Profil Metabolomik Berbasis NMR Untuk Pemulungan Radikal Dan Sifat Anti-Penuaan Bagian 1

Mohon hubungi{0}}untuk informasi lebih lanjut

Abstrak:Herbal yang biasanya dikenal sebagai tanaman obat terkenal karena efek terapeutiknya dan secara tradisional digunakan untuk mengobati berbagai penyakit, termasuk penuaan. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi variasi metabolit pada enam herba terpilih yaitu Curcuma longa, Oenanthe japonica, Vitex Mundo, Pluchea indica, Cosmos caudatus, dan Persicaria minus menggunakan proton nuclear magnetic resonance('H-NMR) ditambah dengan analisis data multivariat (MVDA). . Aktivitas penangkapan radikal bebas dari ekstrak diukur dengan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil(DPPH), dan 2,2-azinobis(3-etil-benzotiazolin{{8 }}asam sulfonat)(ABTS) dan uji kapasitas penyerapan radikal oksigen (ORAC). Sifat anti-penuaan ditandai dengan aktivitas penghambatan anti-elastase dan anti-kolagenase. Hasil penelitian menunjukkan bahwa P. minus menunjukkan aktivitas pemulungan radikal tertinggi dan sifat anti-penuaan. Biplot kuadrat terkecil parsial (PLS) menunjukkan adanya metabolit kuat dalam P. minus seperti quercetin, quercetin-3-O-rhamnoside (quercitrin), turunan myricetin, catechin, isorhamnetin, astragalin, dan apigenin.metode ekstraksi flavonoid pdfDapat disimpulkan bahwa P. minus dapat dianggap sebagai sumber potensial bahan anti penuaan dan juga penangkal radikal bebas yang baik. Oleh karena itu, P. minus dapat digunakan dalam pengembangan di masa depan dalam penelitian anti-penuaan dan persiapan bahan obat.

Kata kunci:pemulungan radikal; penghambat elastase; penghambat kolagenase; metabolomik; analisis data multivariat; proton NMR; profil senyawa

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

1. Perkenalan

Penuaan ditandai dengan penurunan progresif fungsi fisiologis berbagai organ, diikuti oleh disfungsi, dan akhirnya kematian [1]. Ini dapat dikategorikan oleh gangguan fisiologis, metabolisme, dan kekebalan yang terkait dengan stres oksidatif ekstrem. Produksi terus-menerus spesies oksigen reaktif (ROS), meskipun penting untuk fungsi biologis, mematikan bila hadir dalam jumlah berlebihan. Radikal ini biasanya dihilangkan melalui sistem pertahanan antioksidan. Namun, pada tahap penuaan, sistem pertahanan antioksidan menjadi tidak berfungsi, mengakibatkan kerusakan sel dan akibatnya membuat sel rentan terhadap berbagai penyakit degeneratif.

