Penentuan Kandungan Lima Senyawa dalam Semen Rehmanniae Dan Penetapan Sidik Jari HPLC-nya

Tabel 3 Hasil uji pemulihan (n=6)

2.4 Penentuan sampel

Enam batch Rehmannia yang dikumpulkan disiapkan menurut metode "2.2.2" dan diambil sampelnya serta ditentukan menurut kondisi kromatografi berdasarkan "2.1". Hasil penentuan kandungan ditunjukkan pada Tabel 4. Hasil penelitian menunjukkan bahwa diantara kelima komponen tersebut, kandungan rehmannia glikosida D paling tinggi, berkisar antara 0.460% sampai dengan {{1 0}},730%; kandungan glikosida leonuri menempati urutan kedua, berkisar antara 0,100% hingga 0,270%, dan kandungan kedua komponen pada sampel dari daerah produksi yang berbeda tidak berbeda nyata. Dalam sampel SX1, kecuali echinacoside, kandungan empat komponen lainnya jauh lebih tinggi dibandingkan dengan kumpulan sampel lainnya; Kandungan echinacoside, cistancheside A, dan verbascoside pada Rehmannia glutinosa dari berbagai daerah produksi sangat berbeda dan tidak beraturan.

HERBAL CISTANCHE DENGANKONSISTENSI KUALITAS BAIK

2.5 Pembentukan dan evaluasi kesamaan sidik jari HPLC Rehmannia glutinosa

Kromatogram dan data penentuan kandungan multi-komponen dalam Rehmannia glutinosa diimpor ke perangkat lunak "Sistem Evaluasi Kemiripan Sidik Jari Kromatografi Obat Herbal Tiongkok (Edisi 2012)", dan kromatogram sampel uji SX1 dipilih sebagai spektrum referensi. Lebar jendela waktu ditetapkan ke 0.10 menit, dan metode median digunakan untuk menghasilkan spektrum superimposisi dan spektrum referensi. Sebanyak 23 puncak umum diidentifikasi (lihat Gambar 3). Kemiripan sidik jari sampel Rehmannia glutinosa dengan referensi adalah 0,904~0,950, hal ini menunjukkan bahwa sampel Rehmannia glutinosa dari daerah produksi berbeda dan antara Rehmannia glutinosa mentah dengan Rehmannia glutinosa matang memiliki kemiripan dan mempunyai konsistensi mutu yang baik.

Tabel 4 Hasil Penentuan Kandungan 5 Komponen Semen Rehmanniae/%

13. rehmaniosida D; 17. leonurida; 19. echinakosida; 20. castanoside A; 21. akteosida

Gambar 3 Overlay kromatogram HPLC 6 batch Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) dan referensi (R)

3 Diskusi

3.1 Pemilihan kondisi kromatografi

Empat sistem fase gerak, asetonitril-air, asetonitril-0.1% larutan asam format, metanol-air, dan metanol-0.1% larutan asam format, diselidiki dalam penelitian ini. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelima komponen mempunyai efek pemisahan yang baik pada sistem asetonitril; dibandingkan dengan sistem fase gerak asetonitril-air, puncak glikosida rehmannia glutinosa dan motherwort dalam fase gerak larutan asam format asetonitril-0.1% lebih sempit dan memiliki simetri puncak yang baik. Pada saat yang sama, karena perbedaan serapan ultraviolet dari kelima komponen tersebut, kandungan komponennya sangat bervariasi. Untuk menentukan kandungan masing-masing komponen secara lebih akurat dan untuk memastikan bahwa intensitas penyerapan kelima komponen merata dalam kromatogram yang sama, maka serapan ultraviolet darirehmannia glikosida D, glikosida motherwort, echinacoside, cistancheside A, dan verbascoside dianalisis, dan penentuan panjang gelombang variabel dipilih, yaitu, 0-24 menit, rehmannia glikosida pertama yang dipisahkan ditentukan pada 203 nm, dan 24-40 menit, echinacoside, cistancheside A, dan verbascoside yang terpisah ditentukan pada 330 nm. Selain itu, penelitian ini juga menyelidiki efek ekstraksi metanol, larutan metanol 70%, larutan metanol 50%, dan larutan asetonitril 50% sebagai pelarut ekstraksi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa larutan metanol 70% sebagai pelarut ekstraksi dapat melarutkan komponen yang akan diuji lebih baik, dan sampel yang diekstraksi memiliki pengotor yang lebih sedikit. Oleh karena itu, penelitian ini memilih metanol 70% sebagai pelarut ekstraksi, larutan asetonitril-0.1% asam format sebagai sistem fase gerak, dan menggunakan panjang gelombang variabel untuk menentukan kandungan kelima komponen dalam Rehmannia.

