Iridoid Dan Acyclic Monoterpene Glycosides, Kankanosides L, M, N, O, Dan P Dari Cistanche Tubulosa
Mar 06, 2022
Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)adalah tanaman parasit abadi yang tumbuh di akar spesies Salvadora atau Calotropis, tersebar di Afrika Utara, Arab, dan negara-negara Asia.1) Batang tanaman ini (Kanka-nikujuyou dalam bahasa Jepang) secara tradisional telah digunakan untuk pengobatan impotensi, kemandulan, sakit pinggang, dan kelemahan tubuh serta agen mempromosikan sirkulasi darah.1,2) Selama penelitian kami pada konstituen bioaktif dari batang Cistanche tubulosa,3-6) kami sebelumnya melaporkan dua puluh empat aminoglikosida fenilethanoid termasuk kankanosida H1, H2, I, J1, J2, K1, dan K2, dan dua oligosugar terasilasi dari batang segar Cistanchetubulosa.5,6) Selanjutnya, pokokglikosida fenilethanoid,echinacosida, akteosida,dan isoakteosida, ditemukan menghambat peningkatan kadar serum aspartat aminotransferase (sAST) dan alanine aminotransferase (sALT) di hati tikus yang terluka yang diinduksi oleh D-galaktosamin (D-GalN)/lipopolisakarida pada dosis 25-100 mg/kg per os ( po). Persyaratan struktural glikosida fenilethanoid untuk aktivitas hepatoprotektif juga dijelaskan.5) Dalam studi lanjutan tentang konstituen dalam batang segar Cistanchetubulosa, kami selanjutnya mengisolasi sebelas glikosida iridoid termasuk kankanosida L (1), M (2), dan N (3), tujuh glikosida monoterpen asiklik termasuk kankanosida O (4) dan P (5), tiga fenilpropanoid, dan empat lignan. Makalah ini membahas isolasi dan penjelasan struktur lima senyawa baru (1-5).
Batang segar C. tubulosa (dibudidayakan di Urumuqi, Provinsi Xin jiang, Cina) diekstraksi dengan metanol di bawah refluks untuk menghasilkan ekstrak metanol (8,36 persen dari batang segar). Dari ekstrak metanol, diperoleh fraksi yang dielusi H2O- dan MeOH (masing-masing 5,63 persen dan 2,73 persen ) dengan kromatografi kolom Diaion HP-20 (H2O→MeOH) seperti yang dijelaskan sebelumnya.5) Fraksi yang dielusi MeOH adalah dikenakan kromatografi kolom SiO2 dan ODS dan akhirnya HPLC untuk menghasilkan kankanosida L (1, 0.0026 persen ), M (2, 0.{{ 27}}001 persen ), N (3, 0.00{{60}}7 persen ) , O (4, 0.0{{90}}2{{105}} persen ), dan P (5, {{118} }.0002 persen ), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0,197 persen ), bartsioside3,7) (7, 0.0583 persen ), gluroside3,7) (8, 0.0443 persen ), kankanoiside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 persen ), asam mussaenosidic3,7) (10, 0,0056 persen ), 8- asam epiloganat3,8) (11, 0,0023 persen ), 8-asam epideoksiloganat3,7) (12, 0,0004 persen ), asam geniposidat3,7) (13, 0,0040) persen ), kankanoside E3) (14, 0,0026 persen ), (2E,6Z)-8-b D-glucopyranosyloxy-2,6-di metil-2,6-asam oktadienoat3,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 persen ), (2E,6E){{95 }},7-dimetil-8-hidroksioktadien-1-yl-ObD-glu copyranoside10) (16, 0,0082 persen ), 8-hidroksigeraniol 8-Ob- D-glucopyranoside11 ) (17, 0,0044 persen ), betulalbusid A12) (18, 0,0004 persen ), koniferin13) (19, 0,0002 persen ), syringin13) (20, 0,0015 persen ), aldehida sinapik 4-ObD-glucopyranoside14) (21, 0,0001 persen ), ( )-pinoresinol ObD-glucopyranoside4,8,15) (22, 0,0010 persen ), eucommin A16) (23, 0,0002 persen ), isoeucommin A17) (24, 0,0010 persen ), dan ( )-syringaresinol ObD- glucopyra noside4,8,18) (25, 0,0044 persen ).
