Penentuan Lima Komponen Rehmannia Glutinosa Dan Pembentukan Sidik Jari HPLC

Abstrak:Metode penentuan isi lima komponen dalamRehmannia glutinosa, yaitu,rehmannosida D, Leonurin,echinacoside,cistancheside ADanverbascoside, didirikan, dan sidik jari kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) Rehmannia glutinosa didirikan untuk memberikan dasar ilmiah bagi pengendalian kualitas Rehmannia glutinosa. Kolom Shiseido CAPCELL PAK C18 digunakan, dengan larutan asetonitril-0.1% asam format sebagai fase gerak, elusi gradien, suhu kolom 30 derajat, penentuan panjang gelombang variabel, dan laju aliran 1,0 ml/menit. Sidik jari HPLC Rehmannia glutinosa dianalisis dengan "Sistem Evaluasi Kemiripan Sidik Jari Kromatografi Pengobatan Tiongkok (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD uji presisi, uji pengulangan, dan uji stabilitas adalah 0.12%~1,58%, dan tingkat perolehan sampel rata-rata adalah 96,5% ~98,6%; sidik jari HPLC Rehmannia glutinosa yang sudah ada mengidentifikasi 23 puncak umum, dan kemiripan antara sampel Rehmannia glutinosa dan sidik jari kontrol adalah 0.904~0.950. Hasilnya menunjukkan bahwa metode penentuan kandungan dan sidik jari HPLC yang ada cocok untuk evaluasi kualitas Rehmannia glutinosa dan identifikasi Rehmannia glutinosa mentah dan Rehmannia glutinosa matang, dengan akurasi tinggi dan reproduktifitas yang baik, serta dapat memberikan dukungan teknis untuk pengendalian kualitas. Bahan obat Rehmannia glutinosa.

Kata kunci:Rehmannia glutinosa; penentuan konten; sidik jari; evaluasi kualitas

CISTANCHE HERB BARU DENGANECHINACOSIDE,CISTANCHESIDE ADANVERBASKOSISI

Rehmannia glutinosaadalah umbi akar segar atau kering dari tanaman Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. Karena metode pengolahan yang berbeda, rehmannia ini terutama dibagi menjadi rehmannia segar, rehmannia mentah, dan rehmannia matang [1-2]. Area produksi utama adalah tanah Henan, Shanxi, Shaanxi, dll. Diantaranya, rehmannia glutinosa mentah memiliki efek menghilangkan panas dan mendinginkan darah, memberi nutrisi pada yin dan meningkatkan produksi cairan, dan terutama digunakan untuk mengatasi panas dalam darah, menghangatkan racun dan flek, dll.; rehmannia glutinosa yang dimasak memiliki efek menutrisi darah dan yin, mengisi kembali esensi dan mengisi sumsum, dan terutama digunakan untuk mengobati kekurangan darah, klorosis, dll. Palpitasi, kegelisahan, dll.[1-2]. Keduanya memiliki khasiat dan rasa yang berbeda, namun keduanya termasuk dalam meridian hati dan ginjal. Rehmannia glutinosa mengandung komponen kimia yang kompleks, terutama termasuk iridoid, ionon, glikosida feniletanol, flavonoid, dll. [3-5].

Setelah Rehmannia glutinosa diolah dengan metode pengolahan yang berbeda, jenis, kandungan dan proporsi komponen kimia pada setiap produk olahan sangat bervariasi, sehingga mengakibatkan perbedaan aktivitas farmakologis yang signifikan [6-10]. menurut

Studi terkait[11-12] menunjukkan bahwa dalam proses perubahan Rehmannia glutinosa dari "mentah" menjadi "dimasak", kandungan komponen kimia seperti catalpol, motherwort, stachyose, dan asam amino semuanya menurun secara signifikan, dan kandungannya fruktosa, 5-hidroksimetilfurfural, dll. Kandungan , isorebascoside, dll. meningkat secara signifikan. Saat ini pengendalian mutu rehmannia glutinosa mentah dan matang terutama menggunakan kandungan catalpol dan rehmanniaside D sebagai indikator evaluasi. Indikator sistem evaluasinya relatif tunggal, sehingga sulit untuk mengontrol kualitas rehmannia glutinosa secara komprehensif. Selain itu, penelitian menunjukkan bahwa kandungan rehmannia glutinosa D berubah sebelum dan sesudah pengolahan. Ukurannya kecil dan memiliki spesifisitas yang buruk dalam mengkarakterisasi perubahan komposisi setelah pemrosesan dan tingkat pemrosesan [12-13].

