Cross‑reaktif, IgG Alami Mengenali L. Major Mempromosikan Internalisasi Parasit Oleh Sel Dendritik Dan Mempromosikan Imunitas Protektif

Abstrak

Pesan kunci

• Menggunakan tikus yang dimodifikasi secara genetik yang berbeda, kami menemukan bahwa antibodi ini dapat berupa IgG, bukan hanya IgM.

Kata kunci

Leishmania mayor · Sel dendritik · Sel B · IgG alami

Perkenalan

Infeksi dengan Leishmania spp. merupakan beban utama di negara-negara endemik. Manifestasi penyakit berkisar dari self-limited cutaneous leishmaniasis hingga disebarluaskan, berulang, mukokutan, dan penyakit visceral. Leishmaniasis visceral yang tidak diobati merupakan ancaman berat bagi kehidupan inang. Vaksin belum ada. Menyembuhkan dan seumur hidupkekebalanmelawan patogen intraseluler yang penting ini bergantung pada perkembangan sel Th1/Tc1 penghasil IFN, sedangkan persistensi parasit dan perkembangan penyakit dikaitkan dengan dominasi sel Th2, sel T pengatur, dan/atau respons Th17. Pelepasan IFN menyebabkan produksi NO yang menghilangkan parasit.Imunitas protektifdiinduksi oleh sel dendritik yang terinfeksi (DC). Setelah inokulasi Leishmania mayor ke dalam kulit oleh lalat pasir, bentuk kehidupan parasit promastigote dicerna oleh makrofag penghuni kulit (MΦ) dan neutrofil. Di dalam MΦ, parasit berubah menjadi bentuk kehidupan amastigote yang tidak bertanda dan bereplikasi. Kemudian, amastigot yang dilepaskan diambil oleh sel inang lainnya, seperti DC. DC yang terinfeksi memproses antigen parasit, dan bermigrasi ke kelenjar getah bening yang mengering dan sel T utama. Pelepasan IL-12, serta sitokin lain dari DC yang terinfeksi, mengarahkan pendidikan Th1/Tc1 sel T spesifik parasit.

Sedangkan MΦ menggunakan reseptor komplemen (CR)3 untuk serapan parasit, di DC, Fc RI/III bertanggung jawab untukparasitinternalisasi. Menariknya, sejak awal, serapan parasit terkait CR3-menyebabkan pembungkaman MΦ yang terinfeksi, sedangkan pada infeksi yang sudah ada, serapan amastigotes Fc Rmediated oleh MΦ menginduksi produksi IL-10 anti-inflamasi yang mempromosikan pengembangan Th2/Treg dan persistensi parasit. Penyerapan parasit yang dimediasi Fc R di DC, sebaliknya, menginduksi aktivasi sel, priming sel T CD4, dan juga presentasi silang antigen. Oleh karena itu, serapan parasit yang dimediasi antibodi oleh DC penting untuk pengembangan perlindungan terhadap parasit. Produksi anti-Leishmania IgG dengan demikian merupakan prasyarat untuk efisien (cross-)priming sel Th1 / Tc1 spesifik Leishmania. Sejalan, dengan tidak adanya sel B, perkembangan penyakit menjadi lebih parah dengan volume lesi yang lebih besar, beban parasit yang lebih tinggi, penundaan priming sel T, dan penurunan produksi IFNΓ. Sebelumnya, kami menunjukkan bahwa IgG spesifik Leishmania hadir dalam serum pada saat akumulasi DC pada lesi.

