Pembedahan Respons Antibodi Subjek yang Divaksinasi Gam-COVID-Vac Menyarankan Keterlibatan Epitop Di Luar RBD dalam Netralisasi SARS-CoV-2
Oct 16, 2023
Abstrak: Jutaan orang telah menerima vaksinasi Gam-COVID-Vac, namun spesifisitas antibodi yang diinduksi belum sepenuhnya diteliti. Plasma dari 12 subjek yang belum sembuh dan 10 penyakit virus corona 2019 (COVID-19) diperoleh sebelum dan sesudah dua kali imunisasi dengan Gam-COVID-Vac. Reaktivitas antibodi dalam sampel plasma (n=44) dipelajari pada panel protein rekombinan mikro-array terlipat dan terbuka sindrom pernapasan akut parah virus corona 2 (SARS-CoV-2) dan 46 peptida yang mencakup lonjakan tersebut protein (S) dan dengan uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) subkelas imunoglobulin G (IgG). Kemampuan antibodi yang diinduksi Gam-COVID-Vac untuk menghambat pengikatan domain pengikat reseptor (RBD) ke enzim pengonversi angiotensin reseptor 2 (ACE2) diselidiki dalam uji interaksi molekuler (MIA). Kapasitas antibodi penetral virus dipelajari dengan uji netralisasi virus tipe semu (pVNT) untuk Wuhan-Hu-1 dan Omicron. Kami menemukan bahwa vaksinasi Gam-COVID-Vac menginduksi peningkatan IgG1 yang signifikan tetapi tidak pada subkelas IgG lainnya terhadap lipatan S, spike protein subunit 1 (S1), spike protein subunit 2 (S2), dan RBD dengan cara yang sebanding pada pasien naif dan konvalesen. mata pelajaran. Netralisasi virus sangat berkorelasi dengan antibodi spesifik yang diinduksi vaksinasi untuk RBD terlipat dan peptida baru (yaitu, peptida 12). Peptida 12 terletak dekat dengan RBD di bagian N-terminal S1 dan berpotensi terlibat dalam transisi konformasi protein lonjakan sebelum dan sesudah fusi. Singkatnya, vaksinasi Gam-COVID-Vac menginduksi antibodi IgG1 spesifik S pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan dengan cara yang sebanding. Selain antibodi spesifik untuk RBD, antibodi yang diinduksi terhadap peptida yang dekat dengan ujung N RBD juga dikaitkan dengan netralisasi virus.
Kata Kunci: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; epitop; antibodi; netralisasi virus; uji interaksi molekuler; Omikron
manfaat suplemen cistanche-meningkatkan kekebalan tubuh
Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Meningkatkan Imunitas
【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1. Perkenalan
Setelah kasus pertama infeksi Severe Acute Respiratory Syndrome Virus Corona 2 (SARS-CoV-2) pada akhir tahun 2019 di Wuhan, Tiongkok, penyakit virus corona baru (COVID-19) dengan cepat menyebar ke seluruh penjuru dunia dan berkembang menjadi pandemi global [1–4]. Perkembangan vaksin COVID-19 yang cepat dan diperkenalkannya program vaksinasi global serta munculnya varian SARS-CoV-2 yang kurang patogen dianggap sebagai faktor signifikan dalam pengurangan kematian-19-terkait COVID dan tingkat keparahan pandemi [1,5]. Vaksin pertama yang tersedia adalah vaksin genetik berdasarkan transfer gen yang mengkode protein permukaan S SARS-CoV yang dimediasi adenovirus [6–8]. Protein SARS-CoV-2 S terdiri dari subunit S1 yang berisi domain pengikat reseptor (RBD) yang menempel pada reseptor ACE2 pada sel manusia dan subunit S2 yang memastikan perlekatan virus pada membran sel inang melalui pembelahan proteolitik pada membran sel inang. fusion peptida (FP) selama infeksi virus [9]. Gen S yang digunakan untuk transfer gen pada vaksin berbasis adenovirus tertentu (misalnya, Vaksin COVID-19 Janssen) dapat dimodifikasi untuk menstabilkan protein dan memengaruhi pembelahannya, namun hal ini tidak berlaku pada vaksin lainnya [10]. Sel manusia yang terinfeksi adenovirus yang mengandung gen penyandi S menghasilkan antigen S dalam jumlah bervariasi yang dilepaskan dan dipresentasikan oleh kompleks histokompatibilitas mayor (MHC) kelas II ke sel T sehingga menghasilkan bantuan sel T CD4+ untuk produksi antibodi spesifik S. Protein S yang diekspresikan oleh sel yang ditransfeksi juga dipresentasikan oleh MHC kelas I pada permukaan sel yang terinfeksi dan memicu aktivasi sel T CD8+ sitotoksik spesifik S, yang dapat mengenali sel penghasil antigen S dan menghancurkannya. Prinsip vaksinasi, yaitu memasukkan informasi genetik pengkode S ke dalam sel inang dan selanjutnya memproduksi antigen S oleh sel yang terinfeksi, serupa dengan vaksin messenger ribonucleic acid (mRNA), meskipun teknologi transfer gennya berbeda dengan adenovirus. vaksin berbasis. Oleh karena itu, "vaksin genetik" sampai batas tertentu meniru infeksi SARS-CoV{36}} alami. Identifikasi epitop yang dikenali oleh antibodi dari subjek yang divaksinasi yang terlibat dalam netralisasi virus sangat penting tidak hanya untuk memahami mekanisme kerja vaksin yang ada, tetapi juga untuk pengembangan strategi vaksinasi aktif dan imunisasi pasif yang lebih baik terhadap COVID-19 [11 ,12]. Sebagian besar vaksin yang ada saat ini difokuskan untuk memperoleh respons antibodi spesifik S dengan perhatian khusus pada respons antibodi spesifik RBD karena telah terlihat bahwa antibodi spesifik RBD berkorelasi dengan aktivitas penetralan yang tinggi terhadap SARS-CoV-2 [ 13–15]. Namun, jumlah mutasi yang didapat oleh setiap varian baru yang menjadi perhatian (VOC), menunjukkan pentingnya mengidentifikasi epitop yang dilestarikan di antara VOC yang ditargetkan dengan menetralisir antibodi yang terletak tidak hanya di RBD tetapi juga di luar RBD [16]. Faktanya, terdapat penelitian yang menunjukkan adanya epitop penetral di luar RBD, yang dikenali oleh antibodi setelah imunisasi [17-20]. Pada tahun 2020, vaksin berbasis vektor Gam-COVID-Vac, juga disebut Sputnik-V, tersedia untuk digunakan dalam praktik klinis dan saat ini