Ekstrak Cistanche Deserticola Dapat Melawan Imunosenescence Dan Memperpanjang Masa Hidup pada Tikus Mouse Prone 8 (SAM-P8) yang Dipercepat Penuaan

Mohon hubungi{0}}untuk informasi lebih lanjut

Substrain 8 rawan tikus yang dipercepat penuaan (SAM-P8), diterima secara luas sebagai model hewan untuk mempelajari obat penuaan dan antipenuaan, digunakan untuk menguji efek suplementasi makanan dengan ekstrak Cistanche deserticola (ECD) yang telah digunakan secara luas di pengobatan tradisional Tiongkok karena kemampuannya yang dirasakan untuk meningkatkan fungsi kekebalan pada orang tua. Tikus SAM-P8 jantan berusia delapan bulan diobati dengan ECD dengan pemberian oral setiap hari selama 4 minggu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa suplementasi makanan l50 mg/kg dan 450 mg/kg ECD dapat memperpanjang masa hidup yang diukur dengan analisis kelangsungan hidup Kaplan-Meier dengan cara yang bergantung pada dosis. Suplementasi diet tikus SAM-P8 selama 4 minggu dengan 100.500 dan 2500 mg/kg ECD terbukti menghasilkan peningkatan yang signifikan pada sel T naif dan sel pembunuh alami dalam populasi sel darah dan limpa. Sebaliknya, sel T memori perifer dan sitokin proinflamasi, IL{19}} dalam serum, secara substansial menurun pada tikus yang mengonsumsi 100 dan 500 mg/kg ECD setiap hari. Selain itu, sel positif Sca-1, nenek moyang yang diakui darinaif periferalSel T, dipulihkan secara paralel. Hasil kami memberikan dukungan eksperimental yang jelas untuk studi observasional klinis lama yang menunjukkan bahwaBentengdeserticola memiliki efek yang signifikan dalam memperpanjang rentang hidup dan menyarankan ini dicapai dengan memusuhiimmunosenescence.

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

1. Perkenalan

Bentenggurun pasir, salah satu obat herbal/produk kesehatan tradisional Tiongkok yang paling populer, telah dijelaskan dalam sejumlah farmakope herbal Tiongkok historis memiliki sifat antipenuaan. Akibatnya, telah banyak digunakan di Cina untuk mengobati berbagai gangguan terkait usia termasuk pikun, impotensi, infertilitas, infeksi kronis, dan gangguan hematopoietik pada orang tua [1]. Pendekatan kimia modern telah memungkinkan dua jenis utama senyawa, glikosida fenilethanoid, dan oligosakarida, untuk diisolasi sebagai bahan aktif utama dari Cistanche deserticola [1]. Dalam dekade terakhir, Cistanche deserticola dan ekstraknya telah dipelajari secara intensif dan terbukti mampu melindungi neuron dari cedera yang disebabkan oleh neurotoksin [2], menghambat induksi karbon tetraklorida.hepatotoksisitas[2], dan mempromosikan pemulihan sel sumsum tulang dari kerusakan radiasi yang diinduksi Co60 [3]. Ini juga telah terbukti memiliki efek anti-inflamasi, antioksidan, dan antipenuaan [4]. Namun, apakah Cistanche deserticola dapat meningkatkan rentang hidup dan mekanisme molekuler apa yang mendasarinya [3] terkait dengan sifat antipenuaannya belum diuji secara ketat.