Masih menjadi pertanyaan terbuka bagaimana respons sel B awal terhadap parasit itu sendiri berkembang tanpa adanya sel B yang dipancing oleh DC yang terinfeksi. Apa yang disebut antibodi alami yang mengenali Leishmania spp. dapat memfasilitasi lebih awalinternalisasi parasitoleh DC. Selain itu, karena membran parasit mengandung fosfatidilserin yang mirip dengan badan apoptosis,lintas-reaktifantibodi mungkin berperan. Dalam penelitian ini, kami menilai apakah antibodi anti-fosfolipid yang dihasilkan, misalnya, selama kematian sel yang berlebihan atau IgG alami yang mengenali Leishmania yang ada pada hewan nonimun berkontribusi pada parasit mengambil DC untuk mempromosikan sel B dan sel T. Kami menemukan bahwa antibodi anti-fosfolipid dari murine atau serum manusia serta "IgG alami" dalam serum tikus normal (NMS) berikatan dengan parasit Leishmania, yang cukup untuk mempromosikanparasitinternalisasioleh DC dan mempromosikan hasil penyakit yang lebih baik secara in vivo.

Bahan dan metode

Hewan

Tikus C57BL / 6 berumur enam hingga delapan minggu dibeli dari Janvier. Tikus µMT yang kekurangan sel B disediakan dengan murah hati oleh Hansjörg Schild, Institut Imunologi, University Medical Center Mainz. Tikus IgGi dan IgMi (keduanya pada latar belakang C57BL/6) telah dijelaskan sebelumnya. Semua hewan ditempatkan di bawah kondisi spesifik bebas patogen (SPF) di Translational Animal Research Center (TARC) Universitas Johannes Gutenberg, Mainz. Semua percobaan dilakukan dengan lisensi yang disetujui dari Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Wilayah Rheinland-Pfalz.

Menurut penelitian herbal, telah dibuktikan bahwa cistanche adalah sejenis jamur yang telah digunakan dalam pengobatan tradisional Tiongkok selama berabad-abad. Itu terbuat dari batang kering dan batang jamur, yang tumbuh di daerah tropis dan subtropis di Asia. Biasa digunakan untukmeningkatkan kekebalan, menghilangkan rasa lelah, serta mengobati masuk angin dan infeksi lainnya.

Penelitian telah menunjukkan bahwacistanchedapat meningkatkan produksi antibodi, yang dapat membantu tubuh melawan penyerbu asing seperti virus dan bakteri. Telah ditemukan untuk meningkatkan jumlah dan aktivitas sel T, sejenis sel darah putih yang bertanggung jawab untuk membantu tubuh mengenali dan melawan penyerang berbahaya.

Selain itu, penelitian menunjukkan bahwa cistanche dapat mengurangi keparahan pilek, flu, dan infeksi virus lainnya. Telah ditemukan untuk mengurangi jumlah waktu yang dibutuhkan tubuh untuk pulih dari infeksi virus atau bakteri. cistanche juga dapat mengurangi durasi demam yang disebabkan oleh virus tertentu, serta mengurangi risiko berkembangnya infeksi sekunder.

Lebih-lebih lagi,cistanchediketahui memiliki sifat anti-inflamasi, yang dapat mengurangi peradangan yang terkait dengan penyakit tertentu. Studi juga menunjukkan bahwa dendrobium dapat membantu meningkatkan efektivitas antibiotik tertentu.

Klik Cistanche Organik yang Dijual di Dekat Saya

Untuk info lebih lanjut, silakan hubungi kami di:david.deng@wecistanche.com

Secara keseluruhan, penelitian menunjukkan bahwa cistanche dapat menjadi pengobatan yang bermanfaatmembaikkekebalandan melawan berbagai infeksi. Ini dapat membantu meningkatkan pertahanan alami tubuh, mengurangi keparahan dan durasi penyakit, dan bahkan dapat mengurangi risiko berkembangnya infeksi sekunder.

Parasit dan infeksi 

Amastigotes atau metacyclic promastigotes dari L. major clone VI (MHOM/IL/Friedlin) disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Amastigot diisolasi dari telinga BALB / c atau tikus µMT yang kekurangan sel B yang terinfeksi seperti yang dijelaskan sebelumnya. Parasit yang diisolasi diopsonisasi dengan 5 persen NMS, IMS, atau anti-PL selama 10 menit pada suhu 37 derajat dan dicuci sebelum infeksi in vitro atau in vivo.