Oleh karena itu, untuk mengevaluasi kualitas Rehmannia glutinosa secara lebih komprehensif, penelitian ini membuktikan hubungan antara rehmanniaside D dan Yimu pada Rehmannia glutinosa.

Metode penentuan kandungan lima komponen umum, antara lain glukosida, echinaceaside, cistancheoside A, dan verbascoside, serta menetapkan sidik jari HPLC Rehmannia glutinosa untuk menganalisis kandungan komponen utama dalam Rehmannia glutinosa dari berbagai area produksi dan sebelum dan sesudah pemrosesan, guna memberikan informasi untuk pengendalian mutu Rehmannia glutinosa. Dukungan teknis.

Instrumen, reagen dan obat uji

Agilent 1260 kromatografi cair kinerja tinggi (detektornya adalah susunan dioda); timbangan analitik elektronik rentang variabel (METTLER TOLEDO); pembersih ultrasonik digital (Pabrik Instrumen Ultrasonik Shanghai, KH-500DE). Metanol (Grup Sinopharm) memiliki kualitas analitis; asetonitril (Merck) adalah tingkat kromatografi; air adalah air kemasan Watsons. Bahan acuan Rehmannia glutinosa D (nomor batch RFSD8401909016, kemurnian 98,0%), bahan referensi glikosida leonurus (nomor batch RFS-Y22002208010, kemurnian 98,0%), dan bahan referensi cistancheside A (batch nomor RFS-R05002009014, kemurnian 96,0%) semuanya dibeli dari Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; bahan referensi echinacoside (nomor batch 111670-201907, kemurnian 91,8%) dan bahan referensi verbascoside (nomor batch 11530-201914, kemurnian 95,2%) semuanya dibeli dari Lembaga Inspeksi Makanan dan Obat China. Sampel Rehmannia (SX1~SX4, HN1 dan HN2) dikumpulkan dari area produksi yang berbeda (lihat Tabel 1), dimana SX4 dan HN2 masing-masing dikukus oleh SX1 dan HN1, dan SX2 dan SX3 dikumpulkan dari area produksi yang sama. Semua sampel diidentifikasi asli oleh Song Pingshun, kepala praktisi pengobatan Tiongkok di Institut Pengawasan Obat Provinsi Gansu.

Tabel 1 Informasi sampel Semen Rehmanniae

2.1 Kondisi kromatografi

Kolom Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm×4,6 mm, 5 μm) digunakan, asetonitril digunakan sebagai fase gerak A, dan larutan asam format 0,1% digunakan sebagai fase gerak B . Kondisi elusi gradien adalah: 0-3 min, 1%A; 3-9 menit, 1%A→5%A; 9-24 menit, 5%A→35%A; 24-35 menit, 35%A→65%A; 35-40 menit, 65%A→90%A. Deteksi panjang gelombang variabel (0-24 mnt, 203 nm; 24-40 mnt, 330 nm). Volume injeksi adalah 15 μL larutan referensi dan 20 μL larutan sampel.

2.2 Persiapan solusi

2.2.1 Persiapan solusi referensi

Ambil lima zat referensi di atas dalam jumlah yang sesuai, tambahkan 70% metanol untuk menyiapkan larutan referensi campuran dengan konsentrasi massa 0,4 mg/mL.

2.2.2 Persiapan larutan uji

Timbang sekitar 1.0 g bubuk Rehmannia (melewati saringan No. 2), timbang secara akurat, masukkan ke dalam labu berbentuk kerucut yang bersumbat, tambahkan secara akurat 25 mL metanol 70%, segel, timbang, proses ultrasonik (daya 300 W, frekuensi 50 kHz) selama 30 menit, biarkan dingin hingga suhu kamar, timbang kembali, tambahkan massa yang hilang dengan metanol 70%, saring, dan ambil filtratnya untuk diperoleh.