Imunosenesensi, yaitu, perubahan sistem kekebalan dengan usia membentuk latar belakang yang meningkatkan kerentanan terhadap infeksi, kanker, penyakit neurodegeneratif, dan penyakit autoimun pada orang tua [5]. Intervensi terapeutik, seperti pembatasan kalori [6] dan suplementasi vitamin E, telah dilaporkan efektif dalam menunda perkembangan immunosenescence dan karenanya mengurangi morbiditas beberapa penyakit terkait usia serta memperpanjang rentang hidup manusia dan hewan pengerat. [7, 8]. Namun, penelitian di bidang ini diperumit oleh fakta bahwa penuaan dikaitkan dengan paradoks defisiensi imun simultan dan peradangan kronis [9]. Ini berarti bahwa stimulasi sederhana proliferasi limfosit atau anti-inflamasi tidak mewakili intervensi terapeutik yang ideal dalam menghadapi penuaan dan kondisi terkait usia [10]. Akibatnya dalam mencari intervensi medis yang mampu mencegah atau mengurangi kondisi terkait usia termasuk infeksi, kanker, penyakit autoimun, aterosklerosis, dan penyakit neurodegeneratif yang merupakan penyebab utama kematian dan kecacatan, dan perbaikan cacat sistem kekebalan harus disertai dengan penghambatan respon inflamasi. Tikus yang dipercepat penuaan [11] adalah model tikus inbrida, berasal dari strain AKR/J, yang banyak digunakan dalam studi penuaan. Substrain P8 (SAM-P8) dari tikus-tikus ini memiliki rentang hidup yang sangat pendek jika dibandingkan dengan substrain R1 (SAM-R1), yang juga menunjukkan proses penuaan yang lebih lambat [12]. Sejalan dengan penuaan dini mereka, tikus SAM-P8 juga menunjukkan peningkatan penuaan neurologis, imunosenesensi, dan terkait usia.hematopoietikdefisit yang sangat mirip dengan karakteristik penuaan manusia yang khas [13, 14]. Analisis mekanisme yang mendasari bertanggung jawab untuk proses penuaan dipercepat dan gangguan terkait usia menunjukkan bahwa disfungsi mitokondria [15], stres oksidatif, dan peningkatan tingkat mutasi DNA somatik semua tampaknya terlibat [16, 17]. Sistem tikus ini, dengan latar belakang genetiknya yang homogen, oleh karena itu, menyediakan model eksperimental yang sangat baik untuk mempelajari terapi penuaan dan antipenuaan [12]. Studi ini berfokus pada penyelidikan apakah ekstrak Cistanche deserticola mampu memperpanjang masa hidup tikus SAM-P8 dan membalikkan status imunosenesensi mereka.

Cistanche dapat meningkatkan kekebalan dan anti-kelelahan

2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan. Cistanche deserticola YC MA segar dikumpulkan dari berbagai daerah di Cina barat laut termasuk daerah otonomi Xinjiang, Neimenggu, dan Ningxia. Sampel yang digunakan untuk membuat ekstrak diautentikasi oleh Profesor Pengfei Tu, spesialis farmakognosi di Departemen Obat Alami, Sekolah Ilmu Farmasi, Universitas Peking. Spesimen voucher Cistanche deserticola (nomor CD-2007-03-08) yang digunakan telah disimpan di herbarium School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, China. 