Sera, pengayaan IgG, dan uji pengikatan parasit

Serum tikus normal (NMS) dihasilkan dari tikus naif C57BL/6, sedangkan serum imun (IS) diambil dari tikus yang disembuhkan yang terinfeksi dengan 2 × 10promastigotes metacyclic E5 dari L. mayor untuk Lebih dari atau sama sampai 6 minggu. Antibodi antifosfolipid (PL) serum dihasilkan oleh imunisasi berulang dengan thymocytes apoptosis. Sebelum serum dipanen, keberhasilan imunisasi diverifikasi dengan menilai pengikatan IgG spesifik pada sel apoptosis melalui flow cytometry atau dalam ELISA spesifik -glikoprotein. Kelompok mencit C57BL/6 diimunisasi dengan 2-glikoprotein ( 2G) rekombinan dengan adanya ajuvan Freud (FA); serum yang mengandung anti- 2G dipanen setelah 4 minggu. IgG Anti-Leishmania Lebih besar dari atau sama dengan 5–6-minggu L. mencit BALB/c yang terinfeksi mayor, IgG spesifik PL- atau b2G, dibuat dari kumpulan serum menggunakan kolom protein G (Pierce Chemical Co.) mengikuti protokol pabrikan. Sera disimpan pada suhu -20 derajat sebelum pemurnian IgG. IgG yang dimurnikan disimpan pada suhu 4 derajat (0,8 mg/mL) dalam PBS sebelum digunakan.

Serum manusia normal (NHS) berasal dari subjek kontrol yang sehat dan serum yang mengandung antibodi anti-Leishmania diperoleh dari pasien cutaneous leishmaniasis (LM) dari Marocco. Serum dari pasien dengan sindrom antifosfolipid (PL) juga digunakan.

Parasit (promastigotes atau amastigotes) diwarnai untuk Ig terkait permukaan menggunakan antibodi sekunder spesifik isotipe yang reaktif dengan Ig tikus: anti-IgM (Serotec), anti-IgG1 (A85-1), dan anti-IgG2a/b ( R2-40, semuanya dari BD Biosciences). Setelah pewarnaan, parasit dicuci dengan PBS/2 persen BSA, difiksasi, dan dianalisis dengan flow cytometry.

Stimulasi in vitro

DC yang diturunkan dari sumsum tulang dihasilkan dalam media RPMI/5 persen FCS yang dilengkapi dengan IL-4 (10 µg/mL) dan GM-CSF (10 µg/mL) selama 6 hari seperti yang dijelaskan sebelumnya. Sel dipanen pada hari ke 6 sebagai DC yang belum matang. 2 × 105 DC dikultur bersama dengan amastigot yang diopsonisasi dari tikus BALB / c atau µMT yang terinfeksi atau dikultur dengan promastigot metasiklik yang diopsonisasi (MOI 1: 5) selama 18 jam. Setelah itu, sel dipanen dan sitosin dihasilkan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Sel-sel yang diwarnai DifQuick dianalisis untuk keberadaan parasit intraseluler dan ekstraseluler. Setidaknya 200 sel dihitung per sampel.

Infeksi in vivo

Volume lesi diukur setiap minggu dalam tiga dimensi dan dilaporkan sebagai ellipsoid [(a/2×b/2×c/2)×4/3×π]. Parasit yang ada dalam jaringan lesi dihitung menggunakan uji pengenceran terbatas seperti yang dijelaskan sebelumnya.

Untuk pengukuran produksi sitokin spesifik antigen, pengeringan sel LN dari tikus C57BL/6 yang terinfeksi dipulihkan dan suspensi sel tunggal disiapkan. Satu juta sel LN/200 μL RPMI 1640 (Biokrom) lengkap ditambahkan ke 96-pelat sumur dengan SLA 25 ug/mL. Supernatan dipanen 48 jam setelah stimulasi dan diuji menggunakan ELISA khusus untuk IFNΓ (Sistem R&D), serta IL-4 dan IL-10 (BD).