Cistanche tubulosameningkatkan fungsi seksual
Struktur Kankanosida L (1), M (2), dan N (3)
Kankanoside L (1) diperoleh sebagai bubuk putih dengan rotasi optik negatif ([a]D 26 45.7 dalam MeOH). Spektrum IR-nya menunjukkan pita serapan yang kuat pada 3433 dan 1{{20}}80 cm 1 yang menunjukkan bagian glikosida. Pengeboman atom cepat (FAB)-MS dari 1 berjalan dalam mode ion positif dan negatif menunjukkan puncak ion kuasimolekul pada m/z 371 [M Na] dan 347 [MH], masing-masing, dan rumus molekul ditentukan sebagai C15H24O9 dengan pengukuran FAB-MS resolusi tinggi. Hidrolisis asam 1 dengan 1,0 M asam klorida (HCl) membebaskan D-glukosa, yang diidentifikasi dengan analisis HPLC menggunakan detektor rotasi optik.3—6) Spektrum 1 H- dan 13C-NMR dari 1 (CD3OD, Tabel 1, 2), yang ditetapkan oleh berbagai eksperimen NMR,19) menunjukkan sinyal sebagai penanda untuk empat metilen [d 1,43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 (1H, br dd, J kira-kira 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= kira-kira 8, 14 Hz, 6b-H), 3,50 ( 1H, ddd, J 2.4, 12.5, 13.0 Hz, 3a-H), 3.83 (1H, br dd, J=ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3.78, 4.12 (masing-masing 1H, keduanya d, J 13.1 Hz, 10-H2)], dua metana [d 2.15 (1H, dd, J 7.2, 8.9 Hz, 9-H) dan 2.23 (1H, m, 5- H)], dan gugus asetal [d 4.81 (1H, d, J 8.9 Hz, 1-H)] bersama-sama dengan bagian b-glucopyranosyl [d 4.70 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 1, spektroskopi korelasi 1 H-1H (1 H-1 H COSY) percobaan pada 1 menunjukkan adanya struktur parsial yang ditulis dalam garis tebal. Dalam percobaan korelasi ikatan ganda heteronuklear (HMBC) pada 1, korelasi jarak jauh diamati antara proton dan karbon berikut (1-H dan 3-C, 8-C; {{ 124}}H dan 1-C; 7-H dan 8-C, 10-C; 9-H dan 8-C; {{131 }}H2 dan 7-C, 8-C; 1 -H dan 1-C) seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1. Selanjutnya, stereostruktur relatif 1 dicirikan oleh fase-sensitif nuklir Eksperimen spektroskopi peningkatan overhauser (fase-sensitif NOESY), yang menunjukkan korelasi NOE antara pasangan proton berikut (1-H dan 3a H; 3a-H dan 4a-H; 3b-H dan 4b-H; 4b-H dan 5-H, 9-H; 5- H dan 6b-H, 9-H; 6a-H dan 7-H; 7-H dan 10-H2), seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1. Spektrum 1 H- dan 13C-NMR dari 1 dapat ditumpangkan pada spektrum konstituen iridoid utama 6-deoxycatalpol (6), kecuali untuk sinyal karena ke bagian d-laktol jenuh. Akhirnya, hidrogenasi 6 menghasilkan 1, sehingga stereostruktur kankanosida L dijelaskan menjadi 3,4- dihidro-6-deoxycatalpol (1).
