HydroZitLa Menghambat Pembentukan Batu Kalsium Oksalat pada Tikus Nefrolitik Dan Mempromosikan Umur Panjang pada Nematoda Caenorhabditis Elegans Bagian 2

Glikosida cistanche juga dapat meningkatkan aktivitas SOD di jaringan jantung dan hati, dan secara signifikan mengurangi kandungan lipofuscin dan MDA di setiap jaringan, secara efektif mengais berbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi dari kerusakan DNA yang disebabkan oleh radikal OH. Cistanche phenylethanoid glycosides memiliki kemampuan pemulungan radikal bebas yang kuat, kemampuan reduksi yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktivitas SOD dalam suspensi sperma, mengurangi kandungan MDA, dan memiliki efek perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida Cistanche dapat meningkatkan aktivitas SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan jaringan paru-paru tikus tua yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangi kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, memiliki efek pemulungan yang baik pada DPPH, memperpanjang waktu hipoksia pada tikus tua, meningkatkan aktivitas SOD dalam serum, dan menunda degenerasi fisiologis paru-paru pada tikus tua eksperimental Dengan degenerasi morfologi seluler, percobaan telah menunjukkan bahwa Cistanche memiliki kemampuan antioksidan yang baik dan berpotensi menjadi obat untuk mencegah dan mengobati penyakit penuaan kulit. Pada saat yang sama, echinacoside di Cistanche memiliki kemampuan yang signifikan untuk mengais radikal bebas DPPH dan memiliki kemampuan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah degradasi kolagen yang diinduksi radikal bebas, dan juga memiliki efek perbaikan yang baik pada kerusakan anion radikal bebas timin.

cistanche supplement

Klik Cistanche Norge

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Berdasarkan temuan kami saat ini, HydroZitLa mengerahkan fungsi antipatogenik melalui setidaknya dua jalur. Pertama, mengurangi ekskresi oksalat urin, menurunkan kapasitas kristalisasi CaOx urin, dan memasok sitrat. Kedua, mengandung polifenol herbal yang mampu melemahkan stres oksidatif dan peradangan, sehingga menghambat litogenesis CaOx. Pada dasarnya, oksalat disintesis secara endogen di hati menggunakan glioksilat sebagai prekursor yang menonjol41. Glioksilat disintesis dari glikolat oleh enzim glikolat oksidase (GO), dan selanjutnya diubah menjadi oksalat oleh laktat dehidrogenase (LDH). Kami menemukan bahwa HydroZitLa secara signifikan mengurangi ekskresi oksalat urin pada tikus yang diobati dengan EG. Kami berspekulasi bahwa HydroZitLa menghambat jalur sintetis oksalat di hati melalui penurunan regulasi enzim hati yang terlibat dalam metabolisme glioksilat, khususnya LDH dan GO. Studi sebelumnya oleh Kailash dan Varalakshmi menunjukkan bahwa ekstrak batang pisang mengurangi kadar GO dan LDH hati pada tikus hiperoksalurik yang diinduksi natrium glikolat27. Poonguzhali dan Chegu juga melaporkan bahwa ekstrak kasar dari batang pisang mengurangi oksalat urin, asam glikolat, dan asam glioksilat pada tikus hyperoxaluric yang diinduksi glikolat30. Baru-baru ini, Patankar et al. menunjukkan bahwa formulasi herbal mereka, yang disebut Herbmed Plus (mengandung batang pisang), mengurangi tingkat aktivitas LDH di jaringan hati dan ginjal42. Untuk memverifikasi spekulasi kami, ekspresi enzim hati dan ginjal yang terlibat dalam sintesis oksalat pada tikus EG yang diobati dengan HydroZitLa harus dieksplorasi lebih lanjut.

cistanche nedir

Beberapa bukti sangat mendukung bahwa stres oksidatif, peradangan, dan cedera tubulus ginjal sangat terlibat dalam litogenesis CaOx3,4,15,43–45. Stres oksidatif yang diinduksi oleh kristal oksalat dan/atau CaOx menyebabkan cedera tubulus ginjal yang menciptakan tempat nukleasi kristal, adhesi, retensi, agregasi, dan akhirnya pembentukan nidus43,46,47. Selanjutnya, stres oksidatif mengaktifkan reaksi inflamasi yang pada gilirannya mempercepat proses litogenik4,47,48. Dengan demikian, phytomedicine yang memiliki sifat antioksidan dan anti-inflamasi merupakan langkah yang menjanjikan untuk pencegahan pembentukan batu ginjal24. Aggarwal et al. ditunjukkan dalam model tikus nefrolitik yang diinduksi EG bahwa bergenin (senyawa fenolik bioaktif yang diisolasi dari Bergenia ligulata) memiliki efek antipatogenik yang kuat untuk mengurangi stres oksidatif, memperbaiki disfungsi mitokondria dan mengurangi cedera tubular dan peradangan49. Rutin dan kurkumin (fitokimia pribumi terkenal dengan sifat antioksidan dan anti-inflamasi) terbukti menghambat kerusakan tubulointerstitial dan endapan kristal pada tikus nefrolitik yang diinduksi EG50. Polifenol dari biji anggur juga ditunjukkan untuk menghambat endapan kristal CaOx intrarenal pada tikus lithiasis yang diinduksi EG, mungkin melalui aktivitas antioksidannya51. Formulasi herbal Ayurveda Herbmed ditunjukkan untuk mengurangi cedera peradangan dan endapan kristal di ginjal tikus nefrolitik yang diinduksi EG42. Dalam studi ini, kami menunjukkan bahwa HydroZitLa menurunkan stres oksidatif intrarenal, peradangan, dan endapan kristal CaOx, menunjukkan bahwa HydroZitLa memberikan tindakan antioksidan dan anti-inflamasi untuk mencegah pembentukan batu ginjal CaOx.