2.3 Investigasi metodologis

2.3.1 Investigasi kekhususan

Ambil larutan referensi campuran di bawah "2.2.1" dan larutan uji (sampel SX1) di bawah "2.2.2", dan suntikkan serta ukur sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah "2.1". Hasil penelitian menunjukkan bahwa kromatogram sampel Rehmannia menyajikan puncak kromatografi dengan waktu retensi yang sama dengan standar acuan Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A, dan Verbascoside (lihat Gambar 1), menunjukkan bahwa metode ini mempunyai kekuatan yang kuat. kekhususan.

2.3.2 Investigasi hubungan linier

Tambahkan 70% metanol ke dalam larutan referensi campuran, encerkan masing-masing 5 kali, 10 kali, 25 kali, 50 kali, 100 kali, dan 250 kali, lalu suntikkan dan ukur sesuai dengan kondisi kromatografi pada "2.1". Kurva standar digambar dengan konsentrasi massa masing-masing referensi sebagai sumbu horizontal (x) dan luas puncak kromatografi yang sesuai sebagai sumbu vertikal (y). Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2, yang menunjukkan bahwa setiap komponen memiliki hubungan linier yang baik dalam rentang konsentrasi massa yang sesuai.

1.rehmaniosida D; 2. leonurida; 3. echinakosida; 4. castanoside A;5. akteosida

Gambar 1 Kromatogram penyelidikan spesifisitas

Tabel 2 Hubungan Linier 5 Komponen Semen Rehmanniae

2.3.3 Investigasi yang presisi

Ambil larutan uji (sampel SX1) pada "2.2.2", dan lakukan uji injeksi sesuai dengan kondisi kromatografi pada "2.1". Suntikkan sampel sebanyak 6 kali terus menerus, catat luas puncak masing-masing komponen, dan hitung luas puncak RSD rehmannia glutinosa D, glikosida motherwort, glikosida echinacea, glikosida cistanche A, dan verbascoside pada sampel uji menjadi 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48%, dan 0.82%, masing-masing menunjukkan bahwa instrumen tersebut memiliki presisi yang baik.

2.3.4 Studi Pengulangan

Enam sampel dari sampel akar Rehmannia (SX1) yang sama dibuat secara paralel sesuai dengan metode pada "2.2.2" dan disuntikkan serta ditentukan sesuai dengan kondisi kromatografi pada "2.1". RSD kandungan glikosida akar rehmannia D, glikosida motherwort, glikosida echinacea, glikosida cistanche A dan verbascoside pada keenam sampel adalah 0.46%, 0.69%, 1.42%, {{ 12}}.48% dan 1.58%, masing-masing menunjukkan bahwa metode tersebut mempunyai kemampuan pengulangan yang baik.

2.3.5 Studi Stabilitas

Ambil larutan uji (sampel SX1) pada "2.2.2" dan suntikkan serta ukur sesuai dengan kondisi kromatografi pada "2.1" pada 0 jam, 2 jam, 4 jam, 6 jam, 8 jam, 1{{ 15}} jam, 12 jam, 18 jam, dan 24 jam, masing-masing. RSD area puncak rehmannia glutinosa D, motherwort glikosida, echinacoside, cistanche glikosida A, dan verbascoside adalah 0,94%, 1.04%, 0,73% , 0,83%, dan 0,71%, masing-masing, menunjukkan bahwa larutan uji memiliki stabilitas yang baik dalam waktu 24 jam.

2.3.6 Tingkat pemulihan sampel

{{0}}.5 g sampel akar Rehmannia (SX1) yang diketahui kandungan 5 komponen ditimbang secara akurat ke dalam labu berbentuk kerucut bersumbat, dan ditambahkan 6 bagian paralel, dan ditambahkan 5 larutan referensi dengan konsentrasi tertentu masing-masing. Sampel disiapkan menurut metode "2.2.2", dan sampel diinjeksi serta diukur menurut kondisi kromatografi berdasarkan "2.1". Tingkat pemulihan dihitung, dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 3. Rata-rata tingkat pemulihan sampel setiap komponen adalah 96,5%~98,6%, dan RSD adalah 0,73%~1,52%, yang menunjukkan bahwa metode ini memiliki akurasi yang baik.