Hidrolisis Enzimatik Dikembangkan Untuk Enzim Komersial Food-grade Masing-masing

Mohon hubungi{0}}untuk informasi lebih lanjut

2.2. Efek Ultrafiltrasi pada Sifat Hidrolisat Kolagen

Proses ultrafiltrasi mungkin berguna, metode menguntungkan industri untuk memproduksi fraksi peptida kecil dengan ukuran molekul yang diinginkan dan bioaktivitas tinggi, tergantung pada komposisi hidrolisat awal dan aktivitas yang dipelajari [19]. Kelarutan, kandungan gugus amino bebas, dan hasil CH setelah liofilisasi ditunjukkan (Tabel 1). Kelarutan dan kandungan gugus amino bebas dari kontrol masing-masing adalah 11,95 persen dan 0,79 persen. Setelah hidrolisis enzimatik dan ultrafiltrasi dengan cut-off berat molekul 3 kDa, kelarutan tertinggi (21,17 persen ), dan kandungan gugus amino bebas (14,17 persen) diamati pada CH-Alcalase.<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

Berat molekul rata-rata hidrolisat protein merupakan faktor penting yang menentukan sifat biologisnya [19]. Umumnya, fraksi rata-rata dengan MW<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa mewakili kolagen [20,21]. Distribusi berat molekul relatif dari kontrol (sampel pretreatment), CH-Alcalase, dan CH-Alcalase<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

Komposisi asam amino dalam CH ditunjukkan (Tabel 2). CHS oleh protease yang berbeda memiliki komposisi asam amino dan sifat antioksidan yang berbeda [23]. Komposisi asam amino kolagen kaya akan glisin (Gly), prolin (Pro), dan asam glutamat (Glu). Kandungan asam amino CHs(CH-Alcalase dan CH-Alcalase<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">batang cistancheAsam amino ini telah dilaporkan meningkatkan aktivitas antioksidan karena peningkatan kelarutannya dalam lipid atau melalui reaksi radikal bebas [1,24].

2.3. Aktivitas Antioksidan dan Anti Penuaan Kolagen Hidrolisat

Aktivitas antioksidan CHs diukur dengan menggunakan 2,2'-dan-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat)(ABTS)pengujian aktivitas penangkapan radikal dan uji daya pereduksi. Aktivitas penangkap radikal ABTS dari kontrol (suspensi kolagen), CH-Alcalase, dan CH-Alcalase<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">ekstrak cistanche salsaSecara umum, aktivitas antioksidan peptida dapat dipengaruhi oleh urutan asam amino, jumlah asam amino bebas yang ada, derajat hidrolisis, dan berat molekul peptida [26,27]. Secara khusus, hidrolisat dengan berat molekul rendah memiliki sifat antioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan hidrolisat dengan berat molekul tinggi [2,26].

Gambar 5. Aktivitas antioksidan kolagen hidrolisat (CH) dalam 2,2'-dan-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat)(ABTS)pemulung radikal(A)dan daya pereduksi (B) tes. Data yang dilambangkan dengan huruf yang berbeda (ac) menunjukkan perbedaan yang nyata secara statistik tergantung pada perlakuan yang berbeda (p<0.05).>manfaat dan efek samping cistanche tubulosaData yang dilambangkan dengan huruf (AD) yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik tergantung pada konsentrasi (p < 0.05).

Cistanche dapat anti-penuaan

Kekuatan reduksi dari kontrol, CH-Alcalase, dan CH-Alcalase<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">ekstrak cistanche tubulosaPengamatan serupa menunjukkan bahwa hidrolisat kolagen kasar mungkin lebih efektif dalam mengurangi daya daripada peptida kolagen ultrafiltrasi [30].

Penghambatan aktivitas tirosinase, kolagenase, dan elastase digunakan untuk memverifikasi efek anti-penuaan in vitro mereka [20]. Hasil penghambatan aktivitas tirosinase, kolagenase, dan elastase dari kontrol, CH-Alcalase, dan CH-Alcalase<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastase (tidak ada aktivitas). CH-Alcalase<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastase (tidak ada aktivitas). Tren serupa dilaporkan dalam penelitian lain menunjukkan bahwa kolagen hidrolisat menunjukkan potensi untuk bertindak sebagai agen anti-penuaan dan inhibitor kolagenase [20].