Beberapa polifenol tumbuhan telah terbukti secara eksperimental bermanfaat untuk memperpanjang umur dan menunda penuaan52. Resveratrol adalah senyawa polifenol yang memperpanjang umur yang ditandai dengan paling baik. Ini terutama bertindak melalui aktivasi sirtuin dan redaman stres oksidatif53. Efek umur panjang resveratrol yang diuji dalam model C. elegans bervariasi antar penelitian dengan peningkatan rata-rata umur berkisar antara 10 sampai 65 persen 54,55. HydroZitLa secara signifikan memperpanjang umur C. elegans tipe liar hingga 34 persen tanpa tanda toksisitas, menunjukkan bahwa efek perpanjangan umur dari HydroZitLa sebanding dengan resveratrol. Pembatasan diet adalah mekanisme kunci yang diketahui dalam umur panjang56. Tingkat pemompaan faring dibandingkan antara cacing HydroZitLa dan cacing kontrol sebanding, menunjukkan bahwa perpanjangan umur oleh HydroZitLa bukan hasil dari pembatasan diet.

HydroZitLa secara signifikan menurunkan akumulasi lipofuscin pigmen usia autofluorescent di C. elegans, menunjukkan efek anti-penuaan. ROS dan stres oksidatif adalah penginduksi SIPS yang terkenal, dan stres oksidatif mempercepat pemendekan telomere57. Kami baru-baru ini menunjukkan bahwa oksalat, COM, dan urin dari pasien dengan batu CaOx menginduksi penuaan dini, peningkatan regulasi p16, dan gesekan telomer dalam sel tubulus ginjal melalui stres oksidatif 58. Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa HydroZitLa menghambat gesekan telomer, peningkatan regulasi p16, dan penuaan dini pada sel HK-2 yang terpapar H2O2, oksalat, dan COM. Meskipun mekanisme molekuler untuk efek anti-penuaan ini tidak diuraikan, HydroZitLa disarankan untuk secara mekanis mencegah penuaan dini melalui penghambatan pemendekan telomer dan penurunan regulasi ekspresi p16.

Meskipun pengobatan herbal dan fitomedisin semakin populer dan diterima secara global, bukti ilmiah tentang khasiat dan keamanan harus diberikan dan tidak boleh dikompromikan. Interaksi herbal-obat sulit diprediksi karena sangat bervariasi antar individu, tergantung pada beberapa faktor seperti polimorfisme enzim sitokrom P450 dan transporter obat, dan kondisi medis yang ada59. Efek merugikan dari pemberian bersama herbal dan obat harus dipantau secara ketat untuk mengidentifikasi potensi interaksi obat herbal. Jamu paling terkenal yang berinteraksi serius dengan obat-obatan termasuk bawang putih, Baizhi, Danggui, ginseng, ginkgo, licorice, St John's wort, Kava, lada hitam dan panjang, Danshen, Huangqin, dan milk thistle59. Sepengetahuan kami, tidak ada efek samping serius atau interaksi obat yang dilaporkan untuk batang pisang, bunga kupu-kupu, dan kayu secang. Di Thailand, batang pisang dikonsumsi sebagai bahan makanan. Minum terlalu banyak (konsumsi berlebihan) jus batang pisang dapat menyebabkan alergi, sakit perut, dan muntah, oleh karena itu disarankan konsumsi dalam jumlah sedang. Bunga kacang biru biasa digunakan dalam makanan sebagai pewarna alami, dan juga digunakan untuk membuat teh. Efek buruk dari konsumsi berlebihan teh bunga kupu-kupu biru, misalnya, sakit perut, mual, dan reaksi alergi, jarang dilaporkan. Kayu secang juga sering digunakan sebagai pewarna makanan alami, dan di masyarakat (termasuk masyarakat di Thailand) biasa dikonsumsi sebagai minuman kesehatan. Namun, fungsi kontrasepsi (anti-kesuburan pada laki-laki) dari ekstrak kayu secang ditunjukkan pada model tikus, karena mengganggu spermatogenesis60. Di sisi lain, kayu teras Caesalpinia secang L. digunakan sebagai obat untuk gejala ginekologi, termasuk oligomenore dan amenore61. Oleh karena itu, keamanan konsumsi HydroZitLa dalam jangka panjang pada manusia masih harus dipastikan dalam uji klinis.

rou cong rong benefits (2)

Penelitian ini memiliki beberapa keterbatasan. Senyawa aktif yang tepat yang bertanggung jawab untuk fungsi penghambatan batu CaOx tidak diidentifikasi dan dikarakterisasi. Mekanisme yang tepat dari HydroZitLa untuk menghambat pembentukan batu CaOx pada tikus tidak diselidiki secara ekstensif. Efek antipatogenik yang tergantung dosis dari HydroZitLa tidak diselidiki. Dosis HydroZitLa yang secara signifikan dapat meningkatkan kadar sitrat urin pada tikus nefrolitik tidak dieksplorasi. Profil fenolik HydroZitLa harus diselidiki lebih lanjut. Mekanisme promosi umur panjang oleh HydroZitLa di C. elegans tidak dieksplorasi secara intensif. Terakhir, senyawa spesifik dalam HydroZitLa yang bertanggung jawab atas umur panjang dan anti penuaan tidak diidentifikasi dan dikarakterisasi.

Kesimpulannya, HydroZitLa dikembangkan untuk secara bersamaan menormalkan faktor risiko pembentukan batu CaOx dengan memasok cairan, sitrat, dan antioksidan alami. Secara eksperimental, HydroZitLa menghambat deposit CaOx intrarenal pada tikus nefrolitik. Kemanjuran penghambatan batu CaOx dari HydroZitLa setara dengan potasium sitrat (Uralyt-U) yang saat ini digunakan. HydroZitLa secara efisien melemahkan stres oksidatif baik in vitro maupun in vivo. Hebatnya, HydroZitLa memperpanjang umur dan menunda timbulnya penuaan pada C. elegans. Selanjutnya, HydroZitLa secara signifikan menghambat pemendekan telomere, ekspresi p16, dan penuaan dini pada sel ginjal manusia. Temuan praklinis ini menunjukkan bahwa HydroZitLa adalah alternatif yang menjanjikan secara klinis untuk pengobatan nefrolitiasis CaOx disertai dengan promosi umur panjang dan manfaat anti-penuaan. Uji klinis diperlukan untuk menjamin kemanjuran terapeutik HydroZitLa pada manusia.