2.2. Persiapan Ekstrak Cistanche deserticola (ECD) dan Analisis HPLC. Cistanche deserticola (2.0 kg) yang dikeringkan dan diiris di udara dibubuk dan diekstraksi dua kali dengan etanol 70 persen selama 1 jam. Rasio tanaman/etanol yang digunakan adalah 1/6 (b/b) pada ekstraksi pertama dan 1/4 (b/b) pada ekstraksi kedua. Kedua ekstrak digabungkan dan disaring sebelum dipekatkan dengan kepadatan relatif 1,10-1,15 di bawah tekanan tereduksi pada 60∘ C. Konsentrat ini kemudian dikeringkan dengan vakum dan bubuk yang dihasilkan adalah ekstrak dari Cistanche deserticola (ECD) yang digunakan selama penelitian ini. Komponen ECD dianalisis menggunakan HPLC seperti yang dijelaskan sebelumnya [1]. Secara singkat, 100 mg bubuk ECD dilarutkan dalam 10,0 mL H2O dan setelah penyaringan disuntikkan ke dalam HPLC. Analisis HPLC dilakukan pada sistem kromatografi cair Agilent 1100 (Agilent Co., USA) Fase gerak terdiri dari campuran metanol (A) dan 0,10 persen asam metanoat (B). Program kromatografi gradien digunakan; ini adalah 26,5 persen (A) dan 73,5 persen (B) dalam 0–7 menit, 26,5–29,5 persen (A) dan 73,5–70,5 (B) dalam 8–10 menit, dan 29,5 persen (A) dan 70,5 persen (B ) dalam 20-27 menit. Laju aliran dijaga konstan pada 1,0 mL/menit, volume injeksi adalah 10 mL, dan suhu kolom dipertahankan pada 25∘ C. Detektor UV yang ditetapkan pada 330 nm digunakan untuk memantau aliran keluar kolom dan menghasilkan kromatogram. Glikosida feniletanoid dan oligosakarida diidentifikasi dari waktu retensi dan spektrum penyerapannya. Kuantifikasi dilakukan dengan kurva kalibrasi standar eksternal. Rendemen ekstrak Cistanche deserticola (ECD) sekitar 3,33 persen dan kandungan fenilethanoid adalah 17,94 persen. Acteoside dan echinacosida adalah dua konstituen utama dalam fraksi ini, dengan isinya masing-masing 3,80 persen dan 8,25 persen . Oligosakarida menyumbang 82 persen dari total ECD. Konsentrasi komponen aktif utama PAUD ditunjukkan pada Tabel 1. 2.3. Analisis Rentang Kehidupan Hewan. Tikus SAM-P8 jantan dan kontrol SAM-R1 dibeli dari Laboratorium Pemuliaan Hewan dan Pusat Penelitian Pusat Ilmu Kesehatan Universitas Peking (Beijing, Cina). Penelitian ini telah disetujui oleh Komite Penelitian Hewan Universitas Peking dan dilakukan sesuai dengan pedoman Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium di Universitas Peking. Nomor sertifikasi tikus ini adalah SCXK2001-2008. Tikus-tikus itu disimpan dalam kandang metabolisme standar dalam kondisi yang dikendalikan lingkungan (22 ± 2∘ C, kelembaban 45-60 persen, dan siklus terang / gelap 12 jam) dan diizinkan akses gratis ke makanan dan air. Setelah 2 minggu aklimatisasi, hewan dibagi menjadi lima kelompok: 3 kelompok perlakuan ECD, kelompok kontrol SAM-R1, dan kelompok kontrol SAM-P8 tanpa perlakuan. Diet dari 3 kelompok perlakuan dilengkapi dengan diet yang dicampur dengan