Di seluruh dunia saat ini, terdapat keanekaragaman tumbuhan yang telah lama digunakan secara tradisional oleh masyarakat untuk penuaan baik untuk dimasukkan ke dalam makanan yang dimasak atau dimakan mentah sebagai salad. Di antara herbal yang umum digunakan di Malaysia untuk tujuan ini adalah daun Curcuma longa, Oenanthe japonica, Vitex negundo, Pluchea indica, Cosmos caudatus, dan Persicaria minus. Selain tujuan tersebut, jamu ini diyakini memiliki nilai medis yang secara tidak langsung memberikan manfaat kesehatan bagi konsumennya. Sebagai contoh, daun C. longa banyak digunakan karena aromanya yang menyenangkan, terutama dalam masakan Asia, meskipun penggunaannya dalam sediaan obat belum didokumentasikan dengan baik.O. javanica biasanya digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengobati penyakit kuning, hipertensi, polidipsia, menurunkan tekanan darah, menghilangkan aritmia dan anti-anafilaksis [2-4]. Juga dilaporkan bahwa ramuan ini memiliki sifat protektif terhadap kerusakan hati akibat stres oksidatif, peroksidasi lipid hati pada tikus yang diberi bromobenzena, keracunan alkohol, dan aktivitas virus hepatitis B [5-8]. V. negundo secara tradisional digunakan sebagai obat tradisional untuk menyembuhkan sakit kepala, demam, pilek, dan batuk, mengobati penyakit mata, sakit gigi, radang, leukoderma, borok kulit, demam catarrhal, rheumatoid arthritis, gonore, bronkitis, vermifuge, antibakteri, antipiretik dan sifat antihistamin [9,10]. Ramuan ini telah dilaporkan memiliki potensi anti-hiperglikemik, dan efek hepatoprotektif dan telah digunakan sebagai terapi penggantian hormon dalam praktek klinis [11-13]. P. indica dikenal secara tradisional memiliki antioksidan, antimikroba, anti-inflamasi, memberikan efek hipoglikemik dan diuretik; dan untuk menyembuhkan rheumatoid arthritis [14-19]. Ramuan lokal yang populer, C. caudatus telah digunakan untuk meningkatkan sirkulasi darah, meningkatkan pembentukan tulang yang sehat, mengurangi panas tubuh, meningkatkan nafas segar, mengobati infeksi yang terkait dengan mikroorganisme patogen, menurunkan tekanan darah tinggi dan juga berguna dalam membersihkan darah [20-24]. Ramuan ini juga dikenal memiliki sifat antioksidan, anti-diabetes, anti-hipertensi, anti-bakteri,l, dan anti-jamur [22,25-27]. Ramuan terkenal, P. minus telah dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba, aktivitas sitotoksik terhadap HeLa (karsinoma serviks manusia), antioksidan kuat, dan aktivitas antikanker [28-33]. Ramuan ini juga digunakan dalam pengobatan herbal untuk menyembuhkan gangguan pencernaan, karena minyak atsirinya telah digunakan untuk menghilangkan ketombe dan juga digunakan dalam terapi aroma dan dalam industri parfum [34,35]. Namun, penerapan herbal ini sebagai agen anti-penuaan masih terbatas dan kurangnya informasi di bidang ini.

Cerita rakyat telah menggunakan tumbuhan atau tanaman obat untuk mengobati berbagai kondisi seperti asam urat, tekanan darah tinggi, diabetes, diare, dan juga untuk menunda penuaan [36]. Organisasi Kesehatan Dunia melaporkan bahwa sebagian besar penyakit telah diobati dengan ramuan tradisional atau tanaman obat dan ini telah dipraktikkan oleh 65-80 persen populasi dunia[37]. Beberapa tanaman ini telah terbukti memiliki aktivitas penangkapan radikal yang sangat kuat [38]. Senyawa alami yang diyakini berkontribusi terhadap efek terapeutik ini berasal dari kelompok metabolit sekunder, terutama polifenol. Tanaman secara alami mensintesis polifenol dan menyediakan kategori besar senyawa kimia yang memiliki antioksidan, anti-karsinogenik, anti-obesitas, anti-diabetes, anti-inflamasi, dan sifat fungsional lainnya. Polifenol juga bisa bertahan melawan stres oksidatif [39,40]. Metabolit sekunder ini memiliki variasi substansial dalam strukturnya, yang berkontribusi pada rasa, warna, dan atribut sensorik tanaman. Polifenol berinteraksi dengan sel pada tingkat sel, terutama melalui kontak langsung dengan reseptor atau enzim yang terkait dengan transduksi sinyal. Modifikasi status redoks sel dapat mengakibatkan interaksi ini dan juga memicu rantai respons yang bergantung pada redoks. Efek antioksidan dan prooksidan polifenol telah didefinisikan secara luas, menghasilkan efek yang berbeda pada jalur fisiologis sel. Kelangsungan hidup sel dapat meningkat jika polifenol bertindak sebagai antioksidan. Sebaliknya, mereka dapat menyebabkan apoptosis dan menghambat evolusi tumor ketika mereka bertindak sebagai prooksidan. Namun, efek perlindungan polifenol 'dapat berkembang jauh melampaui hanya mengatasi stres oksidatif [41]. Akumulasi studi telah melaporkan bahwa polifenol seperti quercetin, epicatechin gallate, epigallocatechin gallate, dan asam galat dapat menghambat aktivitas enzim proteolitik dan tirosinase secara in vitro, dengan bertindak sebagai agen kompleks atau presipitasi [42-45]. Oleh karena itu, herba atau tanaman obat yang menunjukkan sifat antioksidan dan efek penghambatan terhadap enzim penuaan dapat digunakan sebagai antioksidan dan juga sebagai agen anti-penuaan. Mengingat hal ini, profil metabolit dan korelasi dengan aktivitas penangkapan radikal dan sifat anti-penuaan dari tanaman ini harus dilakukan. Variasi metabolik antara organisme dapat dievaluasi melalui metabolomik, yang dianggap sebagai alat serbaguna saat ini [46,47].flavonoidvariasi dapat dipelajari dengan menggunakan metode analisis tertentu bersama-sama dengan analisis data multivariat. Misalnya, instrumen analitik yang paling sering digunakan untuk studi metabolisme tanaman adalah spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR) [48] Spektroskopi NMR dapat menawarkan analisis struktural sederhana yang dicapai dari sinyal dan konstanta kopling metabolit (primer dan sekunder) yang hadir dalam organisme, termasuk ekstrak kasar [49]. Selain itu, intensitas sinyal metabolit relatif terhadap konsentrasi molar dapat memberikan bukti yang berguna tentang kualitas dan kuantitas metabolit yang diidentifikasi [49]. NMR adalah pilihan terbaik untuk sidik jari dan diskriminasi herbal karena evaluasi ini mencerminkan jumlah metabolit yang telah diidentifikasi dan bukan sinyal yang diberikan [49]. Sejumlah besar data yang diperoleh dari analisis NMR dikelola oleh analisis komponen utama (PCA) dan kuadrat terkecil parsial (PLS), yang merupakan komponen analisis data multivariat. Alat yang berguna ini juga digunakan untuk mendeteksi kemungkinan penanda dalam sampel[48].