Bahan dan metode

Produksi HydroZitLa, kandungan antioksidan, dan fakta nutrisi. HydroZitLa adalah konsentrat minuman turunan tanaman obat yang tersedia secara lokal di Tailand32. Minuman disiapkan dengan mengencerkan konsentrat HydroZitLa (55 mL dalam kantong tertutup) dengan air minum (hingga volume akhir 500 mL). Ini memiliki warna merah muda-ungu dengan rasa asam dan manis yang lezat. Bahan utama HydroZitLa adalah ekstrak air batang pisang (Musa sapientum L.), dan asam sitrat (16 mEq/pouch). Tanaman obat tradisional Tai termasuk Clitoria ternatea L. (bubuk bunga kacang biru kupu-kupu) dan Caesalpinia sappan L. (bubuk kayu secang) digunakan sebagai pewarna alami. Stevia dan sucralose adalah pemanis. Produk tersebut telah disetujui oleh Tai FDA pada 10 April 2019, dalam kategori minuman dalam wadah tertutup (seri makanan no. 10–1-02,244–5-0005).

Total kapasitas antioksidan (TAC) HydroZitLa adalah 21,87 ± 7,96 mg kapasitas antioksidan setara vitamin C per kantong (Gambar Tambahan 8). Total kandungan fenolik (TPC) adalah 19,99 ±0,83 mg setara asam galat/100 g. Total konten favonoid (TFC) adalah 4,59 ± 0,31 mg setara katekin/100 g. Untuk kontrol kualitas, TAC, TPC, dan TFC digunakan sebagai parameter kontrol kualitas. Kadar TAC, TPC, dan TFC pada ekstrak batang pisang, bunga telang, dan kayu secang antara lot dan waktu penyimpanan tidak berbeda nyata. Dalam produksi HydroZitLa, nilai TAC, TPC, TFC, dan brix (17±2) digunakan sebagai parameter kontrol kualitas untuk menjaga konsistensi antar batch.

Energi total HydroZitLa per kantong (sajian) adalah 25 kkal. Tidak ada kandungan protein, lemak, dan kolesterol yang terdeteksi. Karbohidrat total adalah 6 g, gula adalah<1 g, and sodium was 10 mg. The potassium content was 240 mg/100 g. Soluble and insoluble dietary fibers were 0.74 and 0.43 g/100 g, respectively. Te pH of HydroZitLa was 3.4.

penilaian toksisitas.Kehadiran Escherichia coli, Clostridium spp., Salmonella spp., dan Staphylococcus aureus di HydroZitLa dianalisis oleh Biro Kualitas dan Keamanan Pangan, Kementerian Kesehatan Masyarakat, Thailand. Profil logam HydroZitLa dianalisis dengan ICP-OES.

Toksisitas akut in vivo HydroZitLa pada tikus telah diuji oleh Lembaga Penelitian Tumbuhan Obat, Kementerian Kesehatan Masyarakat, Thailand. HydroZitLa atau air (kontrol) diberikan secara oral kepada mencit dengan dosis 20 mL/kg (n=10 per kelompok). Mencit diamati selama 14 hari sebelum dilakukan nekropsi. Lesi kotor pada organ visceral diperiksa dan dibandingkan antara HydroZitLa dan kelompok kontrol.

uji agregasi CaOx.Benih kristal COM disiapkan62 dan diencerkan menjadi 50 mg/mL dalam 0.05 M Tris/0.15 NaCl, pH 6,5. HydroZitLa, atau BSA, atau air suling (kosong) (200 µL) ditambahkan ke suspensi COM benih kerja yang baru disiapkan (2 mL). Setelah pencampuran, absorbansi pada 620 nm diukur sebagai baseline (AT0). Setelah inkubasi pada 37 derajat selama 10 menit, absorbansi pada 620 nm diukur lagi (AT10). Koefisien agregasi (AC) dihitung sebagai berikut: AC=((AT0− AT10)/10)×1000. Nilai AC yang lebih tinggi menunjukkan agregasi COM yang lebih tinggi.

Garis sel, sitotoksisitas, dan penentuan ROS intraseluler.Sel HK{{0}} (ATCC, VA, USA) dipertahankan dalam DMEM yang dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi dan 1 persen Pen-Strep di bawah 37 derajat , 5 persen CO2, dan kelembapan 95 persen. Sitotoksisitas HydroZitLa dalam sel HK-2 dinilai dengan uji MTT63. Sel HK{10}} diunggulkan (200 sel/sumur), ditumbuhkan semalaman di pelat sumur 96-, dan diperlakukan dengan berbagai konsentrasi HydroZitLa (0 sebagai kontrol, 1,25 persen , 2,5 persen , 5 persen , 10 persen , 20 persen , 40 persen , 50 persen , 80 persen , dan 100 persen v/v) selama 24 jam. Setelah dicuci, ditambahkan larutan MTT, diinkubasi selama 1 jam, lalu dibuang. Dimetil sulfoksida ditambahkan untuk melarutkan kristal formazan. Penyerapan pada 570 nm diukur. Viabilitas sel (persen) dihitung dengan menggunakan sel yang tidak diberi perlakuan sebagai kontrol (viabilitas 100 persen).

Penghambatan produksi ROS intraseluler oleh HydroZitLa ditentukan dengan uji dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) dalam 96-well plate 64,65. Sel HK-2 digabungkan dengan solusi 0.1 M DCFH-DA dan diinkubasi pada 37 derajat selama 30 menit. Setelah dicuci, sel ditantang dengan H2O2 atau COM (dengan dan tanpa 10 persen v/v HydroZitLa). Intensitas fluoresen (bersemangat pada 485 nm dan dipancarkan pada 535 nm) diukur pada awal (T0) dan 60 menit (T60). Unit fluoresen sewenang-wenang (AFU), yang menunjukkan tingkat generasi ROS, dihitung sebagai berikut: AFU= T60/T0.

