Penentuan Echinacoside dalam Ekstrak Air Cistanche Herba Dengan HPLC

Abstrak:

Tujuan Metode HPLC dikembangkan untukpenentuan echinacosidediekstrak air Cistancheramuan.

Metode Echinacoside ditentukan dengan HPLC. Pemisahan dilakukan pada kolom Inertsil ODS-SP C18 dengan fase gerak yang terdiri dari asetonitril(A) dan larutan asam fosfat (B) 0,4%, secara elusi gradien. Panjang gelombang deteksi ditetapkan pada 333 nm, dan suhu kolom adalah 30 derajat. Laju aliran adalah 1,0 mL·menit-1 dan volume injeksi adalah 10 μL. Hasil Hubungan linier echinacoside dalam kisaran konsentrasi 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 baik (r=0.999 8). Pemulihannya adalah 94,59%-105,31% (RSD= 2,93%,n=9). Kandungan echinacoside dalam ekstrak air Cistanche herba adalah 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Kesimpulan Metode HPLC yang dikembangkan dengan kemampuan pengulangan yang baik adalah metode yang akurat, sederhana, dan layak. Sangat cocok untuk penentuan echinacoside dalam ekstrak air Cistanche herba.

Kata kunci:HPLC;ekstrak air Cistanche herba; Echinacoside; penentuan konten

Cistanche deserticola adalah tonik pengobatan tradisional Tiongkok yang biasa digunakan dalam praktik klinis dan dikenal sebagai "desert ginseng" [1]. Cistanche deserticola yang tercatat dalam Chinese Pharmacopoeia edisi 2015 adalah batang berdaging kering dengan daun bersisik Cistanche deserticola YC Ma atau Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Rasanya hangat, manis dan asin, dan kembali ke meridian ginjal dan usus besar. Ini memiliki efek menutrisi Yang ginjal, mengisi kembali esensi dan darah, serta melembabkan usus dan obat pencahar [2]. Materia Medica karya Shen Nong, katanya, dapat menguatkan bagian tengah, menyehatkan lima organ dalam, memperkuat yin, dan menyehatkan esensi. Cistanche deserticola terutama mengandung glikosida feniletanoid, iridoid dan glikosidanya, lignan dan glikosidanya, polisakarida, senyawa ester dan alkaloid [3]. Glikosida feniletanol adalah bahan aktif utama Cistanche deserticola. Diantaranya, echinacoside dan verbascoside terdaftar di Cistanche deserticola di Farmakope Tiongkok.

Komponen indikatif untuk identifikasi dan penentuan konten. Studi farmakologi [4] menunjukkan bahwa Cistanche deserticola memiliki berbagai efek farmakologis seperti pencahar, pelindung hati, anti osteoporosis, antioksidan, anti penuaan, dan anti kelelahan. Ekstrak air Cistanche deserticola dapat meningkatkan ekspresi gen protein morfogenetik tulang 2 pada osteoblas tikus, asam fosfatase tahan tartrat, osteokalsin dalam serum tikus yang diovariektomi, dan gen Smad1, mad5, transformasi faktor pertumbuhan-, dll. , memiliki efek anti-osteoporosis [5-6].

Echinacea dapat mendorong proliferasi osteoblas dan mendorong diferensiasi sel induk mesenkim sumsum tulang yang dikultur secara in vitro menjadi osteoblas [7-9]. Beberapa tahun terakhir ini telah banyak laporan penelitian mengenai penentuan kandungan echinacoside dan verbascoside pada ekstrak etanol Cistanche deserticola beserta sediaan senyawanya [10-12], namun hanya sedikit laporan mengenai penentuan kandungan komponen indeks pada Cistanche deserticola ekstrak air. Dalam penelitian ini, kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) digunakan untuk mengetahui kandungan echinaceaside dalam ekstrak air Cistanche deserticola.

1 bahan

1.1 Instrumen

LC-20AT kromatografi cair kinerja tinggi, SPD-20Detektor, SIL-20Autosampler, CTO-10oven kolom ASvp, stasiun kerja kromatografi cair larutan LC, Shimadzu Corporation of Jepang; Timbangan analitik elektronik MES125P-OCE-DU, Sartorius Company, Jerman; SHZ-D (Ⅲ) pompa vakum serbaguna air sirkulasi, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; Sistem sirkulasi pendingin evaporator putar RC2B SO25, evaporator putar RV 10 D S96, Perusahaan IKA, Jerman; DK-S26

Pemandian air suhu konstan listrik, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; Mesin air ultra murni seri UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Bahan obat dan reagen

Bahan obat Cistanche deserticola dibeli dari Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., nomor batch: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, kepala apoteker tradisional Tiongkok di Rumah Sakit Afiliasi Ketiga Universitas Pengobatan Cina Guangzhou, mengidentifikasinya seperti batang berdaging kering dengan daun bersisik Cistanche deserticola YCMa. Sampel disimpan di Ruang Pengujian Obat Rumah Sakit Afiliasi Ketiga Universitas Pengobatan Tiongkok Guangzhou; Bahan referensi Echinacea Glycoside, kandungan 89,7%, China Institute of Food and Drug Control, nomor batch: 111670-

201706; asetonitril murni secara kromatografi (Merck, Jerman); metanol dan asam fosfat murni secara analitik (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); air adalah air ultra murni.