Cistanche dapat anti-penuaan

Mengingat keterbatasan aplikasi dan kurangnya informasi tentang herbal terpilih sebagai agen anti penuaan, dalam penelitian ini daun enam herbal terpilih, yaitu C.longa, O. javanica, V. negundo, P. indica, C .caudatus, dan P.minus, dianalisis menggunakan spektroskopi 'H-NMR untuk profil metabolit dan korelasinya dengan aktivitas pembersihan radikal dan sifat anti-penuaan. Dihipotesiskan bahwa ramuan ini akan mengungkapkan aktivitas biologis yang signifikan (aktivitas pemulung radikal dan sifat anti-penuaan) dan korelasi yang signifikan antara metabolit dan sifat anti-penuaan akan diperoleh.penggunaan hesperidinTumbuhan ini dipilih berdasarkan penggunaannya selama beberapa generasi dalam masakan tradisional lokal dan mereka dimakan mentah sebagai salad selama zaman rakyat.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1.Aktivitas Pemulungan Radikal Herbal

Radikal bebas telah dikaitkan sebagai penyebab berbagai penyakit manusia yang terdiri dari diabetes mellitus, aterosklerosis, lesi inflamasi, penyakit jantung iskemik, gangguan metabolisme, penyakit imunosupresif yang berbeda, kondisi degeneratif neuromuskular, dan proses penuaan [50-52]Mekanisme potensial senyawa fenolik sebagai sistem pertahanan antioksidan diyakini karena pemulungan langsung radikal bebas yang terlibat dalam penuaan dan penyakit kronis lainnya [53-55]. Pada dasarnya, aktivitas penangkapan radikal senyawa alami pada tanaman diukur untuk menentukan peringkat dan merekomendasikan bahan tanaman terbaik untuk dikonsumsi [56].