Pengukuran karbonilasi protein.Kandungan karbonil protein, sebagai indikator oksidasi protein, diukur menurut laporan kami sebelumnya64-66. Sel HK-2 yang diberi perlakuan (dalam cawan 100-mm) dilisiskan dengan buffer uji radioimunopresipitasi yang mengandung koktail protease inhibitor. Konsentrasi protein total diukur dengan uji Bradford. Lisis sel diinkubasi dengan larutan dinitrofenilhidrazin (DNPH) 10 mM atau HCl 2 N selama 1 jam dalam gelap. Asam trikloroasetat 20 persen dingin ditambahkan dan diinkubasi selama 10 menit di atas es. Pelet dikumpulkan dengan sentrifugasi, dicuci dengan etil asetat: etanol (1:1), dan dilarutkan kembali dengan 6 M guanidin HCl. Absorbansi (A) pada 375 nm diukur. Kandungan karbonil protein yang dinormalisasi dengan konsentrasi protein total dihitung sebagai berikut: ((ADNPH – AHCl)×45,45)/konsentrasi protein.

cistanche side effects reddit

Model tikus untuk nefrolitiasis CaOx.EG (1 persen v/v) ditambahkan dalam air minum (akses gratis ad libitum, selama 35 hari) digunakan untuk induksi nefrolitiasis CaOx pada tikus. Tikus Wistar jantan (6–8 minggu, 180–300 g) dibagi menjadi empat kelompok, yaitu EG (n=6), EG plus HydroZitLa (n=6), EG plus Uralyt-U (n=6), dan grup kontrol normal (n=2). Semua tikus ditempatkan di kandang baja tahan karat pada suhu 25 derajat di bawah siklus terang-gelap 12:12 jam. Dua tikus kontrol sengaja digunakan hanya untuk perbandingan deposit CaOx pada ginjal tikus dan imunohistokimia, bukan untuk kimia urin. HydroZitLa dan Uralyt-U dicekok paksa makan dua kali sehari (pagi dan sore) dengan dosis sitrat total 2 mEq per hari. Dosis sitrat yang diberikan ini setara dengan 60,8 mEq sitrat pada manusia yang dihitung berdasarkan konversi dosis yang diusulkan oleh Reagan-Shaw et al.67. 24-jam spesimen urin dikumpulkan pada akhir intervensi (hari ke-35) menggunakan timol sebagai pengawet. Tikus dibius dengan isoflurane dan dikorbankan. Kedua ginjal diangkat, dipotong, dan difiksasi dalam buffer formalin netral 10 persen untuk studi histologi.

Semua tikus dibeli dari Pusat Hewan Laboratorium Nasional, Universitas Mahidol Kampus Salaya, Nakhonpathom, Thailand. Prosedur eksperimental dilakukan oleh pedoman untuk hewan percobaan oleh Dewan Riset Nasional Thailand dan disetujui oleh Komite Perawatan & Penggunaan Hewan Institusional, Fakultas Kedokteran, Universitas Chulalongkorn (No. 022/2560). Studi kami dilakukan sesuai dengan pedoman ARRIVE.

Deposisi CaOx di bagian ginjal dengan mikroskop terpolarisasi.Bagian ginjal tikus yang tertanam parafin yang difiksasi dengan formalin disiapkan oleh prosesor jaringan otomatis. Pewarnaan H&E dilakukan sesuai dengan prosedur standar. Endapan kristal CaOx birefringent pada bagian yang diwarnai H&E divisualisasikan menggunakan mikroskop cahaya terpolarisasi (OLYMPUS BX50, Jepang).

Pewarnaan Yasue untuk histokimia CaOx.Bagian jaringan ginjal dideparafinisasi, direhidrasi, direndam dalam asam asetat 5 persen selama 30 menit untuk menghilangkan kalsium fosfat dan kalsium karbonat, dan dicuci dengan air suling 68. Bagian diinkubasi dengan AgNO3 5 persen selama 12 menit, dicuci, dan diinkubasi dengan rubean jenuh. asam dalam 10 persen amonium selama 1 menit. Bagian yang diwarnai dibilas dengan etanol 50 persen, dicuci dengan air suling, didehidrasi, dibersihkan, dan dipasang. Endapan CaOx hitam divisualisasikan di bawah mikroskop cahaya69.

Pewarnaan imunohistokimia.Setelah deparafinisasi dan rehidrasi, pengambilan antigen dilakukan dengan merebus dalam buffer natrium sitrat menggunakan microwave. H2O2 endogen dinonaktifkan dengan menginkubasi dengan 0,3 persen H2O2 selama 30 menit. Pengikatan nonspesifik diblokir dengan menginkubasi dengan serum kuda normal selama 20 menit. Potongan kemudian diinkubasi dengan antibodi primer 1:1,000 4-HNE (ab46545, Abcam, Cambridge, UK) atau caspase-3 (5A1E, Cell Signaling Technology, MA, USA) pada suhu 4 derajat semalam, diikuti dengan inkubasi dengan antibodi sekunder pada suhu 37 derajat selama 30 menit. Setelah dicuci, bagian diinkubasi dengan reagen ABC (VECTASTAIN® ABC kit) selama 30 menit, direndam dalam reagen pewarnaan diaminobenzidine 1 persen selama 5 menit, dan diimbangi dengan hematoxylin selama 5 menit. Akhirnya, bagian didehidrasi, dibersihkan, dipasang, dan divisualisasikan di bawah mikroskop cahaya.

Pengukuran sitrat urin, oksalat, asam urat, dan iCOCI. Tingkat urin sitrat ditentukan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (Varian Medical Systems, CA, USA) menggunakan kolom ROAorganic Acid H plus (300×7,8 mm) (Phenomenex, CA, USA), dan dielusi oleh 5 mM H2SO4 dengan laju alir 0,5 mL/menit. Oksalat urin dan kadar asam urat diukur dengan elektroforesis kapiler (Beckman Coulter, CA, USA) yang dipisahkan pada suhu 25 derajat dengan voltase −20 kV. Tes iCOCI urin dilakukan sesuai dengan laporan kami sebelumnya 38.

Strain dan pemeliharaan C. elegans.Strain tipe liar C. elegans Bristol N2 dan sumber makanan laboratoriumnya E. coli OP50 diperoleh dari Pusat Genetika Caenorhabditis, Universitas Minnesota, AS. Mereka ditanam dan dipelihara dalam piring agar media pertumbuhan nematoda dengan rumput E. coli OP50 pada 20 derajat 70. Semua percobaan dilakukan pada cacing dewasa muda yang disinkronkan dengan usia.

