknik yang banyak akal untuk analisis kualitatif PTs dan bahkan cukup kuat untuk mencapai karakterisasi yang cukup baik dari senyawa dengan berat molekul rendah, ia gagal untuk mendapatkan rincian yang memadai tentang jenis dan posisi keterkaitan bentuk senyawa isomerik. dengan DPS yang lebih tinggi. Oleh karena itu, ketika tujuannya adalah untuk sepenuhnya menjelaskan fitur-fitur struktural PTs, NMR adalah satu-satunya metode efektif yang dapat menawarkan resolusi yang memadai untuk analisis mendalam semacam itu.

5.2.3. NMR

Spektroskopi NMR terdiri dari analisis langsung dan non-destruktif yang dapat berguna tidak hanya untuk mengakses konten PT tetapi juga untuk sepenuhnya menjelaskan fitur struktural PT. Ketika data kuantitatif dimaksudkan, sinyal resonansi 1H NMR dari semua senyawa fenolik yang terkandung dalam ekstrak alga diintegrasikan dan dibandingkan dengan standar internal yang sesuai; senyawa-senyawa ini harus stabil, inert secara kimiawi, tersedia dalam bentuk yang sangat murni, dan larut sepenuhnya dalam pelarut deuterasi yang sama dengan sampel. Secara keseluruhan, penulis telah menggunakan pendekatan dan metodologi yang berbeda untuk mengukur senyawa fenolik dan/atau PT melalui teknik ini, termasuk dalam sampel turunan Fucale.

Dalam 2009, Parys et al. menjelaskan, untuk pertama kalinya, penggunaan 1H NMR (NMR) kuantitatif untuk menentukan variabilitas kandungan florotanin A. nodosum selama setahun. Dalam pekerjaan mereka, asam trimesat digunakan sebagai standar internal (2.0 mg asam trimesat dalam 0,8 mL metanol deuterasi dan 0,2 mL deuterium oksida), dan kurva kalibrasi diproduksi menggunakan phloroglucinol. Meskipun konten PTs lebih tinggi terdeteksi oleh qHNMR, dibandingkan dengan yang diperoleh dengan menggunakan metode kolorimetri FC, kedua metode mengikuti tren variasi musiman yang sama [126]. Penting untuk dicatat bahwa, berbeda dengan uji kolorimetri, yang tidak spesifik untuk PTs atau bahkan untuk senyawa fenolik, integrasi sinyal resonansi spektrum 1H NMR dalam qHNMR dibandingkan dengan standar internal. Karena perbedaan prinsip ini, perbandingan langsung tidak dapat dilakukan secara akurat antara kedua metodologi [127.128].

Dengan menggunakan pendekatan yang berbeda, Stiger-Pouvreau dan rekan kerja menggunakan magic angle spinning (HR-MAS) beresolusi tinggi untuk menghitung PTs di ganggang coklat, Cystoseira tamariscifolia. Dalam penelitian ini, NMR keadaan padat digunakan untuk mendeteksi phloroglucinol (monomer) in vivo dan 1H qNMR diterapkan untuk memperkirakan kuantifikasi monomer (menggunakan trimethylsilylpropionate –d4 (TSP) sebagai standar internal). Singlet phloroglucinol pada δ 6,02 ppm, diintegrasikan ke dalam tiga proton, mengkonfirmasi keberadaannya di dalam sampel. Keakuratan metode ini dinilai menggunakan larutan standar phloroglucinol dan hasilnya divalidasi dengan membandingkannya dengan FC assay. Pada akhirnya, penulis mengklaim bahwa metodologi yang disajikan terdiri dari metode inovatif dan cepat untuk mengukur phloroglucinol, yang dapat diterapkan pada semua spesies alga. Satu-satunya batasan metode qNMR terletak pada kebutuhan setidaknya satu dari sinyal spektrum (singlet, doublet, dll.) yang secara jelas dikaitkan dengan satu dan hanya satu senyawa [129].

Sebelumnya pada tahun 2010, penulis yang sama telah mendemonstrasikan potensi NMR HR-MAS in-vivo 1H yang terkait dengan Spektrometri Massa (LC/ESI–MSn ) untuk mengamati profil kimiawi global dari lima spesies genus, Cystoseira, yang ada di sepanjang pantai. Brittany di Prancis: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis, dan C. tamariscifolia [130]. Itu

tujuan utama dari pekerjaan mereka adalah untuk mengidentifikasi spesimen Cystoseira dan mendiskusikan taksonomi mereka. Hasilnya membuktikan efisiensi pendekatan yang disajikan untuk membedakan terutama C. nodicaulis dan C. tamariscifolia karena spektranya membuktikan adanya sinyal karakteristik, memungkinkan identifikasi yang tidak ambigu. Dalam kasus singlet pada 2,91 ppm untuk yang pertama dan yang terakhir, puncaknya tepat pada 6.00 ppm mencirikan spesies dan menunjukkan kemungkinan terjadinya phlorotannin sederhana. Foeniculacea dan C. humilis secara umum ditandai dengan terjadinya dua doublet dengan intensitas yang sama pada 7,90 dan 7,36 ppm. Namun, diskriminasi absolut antara kedua sinyal tetap tidak mungkin. Kemiripan sinyal NMR in-vivo, bersama-sama dengan sedikit keragaman kimia intraspesifik dari kedua spesies, membenarkan hasil ini. Terakhir, dalam kasus C. baccata, meskipun menunjukkan keanekaragaman kimia yang paling penting, banyak sinyal memungkinkan diskriminasi terus-menerus dari spesies lain.