konsentrasi ECD yang berbeda: hasil dosis rata-rata ECD rendah (50 mg/kg), sedang (150 mg/kg), dan tinggi (450 mg/kg). harian. SAM-R1 dan SAM-P8 tanpa perlakuan kelompok kontrol diberi makan dengan diet yang sama tanpa ECD. Pengukuran asupan makanan semua hewan dilakukan setiap tiga hari selama percobaan. Pemantauan tekanan darah dan detak jantung dilakukan secara noninvasif setiap tiga bulan selama percobaan untuk menentukan status kesehatan mencit. Rentang hidup setiap tikus dicatat sampai kematian semua hewan. 2.4. Analisis Sel T Naif, Sel T Memori, Sel NK, dan Sel Positif Sca-1 dalam Populasi Sel Darah Tepi dan Sel Limpa dengan Flow Cytometry. Tikus SAM-P8 jantan umur delapan bulan dan tikus kontrol SAM-R1 dibagi menjadi 5 kelompok: 3 kelompok perlakuan ECD mencit SAM-P8, kelompok kontrol SAM-P8 tanpa perlakuan, dan kelompok kontrol SAM-R1. Diet dari 3 kelompok perlakuan dilengkapi dengan pemberian ECD harian dengan dosis 100 mg/kg, 500 mg/kg, atau 2500 mg/kg. Setelah 4 minggu pengobatan, hewan diikat selama 12 jam dan kemudian dibius dengan larutan natrium pentobarbital (50 mg/kg, injeksi peritoneal, ip), dan darah dikumpulkan dan diobati dengan antikoagulan, natrium sitrat (2 mg/mL ). Limfosit darah dikumpulkan dan dianalisis. Kemudian mencit diusap dengan alkohol 75 persen dan rongga perut dibuka dalam lemari yang sangat bersih (fume hood). Limpa dicuci dengan PBS; kemudian digiling dan disaring dengan saringan sel (70 m). Suspensi sel limpa yang dihasilkan dicuci dan disuspensikan kembali dalam media PRMI 1640 pada konsentrasi 2 × 106 /mL. Sel-sel limpa dari masing-masing tikus dibagi ke dalam 6 tabung untuk analisis aliran sitometri. Konsentrasi akhir suspensi sel limpa di setiap tabung adalah 2 × 105/100 L. Limfosit darah tepi dan limfosit limpa secara terpisah diinkubasi dengan FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b/pink, dan FITC-ly-6A/E ( Sca-1) (semua dibeli dari BD Biosciences, San Diego, CA, USA) antibodi monoklonal pada suhu kamar selama 30 menit. Larutan lisis, yang secara khusus ditujukan untuk melisiskan sel darah merah sambil mempertahankan leukosit, sehingga menghilangkan sel-sel yang mengganggu untuk analisis aliran sitometrik, diinkubasi dengan darah dalam gelap pada suhu kamar selama 5 menit. Setelah sentrifugasi pada 500 × g selama 5 menit, supernatan dituang. Kemudian sel pelet dicuci 3 kali dengan PBS, disuspensikan kembali dalam saline buffer fosfat dingin (PBS, pH 7,4) yang mengandung 0,01 persen natrium azida, dan dikenai FCM analisis. Subpopulasi limfosit dianalisis dengan flow cytometry menggunakan FACS Calibur flow cytometer (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) dan perangkat lunak analisis BD CellQuest. 2.5. Penilaian Viabilitas Seluler Limfosit T Perifer dengan Annexin V-FITC dan PI Pewarnaan Ganda dan Analisis FACS. Setelah suplementasi diet tikus SAM P8 dengan tiga dosis ECD selama 4 minggu, hewan diikat selama 12 jam dan kemudian dibius, dan darah dikumpulkan dan dianalisis. Limfosit apoptosis dan nekrotik yang layak dikuantifikasi menggunakan kit Annexin V-FITC (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Beijing, China). Limfosit menjadi sasaran pewarnaan ganda dengan fluorescein isothiocyanate terkonjugasi berlabel annexin V (Annexin V-FITC) dan propidium iodide (PI). Secara singkat, suspensi limfosit yang mengandung sekitar 106 sel/mL dicuci dua kali dengan PBS dan disuspensikan dalam 200 L buffer pengikat (10 mM HEPES/NaOH, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2,5 mM CaCl2), dan 10 L Annexin V-FITC ditambahkan ke dalam suspensi sel. Setelah 15 menit inkubasi dalam gelap pada suhu kamar, 300 L buffer pengikat lebih lanjut dan 5 L PI ditambahkan. Segera setelah inkubasi 5 menit lebih lanjut dalam gelap, sampel limfosit bernoda ganda dianalisis menggunakan flow cytometer, FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). 2.6. Penentuan Sitokin Plasma dengan Sitometrik Bead Array (CBA) Immunoassay. Kadar sitokin plasma dikuantifikasi menggunakan cytometric bead array (CBA) assay kit (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) yang mampu mendeteksi secara simultan IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL{{96 }}, IL-10, GM-CSF, dan IL-3 dalam satu sampel. Oleh karena itu, immunoassay multipleks ini memungkinkan deteksi sitokin stimulasi imun (IL-2), sitokin proinflamasi (IFN-𝛾, TNF- , dan IL-6), sitokin penghambat inflamasi (IL{{105 }}), dan sitokin hematopoietik (IL-3 dan GM-CSF). Secara singkat, 50 L plasma dicampur dengan 50 L manik-manik penangkap sitokin terkonjugasi PE yang telah dilapisi dengan antibodi penangkap khusus untuk IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL-2, IL -10, GM-CSF, dan IL-3 protein. Setelah 2 jam inkubasi pada suhu kamar, sampel dicuci dalam saline buffer fosfat dingin (PBS, pH 7,4) yang mengandung 0,01 persen natrium azida, kemudian difiksasi dalam 0,5 mL paraformaldehida 1 persen dalam PBS dan disimpan pada suhu 4∘ C dalam gelap sampai analisis, dan kemudian dianalisis dengan flow cytometer FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). 2.7. Analisis statistik. Data ditampilkan sebagai nilai rata-rata ± SD Perbandingan antara kelompok yang berbeda dilakukan dengan ANOVA satu arah dengan uji post hoc. Dalam studi rentang hidup, data menjalani analisis kelangsungan hidup Kaplan-Meier, yang mencakup penggunaan uji Log-rank (Mantel-Cox) dan Gehan-Breslow Wilcoxon. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Paket Statistik untuk Ilmu Sosial untuk Windows (SPSS, Chicago, IL) dan nilai kurang dari 0,05 dianggap signifikan.