Uji umur.Analisis umur dilakukan dalam media cair71. Secara singkat, 10 nematoda dewasa muda yang disinkronkan dengan usia dipindahkan ke pelat sumur 24-dengan buffer M9 bersama dengan E. coli OP50 dan 5-fuoro-2′- deoxyuridine untuk pencegahan produksi keturunan. Berbagai konsentrasi HydroZitLa ditambahkan menggunakan air suling sebagai kontrol kendaraan. Nematoda hidup dihitung setiap 24 jam. Nematoda dianggap mati ketika mereka tidak menanggapi dorongan lembut menggunakan loop platinum.

Uji pemompaan faring.Pemompaan faring (indikator kemampuan asupan makanan) diukur pada nematoda dewasa muda (~10) dibandingkan antara kontrol dan suplementasi HydroZitLa, dengan memantau kontraksi faring selama 30 detik dalam setiap 24 jam di bawah mikroskop stereo (SMZ{ {3}}, Motic, China) pada hari ke 0 (sebelum suplementasi), 5, 10, dan 1572.

Uji lipofussin.Akumulasi lipofuscin pada nematoda tipe liar setelah suplementasi dengan berbagai konsentrasi HydroZitLa (20 persen , 30 persen , 40 persen v/v) selama 5 hari dipantau. E. coli OP50-cacing makan digunakan sebagai kontrol. Setelah intervensi, cacing dicuci menggunakan buffer M9 beberapa kali dan diletakkan di atas kaca objek yang ditetesi natrium azida. Pencitraan fluoresen dilakukan dengan menggunakan mikroskop confocal ZEISS LSM 700. Gambar dianalisis lebih lanjut menggunakan perangkat lunak Image J, dan intensitas fluoresensi disajikan sebagai unit arbitrer (AU)72.

Pengukuran panjang telomer relatif. Panjang telomer relatif (RTL) diukur dalam sel HK-2 yang diberi perlakuan dengan H2O2 (25 µM), natrium oksalat (NaOx, 900 µM), dan COM (25 µg/cm2 ) dengan atau tanpa HydroZitLa (10 persen v /v). RTL ditentukan dengan reaksi berantai polimerase kuantitatif waktu nyata (qPCR)73. Ini dihitung berdasarkan rasio jumlah salinan pengulangan telomerik dengan jumlah salinan gen salinan tunggal (gen 36B4) yang sebanding dengan panjang rata-rata telomer. Primer yang digunakan adalah sebagai berikut: Telomer (maju) 5′-CGGTTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3′, Telomer (mundur) 5′-GGC TTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT-3′, 34B4 (maju) 5′-CAGCAAGTGGGAAGGTGT AATCC{ {23 }}′, dan 36B4 (terbalik) 5′-CCCATTCTATCAATCACGGGTACAA-3′. PCR diamplifikasi pada 95 derajat selama 10 menit, diikuti oleh 40 siklus 95 derajat selama 15 detik dan 54 derajat selama 1 menit.

Pewarnaan ganda SA‑‑gal dan p16.Sel HK{{0}} yang tumbuh pada kaca penutup diperlakukan dengan H2O2, NaOx, dan COM dengan dan tanpa 10 persen v/v HydroZitLa selama 72 jam untuk induksi SIPS. Setelah perawatan, sel difiksasi dan diwarnai dengan larutan X-gal yang baru disiapkan (Vivantis, Malaysia) selama 12–16 jam, dicuci, ditembus dengan 0,1 persen Triton X-100 (Amresco, TX, USA) selama 3 menit , dan diblokir untuk pengikatan nonspesifik dengan 1 persen serum kuda normal (Gibco, MA, USA) pada suhu 37 derajat selama 1 jam. Sel-sel kemudian diinkubasi dengan antibodi primer 1:10,000 p16 (ab108349, Abcam) pada suhu 4 derajat semalam, diikuti oleh 1:10,000 antibodi sekunder terkonjugasi Alexa Fluor® 488-( Cell Signaling Technology) pada 37 derajat selama 30 menit. Kaca penutup yang diwarnai dipasang dengan media pemasangan Fluoroshield dengan 4′,6-diamidino-2-phenylindole (Abcam). SA- -sel senescent positif-gal (biru) dan sel pengekspres p16-(hijau) divisualisasikan dan dicitrakan menggunakan sistem pencitraan EVOS FL Auto 2 (Thermo Fisher Scientific, MA, USA).

Analisis statistik.Semua data disajikan sebagai rata-rata ± standar deviasi atau median (kisaran interkuartil), yang sesuai. Uji-t dua sampel atau uji Mann-Whitney dilakukan untuk menguji perbedaan antara kedua kelompok. Analisis varians satu arah atau uji Kruskal-Wallis, diikuti dengan uji perbandingan berganda, digunakan untuk menguji perbedaan di antara tiga kelompok atau lebih. Perangkat Lunak GraphPad Prism versi 9 (GraphPad Sofware Inc., CA, USA) digunakan untuk perhitungan dan grafik. P<0.05 was considered significant.

Referensi

1. Michell, AR Urolithiasis–aspek historis, komparatif dan patofisiologis: Tinjauan. JR Sok. Kedokteran 82, 669–672 (1989).

2. Shah, J. & Whitfield, HN Urolithiasis selama berabad-abad. BJU Int. 89, 801–810 (2002).

3. Boonla, C. dkk. Ekspresi Messenger RNA dari protein kemoatraktan monosit-1 dan interleukin-6 pada ginjal yang mengandung batu. BJU Int. 101, 1170–1177 (2008).

4. Boonla, C. dkk. Fibrosis dan bukti transisi epitel-mesenkimal pada ginjal pasien dengan batu staghorn. BJU Int. 108, 1336–1345 (2011).

5. Chuang, TF dkk. Risiko penyakit ginjal kronis pada pasien dengan batu ginjal-sebuah studi kohort nasional. BMC Nefrol. 21, 292 (2020).