2 Metode dan hasil

2.1 Pembuatan ekstrak air Cistanche deserticola

Ambil bubuk kasar bahan obat Cistanche deserticola, tambahkan air suling 10 kali, panaskan dan refluks untuk ekstraksi dua kali, masing-masing 1 jam, saring, gabungkan filtrat, dan konsentrasikan filtrat dengan rotavapor hingga kandungan obat kasar 0,100 g·mL-1, dan simpan pada suhu 4 derajat untuk digunakan nanti.

2.2 Kondisi kromatografi dan kesesuaian sistem

Kolom kromatografi: kolom Inertsil ODS SP C18 (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); fase gerak: asetonitril (A)-0larutan asam fosfat 0,4% (B), elusi gradien: 0 ~ 5 menit, 17%

A; 5 ~ 25 menit, 20% A; 25 ~ 30 menit, 17% A; panjang gelombang deteksi: 333 nm; suhu kolom: 30 derajat; laju aliran: 1,0 mL·mnt-1;

Volume injeksi: 10 μL. Dalam kondisi kromatografi ini, pemisahan antara puncak echinaceaside dan puncak komponen yang berdekatan lebih besar dari 1,5, dan jumlah pelat teoretis berdasarkan puncak echinaceaside tidak boleh kurang dari 4,000. Kromatogramnya ditunjukkan pada Gambar 1.

2.3 Persiapan larutan

2.3.1 Larutan bahan pembanding Timbang bahan pembanding echinacoside secukupnya, timbang dengan teliti, masukkan ke dalam labu takar 10 mL, tambahkan metanol untuk melarutkannya, dan siapkan larutan bahan pembanding yang mengandung 898.794 ug echinaceaside per ml, 4 derajat Simpan untuk digunakan nanti.

2.3.2 Solusi uji

Takar tepat 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, uapkan hingga kering dalam penangas air, tambahkan metanol hingga larut, encerkan hingga volume dalam labu takar 10 mL, kocok rata, dan saring dengan membran mikropori 0,22 μm untuk diperoleh.

2.4 Investigasi hubungan linier

Tepatnya mengukur {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL larutan referensi pada butir 2.3.1, masukkan ke dalam labu takar 5 mL, tambahkan metanol hingga volumenya sesuai, dan kocok rata hingga diperoleh gradien konsentrasi 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 larutan referensi, disaring melalui membran mikropori 0,22 μm. Ukur sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah 2.2, dan catat luas puncaknya. Lakukan regresi linier dengan konsentrasi massa zat acuan sebagai absis (X, ug·mL-1) dan luas puncak sebagai ordinat (Y), sehingga diperoleh persamaan regresi: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Hasilnya menunjukkan bahwa echinacea memiliki hubungan linier yang baik pada rentang konsentrasi 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Uji presisi

Ambil larutan referensi 539.276 4 ug ·mL- 1, suntikkan dan ukur 6 kali terus menerus sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah 2.2, dan catat luas puncaknya. Hasil penelitian menunjukkan bahwa RSD area puncak echinacoside sebesar 1,81% menunjukkan presisi instrumen yang baik.

2.6 Uji stabilitas

Takar tepat 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, uapkan hingga kering dalam penangas air, tambahkan metanol hingga larut, encerkan ke dalam labu takar 10 mL, kocok rata, saring dengan {{ 7}}.22 μm membran mikropori, ikuti kondisi kromatografi pada butir 2.2, dan tempatkan masing-masing pada 0 dan 2. , 4, 8, 12, 24 jam pengukuran injeksi, catat area puncak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa RSD area puncak echinacoside adalah 1,16% yang menunjukkan bahwa larutan uji memiliki stabilitas yang baik dalam waktu 24 jam.

2.7 Uji pengulangan

Ukur 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola secara tepat dan siapkan 6 larutan uji secara paralel sesuai dengan metode di bawah 2.3.2. Suntikkan sampel untuk pengukuran sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah 2.2 dan catat area puncak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa RSD dariechinacosidekonsentrasi massa adalah 1,28%, menunjukkan kemampuan pengulangan yang baik dari metode ini.

2.8 Tes pemulihan sampel

Takar 9 porsi 1.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola dengan tepat, tambahkan 0.8, 1.0, dan 1.2 mL larutan referensi (1.552 mg·mL{{11 }}) masing-masing, diuapkan hingga kering dalam penangas air, tambahkan metanol hingga larut, dan masukkan ke dalam labu takar 10 mL; Kocok dengan baik dan saring melalui membran mikropori 0,22 μm untuk menyiapkan larutan uji konsentrasi tinggi, sedang dan rendah. Siapkan 3 rangkap masing-masing konsentrasi secara paralel. Ukur sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah 2.2. Catat luas puncak dan hitung perolehan sampel. Kecepatan. Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 1.

2.9 Penentuan isi sampel

Takar tepat 3 porsi 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, uapkan hingga kering dalam penangas air, tambahkan metanol hingga larut, encerkan ke dalam labu takar 10 mL, kocok rata, saring dengan membran mikropori 0,22 μm, dan diukur sesuai dengan kondisi kromatografi di bawah 2.2. Catat luas puncaknya dan hitung kandungan echinaceasidenya. Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2.

Tabel 1 Hasil tes pemulihan echinacoside

Tabel 2 Hasil penentuan kandungan echinacoside pada ekstrak air herba Cistanche