Metode untuk kontrol kualitas Cistanche deserticola

untuk informasi lebih lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei & dkk.

obat tradisional cinaBentengadalah batang sukulen dariDeserticola CistancheYC Ma atau Cisanche tubulosa (Schenk) Berat dengan daun kering bersisik. Ini memiliki fungsi mengencangkan ginjal yang, menutrisi esensi dan darah, melembabkan usus dan pencahar, dll. Hal ini banyak digunakan untuk kekurangan yang ginjal, kekurangan esensi dan darah, impotensi dan infertilitas, nyeri dan kelemahan pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering dan sembelit. Penelitian farmakologi modern menunjukkan bahwaBentengmemiliki banyak fungsi seperti meningkatkan fungsi seksual, melawan penyakit alzheimer dan parkinson, meningkatkan kemampuan belajar dan memori, anti penuaan, anti lelah, melindungi hati, dan pencahar [4]. Sejumlah besar penelitian telah mengkonfirmasi bahwa glikosida fenilethanoid dalamDeserticola Cistanchememiliki efek yang jelas pada peningkatan kemampuan belajar dan memori, melawan penyakit Alzheimer dan penyakit Parkinson (4, oligosakarida dan poliol memiliki efek pencahar dan pencahar 64 ). "Farmakope Republik Rakyat Tiongkok" hanya mengukur kandungan fenilethanoid glikosida echinacosida dan verbaskosida dalamBentengdeserticola, tetapi tidak mengukur komponen aktif dari efek pencaharnya, sehingga sulit untuk mencapai analisis yang komprehensif dari bahan obat dariBentengdeserticola. Kontrol kualitas. Untuk mengatasi keterbatasan ini dan membangun sistem evaluasi kualitas multi-indeks terkait dengan fungsi utama dan indikasi:Bentengdeserticola, penelitian ini menggunakan HPLCELSDP4 untuk menetapkan metode analisis kuantitatif betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa dalam bahan obat dariBentengdeserticola. Selain itu, 58 batchBentengdeserticolabahan obat dari berbagai asal dan 10 batch bahan obat dariBentengdi daerah Hotan Xinjiang diuji, yang dapat memberikan referensi untuk kontrol kualitas yang komprehensif dan evaluasi bahan obat dariBentengdeserticoladi masa depan.

Klik untuk produk manfaat ekstrak cistanche

1 Instrumen dan reagen

1.1 Instrumen

Saldo elektronik Sartorius BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 1100 Agilent; ALLTECH 2000ES Evaporative Light Scattering Detector (EISD); Pembersih Ultrasonik KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reagen

Zat kontrol: betaine (batch: {{0}}, kemurnian: 99,2 persen ), manitol (batch: 10053-201304, kemurnian: 99,0 persen ), D-fruktosa (batch: 111504-201703 , kemurnian: 99,8 persen ), D - Glukosa anhidrat (nomor batch: 110833-201506, kemurnian: 99,9 persen ), sukrosa (nomor batch: 111507-201303, kemurnian: 99,8 persen ), semua dibeli dari China National Institute untuk Pengawasan Obat dan Makanan.

Bahan obat dariBentengdeserticoladikumpulkan di Mongolia Dalam, Xinjiang, Gansu dan tempat-tempat lain, dengan total 58 batch. Mereka diidentifikasi oleh Profesor Tu Pengfei dari Sekolah Farmasi Universitas Peking sebagai batang berdaging kering dariBentengdeserticolaYCMa tanaman Lidangaceae, seperti terlihat pada Tabel 3.

Bahan obat dariBentengdeserticoladikumpulkan di daerah Hotan, Xinjiang, dalam total 10 batch. Mereka diidentifikasi oleh Profesor Tu Pengfei dari Fakultas Farmasi Universitas Peking sebagai batang berdaging kering dengan daun bersisik Cistanche tubulosa (Schenk) Wight dari tanaman Liedangaceae, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 4.