6. Dhondup, T. dkk. Risiko ESRD dan kematian pada pembentuk batu ginjal dan kandung kemih. Saya. J. Ginjal Dis. 72, 790–797 (2018).

7. Kum, F. dkk. Apakah batu masih membunuh? Analisis kematian akibat penyakit batu 1999-2013 di Inggris dan Wales. BJU Int. 118, 140–144 (2016).

8. Geraghty, RM, Cook, P., Walker, V. & Somani, BK Evaluasi beban ekonomi penyakit batu ginjal di Inggris: Sebuah studi kohort retrospektif dengan tindak lanjut rata-rata 19 tahun. BJU Int. 125, 586–594 (2020).

9. C. Türk (Ketua), AN, A. Petrik, C. Seitz, A. Skolarikos (Wakil Ketua), K. Tomas & Rekan-rekan Pedoman: NF Davis, JFD, R. Lombardo, N. Grivas, Y. Ruhayel. Pedoman Asosiasi Urologi Eropa (EAU) tentang Urolitiasis.

10. Jendle-Bengten, C. & Tiselius, HG Tindak lanjut jangka panjang dari pembentuk batu diobati dengan sodium potasium sitrat dosis rendah. Pindai. J.Urol. Nefrol. 34, 36–41 (2000).

11. Schwille, PO, Herrmann, U., Wolf, C., Berger, I. & Meister, R. Sitrat dan urolitiasis kalsium idiopatik berulang. Sebuah studi percontohan longitudinal tentang efek metabolik kalium sitrat oral yang diberikan selama pengobatan jangka pendek, menengah dan panjang pada pasien batu laki-laki. Urol. Res. 20, 145–155 (1992).

12. Tracy, CR & Pearle, MS Pembaruan tentang penatalaksanaan medis penyakit batu. Kur. Opin. Urol. 19, 200–204 (2009).

13. Mechlin, C., Kalorin, C., Asplin, J. & White, M. Splenda(R) meningkatkan toleransi suplementasi kalium sitrat oral untuk pencegahan pembentukan batu: Hasil uji coba double-blind secara acak. J. Endourol. 25, 1541–1545 (2011).

14. Boonla, C. Stres Oksidatif pada Urolitiasis, Spesies Oksigen Reaktif (ROS) pada Sel Hidup, Cristiana Filip dan Elena Albu, IntechOpen.

15. Boonla, C., Wunsuwan, R., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Urin 8-hidroksideoksiguanosin meningkat pada pasien dengan nefrolitiasis. Urol. Res. 35, 185–191 (2007).

16. Khan, SR Stres oksidatif yang diinduksi hyperoxaluria dan antioksidan untuk perlindungan ginjal. Urol. Res. 33, 349–357 (2005).

17. Khan, SR Spesies oksigen reaktif sebagai modulator molekuler pembentukan batu ginjal kalsium oksalat: Bukti dari penyelidikan klinis dan eksperimental. J.Urol. 189, 803–811 (2013).

18. Kittikowit, W. dkk. Peningkatan kerusakan DNA oksidatif terlihat pada batu biopsi ginjal yang berdekatan pada pasien dengan nefrolitiasis. Urolitiasis 42, 387–394 (2014).

19. Yasui, T. dkk. Pengobatan urolitiasis berbasis patofisiologi. Int. J.Urol. 24, 32–38 (2017).

20. Huang, HS, Ma, MC & Chen, J. Diet rendah vitamin E memperburuk pembentukan kristal kalsium oksalat melalui peningkatan stres oksidatif pada ginjal hiperoksalurik tikus. Saya. J. Physiol. Ginjal. Fisik. 296, F34-45 (2009).

21. Huang, HS, Chen, J., Chen, CF & Ma, MC Vitamin E melemahkan pembentukan kristal pada ginjal tikus: Peran kematian sel tubulus ginjal dan penghambat kristalisasi. Ginjal Int. 70, 699–710 (2006).

22. Tamilselvan, S. & Menon, M. Terapi vitamin E mencegah deposisi kristal kalsium oksalat yang diinduksi hiperoksaluria di ginjal dengan meningkatkan status antioksidan jaringan ginjal. BJU Int. 96, 117–126 (2005).

23. Tamilselvan, S. & Selvam, R. Efek vitamin E dan manitol pada retensi kalsium oksalat ginjal pada nefrolitiasis eksperimental. India J. Biochem. Biofisika. 34, 319–323 (1997).

24. Butterweck, V. & Khan, SR Obat herbal dalam pengelolaan urolitiasis: Alternatif atau komplementer? Planta Med. 75, 1095–1103 (2009).

25. Kasote, DM, Jagtap, SD, Tapa, D., Khyade, MS & Russell, WR Pengobatan herbal untuk batu saluran kemih yang digunakan di India dan China: Ulasan. J. Etnofarmakol. 203, 55–68 (2017).

26. Abu Zarin, M., Tan, JS, Murugan, P. & Ahmad, R. Investigasi potensi aktivitas anti-urolitiasis dari berbagai jenis ekstrak batang semu Musa dalam penghambatan kristalisasi kalsium oksalat. BMC Melengkapi Med. Ter. 20, 317 (2020).

27. Kailash, P. & Varalakshmi, P. Pengaruh jus batang pisang pada perubahan biokimia di hati tikus normal dan hyperoxaluric. India J.Exp. Biol. 30, 440–442 (1992).

28. Prasad, KV, Bharathi, K. & Srinivasan, KK Evaluasi Musa (paradisiacal Linn. kultivar)–jus batang "Puttubale" untuk aktivitas antilitiatik pada tikus albino. India J. Physiol. Pharmacol. 37, 337–341 (1993).

29. Panigrahi, PN, Dey, S., Sahoo, M. & Dan, A. Kemanjuran antiurolitik dan antioksidan dari pseudostem Musa paradisiaca pada nefrolitiasis yang diinduksi etilen glikol pada tikus. India J. Pharmacol. 49, 77–83 (2017).

30. Poonguzhali, PK & Chegu, H. Te pengaruh ekstrak batang pisang pada faktor risiko kencing batu pada tikus normal dan hyperoxaluric. Sdr. J.Urol. 74, 23–25 (1994).