3. Bahan dan Metode

3.1. Perawatan Awal Kulit Babi

Kulit babi dibeli dari pemasok lokal (Seoul, Korea), dan semua lemak dan jaringan ikat kulit babi yang terlihat dihilangkan dengan menggunakan pisau silet. Kulit babi yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari satu ekor babi untuk meminimalkan variasi biologis. Kulit babi yang telah dipotong dicuci dengan air pada suhu 90 derajat selama 1 menit sebanyak empat kali untuk menghilangkan lemak dan bahan sisa. Kulit kemudian dipotong menjadi bagian persegi 1 cm dan dihaluskan dalam air suling selama 3 menit menggunakan blender pisau empat sayap (CNHR-26, Bosch, Hong Kong, Cina). Kulit babi yang telah dihaluskan dihomogenisasi dengan kecepatan tinggi (25,000rpm) selama 5 menit menggunakan Ultra Turrax(T25, IKA Labotechnik, Staufen, Jerman). Sekitar 100g campuran kulit babi (50 persen isi padat akhir) dikemas vakum dan dibekukan pada derajat -20 dan disimpan untuk digunakan dalam waktu 1 bulan.

3.2. Protease dan Reagen Komersial

Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, dan Protamex dibeli dari Novozymes (Bagsvaerd, Denmark). Bromelain dan Papain dibeli dari Daesong Sangsa (Seoul, Korea). Semua bahan kimia untuk uji antioksidan dan anti-penuaan dibeli dari Sigma-Aldrich Chemical Company (St.Louis, MS, USA). Semua reagen dan pelarut lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis.

3.3. Hidrolisis Enzim

Hidrolisis enzimatik dikembangkan untuk masing-masing enzim komersial food grade yang digunakan (berdasarkan rekomendasi pabrikan; Tabel 4). Campuran kulit babi yang disiapkan diencerkan dengan air suling sampai kandungan padat akhir 5 persen. Konsentrasi ini dipilih untuk memastikan perilaku aliran karena viskositasnya yang rendah. Campuran kulit babi 5 persen disebut suspensi kolagen (atau kontrol). Suspensi kolagen dihidrolisis dalam reaktor menggunakan enam enzim komersial food grade dengan rasio enzim: substrat 1:100. Alikuot sampel (5 mL) diambil pada hidrolisis 1, 3,6, 12, dan 24 jam dan segera dipanaskan pada 100 derajat selama 10 menit untuk menonaktifkan enzim, diikuti dengan pendinginan hingga 0 derajat menggunakan air es. Selama waktu pengambilan sampel, pH dikontrol menggunakan 1 M NaOH yang sesuai. Setelah pendinginan, sampel disentrifugasi pada 4000 × g selama 15 menit, dan supernatan (kolagen hidrolisat; CH) dikumpulkan. CH dipekatkan lebih lanjut dengan ultrafiltrasi, menggunakan sistem AmiconStirred Cells (Katalog No. UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) dengan batas berat molekul 3 kDa (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) pada 60 psi gas nitrogen, pada 20 derajat.ulasan cistanche tubulosaCH yang disiapkan dibekukan-kering dan disimpan dalam wadah kedap udara pada 20 derajat sampai analisis.

3.4. Penentuan pH, Pemulihan Protein, Kandungan Gugus Amino Bebas Kelarutan, dan Hasil Produksi pH sampel (kontrol dan CH) ditentukan dengan menggunakan pH meter (Model S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, USA). Pemulihan atau kelarutan protein ditentukan dengan memperkirakan kandungan protein menggunakan uji protein asam bicinchoninic (BCA), sesuai dengan instruksi pabrik (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, USA) dengan serum albumin sebagai standar. Kandungan gugus amino bebas ditentukan melalui uji 2,4,6-asam trinitrobenzena sulfonat (TNBSA) sesuai dengan instruksi pabrik (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) menggunakan L-leusin sebagai standar. Baik berat basah dan kering diukur untuk menghitung lapangan produksi.

3.5. Distribusi Berat Molekul

3.5.1. Elektroforesis Gel Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide (SDS-PAGE)

Pola SDS-PAGE sampel (kontrol dan CH) diukur menurut metode yang dilaporkan sebelumnya [10]. Sampel diencerkan dengan urea 8 M (konsentrasi protein akhir, 4 mg/mL). Setiap sampel dicampur dengan satu bagian buffer sampel KTG 020 (10 persen gliserol, 2 persen SDS, 0,003 persen bromophenol blue, 5 persen -mercaptoethanol, dan 63 mM Tris-HCl, pH6.8) dari KOMA Biotech Inc ., Seoul, Korea）, dan direbus selama 2 menit. Campuran sampel 20 L） dimasukkan ke dalam gel akrilamida EzWayTM PAG 6 persen (KOMA Biotech Inc., Seoul, Korea). Setelah elektroforesis, gel difiksasi, diwarnai, dan dihilangkan pewarnaannya. Berat molekul ditentukan dengan menggunakan standar berat molekul rentang lebar antara 10 dan 210 kDa.