Kankanosida M (2) diperoleh sebagai bubuk putih dengan rotasi optik negatif ([a]D26 18,7 dalam MeOH). Spektrum IR 2 menunjukkan pita serapan pada 3433, 1736, 1655, dan 1076 cm 1 yang berasal dari gugus hidroksil, d-lakton, olefin, dan eter. Spektrum FAB-MS ion positif 2 menunjukkan puncak ion kuasimolekul pada m/z 353 [M Na] , dan rumus molekul ditentukan sebagai C15H22O8 dengan pengukuran FAB-MS ion positif resolusi tinggi. Hidrolisis asam 2 dengan 1,0 M HCl membebaskan D-glukosa. Spektrum 1 H- dan 13C NMR dari 2 (CD3OD, Tabel 1, 2) menunjukkan sinyal yang dapat ditentukan untuk empat metilen [d 1.66, 2.11 (masing-masing 1H, keduanya m, 4-H2), 2.15, 2.75 (masing-masing 1H , keduanya m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J 2.8, 8.4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (masing-masing 1H, keduanya d, J 13,1 Hz, 10- H2), 4,35 (1H, ddd, J 3.1, 6.7, 14,3 Hz, 3a-H)], dua metana [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, {{ 84}}H)], sebuah olefin [d 5,94 (1H, m, 7-H)], dan gugus lakton jenuh (d C 174.9) bersama dengan bagian bD-glucopyranosyl [d 4.32 (1H, d , J 7,9 Hz, 1 -H)]. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1, percobaan 1 H-1H COZY pada 2 menunjukkan adanya struktur parsial yang ditulis dalam garis tebal dan, dalam percobaan HMBC, korelasi jarak jauh diamati antara pasangan proton dan karbon berikut ({{105 }}H dan 1-C; 7-H dan 9-C; 9-H dan 1-C, 8-C; {{112} }H2 dan 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H dan 10-C). Stereostruktur relatif dari 2 dicirikan oleh eksperimen NOESY fase-sensitif, yang menunjukkan korelasi NOE antara pasangan proton berikut (3a-H dan 4a-H; 3b-H dan 4b-H; 4b-H dan 5- H;5-H dan 6b-H, 9-H) seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1. Dengan demikian, stereostruktur 2 dijelaskan seperti yang ditunjukkan.
Kankanoside N (3) diisolasi sebagai bubuk putih dengan rotasi optik negatif ([a]D25 24,6 dalam MeOH). Dalam ion positif FAB-MS dari 3, puncak ion kuasimolekul diamati pada m/z 371 [M Na]. Rumus molekul C16H28O8 ditentukan dengan pengukuran FAB-MS resolusi tinggi. Hidrolisis asam 3 dengan 1,0 M HCl membebaskan D-glukosa. Data 1 H- dan 13C-NMR (CD3OD, Tabel 1, 2) menunjukkan sinyal yang dapat diberikan ke metil [d 1.07 (3H, d, J 7.2 Hz, 10-H3)] , empat metilen {d 1,37, 1,87 (masing-masing 1H, keduanya m, 7-H2), 1,65, 1,81 (masing-masing 1H, keduanya m, 6-H2), [3,65 (1H, dd, J 9.1 , 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J 5,9, 9,8 Hz), 11-H2], dan [3,70 (1H, dd, J 3.3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), {{ 71}}H2]}, empat metana [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8- H), 2,16 (1H, m, 5-H)], dan gugus hemiasetal [d 4,67 (1H, d, J 7,4 Hz, 1-H)] bersama dengan bagian bD-glukopiranosil [ d 4,26 (1H, d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. Struktur iridoid dari 3 diklarifikasi oleh eksperimen 1 H-1 H COZY dan HMBC dan stereostruktur relatif dicirikan oleh eksperimen NOESY fase-sensitif seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1. Akibatnya, struktur stereo dari 3 dijelaskan seperti yang ditunjukkan.