3. Hasil
3.1. Analisis Potensi Komponen Aktif dalam Ekstrak Cistanche deserticola (ECD). Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1, ECD terutama terdiri dari dua jenis senyawa, glikosida fenilethanoid, dan oligosakarida. Dalam glikosida fenilethanoid, echinacoside, acetonide, dan 8-asam epiloganat telah diidentifikasi, sedangkan pada oligosakarida, hanya galactitol yang diidentifikasi.

Gambar 1: Efek ekstrak Cistanche deserticola (ECD) pada rentang hidup tikus SAM-P8. Tikus tikus 8 (SAM-P8) jantan yang dipercepat penuaan usia delapan bulan secara acak dibagi menjadi 4 kelompok (dalam setiap kelompok, {{10}}): 3 kelompok perlakuan, dan tidak -kelompok kontrol pengobatan. Substrain nonsenescent (SAM-R1) tikus digunakan sebagai kontrol eksperimental. Asupan makanan semua hewan dipantau selama percobaan pada interval 3-hari. 3 kelompok perlakuan diberi makan ad libitum dengan diet yang dilengkapi dengan dosis rendah (50 mg/kg), sedang (150 mg/kg), dan tinggi (450 mg/kg) dosis Cistanche deserticola. ekstrak (ECD). Kedua kelompok hewan kontrol diberi makan dengan diet yang sama tanpa suplementasi ECD. ( a ) Kurva kelangsungan hidup Kaplan-Meier dari tikus SAM-P8 yang diberi diet ECD atau kontrol kendaraan. Analisis kelangsungan hidup Kaplan-Meier dilakukan dengan menggunakan uji Log-rank (Mantel-Cox) dan Gehan-Breslow-Wilcoxon. (b) Histogram rentang hidup rata-rata kelompok mencit. Bar kesalahan menunjukkan bahwa standar deviasi dari mean dan signifikansi statistik dilakukan dengan menggunakan analisis ANOVA diikuti dengan post hoc -test. ###𝑃 < 0,001="" sam-p8="" versus="" sam-r1;=""><0,01 kelompok="" perlakuan="" dosis="" tinggi="" versus="" sam-p8;=""><0,05 kelompok="" perlakuan="" dosis="" sedang="" versus="" sam-p8="" (dalam="" setiap="" kelompok,="">