3.5.2. Kromatografi Permeasi Gel (GPC)

Distribusi berat molekul sampel ditentukan menurut metode yang dilaporkan sebelumnya [3]. Kromatografi permeasi gel (GPC) dilakukan menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) YL9100 (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Korea) yang dilengkapi dengan tiga kolom Ultrahydrogel TM 120 ( 7,8×3000 mm) dari Perairan (Milford, MA, AS). Fasa gerak adalah air suling/deionisasi pada laju aliran 1,0 mL/menit, dan distribusi berat molekul peptida kolagen dipantau menggunakan detektor indeks bias YL 9100 pada 40 derajat. Kit standar berat molekul (106-67,500 Da, Layanan Standar Polimer, Mainz, Jerman) berfungsi sebagai standar.

3.6.Amin0 Komposisi Asam

Komposisi asam amino sampel dianalisis melalui derivatisasi dengan {{0}}fluorenyl ethoxy carbonyl (FMOC)-chloride dan o-phthalic dialdehyde (OPA) pada sistem Ultimate 3000 HPLC ( Dionex, Idstein, Jerman)dilengkapi dengan dua detektor (detektor fluoresensi dan detektor UV） dan VDSpher 100 C18-E 4,6 mm ×150 mm, ukuran partikel 3,5 m, VDS Optilab, Berlin, Jerman). Volume injeksi adalah 1,0 L, dan fase gerak terdiri dari dua eluen: 40 mM natrium fosfat dibasic (pH 7) dan 45 persen (o/v)asetonitril/45 persen (v/v) larutan metanol. Dengan menghubungkan detektor UV dan detektor fluoresensi, sinar ultraviolet terdeteksi pada 338 nm, turunan OPA terdeteksi pada panjang gelombang emisi 450 nm dan panjang gelombang eksitasi 340 nm, turunan FMOC terdeteksi pada panjang gelombang emisi 305 nm dan 266 nm. nm dari panjang gelombang eksitasi. Campuran asam amino (1,0 nmol mL-I untuk setiap asam amino) digunakan untuk kalibrasi.

dimana asam atotalamino adalah kandungan setelah hidrolisis menggunakan 6 M HCl (pada 130 derajat selama 24 jam), dan asam amino bebas adalah kandungan setelah dilarutkan dalam air suling.

3.7. Evaluasi Aktivitas Antioksidan

3.7.1.2,2'-Azino-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS)Aktivitas Penangkal Radikal

Aktivitas pemulung radikal ABTS dari CH diukur menurut metode yang dilaporkan sebelumnya [20]. Kation radikal ABTS dihasilkan dengan mencampurkan larutan stok ABTS (7,0 mM) dengan kalium persulfat (2,45 mM) dan menginkubasi campuran yang dihasilkan dalam gelap pada suhu kamar semalaman. Solusi radikal ABTS diencerkan dalam 5.0 mM fosfat-buffer saline (pH7.4) ke tingkat absorbansi 0.70±0,02 pada 734 nm. Satu mL larutan radikal ABTS encer dicampur dengan 1 mL masing-masing sampel. Sepuluh menit kemudian, sampel (A sampel, dengan sampel) dan kontrol (A kontrol tanpa sampel) absorbansi diukur pada 734 nm. Aktivitas penangkal radikal ABTS ( persen ) Dihitung sebagai:

3.7.2.Mengurangi Daya

Daya reduksi CH diukur menurut metode yang dilaporkan sebelumnya [20]. Satu mL dari setiap sampel dicampur dengan 1 mL 0.2 M dapar fosfat (pH6.6) dan 1 mL dari 1 persen kalium ferisianida. Campuran diinkubasi pada 50 derajat selama 20 menit, dan kemudian 1 mL asam trikloroasetat 10 persen ditambahkan. Sebuah alikuot 2 mL dari campuran inkubasi ini dicampur dengan 2 ml air suling dan 0,4 mL 0,1 persen besi klorida. Setelah 10 menit, absorbansi larutan yang dihasilkan diukur pada 700 nm pada spektrofotometer (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Korea) Peningkatan absorbansi (pada 700 nm) dari campuran reaksi dianggap menunjukkan peningkatan daya reduksi.