31. Pillai, RG Inti dari pseudostem Musa dalam pengobatan batu kemih. Anc Sci Life. 15, 2–6 (1995).

32. Lordumrongkiat, N., Chotechuang, N., Madared, N., Jindatip, D. & Boonla, C. Total fenolik, total flavonoid dan kapasitas antioksidan total dari minuman yang berasal dari tanaman obat: HydroZitLa. Chula Med. J.64, 381–388 (2020).

33. Sakhaee, K. Farmakologi penyakit batu. Lanjut Dis Ginjal Kronis. 16, 30–38 (2009).

34. Baumann, JM & Avolter, B. Peran paradoks makromolekul urin dalam agregasi kalsium oksalat: Permohonan lebih lanjut untuk meningkatkan diuresis pada metafilaksis batu. Urolitiasis 44, 311–317 (2016).

35. Reddy, AJ dkk. Efek antikonvulsan dan antioksidan ekstrak batang Musa sapientum pada model eksperimental epilepsi akut dan kronis. Farmakogni. Res. 10, 49–54 (2018).

36. Jaafar, NF, Ramli, ME & Mohd Salleh, R. Kondisi optimum ekstraksi bunga Clitorea ternatea terhadap aktivitas antioksidan, total fenolik, total flavonoid dan kandungan total antosianin. Trop. Sains Kehidupan. Res. 31, 1–17 (2020).

37. Nirmal, NP, Rajput, MS, Prasad, RG & Ahmad, M. Brazilin dari kayu secang Caesalpinia dan aktivitas farmakologisnya: Ulasan. Pac Asia. J. Trop. Kedokteran 8, 421–430 (2015).

38. More-Krong, P. et al. Validasi klinis uji indole-reacted calcium oxalate crystallization index (iCOCI) urin untuk mendiagnosis urolitiasis kalsium oksalat. Sains. Rep. 10, 8334 (2020).

39. Yasui, T. dkk. Efek sitrat pada pembentukan batu ginjal dan ekspresi osteopontin pada model urolitiasis tikus. Urol. Res. 29, 50–56 (2001).

40. Ghaeni, FA, Amin, B., Hariri, AT, Meybodi, NT & Hosseinzadeh, H. Efek antilitiatik dari crocin pada litiasis yang diinduksi etilen glikol pada tikus. Urolitiasis 42, 549–558 (2014).

41. Holmes, RP & Assimos, DG Sintesis glioksilat, dan modulasinya serta pengaruhnya terhadap sintesis oksalat. J.Urol. 160, 1617–1624 (1998).

42. Patankar, S., Fanthome, B. & Bhalerao, SS Khasiat herba plus pada tikus urolitik: Sebuah studi eksperimental. J. Ayurveda Integr. Kedokteran 11, 250–255 (2020).

43. Chaiyarit, S. & Tongboonkerd, V. Disfungsi mitokondria, dan penyakit batu ginjal. Fisik Depan. 11, 566506 (2020).

cistanche portugal

44. Holoch, PA & Tracy, CR Antioksidan dan riwayat batu ginjal yang dilaporkan sendiri: Survei Pemeriksaan Kesehatan dan Gizi Nasional. J. Endourol. 25, 1903–1908 (2011).

45. Khan, SR Apakah stres oksidatif, hubungan antara nefrolitiasis dan obesitas, hipertensi, diabetes, penyakit ginjal kronis, sindrom metabolik? Urol. Res. 40, 95–112 (2012).

46. Hirose, M. et al. Cedera sel epitel tubulus ginjal dan stres oksidatif menginduksi pembentukan kristal kalsium oksalat pada ginjal tikus. Int. J.Urol. 17, 83–92 (2010).

47. Khan, SR Spesies oksigen reaktif, peradangan, dan nefrolitiasis kalsium oksalat. Terjemahan Androl. Urol. 3, 256–276 (2014).

48. Boonla, C. dkk. Sekutu proteomik protein inflamasi dan fibrotik diidentifikasi sebagai konstituen protein utama dalam urin dan matriks batu pasien dengan batu ginjal. Klinik. Chim. UU 429, 81–89 (2014).

49. Aggarwal, D., Gautam, D., Sharma, M. & Singla, SK Bergenin melemahkan cedera ginjal dengan membalikkan disfungsi mitokondria pada model tikus hiperoksalurik yang diinduksi etilena glikol. eur. J. Pharmacol. 791, 611–621 (2016).

50. Ghodasara, J., Pawar, A., Deshmukh, C. & Kuchekar, B. Efek penghambatan rutin dan kurkumin pada urolitiasis kalsium oksalat yang diinduksi secara eksperimental pada tikus. Farmakogni. Res. 2, 388–392 (2010).

51. Grases, F. et al. Efek polifenol dari biji anggur pada lithiasis ginjal. Oksida. Kedokteran Sel. Longev. 2015, 813737 (2015).

52. Cherniack, EP Potensi pengaruh polifenol tanaman pada proses penuaan. Forsch Komplemented. 17, 181–187 (2010).

53. Kayu, JG dkk. Aktivator sirtuin meniru pembatasan kalori dan menunda penuaan pada metazoa. Alam 430, 686–689 (2004).

54. Bonkowski, MS & Sinclair, DA Memperlambat penuaan dengan desain: Munculnya senyawa pengaktif NAD (plus) dan sirtuin. Nat. Pendeta Mol. Sel. Biol. 17, 679–690 (2016).

55. Bhullar, KS & Hubbard, BP Masa hidup dan perpanjangan masa kesehatan oleh resveratrol. Biochim. Biofisika. Acta. 1852, 1209–1218 (2015).

56. von Frieling, J. & Roeder, T. Faktor-faktor yang mempengaruhi terjemahan pembatasan diet menjadi umur yang lebih panjang. IUBMB Life 72, 814–824 (2020).

57. von Zglinicki, T. Stres oksidatif memperpendek telomere. Tren Biochem Sci. 27, 339–344 (2002).

58. Chuenwisad, K. dkk. Penuaan dini dan pemendekan telomer yang disebabkan oleh stres oksidatif dari oksalat, kalsium oksalat monohidrat, dan urin dari pasien dengan nefrolitiasis kalsium oksalat. Depan. Imunol. 12, 696486 (2021).