1.3 Reagen

Asetonitril adalah kromatografi murni (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanol adalah kromatografi (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), dan air adalah air ultra murni.

2 Metode dan hasil

2.1 Kondisi kromatografi

Kolom kromatografi adalah kolom gel polimer ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 m); fase gerak adalah asetonitril-air (77-23); laju aliran adalah 0,7 mL·menit-1; suhu kolom adalah 25 derajat; Detektor hamburan cahaya (ELSD): Suhu tabung drift 100 derajat , dan laju aliran gas pembawa adalah 3 L·min-1.

2.2 Persiapan solusi referensi

Ambil zat referensi betaine, manitol, fruktosa, glukosa, dan sukrosa dalam jumlah yang tepat, timbang secara akurat, tambahkan air untuk membuat larutan campuran yang mengandung 0.25 mg betaine, manitol, fruktosa, glukosa, dan sukrosa per 1 mL, kocok rata, dan ambil.

2.3 Persiapan larutan uji

Ambil sekitar 1.0 gBentengserbuk obat (diayak dengan saringan No. 4), timbang dengan teliti, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL berwarna coklat, tambahkan 50 mL metanol 50 persen dengan tepat, tutup rapat, kocok, timbang rendam selama 30 menit, kemudian ultrasonik (daya 250 W, frekuensi 35 kHz) selama 40 menit, angkat, dinginkan, timbang lagi, tambahkan 50 persen metanol untuk mengurangi massa, kocok rata, dan biarkan itu berdiri. Tepatnya aspirasi 5 mL supernatan, masukkan ke dalam labu ukur 25 mL, encerkan sampai tanda dengan metanol 50 persen, kocok rata, dan saring melalui membran mikropori 0,2 m.

2.4 Metode penentuan

Secara tepat gambar 5 dan 10 L larutan referensi dan 5 L larutan uji masing-masing, injeksikan ke dalam kromatografi cair, catat luas puncak, dan hitung sesuai dengan persamaan logaritmik metode dua titik standar eksternal.

2.5 Uji kesesuaian sistem

Menurut kondisi kromatografi di bawah item 2.1, secara akurat menarik 5 larutan referensi dan larutan uji, masing-masing, dan menyuntikkannya ke dalam kromatografi cair kinerja tinggi, mengukur dan merekam kromatogram, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1. Puncak kromatografi sampel uji menunjukkan waktu retensi yang sama dengan puncak kromatografi zat referensi, resolusinya baik, dan kondisi kromatografinya layak.

Catatan: A. Bahan pengontrol; B.BentengNomor 49 sampel; 1. beta waktu; 2. bodoh; 3. manibol; 4. glukosa; 5. sucreve

Gbr. 1 Profil HPLC dari bahan referensi dan sampel Cistanche No. 49

2.6 Pemeriksaan Hubungan Linier

Ambil betaine, manitol, fruktosa, glukosa, dan sukrosa dalam jumlah yang tepat sebagai zat referensi, timbang dengan akurat, dan tambahkan air untuk membuat setiap 1 mL mengandung betaine 0.496 0 mg, manitol {{3} }.994 0 mg, buah 1.0126 mg, glukosa 1.0882 mg, dan sukrosa 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760 , manitol 0.1988, 0.4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 , fruktosa 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Kondisi kromatografi disuntikkan dan dideteksi, dan area puncak dicatat; kemudian nilai logaritma X (ug) dari setiap jumlah injeksi zat referensi digunakan sebagai absis, dan nilai logaritma Y dari area puncak adalah ordinat, dan kurva standar digambar. Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1 Hasil investigasi hubungan linier