Myeloid human DC terinfeksi parasit opsonisasi

Myeloid manusia CD1c plus DC (hDC) diisolasi dari darah tepi sesuai dengan instruksi pabrik menggunakan sistem isolasi sel magnetik dan kit isolasi DC manusia BDCA-1 (Miltenyi, Jerman). 1,5 × 107 sel disepuh dalam 2,5 mL RPMI 1640/2 persen plasma autologus. Untuk memperkaya kemurnian, sel dicuci dengan PBS hangat dan akhirnya dibiakkan dengan X-VIVO 15/plasma (1 persen ) ditambah dengan IL-4 manusia rekombinan (150 U/mL) dan GM-CSF (400 U/mL) . hDC imatur dipanen pada hari ke 6. 2 × 105 hDC dikultur bersama dengan amastigotes opsonized dari tikus µMT yang terinfeksi atau dikultur dengan promastigotes metacyclic opsonized (MOI 1: 5) selama 18 jam. Setelah itu, sel dipanen dan sitosin dihasilkan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Sel-sel yang diwarnai DifQuick dianalisis untuk keberadaan parasit intraseluler dan ekstraseluler. Setidaknya 200 sel dihitung per sampel.

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak StatView dan uji t Student yang tidak berpasangan.

Hasil

Serum yang mengandung antibodi antifosfolipid berikatan dengan L. mayor

Karena parasit dapat memasuki sel inang melalui proses yang disebut "mimikri apoptosis" dan karena L. bentuk kehidupan utama mengekspresikan fosfolipid pada permukaannya, kami menghasilkan serum yang mengandung antibodi antifosfolipid (PL) menggunakan protokol yang telah ditetapkan. Untuk tujuan ini, kelompok mencit C57BL/6 diinfeksi dengan L. mayor, pada diimunisasi dengan thymocytes apoptosis di hadapan ajuvan Freud (FA). Karena 2-glikoprotein ( 2G) adalah antigen utama dalam sindrom antifosfolipid (APS), kami juga mengimunisasi tikus dengan 2G di hadapan FA untuk mendapatkan serum yang mengandung antibodi anti- 2G. Sebagai kontrol, digunakan serum tikus normal (NMS) dari tikus C57BL/6 yang tidak terinfeksi dan serum imun (IS) dari tikus yang terinfeksi L. mayor.

Untuk menguji apakah serum tikus yang berbeda ini dari tikus naif atau yang diimunisasi mengandung antibodi yang berikatan dengan L. mayor, pertama-tama kami menilai pengikatan antibodi terhadap antigen parasit oleh ELISA, menggunakan lisat beku-cair promastigote L. mayor (antigen Leishmania larut, SLA) sebagai substrat (Gbr. 1A, kolom hitam). Sebagai standar, kami menggunakan IgG yang diisolasi dari serum tikus yang terinfeksi L. mayor. Menariknya, serum IS dan PL mengandung tingkat pengikatan antibodi yang sebanding dengan lisat Leishmania, yang 3-4 kali lipat lebih tinggi dibandingkan dengan pengikatan yang diamati dengan NMS atau serum dari tikus yang diimunisasi dengan bahan pembantu saja. Selain itu, serum yang mengandung antibodi 2G juga terikat pada SLA. Menggunakan ELISA spesifik untuk 2G (kolom putih), kami mengidentifikasi kadar 2G-IgG yang tinggi dalam serum, sedangkan kadar IgG 2G di semua serum lainnya berada di bawah batas deteksi.