3.8. Evaluasi Efek Anti-Penuaan

3.8.1. Penghambatan Aktivitas Tirosinase

Penghambatan tirosinase ditentukan dengan metode yang dijelaskan sebelumnya [20]. Larutan campuran awal yang mengandung 70 L buffer fosfat 0,1 M pH6.8）,30uLof jamur tirosinase（167U/mL; Sigma-Aldrich, USA), dan 20 L sampel diinkubasi selama 5 menit pada 30 derajat. Sekitar 100μL 3,4-dihidroksi fenil-L-alanin L-DOPA） kemudian ditambahkan untuk memulai reaksi enzimatik. Absorbansi pada 492 nm diukur selama 20 menit untuk memantau pembentukan L-DOPA. Asam askorbat (1 mg/mL) berfungsi sebagai kontrol positif, yang digunakan sebagai pembanding. Rasio penghambatan dihitung sebagai berikut:

dimana A adalah campuran dengan tirosinase tanpa sampel; B adalah campuran tanpa sampel dan tirosinase; C adalah campuran dengan sampel dan tirosinase, dan D adalah campuran dengan sampel tetapi tanpa tirosinase.

3.8.2.Penghambatan Aktivitas Kolagenase

Penghambatan kolagenase ditentukan dengan metode yang dijelaskan sebelumnya [20]. Secara singkat, 50 mM tricine buffer (pH7.5) yang mengandung 10 mM kalsium klorida dan 400 mM natrium klorida disiapkan. Kemudian, 50mL larutan 1,0mM N-[3-(2-furil) akriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala dan 0,2 mg/ml kolagenase (dari Clostridium histolyticum, Tipe IA, 0.{ {19}} FALGPA U/mg padat; Sigma-Aldrich, USA) ditambahkan dengan ada atau tidaknya sampel. Reaksi dihentikan dengan menambahkan asam sitrat (6 persen ). Campuran reaksi dipisahkan dengan menambahkan etil asetat. Absorbansi supernatan diukur pada 345 nm. Asam askorbat (1 mg/mL) berfungsi sebagai kontrol positif dan digunakan sebagai pembanding. Persentase penghambatan dihitung sebagai:

dimana A adalah campuran dengan kolagenase tanpa sampel; B adalah campuran tanpa sampel dan kolagenase; C adalah campuran dengan sampel dan kolagenase, dan D adalah campuran dengan sampel tetapi tanpa kolagenase.

3.8.3.Penghambatan Aktivitas Elastase

Penghambatan elastase ditentukan dengan metode yang dijelaskan sebelumnya [20]. N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) berfungsi sebagai substrat, dan pelepasan p-nitroaniline dipantau selama 2{{20}} menit pada 25 derajat. Sebagian (1 ug) elastase pankreas babi tipe IV (PPE) dilarutkan dalam 1 mL 0.2 M buffer Tris-HCl (pH 8.0). campuran reaksi mengandung 0,2 M buffer Tris-HCl (pH8.0), 1 ppm PPE, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA, sampel, dan substrat yang disebutkan di atas. Absorbansi pada 214 nm diukur. Asam askorbat (1 mg/mL) berfungsi sebagai kontrol positif yang digunakan untuk perbandingan. Rasio penghambatan dihitung sebagai berikut:

dimana A adalah campuran dengan elastase dan tanpa sampel; B adalah campuran tanpa sampel dan elastase; C adalah campuran dengan sampel dan elastase, dan D adalah campuran dengan sampel tetapi tanpa elastase.

3.9.Analisis Statistik

Data disajikan sebagai mean ± standar deviasi (SD). Signifikansi perbedaan antar kelompok dinilai dengan menggunakan perbandingan ganda dan analisis varians (ANOVA), diikuti dengan uji beda nyata (HSD) Tukey. Perbedaan dengan nilai p kurang dari 0.05 dianggap signifikan secara statistik.

4. Kesimpulan

Pada penelitian ini, kolagen hidrolisat, bahan pangan fungsional, berhasil diproduksi melalui hidrolisis enzimatik, dilanjutkan dengan ultrafiltrasi dan pemurnian. Berbagai protease komersial diuji untuk potensi kegunaannya dalam pembuatan hidrolisat kolagen yang tepat. CHS terhidrolisis oleh Alcalase adalah CH terhidrolisis yang paling efektif, dan ultrafiltrasi diikuti dengan pemurnian efektif dalam menghasilkan peptida aktif dengan berat molekul rendah. Hasil menunjukkan bahwa CHs menunjukkan aktivitas penghambatan antioksidan dan kolagenase yang sangat baik. Oleh karena itu, CH yang diperoleh dari penelitian ini dapat digunakan dalam industri makanan, kosmetik, atau farmasi sebagai aditif alami, yang memiliki sifat anti-oksidatif dan anti-penuaan. Studi lebih lanjut yang melibatkan evaluasi in vivo dari aktivitas penuaan peptida aktif pada kulit manusia mungkin terbukti bermanfaat.

Artikel ini disarikan dari Molecules 2019, 24, 1104; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules