Ekstrak Daun Glochidion Littorale Menunjukkan Efek Neuroprotektif pada Caenorhabditis Elegans Melalui Aktivasi DAF-16

Untuk informasi lebih lanjut hubungi email{0}} 
Abstrak:Sejumlah tanaman yang digunakan dalam pengobatan tradisional di Thailand dan Asia Timur menarik minat karena bioaktivitas ekstraknya yang tinggi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyaring ekstrak daun yang dapat dimakan dari 20 tanaman yang ditemukan di Thailand dan menyelidiki potensi efek neuroprotektif dari sampel yang paling bioaktif. Total kandungan fenol dan flavonoid dan 2,2-difenil-1-aktivitas pemulung pikrilhidrazilradikal ditentukan untuk semua 20 ekstrak daun. Berdasarkan pengujian ini, ekstrak daun Glochidionlittorale (GLE), yang menunjukkan nilai tinggi dalam semua parameter yang diuji, digunakan dalam eksperimen lebih lanjut untuk mengevaluasi efeknya pada neurodegenerasi diCaenorhabditis elegans. Perlakuan GLE memperbaiki H2O2-yang diinduksi stres oksidatif dengan melemahkan akumulasi spesies oksigen reaktif dan melindungi cacing terhadap 1-metil-4-fenilpiridinium yang diinduksi neurodegenerasi. Efek neuroprotektif yang diamati mungkin terkait dengan aktivasi faktor transkripsi DAF-16. Karakterisasi ekstrak ini oleh LC-MS mengidentifikasi beberapa senyawa fenolik, termasuk myricetin, coumestrin, asam klorogenat, dan hesperidin, yang mungkin memainkan peran kunci dalampelindung saraf. Studi ini melaporkan aktivitas neuroprotektif baru dari GLE, yang dapat digunakan untuk mengembangkan pengobatan untuk penyakit neurodegeneratif seperti sindrom Parkinson.

Kata kunci: Caenorhabditis elegans; ekstrak daun;pelindung saraf; aktivitas antioksidan; DAF-16

1. Perkenalan 

Gangguan neurodegeneratif termasuk penyakit Alzheimer dan penyakit Parkinson (PD) menimbulkan masalah kesehatan dan keuangan utama bagi organisasi perawatan kesehatan global [1]. Meskipun umur manusia telah meningkat dalam beberapa dekade terakhir di negara-negara industri, prevalensi penyakit terkait usia juga meningkat. Insiden gangguan onset lambat seperti gangguan neurologis diperkirakan akan meningkat pesat selama beberapa dekade mendatang. Oleh karena itu, sangat penting untuk mendorong penelitian dan melakukan uji klinis pada senyawa yang berpotensi menyembuhkan, mencegah, atau setidaknya menunda timbulnya penyakit neurodegeneratif [2]. Salah satu fitur karakteristik PD adalah hilangnya progresif neuron dopaminergik (DA) di substansia nigra [3]. Dalam patogenesis PD, peningkatan produksi spesies oksigen reaktif (ROS) memainkan peran kunci dalam hilangnya sel DA [4]. Oleh karena itu, pengurangan stres oksidatif dianggap sebagai pendekatan terapeutik yang menjanjikan dalam pengobatan PD [5]. 1-metil-4-fenilpiridinium (MPP plus ), yang menghambat aktivitas kompleks mitokondria I, dapat menginduksi gejala mirip PD pada manusia dan model hewan [6].

penggunaanCaenorhabditis eleganssebagai model in vivo memberikan keuntungan tertentu dalam studi PD [7]. Nematoda ini sederhana, murah, dan memiliki siklus hidup yang pendek. Ini mendukung studi yang melibatkan analisis skala besar. Selain itu, jaringan saraf C. elegans telah dipetakan secara lengkap. Ini berisi 8 neuron DA dan gen homolog terkait PD [8]. Neurodegenerasi, yang meniru gejala parkinsonian, dapat diinduksi pada C. elegans melalui pengobatan dengan neurotoksin seperti MPP plus [9].
Senyawa antioksidan alami merupakan sumber yang menarik untuk mengembangkan obat untuk mengobati penyakit neurodegeneratif karena efek neuroprotektifnya pada model hewan dan toksisitas rendah [3]. Polifenol dikenal sebagai salah satu antioksidan paling melimpah dalam makanan manusia [10]. Juga telah ditetapkan bahwa proses oksidatif terlibat dalam banyak patologi, termasuk neurodegenerasi, kanker, diabetes, penyakit kardiovaskular dan anti-inflamasi. Oleh karena itu, menemukan polifenol yang menunjukkan sifat antioksidan dari sumber alami dapat berkontribusi untuk mencegah atau mengobati patologi tersebut. Penelitian ini berfokus pada ekstrak dari daun tanaman yang dapat dimakan yang ditemukan di Thailand. Sebagian besar varietas yang dibudidayakan secara luas di Thailand utara dan selatan telah digunakan sebagai obat tradisional terhadap cedera dan penyakit umum; Namun, ada beberapa laporan mengenai efek neuroprotektif mereka.
Dalam penelitian ini, pertama-tama kami menyaring ekstrak daun yang dapat dimakan dari 20 tanaman yang dibudidayakan di Thailand dan menilai kandungan fenolik dan flflavonoidnya serta aktivitas penangkal radikal 2,2-difenil-1- picrylhydrazyl (DPPH). Efek ekstrak daun Glochidion littorale (GLE), yang menunjukkan nilai tinggi di semua parameter yang diuji, dievaluasi pada C. elegans dengan neurodegenerasi. Selanjutnya, jalur potensial yang terlibat dalam efek neuroprotektif GLE diperiksa, bersama dengan identifikasi komponen utama dalam GLE.
Karena faktor transkripsi DAF-16 diketahui memainkan peran kunci dalam mengatur stres oksidatif [11], dihipotesiskan bahwa GLE dapat menargetkan DAF-16. Strain C. elegans CF1038, yang merupakan strain mutan kehilangan fungsi -16 DAF, digunakan untuk menentukan tingkat kelangsungan hidup cacing yang diobati dengan dan tanpa GLE. Dalam stres oksidatif yang diinduksi H2O2-, pengobatan GLE tidak meningkatkan tingkat kelangsungan hidup cacing transgenik (Gambar 1C).

2. Hasil

2.1. Penyaringan Daun Tanaman Thailand

Ekstrak kasar daun yang dapat dimakan dari tanaman yang dibudidayakan di Thailand dibuat dengan ultrasonikasi. Ekstrak daun dari 20 tanaman disaring untuk kandungan fenolik dan flavonoid dan aktivitas antioksidannya dengan uji penangkal radikal DPPH. Beberapa sampel yang diuji, seperti Glochidion sphaerogynum dan Mentha piperita, ditemukan memiliki aktivitas penangkapan radikal yang tinggi dengan kandungan fenolik dan flflavonoid yang rendah, sedangkan sampel tertentu, seperti Clinacanthus nutans dan Ocimum × citriodorum, menunjukkan tren yang berlawanan (Tabel 1 ). Ekstrak daun G. littorale menunjukkan aktivitas penangkap radikal DPPH yang tinggi serta kandungan fenolik dan flflavonoid yang tinggi. Oleh karena itu, bioaktivitas yang terkait dengan G. littorale diselidiki lebih lanjut.

2.2. GLE Meningkatkan Ketahanan terhadap Stres Oksidatif melalui DAF-16 di C. Elegans

Pengaruh GLE pada kelangsungan hidup cacing N2 di bawah stres oksidatif diselidiki. Pengobatan dengan H2O2 (5 mM) menginduksi 75 persen kematian pada kelompok kontrol, sedangkan pengobatan bersama dengan 50 g/mL dan konsentrasi GLE yang lebih tinggi dikaitkan dengan tingkat kelangsungan hidup yang tinggi (Gambar 1A). Di antara konsentrasi GLE yang diuji, 100 g/mL dan 200 g/mL dikaitkan dengan tingkat kelangsungan hidup tertinggi (masing-masing 82,0 persen dan 88,2 persen). Oleh karena itu, kedua konsentrasi ini digunakan dalam percobaan selanjutnya. Untuk mengevaluasi efek antioksidan GLE in vivo, level ROS intraseluler diukur pada nematoda tipe liar menggunakan 2',7'-dichlorodihydroflfluorescein diacetate (H2DCF-DA), probe fluoresensi terkenal untuk mendeteksi produksi ROS intraseluler. Penurunan yang signifikan dalam intensitas fluoresensi pada kelompok yang diobati dengan GLE diamati dibandingkan dengan kelompok yang tidak diobati (Gambar 1B), mengkonfirmasikan sifat antioksidan dari GLE.