Struktur Kankanosida O (4) dan P (5)
Kankanosida O (4) dan P (5), C16H26O8, juga diperoleh sebagai bubuk putih dengan rotasi optik negatif (4: [a] D 23 26.1; 5: [a] D 21 32,7 keduanya dalam MeOH). Spektrum IR 4 dan 5 menunjukkan pita serapan pada 3433, 1696, 1647, dan 1076 cm 1 untuk 4, dan pada 3434, 1701, 1647, dan 1{{96} }76 cm 1 untuk 5, berasal dari fungsi glikosidik, karboksil, dan olefin. Spektrum UV mereka menunjukkan serapan maksimum yang sama pada 217 nm yang menunjukkan adanya gugus asam karboksilat b-tak jenuh di keduanya. Hidrolisis asam dari 4 dan 5 D-glukosa yang dibebaskan, sedangkan dengan hidrolisis enzimatik dengan b glukosidase, 4 dan 5 menghasilkan (2E,6E)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{39 }},{{40}}asam oktadesenoat20) (4a) dan (2E,6E)-8-hidroksi-3,7- dimetil{{ 48}},6-asam oktadesenoat21) (5a), berturut-turut. 1 Data H- dan 13C-NMR dari 4 (CD3OD, Tabel 2, 3) menunjukkan sinyal yang dapat dialihkan ke dua metil [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J 1,0 Hz , 9-H3)], tiga metilen {d 2,19 (2H, br t, J ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [ 4,24 (1H, dd, J 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J 6.2, 12.0 Hz), 8-H2]}, dan dua olefin trisubstitusi [d 5.41 (1H, ddd, J 1.2, 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J 7.2, 1.0 Hz, 3-H)] bersama-sama dengan bagian bD glucopyranosyl [d 4.34 (d, J 7.8 Hz, 1 -H)]. Dengan perbandingan sinyal karbon dalam spektrum 13C-NMR 4 dengan 4a, pergeseran glikosilasi diamati pada posisi 8- (d C 4: 65.5; 4a: 59.4). Posisi hubungan glukosida juga dikonfirmasi oleh percobaan HMBC seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2. Akibatnya, stereostruktur 4 diklarifikasi menjadi (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,{{ 143}}dimetil-2,6-asam oktadesenoat. Di sisi lain, data 1 H- dan 13C-NMR dari 5 (CD3OD, Tabel 2, 3) menunjukkan adanya (2E,6E)-8-hidroksi-3,{{158} }dimetil-2,6-asam oktadesenoat [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9-H3), 2,24 ( 2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (masing-masing 1H, keduanya br d, J ca. 12 Hz, 8-H2) , 5,47 (1H, tq, J 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H)] bersama dengan bagian bD-glucopyranosyl [d 4.23 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. Konektivitas dari bagian bD-glucopyranosyl dalam 5 dijelaskan berdasarkan percobaan HMBC seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2. Selanjutnya, pergeseran glikosilasi khas diamati untuk sinyal pada 8-posisi (d C 5: 75.6; 5a: 68.8). Berdasarkan bukti yang disebutkan di atas, stereostruktur 5 ditentukan menjadi (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-3,7-dimetil-2,{ {230}}asam okta dienoat.
Efek Konstituen pada Tumor Necrosis Factor-a (TNF-a) yang diinduksi Sitotoksisitas dalam Sel L929
TNF-a diketahui memediasi berbagai cedera organ melalui induksi apoptosis selulernya. Dalam kasus hati, efek biologis TNF-a telah terlibat dalam cedera hati yang disebabkan oleh racun hati, iskemia/reperfusi, hepatitis virus, dan alkohol.22-24) Oleh karena itu, TNF-a dianggap penting target untuk menemukan agen anti-inflamasi dan hepatoprotektif. Berdasarkan konsep yang disebutkan di atas, kami menyelidiki konstituen pelindung dari produk yang terjadi secara alami pada kematian sel yang diinduksi TNF-a dalam sel L929, garis sel yang sensitif terhadap TNF.25) Sebelumnya, kami telah melaporkan bahwa beberapa konstituen dari Piper Chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) dan Sapindus rarak, 36-38) ditemukan menunjukkan efek penghambatan TNF-a -diinduksi sitotoksisitas dalam sel L929. Karena konstituen fenilethanoid C. tubulosa (misalnya echinacoside, acteoside, dan isoacteoside, dll.) 5) juga menghambat sitotoksisitas ini, kami selanjutnya memeriksa konstituen iridoid, fenilpropanoid, dan lignan seperti yang ditunjukkan pada Tabel 4. Hasilnya, kankanoside A (9, penghambatan: 16,3 2.0 persen pada 100 mM), asam mussaenosidik (10, 44,7 8,7 persen ), 8-asam epiloganat (11, 10,7 0,4 persen ), 8-hidroksigeraniol 8-ObD-glucopyranoside (17, 21,3 2,4 persen), dan ( )-pinoresinol ObD-glucopyranoside (22, 22,3 1,6 persen), ditemukan menunjukkan aktivitas yang signifikan. Meskipun aktivitas mereka lebih lemah daripada echinacosida (IC50 31,1 mM), acteoside (17,8 mM), dan isoaceteoside (22,7 mM), komponen utama fenilethanoid.5)
Eksperimental
Instrumen berikut digunakan untuk memperoleh data spektral dan fisik: rotasi spesifik, Horiba SEPA-300 polarimeter digital (l 5 cm); Spektrum UV, spektrometer Shimadzu UV-1600; Spektrum IR, spektrometer FTIR Shimadzu-8100; 1 spektrum H- dan 13C-NMR, spektrometer JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) dan JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) dengan tetramethylsilane sebagai standar internal; FAB-MS dan FAB-MS resolusi tinggi, spektrometer massa JEOL JMS-SX 102A; Detektor HPLC, Shimadzu RID-10Sebuah indeks bias, Shimadzu SPD-10A UV–VIS, dan detektor rotasi optik Shodex OR-2. Kolom HPLC, Cosmosil 5C18-MS-II, dan pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) dan (250 20 mm id) masing-masing digunakan untuk tujuan analitis dan persiapan.