telah disetujui untuk digunakan di lebih dari 70 negara (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine / (diakses pada 17 Januari 2023)). Menurut sumber daya Our World In Data (OWID), 79 juta orang di Rusia telah menerima setidaknya satu suntikan vaksin, dan 72 juta orang telah menerima vaksinasi lengkap (https://ourworldindata.org/covid-vaccinations?country= RUS (diakses pada 22 Maret 2022)). Gam-COVID-Vac terdiri dari dua jenis vaksin, yang didasarkan pada dua vektor adenovirus manusia yang berbeda (hAd26 dan hAd5) yang membawa bentuk asli protein S dari strain Wuhan-Hu-1 SARS-CoV{{ 73}}. Sputnik-V terdiri dari dua suntikan, satu dengan hAd26 dan yang kedua dengan hAd5 dan Sputnik light, hanya dengan hAd26. Dua vektor adenovirus yang berbeda digunakan pada imunisasi pertama dan kedua untuk mengurangi kemungkinan subjek yang divaksinasi menghasilkan kekebalan terhadap protein S dan kekebalan terhadap adenovirus. Faktanya, antibodi spesifik adenovirus akan membatasi kemanjuran vaksinasi booster dengan menetralisir pembawa vektor adenovirus. Oleh karena itu, pada hari ke-21 setelah pemberian dosis pertama vaksin dengan rAd26, dilakukan penghantaran antigen berulang dengan vektor rAd5 [8,21]. Hanya sedikit penelitian yang menyelidiki respons antibodi spesifik S dan RBD serta aktivitas netralisasi virus dalam serum dari penerima vaksin Gam-COVID-Vac [10,22,23]. Peningkatan antibodi IgG spesifik RBD tiga bulan setelah pemberian Gam-COVID-Vac telah dilaporkan dan telah terbukti bahwa antibodi bereaksi silang dengan varian Alpha, Beta, Delta, dan Omicron yang menjadi perhatian [24-26]. Gam-COVID-Vac juga telah dibandingkan dengan beberapa vaksin berlisensi lainnya untuk melawan SARS-CoV-2, yang menunjukkan netralisasi virus yang tinggi dan efektivitas yang tinggi terhadap kematian-19-terkait COVID pada Sputnik-V, meskipun sedikit lebih rendah kualitasnya terhadap beberapa vaksin mRNA mengenai netralisasi virus ditemukan [24]. Terakhir, telah terbukti bahwa imunisasi pasien yang diobati dengan terapi antiretroviral (ART) yang diobati dengan human immunodeficiency virus-positif (HIV+) dengan Gam-COVID-Vac menunjukkan kemanjuran epidemiologis terhadap SARS-CoV tipe liar asli dan varian Delta{{ 113}} [27]. Namun, sejauh ini belum ada analisis terperinci mengenai pengenalan epitop oleh antibodi pada subjek yang divaksinasi Gam-COVID-Vac dan data diperlukan untuk memahami isotipe imunoglobulin dan respons subkelas IgG pada subjek yang divaksinasi Gam-COVID. Di sini kami menyelidiki dua kelompok subjek yang telah divaksinasi dengan Gam-COVID-Vac, satu kelompok yang pernah menderita infeksi SARS-CoV-2 sebelumnya, dan kelompok subjek lain yang naif SARS-CoV-2. Kami melakukan analisis cermat terhadap spesifisitas epitop dari antibodi yang diinduksi menggunakan susunan mikro SARS-CoV-2-protein terlipat dan tidak terlipat serta peptida yang mencakup protein S lengkap, termasuk RBD. Selanjutnya respon subkelas IgG dianalisis. Penelitian kami mengungkapkan bahwa subjek yang divaksinasi Gam-COVID-Vac memasang antibodi spesifik RBD yang mampu memblokir interaksi RBD-ACE2. Menariknya, kami menemukan bahwa netralisasi virus juga dikaitkan dengan antibodi yang ditujukan terhadap peptida di luar RBD, yang mungkin terlibat dalam transisi konformasi protein lonjakan sebelum-pasca-fusi.
cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh
2. Hasil
2.1. Subjek yang Divaksinasi Gam-COVID-Vac Mencakup Subjek yang Naif dan Sembuh dari COVID
Subyek dalam masa pemulihan terinfeksi oleh strain Wuhan-Hu-1 berdasarkan data prevalensi dan urutan yang diperoleh pada saat infeksi di wilayah Moskow. Subjek yang naif tidak memiliki gejala COVID-19 dan tidak memiliki antibodi spesifik SARS-CoV-2-pada saat perekrutan. Subjek penelitian terdiri dari 15 perempuan dan 7 laki-laki dengan usia rata-rata 60 (yaitu 25-70 tahun) (Tabel 1).
Tabel 1. Karakteristik demografi, klinis, dan serologis subjek.
Sampel plasma diperoleh dari masing-masing subjek pada titik waktu 0 (yaitu, garis dasar) (Gambar 1A), kemudian setiap subjek divaksinasi dengan Sputnik-V dengan selang waktu sekitar 21 hari antara vaksinasi pertama dan kedua. injeksi (titik waktu 1 dan 2). Pada titik waktu 3, sampel plasma kedua dikumpulkan untuk menentukan respons antibodi yang diinduksi oleh vaksin (Gambar 1A). Subyek diamati selama 120 hari tambahan. Pada hari ke 110 setelah vaksinasi terakhir, satu subjek (yaitu subjek 22) menderita COVID-19 sedangkan subjek lainnya tidak mengalami gejala COVID apa pun-19 (Tabel 1).
Gambar 1. Desain penelitian dan respons antibodi spesifik SARS-CoV-2-sebelum dan sesudah vaksinasi dengan Sputnik-V. (A) Desain studi. Sampel plasma diperoleh dari subjek yang naif COVID-19-(n=12) dan dalam masa pemulihan (n=10) pada titik waktu 0 (baseline), kemudian subjek menerima dua Sputnik-V vaksinasi masing-masing pada titik waktu 1 dan 2 dan sampel plasma diperoleh pada titik waktu 3 (yaitu, hari ke 80–85 setelah vaksinasi pertama). (B) Tingkat antibodi IgG spesifik nukleokapsid (sumbu y: ISU) pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan (sumbu x) pada awal. Garis horizontal menunjukkan batas kepositifan. (C) Tingkat antibodi IgG (sumbu y: ISU) spesifik untuk RBD, S, S1, dan S2 pada subjek pada titik waktu 0 dan 3 (sumbu x). (D) Dari kiri ke kanan tingkat antibodi IgG1, IgG2, IgG3, dan IgG4 (sumbu y: nilai OD kepadatan optik) ke S (bagian atas) dan RBD (bagian bawah) pada titik waktu 0 dan 3 ( sumbu x). Perbedaan signifikan antar kelompok sebagaimana ditentukan dengan uji Wilcoxon ditunjukkan: ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns—tidak signifikan.