Dalam penelitian ini, potensi aktivitas penangkapan radikal enam herbal terhadap 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH),2,2-azinobis(3-etil-benzotiazolin{ {7}}asam sulfonat) (ABTS) dan kapasitas penyerapan radikal oksigen (ORAC) (peroksil) radikal diperiksa dan ditunjukkan pada Gambar 1. Hasil penelitian mengungkapkan bahwa aktivitas pembersihan radikal dari tumbuhan yang diteliti berkisar antara 36,12 hingga 411,61 ug/mL untuk IC5o uji DPPH, 70,27 hingga 854,98mg Trolox ekivalen kapasitas antioksidan (TEAC)/g sampel untuk uji ABTS dan 1972,31 hingga 6639,01 mM Trolox/g sampel untuk uji ORAC. Temuan aktivitas penangkap radikal DPPH menunjukkan bahwa daun P. minus menunjukkan peningkatan yang signifikan (p<0.05) higher="" radical="" scavenging="" effect="" followed="" by="" c.caudatus,="" pindica,="" v.="" negundo,="" o.e="" javanica,="" and="" c.longa="" leaves="" (figure="" 1a).="" the="" leaves="" of="" p.="" minus="" extracted="" with="" 60%="" ethanol="" showed="" exceptionally="" high="" radical="" scavenging="" activity="" that="" was="" close="" to="" that="" of="" trolox.="" this="" finding="" is="" in="" agreement="" with="" huda-faujan="" et="" al.[57]who="" stated="" that="" p.="" minus="" extract="" showed="" greater="" antioxidant="" activity="" when="" compared="" to="" other="" common="" herbs="" such="" as="" c.="" caudatus,o.javanica,="" centella="" asiatica,="" and="" murraya="" koenigiii="" leaves,="" and="" the="" antioxidant="" activity="" were="" comparable="" to="" that="" of="" synthetic="" antioxidant="" butylhydroxytoluene="" (bht),="" other="" studies="" have="" also="" proved="" that="" p.minus="" leaves="" demonstrated="" high="" antioxidant="" activity="">

In this study, ABTS radical cation decolorization assay showed quite similar results obtained in the DPPH radical scavenging activity (Figure 1B).P.minus leaves showed the highest Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC), followed by C.caudatus, P.indica, V. negundo, C.longa, and O. javanica. However, the antioxidant value for C. longa leaves was not significantly different (p>0.05) dari V. negundo dan O.javanica. Temuan ini telah diantisipasi karena aktivitas penangkal radikal ABTS dan DPPH memiliki mekanisme reaksi yang serupa dalam analisis antioksidan di mana satu atau lebih elektron ditransfer untuk mereduksi senyawa sasaran. Dalam uji ABTS, hasilnya dibandingkan dengan menggunakan setara Trolox. Menurut TEAC, ekstrak daun P.minus adalah agen pemulung radikal yang kuat dan dapat dipelajari lebih lanjut untuk sifat fungsional lainnya.

Gambar 1 juga menunjukkan aktivitas pemulungan ekstrak herbal pada radikal peroksil dalam hal nilai ORAC (mM Trolox/g sampel). Di antara ekstrak herba yang diuji, aktivitas pemulungan V. negundo dan C.caudatus terhadap radikal peroksil yang dihasilkan AAPH secara signifikan (hal.<0.05) higher,="" followed="" by="" p.="" minus="" and="" p.="" indica,="" and="" the="" lowest="" radical="" scavenging="" potential="" was="" exhibited="" by="" o.="" javanica="" and="" c.="" longa="" (figure="" 1c).="" this="" finding="" was="" slightly="" different="" when="" compared="" with="" the="" other="" two="" radical="" scavenging="" assays(dpph="" and="" abts),="" which="" revealed="" that="" p.minus="" had="" the="" highest="" free="" radical="" scavenging="" effect.="" in="" vitro,="" antioxidant="" potential="" can="" be="" determined="" according="" to="" two="" categories="" of="" classes,="" which="" are="" hydrogen="" atom="" transfer(hat)based="" assays="" and="" electron="" atom="" transfer="" (et)based="" assays.="" assays="" based="" on="" et="" include="" dpph="" and="" abts="" radical="" scavenging="" capacity="" assays,="" the="" total="" phenolic="" assay="" by="" folin-ciocalteu="" reagent,="" superoxide="" dismutase(sod)="" assay,="" and="" the="" ferric="" ion="" reducing="" antioxidant="" power(frap)="" assay="" an="" example="" of="" hat-based="" assays="" is="" the="" orac="" assay="" which="" scavenges="" peroxyl="" radicals="" [60].="">cistanche kekaisaran yang hilangOleh karena itu, dapat berspekulasi bahwa mekanisme aksi dalam efek pembersihan radikal P.minus sangat bergantung pada pengujian berbasis ET, yang terutama mengais spesies oksigen reaktif selain radikal peroksil. Namun demikian, semua pengujian menunjukkan bahwa P.minus dan C.caudatus memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi, sebanding dengan kontrol positif, quercetin. Oleh karena itu, aplikasi herbal ini sebagai agen anti-penuaan harus diselidiki.