59. Hu, Z. dkk. Interaksi obat herbal: Tinjauan literatur. Narkoba 65, 1239–1282 (2005).

60. Susanti, S. & Imannura, P. Pengaruh Ekstrak Kayu Secang (Ceasalpinia Sappan L.) terhadap morfologi spermatozoa dan proses reversibel pada tikus jantan. Dalam Proceeding in The 2nd Joint International Conferences. ISBN: 978-602-5842-03-0 (2018).

61. Kim, BS dkk. Caesalpinia secang menginduksi kematian sel apoptosis pada sel 12Z endometrium ektopik dengan menekan ekspresi piruvat dehidrogenase kinase 1. Exp. Ter. Kedokteran 21, 357 (2021).

62. Boonla, C., Youngjermchan, P., Pumpaisanchai, S., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Lithogenic aktivitas dan relevansi klinis lipid diekstraksi dari urin dan batu pasien nefrolitiasis. Urol. Res. 39, 9–19 (2011).

63. Kloypan, C., Srisa-art, M., Mutirangura, A. & Boonla, C. LINE-1 hipometilasi yang diinduksi oleh spesies oksigen reaktif dimediasi melalui penipisan S-adenosylmethionine. Biokimia Sel. Fungsi. 33, 375–385 (2015).

64. Whongsiri, P., Phoyen, S. & Boonla, C. Stres oksidatif pada karsinogenesis urothelial: Pengukuran karbonilasi protein dan produksi spesies oksigen reaktif intraseluler. Metode Mol. Biol. 1655, 109–117 (2018).

65. Whongsiri, P. et al. Stres oksidatif dan reaktivasi LINE-1 pada kanker kandung kemih terkait secara epigenetik melalui pembentukan kromatin aktif. Radikal bebas. Biol. Kedokteran 134, 419–428 (2019).

66. Whongsiri, P. et al. Protein LINE-1 ORF1 diatur ke atas oleh spesies oksigen reaktif dan terkait dengan perkembangan karsinoma urothelial kandung kemih. Genom Kanker. Proteom. 15, 143–151 (2018).

67. Reagan-Shaw, S., Nihal, M. & Ahmad, N. Terjemahan dosis dari studi hewan ke manusia ditinjau kembali. FASEB J.22, 659–661 (2008).

68. Yasue, T. Identifikasi histokimia kalsium oksalat. Acta Histochem. Sitokimia. 2, 83–95 (1969).

69. Evan, AP dkk. Plak Randall pada pasien dengan nefrolitiasis dimulai pada membran dasar dari lengkung Henle yang tipis. J.Clin. Menginvestasikan. 111, 607–616 (2003).

70. Prasanth, MI, Santoshram, GS, Bhaskar, JP & Balamurugan, K. Ultraviolet-A memicu photoaging dalam model nematoda Caenorhabditis elegans dalam jalur yang bergantung pada DAF-16. Usia (Dordr) 38, 27 (2016).

71. Brimson, JM, Prasanth, MI, Plaingam, W. & Tencomnao, T. Bacopa monnieri (L.) wettst. Ekstrak melindungi terhadap toksisitas glutamat dan meningkatkan umur panjang Caenorhabditis elegans. J.Tradit. Kompleks. Kedokteran 10, 460–470 (2020).

72. Prasanth, MI, Brimson, JM, Chuchawankul, S., Sukprasansap, M. & Tencomnao, T. Antipenuaan, resistensi stres, dan khasiat neuroprotektif dari Cleistocalyx nervosum var. ekstrak buah panacea menggunakan model Caenorhabditis elegans. Oksida. Kedokteran Sel. Longev. 2019, 7024785 (2019).

73. Cawthon, RM Pengukuran telomere dengan PCR kuantitatif. Asam Nukleat Res. 30, e47 (2002).

Terima kasih

Studi ini didukung secara finansial oleh Research Gap Fund dari Kementerian Sains dan Teknologi, National Science and Technology Development Agency (NSTDA) dan Chulalongkorn University (GB-rgf_60_2905_0003 to CB), dan oleh Thailand Science Research and Inovasi, Divisi Industri (RDG6150088 ke CB), dan Fakultas Kedokteran, Universitas Chulalongkorn (Dana Pendampingan). NL menerima HUT ke-90 Dana Universitas Chulalongkorn (Dana Abadi Ratchadaphiseksomphot). Penulis mengucapkan terima kasih atas dukungan penelitian dan inovasi yang diberikan oleh Pusat Teknologi Universitas Chulalongkorn dan Dana Riset dan Inovasi Sains Thailand (TSRI) (CU_FRB640001_01_2). Terima kasih kepada Nona Natcha Madared atas bantuan luar biasa mereka. Bersyukurlah kepada staf di fasilitas hewan Fakultas Kedokteran, Universitas Chulalongkorn. Berterima kasih kepada Asisten Prof. Dr. Sitthichai Ukritchon dan Prof. Dr. Manathip Osiri atas dukungan mereka terhadap penggunaan mikroskop terpolarisasi.

Kontribusi penulis

NL: Melakukan percobaan sel dan tikus, dan mengumpulkan data. NC: Mengumpulkan data, dan membantu menyusun ide penelitian dan analisis data. MP: Menyusun dan melakukan percobaan C. elegans, dan melakukan analisis data C. elegans. DJ: Membantu dalam eksperimen dan pencitraan imunohistokimia. CM: Membantu dalam pemotongan jaringan. KC: Melakukan percobaan pemendekan telomer dan penuaan. AL: Berhasil mengakses fasilitas hewan untuk percobaan tikus. TT: Membantu menyusun dan merancang eksperimen C. elegans. CB: Menyusun dan merancang penelitian, melakukan analisis statistik, dan menulis manuskrip. Semua penulis meninjau naskah.

Kepentingan yang bersaing

CB, NC dan NL adalah penemu HydroZitLa. Universitas Chulalongkorn dan penemunya memiliki kekayaan intelektual untuk HydroZitLa. Tidak ada penulis lain yang memiliki konflik kepentingan untuk menyatakan tentang karya ini.