3.2.Dampak Ekstrak Cistanche deserticola pada Rentang Hidup Rata-Rata Mencit SAM-P8. Untuk penelitian ini dan selanjutnya, tikus SAM-P8 jantan berusia delapan bulan dibagi menjadi 4 kelompok. Di antara mereka, satu kelompok tikus diberi makan dengan diet normal tanpa ECD, 3 kelompok lainnya secara terpisah menelan diet yang mengandung proporsi ECD yang berbeda. Tikus dari substrain SAM-R1, yang memiliki proses penuaan dan rentang hidup normal, digunakan sebagai kelompok kontrol di semua percobaan. Dibandingkan dengan kelompok kontrol SAM-R1, masa hidup rata-rata tikus SAM-P8 secara signifikan dipersingkat (Gambar 1(a); < 0.001).="" meskipun="" suplementasi="" diet="" dengan="" dosis="" rendah="" (50="" mg/kg)="" ecd="" gagal="" menghasilkan="" peningkatan="" yang="" signifikan="" dalam="" rentang="" hidup="" tikus="" sam-p8,="" pada="" suplemen="" sedang="" (150="" mg/kg)="" dan="" tinggi="" (450="" mg/ml).="" dosis="" ada="" peningkatan="" tergantung="" dosis="" dalam="" rentang="" hidup="" (gambar="" 1="" (a)="" dan="" 1="" (b);=""><0,05-0,01) yang="" dikonfirmasi="" oleh="" analisis="" kelangsungan="" hidup="" kaplan-meier,="" yang="" mencakup="" penggunaan="" kedua="" log-rank="" (="" mantel-cox)="" dan="" tes="" gehan-breslow-wilcoxon.="" 3.3.="" pembalikan="" immunosenescence="" pada="" tikus="" sam-p8="" dengan="" ekstrak="" cistanche="" deserticola="" (ecd).="" penurunan="" limfosit="" t="" naif="" perifer="" dan="" peningkatan="" bersamaan="" dengan="" limfosit="" t="" memori="" perifer="" adalah="" fitur="" yang="" menonjol="" dari="" imunosenesensi="" yang="" secara="" luas="" dianggap="" sebagai="" alasan="" utama="" yang="" mendasari="" kelainan="" imunologi="" terkait="" usia.="" imunosenescence="" pada="" sam-p8="" relatif="" terhadap="" hewan="" sam-r1="" jelas="" terlihat="" ketika="" analisis="" facs="" digunakan="" untuk="" menghitung="" (cd3="" plus="" cd44low="" cd45rbhigh)="" limfosit="" sebagai="" indikator="" sel="" t="" naif="" dan="" limfosit="" (cd3="" plus="" cd44high="" cd45brlow)="" sebagai="" indikator="" memori="" t="" sel.="" jadi,="" baik="" dalam="" darah="" tepi="" (gambar="" 2)="" dan="" sel="" limpa="" (gambar="" 3)="" populasi="" mengurangi="" tingkat="" sel="" t="" naif="" dan="" peningkatan="" tingkat="" sel="" t="" memori="" terlihat="" pada="" tikus="" sam-p8.="" suplementasi="" diet="" tikus="" sam-p8="" dengan="" ecd="" ditemukan="" dapat="" membalikkan="" indikator-indikator="" imunosenesensi="" ini="" dengan="" cara="" yang="" bergantung="" pada="" dosis="" pada="" populasi="" darah="" tepi="" (gambar="" 2)="" dan="" sel="" limpa="" (gambar="" 3).="" sebagai="" indikator="" tambahan="" dari="" pembalikan="" immunosenescence="" dengan="" suplementasi="" ecd="" diet,="" tingkat="" sel="" pembunuh="" alami="" [18],="" penanda="" seluler="" utama="" dari="" sistem="" kekebalan="" bawaan,="" dianalisis.="" hal="" ini="" menunjukkan="" bahwa="" suplementasi="" diet="" ecd="" menghasilkan="" peningkatan="" sel="" nk="" (cd3="" plus="" cd49="" plus="" )="" yang="" bergantung="" dosis="" pada="" populasi="" limfosit="" darah="" tepi="" (gambar="" 4)="" dan="" sel="" limpa="" (gambar="" 5).="" 3.4.="" ekstrak="" cistanche="" deserticola="" memperkuat="" intensitas="" fluoresensi="" relatif="" sel="" positif="" sca-1="" pada="" tikus="" sam-p8.="" antigen="" sel="" punca-1="" (sca-1)="" adalah="" salah="" satu="" biomarker="" sel="" punca="" hematopoietik="" (hsc)="" yang="" paling="" menonjol="" dalam="" populasi="" sel="" sumsum="" tulang.="" sel="" positif="" sca-1="" juga="" mewakili="" progenitor="" limfosit="" yang="" baru="" saja="" diekspor="" dari="" sumsum="" tulang="" ke="" dalam="" darah="" perifer="" di="" mana="" mereka="">

4. Diskusi

Pertahanan imun terhadap mikroorganisme baru invasif atau sel tumor endogen tergantung pada keragaman repertoar sel T, yang pada gilirannya bergantung pada generasi dan pemeliharaan sel T naif [19]. Selama proses penuaan, keragaman repertoar sel T telah terbukti menyusut secara dramatis karena penipisan progresif sel T naif di kumpulan cadangan perifer. Kekurangan sel T naif responsif inilah yang dianggap bertanggung jawab atas kerentanan orang tua terhadap infeksi, kanker, dan hasil yang buruk setelah vaksinasi [20]. Berbagai intervensi, termasuk pembatasan kalori [7], olahraga [21], dan suplementasi vitamin E [8], semuanya telah digunakan untuk berhasil mengisi sel T naif dan dengan demikian memperpanjang rentang hidup dan mengurangi timbulnya infeksi dan kanker di antara orang tua. Dalam penelitian ini, kami telah menunjukkan bahwa ECD mampu meningkatkan tingkat sel T naif di kumpulan perifer dan ada perpanjangan masa hidup secara bersamaan dan pengurangan frekuensi pembentukan tumor pada tikus yang dipercepat penuaan (kelompok terapi ECD versus SAM-P8, 0 versus 1/6). Oleh karena itu, tampaknya masuk akal untuk menyimpulkan bahwa kapasitas ECD untuk membalikkan penipisan sel T naif perifer yang bergantung pada usia dapat berkontribusi pada efeknya yang diketahui dalam mengurangi penyakit terkait usia yang berasal dari pengamatan klinis jangka panjang.