3.2 Analisis hasil penentuan sampel

Dari hasil determinasi terlihat bahwa setelah dikukus, kecuali kandungan echinacoside sedikit meningkat, kandungan keempat komponen lainnya mengalami penurunan yang signifikan, terutama kandungan leonuriside dan cistancheside A; kandungan rehmannia glikosida D dan cistanchesida A pada Rehmannia glutinosa dari area produksi yang sama sedikit berbeda, dan kandungan leonuriside, echinacoside dan verbascoside berbeda nyata; kandungan echinacoside pada Rehmannia glutinosa dari area produksi Henan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan sampel dari area produksi Shanxi, dan kandungan empat komponen lainnya sedikit berbeda. Pada saat yang sama, menurut sidik jari HPLC yang dibuat dalam penelitian ini, kesamaan antara 6 kumpulan sampel Rehmannia dan sidik jari kontrol adalah 0.904~0,950, yang menunjukkan bahwa bahan kimia utama komponen dari 6 batch sampel Rehmannia sebelum dan sesudah pemrosesan sangat konsisten.

Singkatnya, metode penentuan konten dan sidik jari HPLC yang dibuat dalam penelitian ini akurat, dapat diandalkan, dan memiliki spesifisitas yang baik. Mereka dapat digunakan untuk mengkarakterisasi perubahan komponen dan tingkat pemrosesan Rehmannia glutinosa sebelum dan sesudah pemrosesan, dan memberikan dukungan teknis untuk pengendalian kualitas Rehmannia glutinosa. Namun, penelitian ini memiliki kelemahan yaitu jumlah sampel yang kecil dan cakupan area produksi yang tidak lengkap, sehingga memerlukan analisis dan verifikasi lebih lanjut.

Referensi

[1] Komite Farmakope Tiongkok. Farmakope Republik Rakyat Tiongkok: Volume 1 [S]. Beijing: Pers Sains dan Teknologi Medis Tiongkok, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Penelitian tentang sejarah evolusi nama olahan Rehmannia glutinosa dan kajian khasiatnya [J]. Pengobatan Paten Tiongkok, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, dkk. Kemajuan penelitian pada Rehmannia glutinosa dan analisis prediksi penanda kualitasnya [J]. Pengobatan Paten Tiongkok, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, dkk. Kemajuan penelitian tentang komposisi kimia dan efek farmakologis Rehmannia glutinosa [J]. Pengobatan Herbal Cina, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Kemajuan penelitian komponen kimia dan efek farmakologi Rehmannia glutinosa［J］.

Penelitian Evaluasi Obat, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, dkk. Analisis komponen kimia Rehmannia glutinosa segar, Rehmannia glutinosa mentah dan Rehmannia glutinosa matang dengan metode UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Pengobatan Paten Tiongkok, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, dkk. Pengenalan pola sidik jari dan penentuan kandungan multi-komponen dari berbagai produk olahan Rehmannia glutinosa［J］. Ilmu Pertanian Hubei, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, dkk. Kemajuan penelitian komponen kimia dan efek farmakologi Rehmannia glutinosa［J］. Pengobatan Herbal Cina, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, dkk. Studi perbandingan komponen kimia Rehmannia glutinosa sebelum dan sesudah diolah dengan UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Pengobatan Tiongkok Baru dan Farmakologi Klinis, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, dkk. Akumulasi dinamis komponen nukleosida dan asam amino pada Rehmannia glutinosa berdasarkan UPLC-TQ-MS［J］. Pengobatan Herbal Cina, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yu Jiao. Kajian teknologi pengolahan dan mekanisme "sembilan pengukusan dan sembilan pemaparan" Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Universitas Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, dkk. HPLC Penentuan kandungan delapan komponen secara simultan dalam Rehmannia glutinosa dan berbagai produk olahannya melalui analisis sidik jari UPLC dan penentuan kandungan komponen multi-indeks [J]. Bahan Obat Cina, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Evaluasi kualitas Rehmannia glutinosa berdasarkan sidik jari UPLC dan penentuan kandungan komponen multi-indeks [J]. Bahan Obat Cina, 2021, 44 (4): 917-923.