Kondisi percobaan berikut digunakan untuk kromatografi: fase normal silika gel kolom kromatografi (CC), silika gel 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63—210 mesh, spherical, netral); silika gel fase terbalik CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui), dan Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100—200 mesh); TLC fase normal, pelat TLC pra-dilapisi dengan gel silika 60F254 (Merck, 0,25 mm); TLC fase terbalik, pelat TLC pra-dilapisi dengan gel silika RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); HPTLC fase terbalik, pelat TLC pra-dilapisi dengan gel silika RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), deteksi dicapai dengan penyemprotan dengan 1 persen Ce(SO4)2– 10 persen H2SO4, diikuti dengan pemanasan .
Bahan Tanaman
Item ini dijelaskan dalam laporan sebelumnya.
Ekstraksi dan Isolasi
Batang segar C. tubulosa (2,98 kg) dipotong halus dan diekstraksi tiga kali dengan metanol di bawah refluks selama 3 jam. Penguapan pelarut di bawah tekanan tereduksi memberikan ekstrak metanol (249,1 g, 8,36 persen). Ekstrak metanol dikenai Diaion HP-20 CC (5.0 kg, H2O→MeOH) untuk menghasilkan fraksi terelusi H2O- dan MeOH (167,84 g, 5,63 persen dan 81,21 g, 2,73 persen , masing-masing). Fraksi yang dielusi MeOH (61,00 g) dikenai fase normal silika gel CC [1,8 kg, CHCl3– MeOH–H2O (15 : 3 : 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] menghasilkan tujuh fraksi [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 (0,89 g), 4 (10,69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g), dan 7 (4,6{{104}} g)], seperti yang telah dijelaskan sebelumnya.5) Fraksi 1 (1,12 g) dipisahkan dengan fase terbalik silika gel CC [55 g, MeOH–H2O (4 0 : 60, v/v)→MeOH] menghasilkan lima pecahan [Fr. 1-1 (132,8 mg), 1-2 (267.0 mg), 1-3 (182,8 mg), {{80}} (31{{ 156}}.9 mg), dan 1-5 (91,4 mg)]. Fraksi 1-1 (132,8 mg) selanjutnya dimurnikan dengan HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN-1 persen berair AcOH (1{{166} } : 90, v/v)] untuk menghasilkan kankanoside M (2, 2.8 mg, 0.{{203}}{{22{{24{{248 }}}}}}01 persen ), bartsioside (7, 5,2 mg, 0.0002 persen ), aldehida sinapik {{1{{295 }}6}}O- bD-glucopyranoside (21, 1,4 mg, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 persen ). Fraksi 1-2 (267.{{350}} mg) selanjutnya dimurnikan dengan HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 persen berair AcOH (7 : 93, v/v)] menghasilkan (2E,6E)-3,7-dimetil-8-hidroksioktadien{{13{{360}}}}yl-O- bD -glucopyranoside (16, 15,8 mg, {{370}}.{{406}}007 persen ), 8-hidroksigeraniol 8-ObD glucopyranoside (17, 5.2 mg, 0,0002 persen ), ( )-pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22.0 mg, 0.0010 persen ), eucommin A (23, 5.0 mg, 0.0002 persen ), isoeu commin A (24, 21,3 mg, 0,0010 persen ), dan ( )-syringaresinol ObD-glucopy ranosida (25, 98,0 mg, 0,0044 persen). Fraksi 2 (9,56 g) dipisahkan dengan fase terbalik silika gel CC [400 g, MeOH–H2O (10 : 90, v/v)→MeOH→ aseton] untuk menghasilkan lima fraksi [Fr. 2-1 (55,9 mg), 2-2 (4,48 g), 2-3 (3,42 g), 2-4 (1,16 g), dan 2-5 (31,9 mg) ], seperti yang dijelaskan sebelumnya.5) Fraksi 2-2 (500,0 mg) menjadi sasaran HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 persen AcOH berair (5 : 95, v/v )] untuk memberikan kankanoside L (1, 6,6 mg, 0,0026 persen ) dan 6-deoxycatalpol (6, 455,5 mg, 0,182 persen ). Fraksi 2-3 (1,00 g) dimasukkan ke HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 persen berair AcOH (7 : 93, v/v)] untuk menghasilkan tujuh fraksi [Fr . 