2.3. Pengobatan GLE Mengurangi Lethality dari MPP plus -Induced DA Neurotoksisitas melalui DAF-16 di C. Elegans C. elegans memiliki 8 neuron DA [8]. Degenerasi selektif dari neuron DA ini dievaluasi setelah terpapar MPP plus. Perlakuan cacing N2 tipe liar dengan 0.75 mM MPP plus menghasilkan penurunan yang luar biasa dalam kelangsungan hidup (Gambar 2). Namun, pengobatan bersama dengan GLE secara signifikan meningkatkan kelangsungan hidup cacing. Efek pengobatan GLE pada cacing mutan daf-16 diselidiki. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3 dan Tabel 2, pengobatan GLE tidak meningkatkan kelangsungan hidup cacing ini setelah terpapar MPP plus dibandingkan dengan kelompok kontrol. Hasil ini menunjukkan bahwa DAF-16 mungkin diperlukan untuk memediasi efek neuroprotektif GLE pada C. elegans. Selanjutnya, strain mutan kehilangan fungsi DAF-2, CB1370, digunakan untuk menentukan apakah DAF-2 terlibat dalam efek neuroprotektif yang diamati. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4 dan Tabel 3, median dan kelangsungan hidup maksimum meningkat secara signifikan pada cacing mutan daf-2 yang diobati dengan GLE.

2.4. Pengaruh GLE pada DAF-16 Lokalisasi

Telah ditunjukkan bahwa aktivasi DAF-16 diatur oleh akumulasi nuklirnya [12]. Selanjutnya, kami menyelidiki apakah GLE dapat menginduksi akumulasi nuklir DAF-16 dalam galur transgenik TJ356 yang mengekspresikan protein fusi DAF-16::GFP. Hasil menunjukkan bahwa setelah 48 jam inkubasi dengan 100 g/mL GLE, intensitas fluoresensi hijau DAF-16 dalam nukleus meningkat secara signifikan dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi perlakuan (Gambar 5).

2.5. Karakterisasi Fitokimia di GLE

LC-MS dilakukan untuk membuat profil fitokimia di GLE, dan hasilnya disajikan pada Gambar6. Puncak kromatografi diidentifikasi dengan membandingkan data MS dengan database berdasarkan pencarian nilai m/z puncak ion molekul dalam mode positif [M plus H]plus. Akibatnya, myricetin, coumestrin, asam klorogenat, dan hesperidin terdeteksi sebagai senyawa utama (Tabel4).

3. Diskusi

Ekstrak tumbuhan merupakan sumber yang kaya akan senyawa bioaktif alami. Banyak penelitian telah mengevaluasi ekstrak tumbuhan yang digunakan di negara-negara Asia Tenggara, termasuk Thailand, di mana ekstrak ini merupakan komponen obat tradisional [13,14]. Dalam penelitian ini, ekstrak 20 daun tumbuhan yang dapat dimakan dari Thailand disaring, dan G. littorale dipilih untuk penelitian lebih lanjut karena menunjukkan kandungan fenol yang tinggi, kandungan flflavonoid, dan aktivitas penangkap radikal. Beberapa penelitian telah menyelidiki berbagai spesies dari genus Glochidion [15-19]; Namun, ada beberapa penelitian mengenai sifat fungsional dan konstituen G. littorale. Data kami menunjukkan bahwa GLE melindungi C. elegans terhadap H2O2-yang diinduksi stres oksidatif dengan mengurangi akumulasi ROS intraseluler. Hal ini mungkin disebabkan oleh tingginya kandungan senyawa fenolik seperti flavonoid yang diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang kuat [20]. Temuan ini serupa dengan yang diperoleh oleh Duangjan et al. (2019), yang menunjukkan bahwa ekstrak daun G. zeylanicum dapat melindungi C. elegans terhadap stres oksidatif [21]. Jalur insulin/insulin-like signaling (IIS) mengatur pertumbuhan, respon stres, dan umur panjang pada C. elegans [22,23]. Kami menemukan bahwa daf-16 null mutan C. elegans yang diobati dengan GLE rentan terhadap stres oksidatif. Hasil ini menunjukkan bahwa efek antioksidan GLE dalam mengurangi stres oksidatif pada nematoda mungkin terlibat tidak hanya dalam aktivitas penangkapan radikal tetapi juga regulasi faktor transkripsi DAF-16.