Ara. 1 Detection of L. major cross-reactive antibodies in serum of mice containing antiphospholipid antibodies. Serum was obtained from groups of C57BL/6 mice that were left untreated (normal mouse serum, NMS) or which were infected for>6 minggu dengan 2× 105 L. mayor (serum imun, IS). Kelompok lain berulang kali diimunisasi dengan thymocytes apoptosis (anti-fosfolipid Ab, a-PL) atau rekombinan 2-glikoprotein (a- 2G) dengan adanya ajuvan Freuds (FA) yang tidak lengkap, FA digunakan sebagai kontrol. Serum diuji reaktivitasnya dalam ELISA menggunakan L. mayor lisat sebagai substrat atau 2-glikoprotein. ELISA dikembangkan menggunakan anti-murine IgG. Data dinyatakan sebagai rata-rata (±SEM, n Lebih besar dari atau sama dengan 1). B metacyclic promastigotes dari L. mayor diperoleh dari kultur fase diam (n{{10}}). C Amastigotes dibuat dari lesi tikus µMT yang kekurangan sel B (n=3). Preparat B dan C Parasit diopsonisasi dengan sera yang berbeda (5 persen , 10 menit, 37 derajat ). Pengikatan antibodi dinilai oleh FACS dengan antibodi sekunder anti-tikus. Pengikatan Ig dihitung berdasarkan tingkat dasar dari parasit yang tidak teropsonisasi (*p Kurang dari atau sama dengan 0,05,**p Kurang dari atau sama dengan 0,005, dan ***p Kurang dari atau sama dengan 0,002)

Selanjutnya, kami menginkubasi promastigotes metacyclic tahap infeksius L. mayor dengan konsentrasi IgG berbeda yang diperkaya dari serum IS, PL, atau 2G. Kami mengamati pengikatan IgG turunan IS dan 2G yang tergantung dosis dengan maksimum pada 100 ng / mL (Gbr. 1B). Pengikatan IgG turunan PL ke promastigot L. mayor tidak terdeteksi.

Selain itu, kami menginkubasi L. amastigotes mayor yang diisolasi dari lesi tikus µMT yang kekurangan sel B dengan serum yang berbeda selama 10 menit. Parasit kemudian dicuci secara ekstensif, dan setelah itu, antibodi yang terikat permukaan dideteksi dengan flow cytometry setelah pelabelan dengan anti-IgG1 terkonjugasi PE, antiIgG2a/b, atau anti-IgM (Gbr. 1C). Seperti yang diharapkan, IS mengandung IgM, IgG1, dan IgG2a/b khusus Leishmania. Kami juga mengkonfirmasi pekerjaan sebelumnya, karena kami mendeteksi IgM spesifik Leishmania di kumpulan yang disebut "Ab alami". Menariknya, kami juga menemukan IgG dan IgM dalam serum PL yang kuatbereaksi silangdengan permukaan amastigotes L. mayor. Anti- 2Antibodi yang mengandung IgG tidak berikatan dengan Leishmania, tetapi serum 2G mengandung IgMbereaksi silangdengan permukaan amastigot.

Antibodi lintas-reaktif memediasi internalisasi parasit oleh DC

Kami selanjutnya bermaksud untuk menilai apakah antibodi IgG berbeda yang mampu mengikat permukaan amastigotes L. mayor aktif secara fungsional. Jadi, kami menghasilkan DC menggunakan kultur sel sumsum tulang (BM) yang dilengkapi dengan GMCSF dan IL-4. BM-DC dipanen sebagai sel imatur pada hari ke 6 dan disepuh pada 2×105 sel/mL. Amastigotes parasit yang berasal dari alas kaki yang terinfeksi dari tikus BALB / c tipe liar atau defisiensi sel B µMT diopsonisasi dengan sera yang berbeda (5 persen vol ), dicuci secara ekstensif, dan kemudian ditambahkan ke DC dalam rasio parasit / sel 5: 1. Setelah 18 jam, sel dipanen, dicuci, dan sitosin.