5. Bahan dan Metode

5.1. Bahan. Dalam respon imun normal, setelah penahanan dan eliminasi antigen asing, sebagian besar sel T yang diperluas secara klon mengalami apoptosis dengan hanya sebagian kecil yang dipertahankan sebagai sel T memori. Akibatnya, seiring bertambahnya usia organisme yang berkompeten imun, sel T memori perifer terakumulasi sebagai akibat dari paparan seumur hidup terhadap antigen asing yang mengubah sel T naif menjadi sel memori [22, 23]. Sejumlah penelitian telah menyarankan bahwa cacat apoptosis limfosit pada hewan yang lebih tua dan manusia juga berkontribusi pada pembesaran kompartemen sel T memori [24, 25]. Selain itu, penelitian terbaru menunjukkan bahwa kelebihan sel T memori perifer dapat menghambat proliferasi homeostatik sel T naif [26]. Studi baru-baru ini juga menunjukkan bahwa sel T memori dapat mengeluarkan sitokin proinflamasi tingkat tinggi yang dapat berkontribusi pada peradangan persisten di berbagai jaringan orang tua. Akibatnya mengurangi tingkat sel T memori harus bermanfaat baik untuk proliferasi homeostatik sel T naif dan juga dalam mengurangi keadaan inflamasi berlebih yang terlihat pada organisme yang lebih tua. Dalam penelitian ini, suplementasi makanan dengan ECD terbukti mampu menurunkan tingkat sel T memori perifer dan meningkatkan kadar sel T naif. Selain itu, suplementasi ECD meningkatkan apoptosis pada populasi limfosit perifer, berpotensi memberikan ruang bagi limfosit naif baru. Nekrosis pada limfosit perifer, yang terutama disebabkan oleh stres oksidatif pada hewan pikun, juga dihambat. Bukti yang luas ada untuk menunjukkan bahwa penuaan pada suatu organisme tidak hanya ditandai dengan defisiensi imun tetapi juga oleh peningkatan peradangan kronis [27]. Status proinflamasi paling jelas dimanifestasikan dalam peningkatan kadar sitokin proinflamasi, termasuk IL-6, TNF-𝛼, dan IL-1𝛽, dalam sirkulasi ditambah dengan peningkatan frekuensi penyakit inflamasi kronis yang terkait dengan penuaan seperti Penyakit alzheimer, penyakit parkinson, dan aterosklerosis. Salah satu sitokinesis inflamasi yang paling menonjol IL-6 dan konsentrasi plasmanya meningkat dengan penuaan dan penyakit terkait usia [18, 28, 29] dan studi epidemiologi menunjukkan IL-6 adalah biomarker umur panjang yang baik karena terkait erat dengan kematian pada kohort pasien usia lanjut [30, 31]. Konsisten dengan ini, sejumlah intervensi terapeutik yang menurunkan konsentrasi IL-6 mampu meringankan penyakit yang berkaitan dengan usia [18]. Dengan latar belakang ini, penting bahwa dalam penelitian ini suplementasi makanan dengan ECD mampu mengurangi konsentrasi IL-6 perifer, dengan implikasi bahwa efek ini dapat berkontribusi pada mekanisme yang mendasari pengurangan frekuensi penyakit terkait usia yang diperoleh melalui penggunaan ECD jangka panjang dalam praktik klinis. Bersamaan dengan perubahan respon imun adaptif yang terjadi seiring bertambahnya usia, ada juga perubahan besar dalam imunitas bawaan seiring bertambahnya usia organisme. Di antaranya, perubahan sel pembunuh alami [18], baris pertama komponen seluler yang menyediakan lisis sitotoksik langsung sel tumor dan sel yang terinfeksi virus, telah meluas sejak orang tua menunjukkan peningkatan kerentanan terhadap perkembangan tumor dan infeksi virus [18]. 32]. Studi ini menunjukkan bahwa sel CD3 plus Ly49 plus NK hadir pada tingkat yang jauh lebih rendah pada tikus SAM P8 pikun dibandingkan dengan hewan kontrol SAM-R1, yang mungkin merupakan faktor mendasar lain yang menyebabkan peningkatan kerentanan tikus tua terhadap kanker dan infeksi virus. Peningkatan tingkat sel NK terlihat dalam penelitian ini setelah suplementasi makanan dengan ECD karena itu dapat bermanfaat bagi organisme lanjut usia dalam hal peningkatan resistensi terhadap perkembangan tumor dan infeksi virus. Namun, penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengklarifikasi peran efek ECD pada sel NK pada organisme tua. Sebagai kesimpulan, penelitian ini telah menunjukkan bahwa pengobatan substrain rawan tikus yang dipercepat penuaan, SAM P8, dengan ECD dapat menginduksi pembalikan signifikan dari perubahan imunosenesensi terkait usia. Kekurangan pada populasi sel perifer dan sel limpa dari sel T naif dan sel NK berkurang, sementara tingkat sel T memori yang berlebihan juga berkurang. Selain itu, suplementasi makanan dengan ECD mampu menekan kedua nekrosis pada limfosit perifer dan tingkat sitokin proinflamasi, IL-6. Akhirnya, selain membawa perubahan dalam sistem kekebalan pikun, suplementasi makanan ECD secara signifikan memperpanjang masa hidup tikus SAM-P8 pikun.