Efek protektif GLE terhadap MPP plus toksisitas yang diinduksi pada C. elegans diperiksa. Neuron DA dalam nematoda mengambil MPP plus terutama melalui transporter DA afinitas tinggi, yang juga diamati pada mamalia. Akumulasi MPP plus di dalam neuron menonaktifkan kompleks mitokondria I dari rantai pernapasan dan menginduksi kematian sel [24-27]. Pengobatan GLE ditemukan secara signifikan mengurangi kematian yang terkait dengan pengobatan MPP plus pada cacing tipe liar. Jalur IIS dimodulasi oleh peptida seperti insulin melalui reseptor DAF-2 di C. elegans [28]. Dalam kondisi normal, jalur IIS menghambat fosforilasi DAF-16 dan mencegah translokasi nuklirnya. Dalam mutan nol daf-2, kelompok yang diobati dengan GLE bertahan lebih lama daripada kelompok kontrol. Sebaliknya, tidak ada perbedaan dalam kelangsungan hidup yang diamati antara kelompok kontrol dan kelompok yang diobati dengan GLE yang mengandung cacing mutan nol daf-16. Diketahui bahwa pensinyalan DAF-2 yang diregulasi ke bawah memfasilitasi masuknya DAF-16 ke dalam nukleus, di mana ia dapat mengatur ekspresi gen target dan mengontrol ketahanan terhadap stres dan umur panjang [29]. Ini mungkin menjelaskan mengapa cacing mutan daf-2 yang diobati dengan GLE menunjukkan kelangsungan hidup yang relatif lebih tinggi. Selanjutnya, peningkatan akumulasi nuklir DAF-16 pada cacing yang diobati dengan GLE diamati menggunakan transgenik TJ356 DAF-16::GFPC. elegan. Secara kumulatif, hasil ini menunjukkan bahwa GLE mungkin telah menunjukkan efek neuroprotektifnya melalui aktivasi DAF-16.

4.3. Kandungan Fenolik TotalMetode Folin-Ciocalteu digunakan untuk menentukan kandungan total fenol. Secara singkat, 11,4 L ekstrak (1 mg/mL) dicampur dengan 227,3 L larutan Na2CO3 2 persen (b/v), dan kemudian campuran didiamkan pada suhu kamar selama 2 menit. Setelah penambahan 11,4 L 10 persen (v/v) reagen Folin-Ciocalteu. Inkubasi dalam gelap dilakukan selama 30 menit. Selanjutnya, absorbansi diukur pada 750 nm menggunakan pembaca lempeng mikro (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Asam galat digunakan sebagai standar untuk kurva kalibrasi. Kandungan total fenolik dinyatakan sebagai setara asam galat (mg setara asam galat / g ekstrak tumbuhan).

4.4. Kandungan Flavonoid Total Metode kolorimetri aluminium klorida digunakan untuk mengukur kandungan flavonoid total. Secara singkat, 25 L ekstrak (2 mg/mL) dicampur dengan 7,5 L larutan NaNO2 5 persen (b/v) dan 152,5 L air suling. Setelah 6 menit, ditambahkan 15 L 10 persen (b/v) larutan AlCl3 dan didiamkan selama 5 menit. Kemudian, 50 L larutan NaOH 1 M ditambahkan ke dalam campuran. Selanjutnya, campuran diinkubasi dalam gelap selama 15 menit, dan absorbansi diukur pada 510 nm menggunakan pembaca microplate. Kandungan flavonoid total dihitung dengan membuat kurva kalibrasi menggunakan kuersetin sebagai standar dan hasilnya dinyatakan sebagai ekuivalen kuersetin (setara mg kuersetin/g ekstrak tumbuhan).4.5. Aktivitas Pemulung Radikal Bebas Kapasitas untuk mengais radikal bebas dinilai dengan menggunakan uji DPPH [32]. Secara singkat, 100 L ekstrak (1 mg/mL) dicampur dengan 100 L larutan DPPH. Setelah 30 menit, absorbansi diukur pada 517 nm menggunakan pembaca lempeng mikro. Hasilnya dinyatakan sebagai persentase penghambatan radikal DPPH.