Parasitinternalisasiditentukan pada slide DifQuickstained pada 100 × (Gbr. 2). Seperti dijelaskan, penyerapan parasit yang diisolasi dari tikus µMT terganggu secara signifikan. Pra-inkubasi dengan NMS sedikit meningkatkan serapan parasit, sedangkan inkubasi dengan IS menyebabkan "normalisasi" tingkat infeksi DC ke tingkat yang diamati dengan amastigot turunan BALB / c. Sebagai catatan, opsonisasi parasit dengan PL juga secara signifikan dan jelas meningkatkan tingkat infeksi DC hingga ~ 100 persen . Sejalan dengan tingkat opsonisasi IgG yang lebih rendah dari amastigot dengan serum yang mengandung b2G (bandingkan Gambar 1C), ini juga meningkatkan tingkat infeksi DC, tetapi pada tingkat yang lebih rendah.

Gambar 2Opsonisasi L. mayor dengan antibodi reaktif silang mengarah pada peningkatan serapan parasit oleh DC. C57BL/6 BMDC(2× 105) yang belum dewasa dikultur bersama dengan amastigot dari BALB/c atau tikus µMT yang kekurangan sel B (1:3). Sebelum ko-inkubasi, amastigot diopsonisasi dengan serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), serum yang mengandung antibodi anti-fosfolipid yang diperoleh dengan imunisasi berulang dengan timosit apoptosis (aPL), atau serum yang mengandung glikoprotein anti- 2 antibodi (2G). Setelah 18 jam, tingkat infeksi ditentukan pada sitospin dengan mikroskop cahaya (n=3, *p Kurang dari atau sama dengan 0.05,**p Kurang dari atau sama dengan 0,005, dan ***p Kurang dari atau sama dengan 0,002 dibandingkan dengan kontrol tanpa operasi)

Antibodi anti-fosfolipid lintas-reaktif meningkatkan hasil penyakit pada leishmaniasis kulit

Dalam percobaan selanjutnya, kami ingin menilai apakah opsonisasi parasit denganlintas-reaktifantibodi mengubah hasil penyakit in vivo. Untuk tujuan ini, promastigotes metacyclic yang diisolasi dan diperkaya dari kultur parasit diopsonisasi dengan sera yang berbeda seperti yang dijelaskan di atas. Parasite opsonized dengan NMS berfungsi sebagai kontrol negatif. Setelah pencucian parasit yang ekstensif, kelompok lima mencit C57BL/6 diinfeksi secara intradermal dengan 103 L. mayor. Perkembangan lesi dipantau selama ~ 4 bulan. Sejalan dengan temuan sebelumnya, parasit yang diopsonisasi dengan IS menginduksi lesi telinga yang lebih kecil sejalan dengan peningkatan frekuensi DC kulit yang terinfeksi pada titik waktu awal (Gbr. 3). Anehnya, parasit yang diopsonisasi dengan PL atau 2G juga mempromosikan hasil penyakit yang sama seperti yang ditentukan oleh 50 persen pengurangan volume lesi antara minggu ke 5 dan 8 pasca infeksi.

Antibodi anti-fosfolipid lintas-reaktif meningkatkan hasil penyakit pada leishmaniasis kulit

Dalam percobaan selanjutnya, kami ingin menilai apakah opsonisasi parasit denganlintas-reaktifantibodi mengubah hasil penyakit in vivo. Untuk tujuan ini, promastigotes metacyclic yang diisolasi dan diperkaya dari kultur parasit diopsonisasi dengan sera yang berbeda seperti yang dijelaskan di atas. Parasite opsonized dengan NMS berfungsi sebagai kontrol negatif. Setelah pencucian parasit yang ekstensif, kelompok lima mencit C57BL/6 diinfeksi secara intradermal dengan 103 L. mayor. Perkembangan lesi dipantau selama ~ 4 bulan. Sejalan dengan temuan sebelumnya, parasit yang diopsonisasi dengan IS menginduksi lesi telinga yang lebih kecil sejalan dengan peningkatan frekuensi DC kulit yang terinfeksi pada titik waktu awal (Gbr. 3). Anehnya, parasit yang diopsonisasi dengan PL atau 2G juga mempromosikan hasil penyakit yang sama seperti yang ditentukan oleh 50 persen pengurangan volume lesi antara minggu ke 5 dan 8 pasca infeksi.