2-3-1 (66,5 mg), 2-3-2 (20,4 mg), 2-3-3 (26,0 mg), 2-3-4 (136,6 mg), 2-3-5 [ 7 (380,6 mg , 0,0581 persen )], 2-3-6 [ glurosida (8, 285,1 mg, 0,0435 persen )], dan 2-3-7 (84,9 mg)]. Fraksi 2-3-4 (106,6 mg) selanjutnya dimurnikan dengan HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN-1 persen berair AcOH (5 : 95, v/v)] untuk menghasilkan 6 (68,4 mg, 0,0134 persen ) bersama dengan salidroside5) (13,7 mg, 0,0027 persen). Fraksi 2-4 (1,16 g) dikenai HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 persen berair AcOH (15 : 85, v/v) dan Cosmosil pNAP, CH3CN-1 persen berair AcOH (10 : 90 atau 15 : 85, v/v)] untuk menghasilkan kankanosida N (3, 15,6 mg, 0,0007 persen ), O (4, 44,1 mg, 0,0020, ), dan P (5, 4,2 mg, 0,0002 persen ), 6 (24,0 mg, 0,0011 persen ), 8 (17,7 mg, 0,0008 persen ), kankanoiside A (9, 22,3 mg, 0,00110 persen ), 8-asam epideoksiloganat (12, 8,1 mg, 0,0004 persen ), kankanoside E (14, 58,1 mg, 0,0026 persen ), (2E,6Z)-8-bD-glucopy ranosyloxy-2,6-dimetil-2,6-oktadienoat asam (15, 31,0 mg, 0,0014 persen), 16 (168,6 mg, 0,0075 persen), 17 (94,3 mg, 0,0042 persen), betulalbuside A (18, 8,1 mg, 0,0004 persen), koniferin (19, 3,8 mg, 0,0002 persen ), dan syringin (20, 33,9 mg, 0,0015 persen). Fraksi 4 (10,69 g) dipisahkan dengan fase terbalik silika gel CC [500 g, MeOH–H2O (30 : 70, v/v)→MeOH→aseton] untuk menghasilkan empat fraksi [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7,06 g), 4-3 (1,57 g), dan 4-4 (792,8 mg)], seperti yang dijelaskan sebelumnya.5) fraksi 4-1 (500,0 mg) dimurnikan dengan HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 persen berair AcOH (10 : 90, v/v)] untuk menghasilkan asam mussaenosidik (10, 39,1 mg, 0,0031 persen ) dan asam geniposidat (13, 51,2 mg, 0,004 persen ). Fraksi 5 (8,84 g) dipisahkan dengan fase terbalik silika gel CC [400 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70, v/v)→MeOH→aseton] untuk menghasilkan tujuh fraksi [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g), dan 5-7 (130,1 mg)], seperti yang dijelaskan sebelumnya.5) Fraksi 5-1 (870,2 mg) selanjutnya dimurnikan dengan HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN -1 persen AcOH berair (5 : 95, v/v)] untuk menghasilkan 10 (55,3 mg, 0,0025 persen ) dan 8-asam epiloganat (11, 51,5 mg, 0,0023 persen ).
Kankanoside L (1): Serbuk putih, [a]D 26 45.7 (c 0.48, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C15H24O9Na [M Na] 371,1318; Ditemukan 371.1309. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: diberikan pada Tabel 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: diberikan pada Tabel 2. Positif- ion FAB-MS m/z: 371 [M Na] . FAB-MS ion negatif m/z: 347 [MH] .