4.10. Lokalisasi Nuklir DAF-16Transgenik C. elegans TJ356, yang mengekspresikan protein fusi DAF-16-GFP, digunakan untuk memeriksa distribusi intraseluler DAF-16. Nematoda stadium L1 diperlakukan dengan GLE selama 48 jam pada 2{{30}} ◦C. Cacing kemudian dipindahkan ke bantalan agarosa 2 persen pada kaca objek dan dibius dengan menambahkan satu tetes (kira-kira 20 L) 25 M natrium azida ke bantalan agarosa. Ekspresi GFP diperiksa melalui mikroskop fluoresensi (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Intensitas fluoresensi rata-rata DAF-16 dalam inti dianalisis menggunakan perangkat lunak Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Profil Fitokimia Menggunakan LC-MSEkstrak daun dianalisis menggunakan LCMS-8040 (Shimadzu). Spektrum massa diperoleh pada rentang m/z 50–1000 menggunakan mode pemindaian Q3. Solusinya disuntikkan ke ODS Inertsil-3 (250 × 2,1 mm, 5 m, GL Sciences, Tokyo Jepang) pada suhu kolom pada 40 C menggunakan gradien (A) 0,1 persen asam format dan (B ) asetonitril/air (80/20) yang mengandung 0,1 persen asam format. Gradien berikut dengan laju aliran 0,2 mL/menit digunakan: 0-100 persen B (0-45 menit), 100 persen B (45-50 menit), dan 0 persen B (50-60 menit). Senyawa diduga diidentifikasi dengan mencocokkan nilai m/z eksperimental ke perpustakaan nilai m/z yang dihitung secara teoritis dalam database, termasuk Database Metabolome Manusia dan database METLIN. 4.12. Analisis Statistik Data dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi untuk setiap kelompok. Perbedaan yang signifikan antara kedua kelompok dinilai menggunakan uji-t, sedangkan perbedaan antara tiga kelompok dan lebih dinilai menggunakan ANOVA satu arah, diikuti dengan uji perbandingan post-hoc Tukey. Signifikansi statistik ditetapkan pada p <0,001 dan="" p=""><0,0001. untuk="" uji="" umur,="" kelangsungan="" hidup="" c.="" elegans="" diplot="" menggunakan="" kurva="" kelangsungan="" hidup="" kaplan-meier="" dan="" dianalisis="" melalui="" uji="" log-rank="" menggunakan="" perangkat="" lunak="" graphpad="" prism="" (versi="" 9.01;="" perangkat="" lunak="" graphpad,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 dan Shigeru Katayama 1,2,*

1 Sekolah Pascasarjana Kedokteran, Sains dan Teknologi, Universitas Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Jepang;

2Institute for Biomedical Sciences, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina,Nagano 399-4598, Jepang;

3 Sekolah Industri Agro, Universitas Mae Fah Luang, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thailand;saroat@mfu.ac.th

4 Institut Bioteknologi Edison, Laboratorium Penelitian Konneker, Universitas Ohio, Athena, OH 45701, AS;

5 Sekolah Tinggi Ilmu & Profesi Kesehatan, Universitas Ohio, Athena, OH 45701, AS

6 Sekolah Pascasarjana Pertanian, Universitas Kyoto, Kyoto 606-8502, Jepang;

Kontribusi Penulis:

Kontribusi Penulis: Konseptualisasi, SR, DAV, dan SK; investigasi, BTA, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV, dan KS; tulisan—persiapan draf asli, AFB; tulisan—review dan editing, SK; pengawasan, SN Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.
Pendanaan: Penelitian ini tidak menerima pendanaan eksternal.
Pernyataan Dewan Peninjau Institusional: Tidak berlaku.
Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan: Tidak berlaku.
Pernyataan Ketersediaan Data: Data tersedia oleh penulis terkait atas permintaan yang wajar.
Konflik Kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
Ketersediaan Sampel: Sampel senyawa tidak tersedia dari penulis