2.2. Aktivitas Penghambatan Elastase

Elastase adalah enzim dari kelas protease (peptidase) yang memecah elastin. Elastin terletak di jaringan ikat dan merupakan protein yang bertanggung jawab atas elastisitas kulit dan paru-paru dan dikatalisis oleh enzim elastase [61-63]. Penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa kerusakan elastin oleh elastase intraseluler meningkat seiring bertambahnya usia atau karena paparan berulang terhadap radiasi UV, yang selanjutnya menyebabkan penuaan kulit [62-64].

Penelitian ini dirancang untuk menentukan efek ekstrak herbal yang dipilih sebagai agen anti-penuaan. Gambar 2A menunjukkan penghambatan enzim elastase oleh ekstrak herbal. Enzim elastase yang diinkubasi dengan ekstrak herba secara signifikan (p < 0.05)="" menghambat="" enzim="" lebih="" dari="" 40="" persen="" .="" hasil="" penelitian="" mengungkapkan="" bahwa="" aktivitas="" penghambatan="" elastase="" dari="" herbal="" yang="" diuji="" berkisar="" antara="" 43,47="" hingga="" 57,91="" persen="" penghambatan.="" pada="" konsentrasi="" 100="" ug/ml="" untuk="" setiap="" ekstrak="" herba,="" p.minus="" menunjukkan="" secara="" signifikan=""><0.05) higher="" elastase="" inhibition="" at="" 57.61="" ±="" 0.95%,="" even="" higher="" than="" that="" of="" quercetin="" at="" the="" same="" concentration="" with="" inhibition="" at="" 52.94±1.18%.="" c.caudatus="" also="" showed="" comparable="" anti-elastase="" activity="" (51.34±0.21%)to="" quercetin,="" followed="" by="" p.="" indica,="" v.negundo,="" c.="" longa="" and="" o.javanica.="" similar="" findings="" were="" also="" observed="" by="" other="" studies="" on="" persicaria="" species="" (synonyms="" polygonum="" spp)[43,65,66].="" kim="" et="" al.="" [44]="" also="" reported="" that="" the="" persicaria="" spp="" demonstrated="" the="" highest="" elastase="" inhibition="" among="" 60="" plants="" studied="" with="" inhibition="" against="" elastase="" activity="" being="" more="" than="" 50%.="" the="" inhibition="" of="" the="" elastase="" enzyme="" activity="" of="" p.="" minus="" obtained="" in="" this="" study="" is="" in="" agreement="" with="" previous="">

Ekstrak tumbuhan telah banyak diteliti untuk aktivitas penghambatan enzim penuaan dan sering ditemukan memiliki aktivitas anti-elastase, misalnya aktivitas anti-elastase ditentukan dari polifenol yang diisolasi dari daun kesemek (Diospyros kaki) [67] dan rosemary (Rosmarinus officinalis) ekstrak [68]. Senyawa fenolik seperti katekin, epikatekin, resveratrol, dan procyanidin B2 dalam anggur pomace serta fenolat tanaman [69,70], dan flavonoid seperti quercetin, kaempferol, dan myricetin sebagai senyawa individu [71], juga telah ditemukan memiliki aktivitas anti-elastase yang kuat.fraksi flavonoid murni mikronisasi 1000 mg menggunakanSebuah penelitian serupa pada 23 ekstrak tumbuhan mengungkapkan bahwa teh putih memiliki aktivitas anti-elastase tertinggi, yang mengandung kandungan fenolik yang sangat tinggi [72]. Oleh karena itu, senyawa fenolik terutama flavonoid yang terdapat pada P. minus diduga berperan dalam aktivitas anti-elastase yang tinggi.