2.7 Uji presisi

Gambarkan larutan uji secara akurat (sampel No. 49), di bawah kondisi kromatografi di atas, injeksi terus menerus sebanyak 6 kali, ukur luas puncak setiap puncak kromatografi, dan hitung nilai RSD-nya. Hasil RSD daerah puncak betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa berturut-turut adalah 0,84 persen , 2,56 persen , 1,27 persen , 2,62 persen dan 1,52 persen , menunjukkan bahwa ketepatan instrumen yang digunakan dalam penelitian ini baik. 2.8 Tes pengulangan

Ambil 6 sampelBentengdeserticola(contoh No. 49), siapkan larutan uji sesuai dengan metode pada butir 2.3, ukur luas puncak setiap puncak kromatografi, dan hitung kandungan yang sesuai. Hasil Rata-rata kandungan betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa (n=6) adalah 7,93 persen , 7,27 persen , 8,74 persen , 2,75 persen dan 4,81 persen , dan RSDs adalah 2,83 persen , 1,94 persen , {{ 18}}, masing-masing 97 persen dan 2,60. persen , 1,40 persen , menunjukkan bahwa metode tersebut memiliki pengulangan yang baik. 2.9 Uji stabilitas

Ambil larutan uji (sampel No. 49), injeksikan pada 0, 4, 8, 12, 16, dan 24 jam setelah persiapan pengukuran, dan hitung nilai RSD dari setiap puncak kromatografi. Hasil RSD betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa berturut-turut adalah 0,61 persen , 1,92 persen , 1,34 persen , 2,83 persen dan 0,69 persen , menunjukkan bahwa larutan uji memiliki hasil yang baik. stabilitas dalam 24 jam. 2.10 Tes pemulihan

Ambil 6 sampelBentengdeserticoladengan kandungan yang diketahui (sampel No. 49), timbang dengan akurat 0.25g, masukkan ke dalam labu takar berwarna coklat 50mL, dan ambil 25mL larutan referensi campuran secara akurat pada konsentrasi 1: 1 (yang mengandung {{10}},7900 mg betaine). mL-, fruktosa 0,7236 mg"mL-1, manitol 0,8812 mg·mL-1, glukosa 0,2708 mg·mL-1, sukrosa 0,4883 mg'mL-') ditambahkan ke sampel, dan larutan uji dibuat menurut metode di bawah 2.3 Dideteksi menurut kondisi kromatografi yang disebutkan di atas, dihitung pemulihannya, hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2, yang menunjukkan bahwa metode tersebut memiliki akurasi yang baik.

Tabel 2: Hasil pengukuran sample recovery rate 5 komponen yang akan diuji (n=6)

3 Diskusi

3.1 Pemilihan komponen indeks

Oligosakarida total dariBentengadalah bagian efektif dariBentenguntuk pencahar. Penulis menganalisis komposisi kimia bagian ini dengan LC-MS dan zat referensi, dan menentukan bahwa bagian ini terutama terdiri dari betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa. Oleh karena itu, 5 komponen ini dipilih sebagai komponen indeksBentengdeserticola, dan metode penentuan konten ditetapkan.

3.2 Pemilihan kolom kromatografi

Lima komponen yang akan diuji, betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa, relatif polar dan tidak dapat dipertahankan dalam kolom Cn fase terbalik. Umumnya, puncak muncul dalam 1-2 menit, dan komponen tidak dapat dipisahkan. Kolom amino Waters Bonopar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 m) dan Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 m) untuk pemisahan gula dan poliol, dan kolom amino berbasis polimer Prevail Carbohydrate ES ( 250 mm ×4,6 mm, 5 m), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm×4,6 mm, 5 m). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kolom amino matriks polimer secara efektif dapat memisahkan kelima komponen tersebut.

3.3 Pemilihan detektor

Lima komponen yang akan diuji tidak memiliki penyerapan UV yang jelas, dan kandungan detektor UV tidak dapat ditentukan secara langsung. Oleh karena itu, makalah ini menetapkan metode analisis kuantitatif untuk komponen gula alkohol dariBentengdeserticolamenggunakan HPLC-EISD. Hasil penelitian menunjukkan bahwa metode tersebut memiliki sensitivitas yang tinggi, pengulangan yang baik dan akurasi yang tinggi, dan dapat digunakan untuk pengendalian kualitasBentengdeserticoladan bahan obat lain yang mengandung betaine dan gula alkohol.