Referensi

1 Pohl, F.; Lin, PKT Potensi Penggunaan Produk Alami Tumbuhan dan Ekstrak Tumbuhan dengan Sifat Antioksidan untuk Pencegahan/Pengobatan Penyakit Neurodegeneratif: In Vitro, In Vivo dan Uji Klinis. Molekul 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rie, SJ; Yoon, S. Peran Stres Oksidatif pada Penyakit Neurodegeneratif. Eks. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Efek protektif xyloketal B terhadap MPP plus neurotoksisitas yang diinduksi dalam sel Caenorhabditis elegans dan PC12. Otak Res. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Pemangkas, PA; Bennett, JP, Jr. Model cybrid penyakit Parkinson sporadis. Eks. saraf. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, aku.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia melindungi neurodegenerasi dopaminergik di Caenorhabditis elegans. Farmasi. Biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Temuan neurokimia dalam model MPTP penyakit Parkinson. J. Transmisi Saraf. 2001, 108, 1263-1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Analisis Fungsional VPS41-Mediated Neuroprotection di Caenorhabditis elegans dan Model Mamalia Penyakit Parkinson. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; dkk. n-Butylidenephthalide Melindungi dari Degenerasi Neuron Dopaminergik dan Akumulasi -Synuclein pada Model Caenorhabditis elegans Penyakit Parkinson. PLOS SATU 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Efek anti-Parkinson dari Bacopa monnieri: Wawasan dari model elegans Caenorhabditis transgenik dan farmakologis penyakit Parkinson. Biokimia. Biofis. Res. Kom. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Antioksidan Polifenol dari Sumber Alami dan Kontribusinya terhadap Promosi Kesehatan. Dalam Polifenol dalam Kesehatan dan Penyakit Manusia; Elsevier BV: Amsterdam, Belanda, 2014; hal.253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulasi Penuaan dan Penyakit Terkait Usia oleh DAF-16 dan Heat-Shock Factor. Sains 2003, 300, 1142-1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 mengintegrasikan masukan perkembangan dan lingkungan untuk menengahi penuaan pada nematoda Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioksidatif dan Aktivitas Pemulungan Radikal Bebas dari Beberapa Tumbuhan yang Digunakan dalam Pengobatan Tradisional Thailand. Farmasi. Biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, aktivitas P. Antioksidan dan perubahan ultrastruktural dalam garis sel kanker lambung yang disebabkan oleh ekstrak tumbuhan rakyat Timur Laut Thailand yang dapat dimakan. Komplemen BMC. Alternatif Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Terjadinya triterpenoid dan steroid pada tiga spesies Glochidion. Fitokimia 1970, 9, 1099-1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, suatu glukosida (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl alcohol dari daun glochidia obovatum. Fitokimia 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Konstituen kimia dari Glochidion wrightii Benth. Biokimia. Sistem Ekol. 2012, 45, 7-11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, T.; Dia, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Kandungan kimia dari Glochidion assamicum. Biokimia. Sistem Ekol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Nilai gizi dan kandungan antioksidan sayuran asli dari Thailand Selatan. Kimia Makanan. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoid sebagai Antioksidan. J.Nat. Melecut. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Mengedipkan mata, M.; Tencomnao, ekstrak daun T. Glochidion zeylanicum menunjukkan sifat ketahanan stres oksidatif dan memperpanjang umur di Caenorhabditis elegans melalui jalur pensinyalan DAF-16/FoxO dan SKN-1/Nrf-2. Fitomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Target DAF-16 yang terlibat dalam umur panjang Caenorhabditis elegans dan pembentukan dauer. Eks. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. Faktor Transkripsi FOXO di Jaringan Regulasi Umur Panjang. J. Biokimia. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergik neuronal loss dan motor defisit di Caenorhabditis elegans overexpressing manusia -synuclein. J. Neurokimia. 2004, 86, 165-172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Balai, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxin-induced degenerasi neuron dopamin di Caenorhabditis elegans. Prok. Natal akad. Sci. AS 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Cabul. Deplesi ATP adalah penyebab utama MPP ditambah kematian neuron dopamin yang diinduksi dan kematian cacing di -synuclein transgenic C. elegans. ilmu saraf. Banteng. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus Model Penyakit Parkinson untuk Skrining Obat High-Throughput. Neurodegeneratif. Dis. 2004, 1, 175-183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Sinyal pemuda: Regulasi endokrin penuaan di elegans Caenorhabditis. Tren Endokrinol. Meta 2009, 20, 259–264. [CrossRef]