2.2. Vaksinasi Gam-COVID-Vac Menginduksi Respon IgG Luas terhadap S Termasuk S1, RBD, dan S2
manfaat suplemen cistanche-meningkatkan kekebalan tubuh
Kami melakukan analisis mendetail mengenai respons antibodi terhadap panel besar protein dan peptida SARS-CoV-2 yang dilipat dan dibuka secara mikro yang mencakup protein S dalam sampel plasma dari subjek yang naif dan dalam masa pemulihan SARS-CoV-2- setelah imunisasi lengkap dengan Gam-COVID-Vac (Gambar 1A,B; Tabel 1). Saat membandingkan sampel plasma dari titik waktu 0 dan titik waktu 3 setelah vaksinasi, ditemukan induksi respons IgG yang signifikan terhadap RBD, S, S1, dan S2 yang terlipat tetapi tidak terbuka (Gambar 1C). Tiga bulan setelah vaksinasi, subjek menunjukkan peningkatan antibodi IgG spesifik RBD 21-kali lipat (p < 0.{{20}}001) dan {{ 18}}peningkatan antibodi IgG spesifik S sebanyak 18}}kali lipat (yaitu, titik waktu 0: median 0,291, titik waktu 3: median 5,778) (p <0,0001), masing-masing. Antibodi IgG terhadap S1 meningkat 3.7-kali (p=0.0023) dan antibodi IgG terhadap S2 meningkat 2.8-kali (p=0.0094) (Gambar 1C ). Vaksinasi dengan Gam-COVID-Vac terutama menginduksi respons IgG terhadap lipatan S, S1, dan RBD yang sebanding pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan (Gambar 1C, S2, dan S3), yang menunjukkan bahwa vaksinasi tersebut dapat digunakan untuk meningkatkan SARS-CoV-2- respons antibodi spesifik juga pada subjek yang dalam masa pemulihan. Peningkatan antibodi IgG yang signifikan terhadap RBD, S, dan S1 diamati pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan (Gambar S2) dan tidak ada perbedaan yang signifikan mengenai kadar IgG terhadap RBD, S, S1, dan S2 pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan pada titik waktu 3 (Gambar S3).
2.3. Vaksinasi Gam-COVID-Vac Terutama Menginduksi Respon Subkelas IgG1 terhadap S dan RBD
Telah dilaporkan bahwa imunoterapi spesifik alergen (AIT) terutama menginduksi respons IgG1 dan IgG4 spesifik alergen yang berbeda tidak hanya dalam fungsi efektornya (IgG1 dapat memediasi sitotoksisitas seluler yang bergantung pada antibodi (ADCC) dan aktivasi komplemen sedangkan IgG4 tidak memiliki hal ini. fungsi efektor) tetapi juga mengenai kinetikanya (IgG1: awitan cepat dan penurunan dini: IgG4: awitan lambat namun kadarnya berkelanjutan) [28-30]. Oleh karena itu kami menyelidiki respons subkelas IgG (yaitu, IgG1 – IgG4) terhadap S dan RBD pada subjek yang divaksinasi Sputnik-V. Gambar 1D menunjukkan bahwa vaksinasi hampir secara eksklusif menginduksi respons subkelas IgG1 terhadap S dan RBD. Peningkatan signifikan kadar IgG1 spesifik untuk S dan RBD (masing-masing p=0.0002 dan p=0.0071) ditemukan setelah vaksinasi. Namun, tidak ada respons subkelas IgG2, IgG3, atau IgG4 relevan yang spesifik untuk S dan RBD yang dapat dideteksi (Gambar 1D).
2.4. Induksi Antibodi Penetral Virus dan Antibodi Penghambat Interaksi RBD-ACE2 dengan Vaksinasi Gam-COVID-Vac
Untuk mendeteksi antibodi penawar virus, kami menggunakan tes pVNT, di mana partikel mirip virus diketik semu dengan protein S dari strain asli Wuhan-Hu-1 dan VOC Omicron yang baru-baru ini dijelaskan. Antibodi dengan aktivitas penetralisir strain Hu-1 Wuhan ditemukan di semua kecuali satu (yaitu, subjek 22) dari 22 subjek (Gambar 2A, Tabel 2) sedangkan titer antibodi penetralisir untuk Omicron secara signifikan lebih rendah (Gambar 2B) dan hanya ditemukan pada 17 dari 20 subjek (Gambar 2A, Tabel 2). Tidak ada netralisasi relevan yang ditemukan untuk subjek 6, 7, 10, 11, 15 (Gambar 2A, Tabel 2). Titer netralisasi virus untuk Omicron 25 kali lebih rendah dibandingkan WT (median masing-masing 141,9 dan 5,7 untuk Wuhan-Hu-1 dan Omicron) (Gambar 2B).
Gambar 2. Aktivitas penetral virus dalam plasma 3 bulan setelah vaksinasi Sputnik-V dan kaitannya dengan respons antibodi IgG terhadap RBD dan peptida turunan S. (A) Netralisasi virus (ID50) (sumbu y) terhadap strain Wuhan-hu-1 (hijau) dan Omicron (oranye) diperoleh dengan plasma dari naif (biru) dan konvalesen (merah) subjek (sumbu x). (B) Perbandingan netralisasi virus (sumbu y: ID50 diperoleh untuk plasma dari subjek yang diuji, batang mewakili median dengan rentang interkuartil (IQR) Wuhan Hu-1 (hijau) dan Omicron (oranye) Garis horizontal mewakili hasil yang diperoleh dengan plasma dari subjek kontrol yang sehat dan tidak terinfeksi (kontrol sehat, HC). Perbedaan signifikan antar strain ditentukan dengan uji Mann–Whitney: **** p < 0. {{30}}001. (C) Lokalisasi RBD dan peptida berkorelasi dengan netralisasi virus dalam skema S (S1, S2). (D) Korelasi antara titer netralisasi virus untuk Wuhan-Hu{{19 }} (WT) atau level Omicron (sumbu y) dan IgG spesifik untuk RBD dan peptida turunan spike 12, 32, dan 46A (sumbu x: ISU). Simbol biru dan merah masing-masing menunjukkan subjek yang naif dan dalam masa pemulihan. menunjukkan korelasi yang signifikan menurut uji nonparametrik Spearman, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 **** p < 0,0001, ns=tidak signifikan.
Tabel 2. Perbandingan kadar IgG spesifik untuk S, S1, S2, dan RBD yang diukur dengan micro-array dengan penghambatan pengikatan RBD ke ACE2 dan titer netralisasi virus (Wuhan-Hu-1, Omicron) yang ditentukan untuk plasma dari subjek yang diselidiki. Pemetaan panas dilakukan untuk setiap parameter secara terpisah menggunakan Excel. Tingkat tertinggi dianggap merah tua dan terendah dianggap putih.
Faktanya, bahwa pada semua kecuali satu subjek (yaitu subjek 22) antibodi penawar virus meningkat setelah vaksinasi menunjukkan bahwa antibodi tersebut diinduksi oleh vaksinasi (Tabel 2). Subjek 21 sudah menunjukkan pemblokiran interaksi RBD-ACE2 yang tinggi pada MIA dan netralisasi virus yang tinggi pada awal (Tabel 2). Khususnya, sampel plasma dari subjek dalam masa pemulihan yang menerima vaksinasi Gam-COVID-Vac dan memiliki penyakit sedang (#1, 2, 17, 18, 21) memiliki titer netralisasi virus yang lebih tinggi dibandingkan sampel dari subjek dalam masa pemulihan yang memiliki penyakit ringan (#22) atau tanpa gejala (#4, 5, 7, 9) (Tabel 1 dan 2). Namun, temuan utamanya adalah penghambatan pengikatan RBD ke ACE2 dan netralisasi virus tidak selalu dikaitkan. Lebih dari 25% penghambatan pengikatan RBD Wuhan Hu-1 ke ACE2 hanya terjadi pada 6 subjek yang juga menunjukkan penghambatan dalam tes netralisasi virus karena vaksinasi (yaitu subjek 1, 2, 3, 17, 18 , dan 19) (Tabel 2). Menariknya, aktivitas penetral virus (50% dosis infeksi (ID50) > 100) diamati pada 6 subjek meskipun mereka tidak menunjukkan atau sedikit penghambatan pengikatan RBD ke ACE2 (Tabel 2: Subjek 6, 10, 12, 13, 16, 20) .
2.5. Netralisasi Virus pada Subjek yang Divaksinasi Gam-COVID-Vac Berkorelasi Kuat dengan Respons IgG terhadap RBD dan Peptida Turunan S 12
Seperti yang ditunjukkan sebelumnya, plasma dari beberapa subjek yang menerima vaksinasi Gam-COVID-Vac (misalnya, pada subjek 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tabel 2) menunjukkan aktivitas penetral virus tetapi tidak menghambat interaksi RBD-ACE2. Oleh karena itu kami menganalisis reaktivitas antibodi IgG terhadap peptida yang mencakup protein S dengan analisis chip berbasis mikro-array [13] (Gambar S4 dan Gambar 2C) dan mengkorelasikan respons IgG spesifik peptida dengan netralisasi virus di Wuhan-Hu{{19} } strain dan Omicron (Gambar 2D). Respons IgG terhadap tiga peptida (yaitu, peptida 12, 32, 46A) seperti respons IgG terhadap RBD terlipat berkorelasi signifikan dengan netralisasi strain Wuhan-Hu-1 (Gambar 2C, D). Peptida 12 menonjol karena respons antibodi terhadap peptida 12 yang tidak dilipat (Gambar S1), tetapi tidak terhadap peptida 32 dan 46A yang tidak dilipat secara signifikan ditingkatkan oleh Gam-COVID Vac pada subjek yang naif (Gambar 3A) dan juga berkorelasi signifikan dengan netralisasi Omicron (Gambar 2D ). Tidak ada peningkatan signifikan yang diamati pada subjek dalam masa pemulihan terhadap peptida 12, 32, atau 46A (Gambar 3A). Urutan peptida 12 sangat terkonservasi di antara strain SARS-CoV-2 (Gambar 4) dan berada di S1 dekat terminal-N RBD dan karenanya menunjukkan wilayah yang mungkin relevan untuk transisi pra- dengan konformasi pasca fusi protein S (Gambar 3B).
Gambar 3. Median kadar antibodi IgG (sumbu y: ISU) terhadap peptida turunan S (P12, P32, P46A) pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan yang divaksinasi pada titik waktu 0 dan 3 (sumbu x) (A) . Perbedaan signifikan antar kelompok yang ditentukan dengan uji Wilcoxon ditunjukkan: * p < 0.05, ns=tidak signifikan. (F) (B) Gambar 3. Median kadar antibodi IgG (sumbu y: ISU) terhadap peptida turunan S (P12, P32, P46A) pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan yang divaksinasi pada titik waktu 0 dan 3 (x -sumbu) (A). Perbedaan signifikan antar kelompok yang ditentukan dengan uji Wilcoxon ditunjukkan: * p < 0,05, ns=tidak signifikan. (B) Visualisasi peptida 12, 32, dan 46A dalam representasi permukaan trimer protein lonjakan SARS-CoV-2 (tampak samping, konformasi pra-fusi) yang dihasilkan dengan PyMOL. Peptida 12 disorot dalam model S-trimer dengan warna merah, peptida 32 dengan warna biru, dan 46A dengan warna oranye. Karbohidrat ditampilkan dalam warna abu-abu muda.
Gambar 4. Penjajaran urutan protein protein S-SARS-CoV-1 Wuhan-Hu-1 (atas) dan Omicron (bawah). RBD diwarnai dengan warna kuning muda dan peptida 12, 22, 25, 32, 33, 46A dan 47 digarisbawahi. Urutan protein S Wuhan sesuai dengan isolat WA1 (aksesi GeneBank Nr.: BCN86353.1), urutan protein S Omicron Omicron adalah clade GRA, garis keturunan B.1.1.529 BA.1 berdasarkan pada database GISAID ( https://www.gisaid.org/ (diakses pada 15 Maret 2022)). Substitusi asam amino diberi kode warna berdasarkan sifat hidropati dan muatannya (merah muda=hidrofobik, hijau=netral, biru muda=basa hidrofilik, dan merah muda=asam hidrofilik).
3. Diskusi
Vaksin berbasis vektor Gam-COVID-Vac, juga disebut Sputnik-V, adalah salah satu vaksin SARS-CoV-2 pertama yang tersedia untuk digunakan dalam praktik klinis. Namun, relatif sedikit informasi yang tersedia mengenai kekhususan respons antibodi pada subjek yang telah divaksinasi COVID-19. Dalam studi ini, kami melakukan analisis mendetail mengenai respons antibodi terhadap protein dan peptida SARS-CoV-2 yang dilipat dan dibuka secara mikro yang mencakup protein S dalam sampel plasma dari subjek yang naif dan dalam masa pemulihan SARS CoV-2-setelah imunisasi lengkap dengan Gam COVID-Vac. Gam-COVID-Vac terutama menginduksi IgG1 tetapi tidak ada respons subkelas IgG lainnya terhadap lipatan S, S1, S2, dan RBD dengan cara yang sebanding pada subjek yang naif dan dalam masa pemulihan, yang menunjukkan bahwa hal tersebut dapat digunakan untuk meningkatkan SARS-CoV-2- respons antibodi spesifik juga pada subjek yang dalam masa pemulihan. Seperti vaksin genetik lainnya, respons antibodi yang diinduksi Gam-COVID-Vac sebagian besar berada pada subkelas IgG1 yang memiliki waktu paruh lebih pendek dibandingkan dengan respons subkelas IgG4 yang lebih berkelanjutan. Misalnya, respons subkelas IgG4 spesifik dikaitkan dengan perlindungan jangka panjang selama imunoterapi spesifik alergen, sedangkan respons IgG1 spesifik terbentuk dengan cepat namun memudar setelah beberapa bulan [28-30]. Oleh karena itu, suntikan booster Gam-COVID-Vac dan vaksin genetik lainnya secara berkala akan diperlukan untuk menjaga tingkat netralisasi respons antibodi tetap tinggi. Vaksinasi dengan Gam-COVID-Vac menginduksi respons antibodi yang sebagian besar mirip dengan respons yang ditemukan setelah infeksi alami SARS-CoV-2 [13]. Selain itu, respons antibodi setelah infeksi alami terutama termasuk dalam subkelas IgG1 dan ditujukan terhadap lipatan S, S1, S2, dan RBD [13]. Temuan baru dan menarik dari penelitian kami adalah bahwa plasma dari beberapa subjek yang menerima vaksinasi Gam-COVID-Vac (misalnya, pada subjek 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tabel 2) menunjukkan aktivitas penetral virus tetapi tidak menghambat virus. Interaksi RBD-ACE2. Oleh karena itu kami menganalisis reaktivitas antibodi IgG terhadap peptida yang mencakup protein S lengkap dengan analisis chip berbasis mikro-array [13] (Gambar 2D dan S4) dan mengkorelasikan respons IgG spesifik peptida dengan netralisasi virus di Wuhan-Hu{{62} } strain dan Omicron BA.1 (Gambar 2D). Respons IgG terhadap tiga peptida (yaitu, peptida 12, 32, 46A) seperti respons IgG terhadap RBD berkorelasi signifikan dengan netralisasi strain Wuhan-Hu-1 (Gambar 2C, D). Namun, peptida 12 unik karena respons antibodi hanya terhadap peptida 12, tetapi tidak terhadap peptida 32 dan 46A secara signifikan ditingkatkan dengan vaksinasi (Gambar 3A) dan juga berkorelasi signifikan dengan netralisasi Omicron (Gambar 2D). Besarnya peningkatan respons IgG terhadap peptida 12 yang dipicu oleh vaksin tidak terlalu besar namun signifikan pada subjek yang naif dan cukup sebanding dengan peningkatan antibodi IgG yang diarahkan pada S dan S1. Namun, antibodi IgG terhadap peptida terbuka yang diisolasi (Gambar S1) mungkin hanya mewakili sebagian dari antibodi yang ditujukan terhadap peptida 12 dalam protein terlipat. Selain itu, tidak hanya kadarnya tetapi juga aviditas antibodinya yang penting. Urutan peptida 12 sangat terkonservasi di antara strain Wuhan-Hu-1 dan BA.1 Omicron VOC (Gambar 4) dan berasal dari wilayah yang mungkin relevan untuk transisi dari pra ke pasca fusi konformasi protein S (Gambar 3B). Selain itu, perbandingan varian mutan baru Omicron (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1), menunjukkan bahwa peptida 12 (284–313 aa. ) tetap tidak berubah dalam hal urutan asam amino, berbeda dengan, misalnya, peptida 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (diakses pada 28 November 2022)). Khususnya, antibodi monoklonal dengan kemampuan menetralkan virus yang menargetkan wilayah N-terminal domain (NTD) yang mana peptida 12 merupakan bagiannya telah dijelaskan [31], dan dilaporkan juga bahwa vaksin lain dapat menginduksi respons antibodi yang ditujukan terhadap wilayah ini. [18-20,32], menunjukkan bahwa wilayah yang ditentukan oleh peptida 12 mungkin penting untuk menginduksi antibodi penetralisir. Oleh karena itu, kita dapat berasumsi bahwa antibodi yang diinduksi oleh vaksinasi Gam-COVID-Vac dapat menetralisir SARS-CoV-2 melalui dua mekanisme, satu hanya dengan menghambat interaksi RBD-ACE2 dan satu lagi dengan menargetkan wilayah yang mengandung peptida 12 dari S- protein yang mungkin terlibat dalam perubahan struktural (yaitu transisi pra-fusi ke konformasi fusi S). Penelitian kami memiliki keterbatasan. Misalnya, kami menggunakan uji netralisasi berdasarkan lentivirus tipe semu tetapi uji ini digunakan secara luas dan dapat diandalkan [33]. Hal ini juga merupakan keterbatasan penelitian kami bahwa peptida pada mikro-array kami terbuka dan dengan demikian mungkin hanya mengidentifikasi sebagian kecil dari antibodi penetralisir yang mengenali peptida yang tidak terbuka tersebut, sedangkan sebagian besar antibodi mungkin telah terikat pada epitop konformasi dalam peptida yang teridentifikasi. wilayah. Selain itu, keterbatasan penelitian kami adalah kami hanya menganalisis sejumlah kecil subjek. Namun, penelitian kami dengan jelas menunjukkan bahwa antibodi dengan spesifisitas epitop yang berbeda dapat berkontribusi terhadap efek perlindungan dari vaksinasi Gam COVID-Vac. Selain itu, penelitian ini menunjukkan respons terhadap peptida yang berpotensi dilestarikan yang dapat digunakan untuk menciptakan antibodi penetralisir secara luas.
manfaat suplemen cistanche-cara memperkuat sistem kekebalan tubuh
4. Bahan dan Metode
4.1. Pelajari Pernyataan Populasi dan Etika
Subjek sehat dengan (n {0}}) atau tanpa (n=12) infeksi SARS-CoV-2 sebelumnya didaftarkan dalam penelitian ini pada bulan Desember 2020 di National Research Center Institute of Imunologi Badan Biologi Medis Federal Rusia (Nomor etika: #12-1, 29 Desember 2020). Semua peserta memberikan persetujuan tertulis. Infeksi SARS-CoV-2 sebelumnya dikonfirmasi melalui tes PCR positif sebelumnya dan gejala COVID-19 atau dengan adanya antibodi spesifik SARS-CoV-2-yang diarahkan ke antigen nukleokapsid dan/atau Antigen RBD dan/atau S seperti yang dijelaskan [13]. Semua subjek diimunisasi secara intramuskular dengan dua dosis Sputnik-V (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moskow, Rusia) dengan selang waktu tiga minggu. Sampel darah diperoleh satu hari sebelum vaksinasi pertama (T0, Gambar 1A) dan 80 hingga 85 hari setelah vaksinasi pertama (T3, Gambar 1A).
4.2. Deteksi SARS-CoV-2-Respon Antibodi Spesifik
Respons imunoglobulin subjek yang naif dan dalam masa pemulihan COVID{{0}} dinilai dalam sampel plasma sebelum dan sesudah imunisasi dengan Sputnik-V (Gambar 1A). IgG spesifik pada panel komprehensif protein SARS-CoV-2 dan 46 peptida (25–30 mer) yang mencakup protein S diukur dalam 1:50 sampel plasma encer dengan teknologi chip mikroarray seperti sebelumnya dijelaskan [13]. Urutan asam amino, jumlah asam amino, dan berat molekul untuk semua peptida sintetik pada chip mikro-array disajikan pada Tabel 3. Untuk peptida 12 dan 32 dan RBD dinyatakan dalam Escherichia coli (E. coli) (dibuka) dan dalam spektrum dichroism melingkar (CD) sel Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) disediakan (Gambar S1). Peptida 12 dan 32 tidak mengungkapkan struktur sekunder spesifik seperti yang ditentukan oleh dichroism melingkar (CD) seperti yang ditunjukkan pada Gambar S1. Secara rinci, slide kaca yang mengandung microarray dikelilingi oleh bingkai Epoxy (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Jerman) diaktifkan dengan polimer organik kompleks reaktif amina, MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA , USA) untuk memfasilitasi pengikatan protein dan peptida. Antigen/peptida SARS-CoV-2 ditemukan menggunakan konsentrasi 0,5–1 mg/mL dalam (75 mM Na2HPO4, pH=8.4) dalam rangkap tiga menggunakan SciFlexArrayer S12 (Scienion AG, Berlin, Jerman) [13]. Ekspresi dan pemurnian protein dan sintesis peptida dijelaskan dalam [13]. Reaktivitas antibodi IgG terhadap antigen micro-array diukur dengan mencuci microarray terlebih dahulu selama 5 menit dengan saline yang mengandung fosfat dengan 0,5% Tween 20 (PBST) dan mengeringkannya dengan sentrifugasi menggunakan centrifuge Sigma 2–7 dan MTP-11113 rotor (keduanya Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Jerman). Kemudian 35 μL alikuot sampel plasma encer 1:50 (pengencer sampel, Thermofisher, Waltham, MA, USA) ditambahkan dan diinkubasi selama 2 jam pada suhu 22 ◦C. Setelah langkah pencucian berikutnya, 30 μL antibodi sekunder (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) berlabel IgG anti-manusia (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) diaplikasikan dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 22 ◦ C RT. Keripik kemudian dicuci, dikeringkan, dan selanjutnya dipindai menggunakan pemindai laser confocal (Tecan, Männedorf, Swiss). Analisis gambar dilakukan oleh perangkat lunak akuisisi dan analisis gambar microarray MAPIX (Innopsys, Carbonne, Prancis) dan konversi unit fluoresensi terukur ke unit standar ISAC (ISU) dilakukan seperti yang dijelaskan [13]. Tingkat antibodi spesifik dinyatakan dalam unit standar ISAC (ISU). Respons antibodi IgG1-4 spesifik S dan RBD diukur dalam sampel plasma (diencerkan 1:50) dalam duplikat dengan ELISA seperti yang dijelaskan sebelumnya [13] dengan variasi<5% for their average values.
Tabel 3. Peptida turunan protein lonjakan SARS-CoV-2 sintetik §.
4.3. Spektrum Dichroism Edaran UV Jauh (CD).
Untuk peptida, P12 dan P32 serta RBD yang diekspresikan dalam sel E. coli dan HEK293, analisis CD dilakukan menggunakan spektropolarimeter Jasco J-180 (Japan Spectroscopic Co., Tokyo, Japan) yang telah dijelaskan sebelumnya [34]. Spektrum CD peptida dan protein (Gambar S1) diukur pada konsentrasi 0.1 mg/mL dalam 10 mM NaH2PO4 (pH 8,0), yang digunakan untuk mendeteksi antigen.
4.4. Uji Netralisasi Virus Berbasis Virus Pseudo (PVT)
Aktivitas netralisasi virus dalam sampel plasma ditentukan dengan uji netralisasi virus berbasis pseudo-virus seperti yang dijelaskan sebelumnya [35]. Untuk menghasilkan partikel mirip virus (VLP) lonjakan SARS-CoV-2, sel HEK293T ditransfeksi bersama dengan 3 plasmid: plasmid kemasan lentiviral pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, UK), pUCHR-GFP, dan a Plasmid pCAGGS-S∆19 yang mengkode protein lonjakan SARS-CoV-2 tipe liar (identik dengan referensi isolat Wuhan-Hu-1 dan WA1) atau pCAGGS-S∆19-Om plasmid mengkode protein lonjakan SARS-CoV-2 Omicron (hadiah dari Andrey Gorchakov, Laboratorium Imunogenetika, Institut Biologi Molekuler dan Seluler, Akademi Ilmu Pengetahuan Rusia Cabang Siberia, Novosibirsk, Rusia). Sebelum digunakan dalam pVNT, VLP dititrasi dengan membatasi pengenceran dan diinkubasi selama 4 hari dengan sel HEK293T yang ditransfeksi hACE2-. Dosis partikel virus yang menghasilkan 50% sel positif protein fluoresen hijau (GFP) dipilih untuk digunakan dalam pengujian ini. Untuk pVNT, semua sampel plasma diinaktivasi dengan panas selama 30 menit pada suhu 56 ◦C sebelum digunakan. Pada hari ke-4, sel-sel pasca infeksi ditangguhkan kembali, dan persentase sel positif GFP diukur dengan flow cytometry. Nilai ID50 dihitung menggunakan kurva sigmoidal (perangkat lunak GraphPad Prism 9.2.0, Sigmoidal, 4PL), direkonstruksi dengan persentase netralisasi pada berbagai konsentrasi plasma yang ditunjukkan.