3.4 Investigasi metode persiapan larutan uji

Pelarut ekstraksi yang berbeda termasuk air, 30 persen metanol, 50 persen metanol, 70 persen metanol, metanol, dll dibandingkan masing-masing. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kecuali untuk tingkat ekstraksi yang sedikit lebih rendah dari pelarut metanol dan metanol 70 persen, tidak ada perbedaan yang signifikan pada pelarut lain, sehingga dilakukan pemilihan langsung. 50 persen metanol digunakan sebagai pelarut di bawah item "Penentuan Isi" dariBentengdi Farmakope Republik Rakyat Cina, dan disiapkan sesuai dengan metode persiapan larutan uji yang relevan, dan kemudian diencerkan 5 kali untuk menentukan komponen gula alkohol.

3.5 Deteksi dan analisis sampel dengan basis berbeda

Dalam penelitian ini, isi 5 komponen dalam 58 batchBentengdeserticoladan 10 batchBentengdeserticolabahan obat ditentukan. Fraksi massa betaine, manitol, fruktosa, glukosa dan sukrosa dalam 58 batchBentengdeserticolasampel adalah 2,73 persen -17,65 persen , 2,46 persen -16,34 persen , 2,52 persen {{10}},74 persen , 0,97 persen -14.06 persen , 3,15 persen -27,16 persen ; Manitol, fruktosa dan glukosa adalah 1,00 persen -13.04 persen , 2.98 persen -8.85 persen , 1,09 persen -5.33 persen dalam 10 batchBentengsampel, masing-masing, dan betaine dan sukrosa tidak terdeteksi. Kandungan bahan obat sangat berbeda antar batch, dan tidak ada aturan yang harus diikuti, yang menyarankan perlunya menetapkan standar penentuan kandungan untuk mengontrol kualitas bahan obat. Selain itu, metode ini dapat secara efektif membedakan dua jenis:Bentengtumbuhan dasar, yaituBentengtidak mengandung betaine dan sukrosa, sedangkan kandungan kedua komponen ini lebih tinggiDeserticola Cistanche. Hal ini juga memberikan dasar untuk menganalisis perbedaan tekstur dan habitat kedua bahan obat tersebutDeserticola Cistanche. Dibandingkan dengan bahan obatDeserticola Cistanche, teksturnya lebih lembut, dan secara lokal dikenal sebagai "Soft Dayun", sedangkanBentengDisebut "Chai Dayun" karena mengandung sukrosa (3,15 persen ~27,16 persen ). ).Deserticola Cistancheterutama didistribusikan di Alxa di Mongolia Dalam, sementaraBentengterutama didistribusikan di daerah Hotan Xinjiang, di mana suhunya lebih tinggi daripada di daerah Alxa, dan irigasi tetes sering digunakan di daerah setempat, tetapi begitu suhu turun,Bentengakan mengalami kerusakan yang parah. Kerusakan beku, di satu sisi, memiliki hubungan tertentu dengan kandungan airnya yang tinggi, dan di sisi lain, ada hubungannya dengan bahan-bahan yang dikandungnya. Betaine 243 adalah zat penyesuaian osmotik penting, yang memainkan peran penting dalam meningkatkan ketahanan stres tanaman, seperti ketahanan terhadap salinitas, kekeringan, suhu rendah, dan cahaya yang kuat. Justru karena tingginya kandungan betaine yang terkandung dalamDeserticola Cistanchebahwa ia memiliki ketahanan yang lebih baik terhadap kerusakan garam-alkali, kekeringan dan pembekuan daripadaBenteng, dan memiliki sebaran yang relatif luas.