Selanjutnya, kami menggunakan amastigot µMT yang diinkubasi dengan 100 µg IgG yang diperkaya dari NMS, IS, atau PL (Gbr. 4). Sekali lagi, kami mengamati bahwa baik IgG dari IS atau PL menghasilkan penyakit yang lebih ringan dengan lesi yang lebih kecil, dibandingkan dengan parasit yang tidak teropsonisasi (Gbr. 4A). Sejalan, beban parasit jaringan lesi sebagaimana ditentukan pada minggu ke 6 pasca infeksi mengungkapkan (secara signifikan) beban parasit yang lebih kecil pada infeksi yang dimulai dengan adanya antibodi pengikat parasit (Gbr. 4B). Restimulasi spesifik antigen dari pengeringan sel kelenjar getah bening dengan SLA mengungkapkan tingkat IFN yang tidak berubah, sedangkan tingkat IL-4 dan IL-10 yang lebih rendah ditemukan pada tikus yang terinfeksi parasit yang diopsonisasi IgG (Gbr. 4C) . Hal ini sejalan dengan penurunan ukuran lesi karena penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa eliminasi parasit pada tikus bergantung pada aktivasi MΦ yang terinfeksi oleh IFN lesional, yang dilawan oleh IL-4 dan — yang sangat penting — IL-10 . Dengan demikian, efek IL-10 pada MΦ yang terinfeksi menyebabkan kegigihan parasit. Dengan demikian, rasio antara IFN di satu sisi, dan sitokin terkait Th2/Treg seperti IL-4 dan IL-10 tampaknya paling relevan untuk hasil penyakit.

Menariknya, bagaimanapun, dalam pengaturan ini, volume lesi yang lebih kecil juga diamati, ketika IgG dari NMS digunakan untuk opsonisasi yang menunjukkan adanyalintas-reaktifantibodi alami dalam serum tikus naif juga.

Antibodi spesifik Leishmania dan reaksi silang dapat menggantikan kekurangan IgG secara genetik

Untuk menganalisis dengan lebih baik kontribusi spesifik subtipe imunoglobulin dalam respons terhadap Leishmania, kami menggunakan tikus IgMi dan IgG1i yang telah kami hasilkan sebelumnya. Tikus IgMi adalah tikus di mana semua sel B mengekspresikan IgM, tetapi tidak dapat beralih kelas atau mengeluarkan antibodi. Pada tikus IgG1i, semua sel B berkembang menggunakan IgG1 sebagai reseptor sel B mereka, tetapi sel-sel ini juga tidak dapat beralih kelas tetapi mampu mengeluarkan antibodi IgG1. Kami menginfeksi tikus IgMi dan IgG1i pada latar belakang genetik C57BL/6 dengan 103 L. mayor. Kami menemukan bahwa keberadaan IgG1 dalam serum cukup bagi tikus untuk memberikan respons penuh terhadap parasit, mirip dengan hewan tipe liar (Gbr. 5A). Sebaliknya, tidak adanya antibodi yang disekresikan seperti yang terlihat pada tikus IgMi cukup untuk menunda pemulihan tikus (Gambar 5A).

Selanjutnya, kami menyusun kembali tikus IgMi atau kontrol tipe liar dengan NMS atau IS dan kemudian menginfeksinya dengan L. promastigotes mayor. Seperti yang diharapkan, pada kedua galur tikus, rekonstitusi IS menginduksi lesi in vivo yang jauh lebih kecil yang mengonfirmasi bahwa serapan parasit yang dipercepat yang dimediasi IgG oleh DC meningkatkan anti-Leishmaniakekebalan(Gbr. 5B). Akhirnya, kami menilai hasil penyakit setelah penggunaan parasit opsonisasi. Sebelum infeksi tikus IgMi, parasit diopsonisasi dengan IgG yang diperkaya dari serum NMS, IS, atau PL (Gbr. 5C). Sejalan dengan percobaan yang ditunjukkan pada Gambar. 5B, parasit yang diopsonisasi IS memfasilitasi peningkatan pertahanan parasit. Sekali lagi, antibodi antifosfolipid mampu menggantikan IgG spesifik Leishmania dari IS di mana kedua antibodi IgG terikat pada L. promastigot utama sebelum infeksi meningkatkan hasil penyakit yang lebih baik pada tikus IgMi. Parasit yang diopsonisasi IS dan PL menginduksi volume lesi yang jauh lebih kecil dan penyembuhan lebih awal dibandingkan dengan parasit yang tidak diopsonisasi.