2.3. Aktivitas Penghambatan Kolgenase

Enzim kolagenase adalah metalloproteinase yang memecah ikatan peptida dalam kolagen. Enzim ini juga mampu membelah molekul lain yang terdapat dalam sel, seperti elastin, fibronektin, gelatin, aggrecan, dan laminin, selain kolagen [73]. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan kolagenase dari herbal yang diuji berkisar antara 56,49±1,29 hingga 71.00±1,08 persen . Tren yang sebanding terlihat untuk aktivitas anti-kolagenase dari herbal yang diteliti, di mana P.minus kembali menunjukkan secara signifikan (hal.<0.05) higher="" collagenase="" inhibitory="" activity="" with="" 71.00±="" 1.08%(figure="" 2b).="" interestingly,="" the="" inhibitory="" effect="" of="" p.minus="" was="" higher="" than="" that="" of="" quercetin="" at="" the="" same="" concentration="" (65.95±0.56%).="" c.caudatus="" and="" p.="" indica="" on="" the="" other="" hand,="" showed="" comparable="" anti-collagenase="" activity="" to="" quercetin="" at="" 66.05±0.74%="" and="" 66.29±1.68,="" respectively.="" the="" inhibition="" of="" the="" collagenase="" enzyme="" decreased="" in="" the="" order="" of="" p.="" minus="">P.indica >C.caudatus >C.longa> O.javanica>V. Segundo. However, the anti-collagenase activity was found to be not significantly different (p>0.05)antara P. indica dan C.caudatus, C.longa, dan O.javanica. Sebuah studi tentang aktivitas anti-kolagenase telah melaporkan bahwa katekin teh hijau seperti epigallocatechin gallate (EGCG) bisa menjadi penghambat kolagenase. Demikian pula, dalam penelitian ini, EGCG menunjukkan aktivitas anti-kolagenase yang sangat baik pada 12,5 ug/mL. Menurut Kim et al. [74], ekstrak teh, yang mengandung katekin yang dikenal sebagai pengkhelat logam, dapat mengikat ion Zn2 ​​dalam enzim kolagenase dan oleh karena itu mencegahnya bergabung dengan substrat. Mekanisme ini disebabkan kolagenase menjadi enzim metalloproteinase yang mengandung seng.

Kolagen yang merupakan protein paling melimpah dalam matriks ekstraseluler dan komponen utama kulit bertanggung jawab untuk kekuatan dan elastisitas kulit, serta untuk mempertahankan fleksibilitasnya [75]. Oleh karena itu, senyawa yang menunjukkan aktivitas anti-kolagenase mungkin memiliki efek yang berharga, secara umum, untuk mempertahankan kesehatan kulit dengan menghambat degradasi matriks dermal dengan menunda proses pemecahan kolagen dan selanjutnya proses kerutan. Dalam penelitian ini, efek penghambatan ekstrak P. minus pada aktivitas kolagenase mungkin terjadi melalui beberapa mekanisme. Karena P. minus adalah herbal dan sebagian besar herbal diketahui kaya dengan polifenol, gugus hidroksil (OH) polifenol mungkin telah terhubung dengan tulang punggung atau rantai gugus samping fungsional kolagenase lainnya. Selain itu, interaksi hidrofobik antara cincin benzena polifenol dan kolagenase mungkin telah mengubah konformasi enzim, sehingga mengakibatkan tidak berfungsinya enzim [76]. Mekanisme ketiga mungkin melibatkan situs aktif ion seng pada kolagenase seperti yang dinyatakan di atas. Bigg dkk. [77] melaporkan bahwa situs aktif enzim kolagenase mengandung ion seng struktural yang sangat berfungsi dalam membantu interaksi dengan inhibitor. Selain polifenol, flavonoid yang merupakan subkelompok polifenol juga dapat mengkelat logam seng melalui struktur 3-hidroksi flavonnya [78].