Kankanoside M (2): Serbuk putih, [a]D 26 18.7 (c 0.11, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C15H22O8Na [M Na] 353.1212; Ditemukan 353.1208. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: diberikan pada Tabel 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: diberikan pada Tabel 2. Ion-positif FAB-MS m/z: 353 [M Na] .
Kankanoside N (3): Serbuk putih, [a]D 25 24.6 (c 1.00, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C16H28O8Na [M Na] 371.1682; Ditemukan 371.1686. IR (KBr, cm 1 ): 3415, 2874, 1076, 1028. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: diberikan pada Tabel 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: diberikan pada Tabel 2. Ion positif FAB-MS m/z: 371 [M Na] .
Kankanoside O (4): Serbuk putih, [a]D 23 26.1 (c 2.30, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Ditemukan 369.1528. UV [l maks (log e), MeOH, nm]: 217 (4,04). IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: diberikan pada Tabel 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: diberikan pada Tabel 2. Ion positif FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
Kankanoside P (5): Serbuk putih, [a]D 21 32,7 (c 0.18, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C16H26O8Na [M Na] 369,1525; Ditemukan 369.1520. UV [l maks (log e), MeOH, nm]: 217 (4,08). IR (KBr, cm 1 ): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: diberikan pada Tabel 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: diberikan pada Tabel 2. Ion positif FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
Hidrolisis Asam Kankanosida L—P (1—5): Larutan 1-5 (masing-masing 1,0 mg) dalam 1,0 M HCl (1,0 ml) adalah dipanaskan pada 80 derajat selama 3 jam. Setelah didinginkan, campuran reaksi dinetralkan dengan Amberlite IRA-400 (bentuk OH), dan resin dihilangkan dengan penyaringan. Setelah penghilangan pelarut di bawah tekanan tereduksi, residu dipisahkan oleh kolom kartrid Sep-Pak C18 (H2O→MeOH). Fraksi terelusi H2O menjadi sasaran analisis HPLC dalam kondisi berikut: kolom HPLC, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Jepang); deteksi, rotasi optik [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Jepang); fase gerak, CH3CN–H2O (85:15, v/v); sesama tingkat 0,8 ml / menit]. Identifikasi D-glukosa yang ada dalam fraksi terelusi H2O dari 1-5 dilakukan dengan membandingkan waktu retensi dan rotasi optiknya dengan sampel asli [tR 17,9 menit (positif)].
Hidrogenasi {{0}}Deoxycatalpol (6) Suspensi 6 (12.0 mg) dan 10 persen karbon paladium (5.0 mg) dalam MeOH (2,0 ml) diaduk pada suhu kamar di bawah atmosfer H2 selama 2 jam. Katalis disaring, dan filtratnya dipadatkan di bawah tekanan tereduksi untuk menghasilkan 1 (12,0 mg, kuantitas).
Hidrolisis Enzimatik Kankanosida O (4) dan P (5) dengan b-Glukosidase Ke dalam larutan 4 (8,0 mg) dalam H2O (1,5 ml) ditambahkan b-glukosidase (4,7 mg, dari almond, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), dan larutan diaduk pada suhu 37 derajat selama 24 jam. Reaksi dipadamkan dengan penambahan EtOH (5.0 ml), campuran dikondensasikan di bawah tekanan tereduksi. Residu diekstraksi dengan EtOAc dan penguapan pelarut menghasilkan (2E,6E)-8-hidroksi-2,{{20}}dimetil-2,{{22} }asam oktadesenoat20) (4a, 3,9 mg, 92 persen ). Melalui prosedur yang sama, (2E,6E)-8-hidroksi-3,7-dimetil-2,6-asam oktadesenoat21) (5a, 0,9 mg, 94 persen ) diperoleh dari kankanoside P (5, 1,8 mg).
Metode Bioassay Efek penghambatan pada sitotoksisitas yang diinduksi TNF-a dalam sel L929 diuji dengan metode yang dijelaskan dalam makalah sebelumnya.5)
Statistik Nilai dinyatakan sebagai berarti SEM Analisis satu arah varians (ANOVA) diikuti dengan uji Dunnett digunakan untuk analisis statistik. Nilai probabilitas (p) kurang dari 0.05 dianggap signifikan.
ramuan cistanche