4.5. Uji Interaksi Molekuler (MIA)
Untuk mendeteksi kapasitas sampel plasma subjek COVID{{0}} dalam masa pemulihan atau naif (Tabel 1), sebelum dan sesudah imunisasi Sputnik-V, untuk menghambat pengikatan 50 ng/mL RBD-hu-1 ke reseptor ACE2 uji interaksi molekuler (MIA) dilakukan seperti yang dijelaskan [13,36–39]. Pengujian ini dapat mengukur penghambatan RBD berlabel terhadap ACE2 yang terikat pada pelat ELISA oleh antibodi atau penghambatan senyawa lain dari interaksi RBD-ACE2 [38]. Singkatnya, ACE-2 rekombinan (GenScript, Piscataway, NJ, USA) dilapisi (2 µg/mL) semalaman ke pelat sumur NUNC Maxisorb 96 (Thermofisher). Setelah itu, tiga siklus pencucian dilakukan dengan buffer pencuci dan kemudian pelat diblokir selama 3 jam di RT dengan buffer pemblokiran. Sampel serum diencerkan 1:2 dalam PBS, 0,05% Tween 20, 1% BSA, dan diinkubasi selama 2 jam dengan 50 ng RBD rekombinan (GenScript) yang diberi tag His. Kemudian sampel serum yang telah diinkubasi sebelumnya ditambahkan ke dalam cawan yang berisi ACE-2 selama 3 jam dan cawan tersebut dicuci dan diinkubasi semalaman dengan antibodi anti-tag Tag monoklonal tikus yang diencerkan dengan perbandingan 1:1000 (Dianova, Hamburg, Jerman) . Setelah 3 langkah pencucian, antibodi IgG1 anti-tikus terkait HRP yang diencerkan 1:1000 (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) ditambahkan selama 2 jam dan deteksi dilakukan dengan ABTS. Nilai rata-rata kepadatan optik (OD) yang sesuai dengan RBD terikat diukur pada 405 nm dan 492 nm (referensi) dalam pembaca ELISA TECAN Infinite F5 dengan perangkat lunak terintegrasi i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Swiss). Kontrol buffer (overlay tanpa RBD) dikurangi dari setiap hasil. Penentuan dilakukan dalam rangkap dua dan hasilnya ditampilkan sebagai nilai rata-rata dengan variasi<5%.
manfaat suplemen cistanche-cara memperkuat sistem kekebalan tubuh
4.6. Visualisasi Peptida dalam Struktur Protein Spike
Representasi permukaan protein lonjakan SARS-CoV-2 dihasilkan di PyMOL (PyMOL Molecular Graphics System, Versi 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, USA) yang berbasis pada entri PDB 6XR8.
4.7. Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan menggunakan GraphPad Prism (versi 9.2.0 GraphPad Software, La Jolla California). Uji Wilcoxon (Gambar 1C, D, dan 3A), uji Mann-Whitney (Gambar 2B dan S3), dan uji Friedman (Gambar S2) digunakan untuk perbandingan antara dua atau beberapa kelompok. p < 0.05 dianggap signifikan secara statistik. Korelasi kedua kelompok ditentukan dengan uji rank Spearman (Gambar 2D). Regresi nonlinier yang dinormalisasi dilakukan menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism (Sigmoidal 4PL). Data disajikan sebagai median ± IQR. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan antar kelompok, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, **** p < 0.0001, ns—tidak signifikan.
5. Kesimpulan
Singkatnya, penelitian kami adalah penelitian pertama yang mempelajari secara mendalam spesifisitas subkelas epitop dan IgG dari antibodi yang diinduksi oleh Gam-COVID-Vac dan mengungkap berbagai mekanisme netralisasi virus yang diinduksi Gam-COVID-Vac oleh antibodi. Secara khusus, kami memperoleh bukti bahwa antibodi yang diarahkan ke peptida (yaitu, peptida 12) yang terletak dekat tetapi di luar RBD di bagian N-terminal S1 dikaitkan dengan netralisasi virus. Potensi aktivitas antibodi spesifik peptida 12- yang dapat menetralkan virus mungkin disebabkan oleh kemampuannya mengganggu transisi konformasi protein lonjakan sebelum dan sesudah fusi. Kami menyarankan pertimbangan untuk memasukkan wilayah yang ditentukan oleh peptida 12 dalam bentuk imunogenik ke dalam vaksin untuk menginduksi antibodi terhadap wilayah epitop ini dan untuk menguji antibodi yang diinduksi oleh vaksin tersebut untuk netralisasi virus. Jika netralisasi virus pada vaksin dapat ditingkatkan, penyertaan epitop peptida 12 imunogenik dapat meningkatkan kemanjuran vaksin COVID. Selain itu, seseorang dapat mempertimbangkan untuk mengembangkan antibodi terhadap epitop yang ditentukan peptida 12-untuk imunisasi pasif. Karena epitop yang ditentukan 12-dikonservasi dalam varian SARS-CoV-2 yang diketahui saat ini, vaksin dan antibodi yang diarahkan ke peptida 12 Mei memberikan perlindungan silang terhadap varian SARS-CoV-2. Oleh karena itu, kami memberikan pengetahuan baru yang mungkin berguna untuk pengembangan strategi vaksinasi aktif dan pasif baru untuk COVID-19.
Referensi
1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. SARS-CoV-2 kandidat vaksin—Komposisi, mekanisme kerja, dan tahapan pengembangan klinis. Alergi 2021, 76, 1922–1924. [Ref Silang] [PubMed]
2. Sharma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: Tinjauan tentang Evolusi, Penularan, Deteksi, Pengendalian dan Pencegahan Penyakit Novel Coronavirus. Virus 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]
3. Arshad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Review-Wawasan tentang strategi terapi Off-Label terhadap infeksi COVID-19 ringan dan berat. Pak. J.Pharm. Sains. 2021, 34, 1469–1484. [Ref Silang] [PubMed]
4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Pendekatan filogenetik dapat membantu menemukan sumber daya untuk penyembuhan alami. fitother. Res. 2020, 34, 2783–2785. [Referensi Silang]
5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Virulensi Intermiten Akibat Seleksi Alam. COVID 2022, 2, 1089–1101. [Referensi Silang]
6. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Zubkova, OV Keamanan dan imunogenisitas vaksin prime-boost COVID-19 heterologous prime-boost berbasis vektor rAd26 dan rAd5 dalam dua formulasi: Dua studi fase 1/2 terbuka dan non-acak dari Rusia. Lancet 2020, 396, 887–897, Koreksi di Lancet 2021, 397, 98. [CrossRef]
7. Folegatti, PM; Ya, KJ; Aley, PK Keamanan dan imunogenisitas vaksin ChAdOx1 nCoV-19 terhadap SARS-CoV-2: Laporan awal dari uji coba terkontrol acak dan tersamar tunggal fase 1/2. Lancet 2020, 396, 467–478, Koreksi di Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]
8. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Keamanan dan kemanjuran vaksin prime-boost COVID-19 heterologous prime-boost berbasis vektor rAd26 dan rAd5: Analisis sementara dari uji coba fase 3 terkontrol secara acak di Rusia. Lancet 2021, 397, 671–681, Koreksi di Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]
9.Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. Mekanisme masuknya SARS-CoV-2 ke dalam sel. Nat. Pendeta Mol. Biol Sel. 2022, 23, 3–20. [Referensi Silang]
10.Heinz, FX; Stiasny, K. Ciri-ciri yang membedakan vaksin COVID-19 saat ini: Presentasi antigen dan cara kerjanya diketahui dan tidak diketahui. Vaksin NPJ 2021, 6, 104. [CrossRef]