Sebuah studi oleh Sin dan Kim [79] mengungkapkan bahwa flavonol sangat efektif sebagai inhibitor kolagenase. Menurut penulis, quercetin dan kaempferol memiliki efek penghambatan yang lebih tinggi pada aktivitas kolagenase dibandingkan dengan flavon, isoflavon dan flavanon, di mana yang terakhir adalah yang paling tidak efisien. Oleh karena itu, senyawa golongan flavonol seperti quercetin, kaempferol, myricetin, dan galanin yang mungkin ada dalam P.minus diyakini memberikan aktivitas anti-kolagenase yang tinggi dari ramuan ini. Di sisi lain, elastase alami dan inhibitor kolagenase dari tanaman diperlukan sebagai sumber baru agen anti-penuaan, untuk menghindari kulit menjadi tua atau keriput. Oleh karena itu, temuan ini menunjukkan bahwa ada kemungkinan komponen yang sama dalam ekstrak P. minus yang mungkin memiliki efek penghambatan terhadap enzim elastase dan kolagenase.

2.4.1H-NMR Spektra Herbal dan Identifikasi Metabolit

Spektrum H-NMR representatif dari tumbuhan yang diteliti disajikan pada Gambar 3A. Perbandingan visual spektrum LH-NMR dari enam tumbuhan menunjukkan beberapa perbedaan, terutama untuk berbagai kelas metabolit. Ada perbedaan mencolok antara spektrum H-NMR herbal pada alifatik (6 0.5-3.00), karbohidrat (63.00-5.50), dan khususnya, wilayah aromatik (65.50-9.00). Di wilayah aromatik, spektrum NMR P. minus menunjukkan perbedaan yang nyata dan menunjukkan sinyal yang lebih kuat dibandingkan dengan herbal lainnya (Gambar 3B). Hal ini menunjukkan bahwa daun P.minus mungkin terdiri dari konsentrasi metabolit aromatik yang lebih tinggi dibandingkan dengan herba lainnya.

Analisis lebih lanjut dari spektrum 'H-NMR mengungkapkan total 29 metabolit utama yang dikenali dari ekstrak daun, seperti yang ditunjukkan pada Tabel1. Identifikasi metabolit primer disediakan oleh perangkat lunak (database Chenomx) dan metabolit sekunder diidentifikasi dari database online (Human Metabolome Database [HMDB]; http://www.hmdb.ca/) dan juga dengan membandingkan dengan data dari literatur. Metabolitnya adalah sembilan metabolit primer (n=9), asam fenolik (n=5). flavonoid (n=14) dan asam askorbat (n =1). Metabolit utama yang diidentifikasi termasuk asam amino (alanin dan valin), asam lemak, dan D-limonen di mana pergeseran kimianya ditemukan di daerah alifatik (6 0.50-3.00). Metabolit primer yang terdiri dari karbohidrat( -glukosa, -glukosa, fruktosa, sukrosa), kolin, dan asam askorbat terdeteksi di daerah pergeseran kimia 3.00-5.50. Metabolit sekunder dari daerah aromatik (65.50-9.00) diidentifikasi sebagai quercetin, quercetin-3-O-rhamnoside [47,80], quercetin-3-O-glucoside [80], quercetin-3-O-glucuronide [81], quercetin-3-O-arabinofuranoside [47 80], rutin, turunan myricetin, catechin, epicatechin, isorhamnetin, astragalin, apigenin, chlorogenic asam, asam galat, asam kumarat, asam fumarat, asam format, 3-metilxantin dan serotonin, Berbagai penelitian telah menunjukkan adanya senyawa fenolik dan metabolit sekunder, khususnya flavonoid dalam daun P. minus [{{33} }], seperti yang ditemukan juga dalam penelitian ini.

Artikel ini disarikan dari Molecules 2019, 24, 3208; doi:10.3390/molecules24173208 www.mdpi.com/journal/molecules