Pada tahun 2020, Walsh dan rekan kerja [131] mendemonstrasikan potensi antimikroba dari dua ekstrak phlorotannin murni dari A. nodosum dan F. serratus, dua rumput laut coklat intertidal. Dalam pekerjaan itu, analisis 1H dan 13C NMR memungkinkan tidak hanya estimasi kuantitatif dan kualitatif senyawa fenolik total tetapi juga akses ke perbedaan profil keterkaitan antara ekstrak fenolik murni dari kedua spesies. Adapun uji FC, tingkat senyawa fenolik total yang jauh lebih tinggi ditemukan di A. nodosum daripada di F. serratus, dan hasilnya divalidasi oleh uji FC. Selain itu, hasil yang dicapai menggunakan pengujian qNMR dan FC menunjukkan adanya variasi antara sampel yang dikumpulkan setiap bulan dan antara kedua metodologi tersebut.

Untuk menjelaskan struktur PTs, analisis 1H dan 13C NMR pertama kali diterapkan oleh Glombitza dan kelompoknya pada tahun 70-an ketika mereka mengidentifikasi phloroglucinol pada spesies ganggang coklat yang berbeda. Kompleksitas spektrum yang terkait dengan turunan ini hanya memungkinkan identifikasi struktur polifenol yang lebih kecil. Jadi, pada tahun 1974, ini adalah pertama kalinya struktur kimia bifuhalol dan diphlorethol dijelaskan dari ekstrak etanol 80 persen C. tamariscifolia [132].

Namun demikian, sejak saat itu, lebih dari seratus struktur PTs telah dijelaskan dengan menggunakan NMR [133]. Untuk itu, ekstrak biasanya dilakukan tahap pra-perlakuan dengan heksana atau petroleum eter untuk mengendapkan PTs yang besar. Selain itu, untuk mencegah ketidakstabilan PTs, memfasilitasi analisis NMR, dan mengubah polaritas senyawa ini, mereka sering diasetilasi menggunakan anhidrida asetat dan piridin, sehingga memungkinkan pemurnian kromatografi fase-silika normal [119]. Dalam spektrum 1H NMR dari jenis senyawa ini, dua aspek harus diperhatikan: resonansi proton aromatik muncul antara δ 6.0 dan 7,5 ppm, dan gugus asetil muncul sebagai puncak tunggal antara δ 2 dan 3 ppm . Ini adalah alat yang berguna untuk menetapkan jumlah gugus hidroksi bebas dalam fenolat asli yang tidak terlindungi. Dua jenis sistem cincin aromatik yang mungkin terjadi ditunjukkan pada Gambar 6. Ambient kimia yang khas dari dua jenis proton (Ha dan Hb) mengubah multiplisitas sinyal yang diamati dalam 1H NMR, serta integrasinya.

Bersama dengan spektroskopi 1H NMR, 13C dan HSQC, dan spektra HMBC NMR, telah digunakan untuk mengklarifikasi struktur PT yang dimurnikan, termasuk di Fucales. Pendekatan korelasi heteronuklir-NMR-spektroskopi berguna untuk mengidentifikasi kelas PT dari matriks sampel (monomer, bahan bakar, kloroetil, penuh, fucophloroetol, dll.) [134]. Sinyal 13C-NMR karakteristik dari PTs diringkas dalam Tabel 4. Muncul pada pergeseran karakteristik-kimia, resonansi karbon dari jenis karbon yang berbeda bersama dengan intensitasnya memungkinkan atribusi beberapa sinyal ke kelas PT tertentu, khususnya aula phlorethol. .

Pada tahun 1997 Glombitza dkk. [135] menggambarkan isolasi dan karakterisasi 33 PTs dari ganggang coklat, Cystophora torulosa. Kelas PT yang berbeda diidentifikasi termasuk phlorethol dan hall, dan fucophlorethol dan hydroxyfucophlorethol (contoh pada Gambar 7). Selain itu, mengenai yang terakhir, tujuh hidroksifukophlorethol baru yang mengandung gugus hidroksil tambahan diidentifikasi dan dikarakterisasi (NMR dan MS). Seperti yang disebutkan sebelumnya, untuk mencegah oksidasi dan meningkatkan lipofilisitas turunan PT yang diisolasi, penulis menggambarkan isolasi mereka sebagai asetat [82].

Koch dkk. juga telah menunjukkan penerapan 1H dan 13C NMR untuk mengkarakterisasi fuhalolasetat yang lebih besar pada B. bifurkasi [136]. Teknik spektroskopi HSQC dan HMBC (2D) NMR telah digunakan oleh Cérantola et al. untuk menampilkan keberadaan struktur fucol dan fucophlorethol dalam ekstrak Fucus spiralis [137]. Pendekatan yang sama digunakan dengan siliquosa Halidry, berlimpah di Brittany. Penggunaan 1D dan 2D NMR, dan analisis MS memungkinkan identifikasi empat turunan fenolik: trifuhalol dan tetrafuhalol, dan, untuk pertama kalinya, diphlorethol dan triphlorethol [125]. Tabel 5 merangkum studi yang disebutkan di atas di mana 1H dan 13C NMR berkontribusi pada penjelasan struktur PTs yang diekstraksi dari ganggang milik Fucales.

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】