11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL Identifikasi Epitop Sel B untuk Memunculkan Antibodi Penetral Terhadap Spike Protein SARS-CoV-2 melalui Bioinformatika dan Penargetan Antibodi Monoklonal. Int. J.Mol. Sains. 2022, 23, 4341. [Referensi Silang]
12. Moroy, G.; Tuffery, P. Strategi Berbasis Peptida Melawan Serangan SARS-CoV-2: Perspektif Silico yang Diperbarui. Depan. Obat. Penemuan. 2022, 2, 899477. [Referensi Silang]
13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. Netralisasi SARS-CoV-2 memerlukan antibodi terhadap epitop domain pengikat reseptor konformasi. Alergi 2022, 77, 230–242. [Referensi Silang]
14.Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC Lanskap Struktural Penetral Antibodi Terhadap SARS-CoV-2 Domain Pengikatan Reseptor. Depan. imunol. 2021, 12, 647934. [Referensi Silang]
15. Shan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Antibodi Penetral Manusia yang Ampuh dan Melindungi Terhadap Varian SARS-CoV-2. Depan. imunol. 2021, 12, 766821. [Referensi Silang]
16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. Menetralkan Antibodi Secara Luas terhadap SARS-CoV-2 Memberikan Wawasan Baru Tentang Netralisasi Varian dan Virus Corona Manusia Lainnya. Depan. Sel. Menulari. Mikrobiol. 2022, 12, 928279. [Referensi Silang]
17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Sindrom Pernafasan Akut Parah Virus Corona 2 Epitop Novel Berbasis Protein Spike Menginduksi Respon Kekebalan Tubuh yang Ampuh in vivo dan Menghambat Replikasi Virus in Vitro. Depan. imunol. 2021, 12, 613045. [Referensi Silang]
18. Garrett, SAYA; Galloway, JG; Wolf, C. Karakterisasi komprehensif respons antibodi terhadap SARS-CoV-2 Protein lonjakan menemukan epitop tambahan yang diinduksi oleh vaksin selain epitop untuk infeksi ringan. eLife 2022, 11, e73490. [Referensi Silang]
19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Epitop antigenik pelindung yang terungkap melalui tanda imun setelah tiga dosis vaksin SARS-CoV-2 yang diinaktivasi. Depan. imunol. 2022, 13, 938378. [Referensi Silang]
20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Keanekaragaman Respon Imun Humoral terhadap Vaksin COVID yang Berbeda-19: Implikasi terhadap Kebijakan "Green Pass". Depan. imunol. 2022, 13, 833085. [Referensi Silang]
21. Tukhvatulin, AI; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Uji coba fase 1/2 terbuka, non-acak tentang keamanan, tolerabilitas, dan imunogenisitas vaksin dosis tunggal "Sputnik Light" untuk pencegahan infeksi virus corona pada orang dewasa yang sehat. Reg Lancet. Kesehatan Euro. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]
22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Efektivitas komponen pertama Gam-COVID-Vac (Sputnik V) dalam pengurangan infeksi terkonfirmasi SARS-CoV, rawat inap, dan kematian pada pasien berusia 60–79 tahun: Sebuah studi kohort retrospektif di Argentina. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]
23. Gushchin, VA; Dolzhikova, IV; Shchetinin, AM Menetralkan Aktivitas Sera dari Orang yang Divaksinasi Sputnik V terhadap Varian Kekhawatiran (VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) dan SARS Endemik Moskow -CoV-2 Varian. Vaksin 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]
24. Voko, Z.; Cium, Z.; Surjan, G. Efektivitas lima vaksin SARS-CoV-2 secara nasional di Hongaria-studi HUN-VE. Klinik. Mikrobiol. Menulari. 2022, 28, 398–404. [Ref Silang] [PubMed]
25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Respon imun setelah dosis pertama Sputnik V (Gam-COVID-Vac). Sains. Rep.2022, 12, 1727. [CrossRef]
26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Hung, CT Menetralisir aktivitas serum vaksin Sputnik V terhadap varian SARS-CoV-2. Nat. Komunitas. 2021, 12, 4598. [Referensi Silang]
27. Gushchin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Sputnik V perlindungan dari COVID-19 pada orang dengan HIV yang menjalani terapi antiretroviral. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]
28. Syamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Peran IgE, IgG, dan IgA spesifik alergen pada penyakit alergi. Alergi 2021, 76, 3627–3641. [Referensi Silang]
29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Pengobatan selama dua tahun dengan vaksin alergi serbuk sari rumput rekombinan BM32 menginduksi respons IgG4 spesifik alergen yang terus meningkat. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [Referensi Silang]
30. Syamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Biomarker untuk memantau kemanjuran klinis imunoterapi alergen untuk rhinokonjungtivitis alergi dan asma alergi: Makalah Posisi EAACI. Alergi 2017, 72, 1156–1173. [Referensi Silang]
31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Antibodi manusia ultrapoten melindungi terhadap tantangan SARS-CoV-2 melalui berbagai mekanisme. Sains 2020, 370, 950–957. [Referensi Silang]
32.Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Analisis Aktivitas Penetralan Antibodi yang Menargetkan Konformasi Protein Lonjakan SARS-CoV Terbuka atau Tertutup. Int. J.Mol. Sains. 2022, 23, 2078. [Referensi Silang]
33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2 lonjakan domain N-terminal memodulasi TMPRSS2-entri virus yang bergantung dan fusogenisitas. Perwakilan Sel 2022, 40, 111220. [CrossRef]
34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Karakterisasi molekul Der p 10: Penanda diagnostik untuk sensitisasi luas pada alergi tungau debu rumah. Klinik. Contoh. Alergi 2011, 41, 1468–1477. [Referensi Silang]
35. Byazrova, M.; Yusubalieva, G.; Spiridonova, A. Pola sirkulasi SARS-CoV-2-pensekresi antibodi spesifik dan pembentukan sel B memori pada pasien dengan COVID akut-19. Klinik. Terjemahan. imunol. 2021, 10, e1245. [Referensi Silang]
36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Antibodi dalam serum pasien dalam masa pemulihan setelah COVID ringan-19 tidak selalu mencegah pengikatan reseptor virus. Alergi 2021, 76, 878–883. [Referensi Silang]
37. Gattinger, P.; Tulaeva, saya.; Borochova, K. Omicron: Varian SARS-CoV-2 yang sangat memprihatinkan. Alergi 2022, 77, 1616–1620. [Referensi Silang]
38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repik, A.; Valenta, R. Pentingnya, Aplikasi dan Fitur Pengujian yang Mengukur Antibodi Penetral SARS-CoV-2. Int. J.Mol. Sains. 2023, 24, 5352. [Referensi Silang]
39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulaeva, saya.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repik, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; dkk. Vaksin berdasarkan protein fusi domain pengikat reseptor terlipat-PreS yang berpotensi menginduksi kekebalan sterilisasi terhadap varian SARS-CoV-2. Alergi 2022, 77, 2431–2445. [Referensi Silang]