Referensi
[1] Y. Jiang dan P.-F. Tu, "Analisis konstituen kimia dalam spesies Cistanche," Jurnal Kromatografi A, vol. 1216, tidak. 11, hlm. 1970–1979, 2009.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, dan S. Kadota, "Aktivitas hepatoprotektif fenilethanoid dari Cistanche deserticola," Planta Medica, vol. 64, tidak. 2, hlm. 120–125, 1998.
[3] "Imunologi dan penuaan di Eropa. Prosiding Konferensi ke-2 tentang Biologi Dasar dan Dampak Klinis Immunosenescence. Maret 22-26, 2001, Cordoba, Spanyol," Eksperimental Gerontologi, vol. 37, tidak. 2-3, hlm. 183–473, 2002.
[4] G.-D. Xuan dan C.-Q. Liu, "Penelitian tentang efek glikosida fenilethanoid (PEG) dari Cistanche deserticola pada anti-penuaan pada tikus tua yang diinduksi oleh D-galaktosa," Journal of Chinese Medicinal Materials, vol. 31, tidak. 9, hlm. 1385–1388, 2008.
[5] D. Aw, AB Silva, dan DB Palmer, "Imunosenescence: muncul tantangan untuk populasi yang menua," Imunologi, vol. 120, tidak. 4, hlm. 435–446, 2007.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein, dan G. Pawelec, "Kultur jangka panjang limfosit T manusia monoklonal: model untuk immunosenescence?" Mekanisme Penuaan dan Perkembangan, vol. 83, tidak. 3, hlm. 171–183, 1995.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy, dan M. Segre, "Modulation of canine immunosenescence by life-long caloric restriction," Veterinary Immunology and Immunopathology, vol. 111, hlm. 287–299, 2006.
[8] SN Meydani, SN Han, dan D. Wu, "Vitamin E dan respon imun di usia: mekanisme molekuler dan implikasi klinis," Immunological Review, vol. 205, hlm. 269–284, 2005.
[9] SG Deeks, "infeksi HIV, peradangan, immunosenescence, dan penuaan," Tinjauan Tahunan Kedokteran, vol. 62, hlm. 141– 155, 2011.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli et al., "Kompleksitas strategi anti immunosenescence pada manusia," Organ Buatan, vol. 30, tidak. 10, hlm. 730–742, 2006.