3.6 AnalisisBentengdeserticolasampel dari asal yang berbeda

Di antara 58 kumpulan guruncistanchesampel bahan obat, 45 batch diproduksi dari Liga Alxa, Mongolia Dalam, 3 batch dari Wangyedi (Kabupaten Dengkou), Mongolia Dalam, dan 1 batch tidak diketahui. Semua 49 batch bahan obat memiliki kandungan 5 komponen yang berbeda. Namun, tidak ada perbedaan yang signifikan. Alasan untuk analisis ini mungkin karena semua bahan obat diproduksi di daerah gurun yang sama, ekologi dan lingkungan geografis serupa, dan kualitas produk relatif seragam dan stabil. Ada 3 batch diproduksi di Minqin County, Gansu, dan 6 batch dari Xinjiang. Menurut analisis pada Gambar 2, dibandingkan dengan bahan obat yang diproduksi di Mongolia Dalam, perbedaan utama tercermin dalam kandungan fruktosa dan sukrosa. Kandungan sukrosa bahan obat relatif paling tinggi, tetapi mengingat jumlah sampel yang sedikit dari kedua sumber tersebut, kesimpulan ini perlu diverifikasi dengan mengumpulkan lebih banyak sampel. 3.7 Ringkasan

Dalam penelitian ini, HPLC Wang ISD didirikan untuk penentuan simultan dari 5 bahan aktif pencahar, yang memberikan metode yang lebih nyaman, efisien dan akurat untuk kontrol kualitas.Deserticola Cistanche, dan memberikan dasar untuk meningkatkan standar kualitas dan pengembangan lebih lanjut dariBentengdeserticola. referensi yang berarti.

Referensi

1】 Komisi Farmakope Negara. Farmakope Republik Rakyat Tiongkok: A M】. Beijing: Pers Sains dan Teknologi Farmasi China, 2015;135.

2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Kemajuan penelitian tentang aktivitas farmakologis dariBentengPameran. Pengobatan Herbal Cina, 2003, 34(9); 113415.

3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Status penelitian efek farmakologis dari total glukosida di Cilantro [J]. Jurnal Farmakologi Klinis Cina, 2018, 34(4): 486-488.

4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Kemajuan penelitian neurofarmakologiDeserticola CistanchePameran [J]. Jurnal Farmasi Cina, 2011, 46(12): 887-890.

5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Kemajuan penelitian tentang efek farmakologis dariDeserticola Cistanchedalam pengobatan penyakit Alzheimer []. Jurnal Pengobatan Tradisional Tiongkok Shanghai, 2018, 52(1): 109-112.

6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou, dkk. Efek pencahar dari bagian terisolasi dariDeserticola CistanchePenelitian Eksperimental . China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen, dkk.Deserticola Cistancheekstrak galactitol Sebuah studi dosis-respons pada aksi tinja [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, dkk. Penelitian tentang bahan obat dariDeserticola Cistancheuntuk pencahar Penelitian [J]. Pengobatan Tiongkok Modern di Tiongkok, 2015, 17(4): 307-311.

9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, dkk. Tiga kegiatanDeserticola Cistanchedi bawah faktor-faktor yang mempengaruhi yang berbeda Analisis Kuantitatif Komponen J. Obat Herbal Cina, 2013, 44 (22): 32233230.

10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, dkk. PenentuanDeserticola Cistancheoleh HPLCEISD Isi Galactitol.Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan, dkk. Penentuan HPLCELSD dariBentengdan tabung Isi galactitol diBenteng[J]. Jurnal Pengobatan Tradisional Tiongkok Tiongkok, 2012, 19(8): 52-54.

12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao, dkk. Pengaruh betaine pada peningkatan ketahanan stres tanaman dan mekanisme kerjanya.Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

13】 Wang Qingjie, Wang Li. Tinjauan penelitian gen tahan dingin tanaman. Ekonomi dan Teknologi Pedesaan, 2018, 29(8): 23-25.