Yang penting, pemberian NMS ke tikus IgMi "menormalkan" fenotipe mereka untuk hasil penyakit yang diamati pada tikus C57BL / 6 (Gbr. 5B). Temuan ini sejalan dengan data kami yang ditunjukkan di atas yang menunjukkan bahwa NMS juga mengandung alintas-reaktifisotipe IgG antibodi yang mampu mengikat parasit dengan konsekuensi fungsional berikutnya secara in vitro dan in vivo. Konfirmasi lebih lanjut datang dari tikus IgMi yang terinfeksi parasit berlapis NMS, yang juga mampu mengendalikan infeksi dengan lebih baik (Gbr. 5C).

Ara. 4Parasit yang diopsonisasi antibodi menginduksi kekebalan yang efisien pada µMT yang kekurangan sel B. Parasit diopsonisasi dengan serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), serum yang mengandung antibodi antifosfolipid (a-PL), atau — hanya tikus C57BL/6 — serum yang mengandung antibodi anti- 2 glikoprotein (2G) di kehadiran ajuvan Freud (FA). Kelompok tikus yang berukuran lebih dari atau sama dengan 5 µMT terinfeksi dengan 103 promastigot metasiklik L. mayor yang diopsonisasi. Perkembangan lesi dinilai setiap minggu. B Pada minggu ke-6, muatan parasit lesional dari tikus µMT yang terinfeksi ditentukan dengan membatasi uji pengenceran. Nomor parasit individu ditampilkan; bar mengungkapkan berarti. C Profil sitokin sel µMT LN yang mengering ditentukan dengan restimulasi dengan antigen Leishmania terlarut (SLA). Pelepasan IFNΓ, IL{{10}}, dan IL-10 ke 48-h supernatan dinilai oleh ELISA (rata-rata ± SEM, n=15 tikus/grup dari independen 3 percobaan, *p Kurang dari atau sama dengan 0.05, **p Kurang dari atau sama dengan 0,005, dan ***p Kurang dari atau sama dengan 0,002 dibandingkan dengan tikus yang terinfeksi parasit yang tidak diopsonisasi)

Serum manusia mengandung antibodi lintas-reaktif parasit yang aktif secara fungsional

Untuk menguji relevansi temuan kami untuk manusia, promastigotes atau amastigotes yang diisolasi dari tikus µMT yang kekurangan sel B diopsonisasi dengan serum manusia normal (NHS), serum dari L. pasien yang terinfeksi mayor (LM), atau serum dari pasien APS (APS ). IgG yang terikat permukaan pada parasit ditentukan menggunakan flow cytometry. Menariknya, serum LM terikat lemah pada permukaan promastigotes, tetapi kuat pada amastigotes. Menariknya, serum APS mengandung kadar IgG yang serupalintas-reaktifdengan permukaan parasit (Gbr. 6A).

IgG selanjutnya diperkaya dari sera LM menggunakan kolom protein A (Gbr. 6B). Ini dan berbagai konsentrasi imunoglobulin intravena (IVIG) yang digunakan untuk pengobatan berbagai gangguan (kekebalan) pasien selanjutnya digunakan untuk opsonisasi parasit sebelum flow cytometry. Leishmania IgG terikat secara signifikan dengan promastigotes dan amastigotes dari L. mayor. Menariknya, IVIG yang tersedia secara komersial mengandung IgG itubereaksi silangbaik dengan preparat parasit promastigote maupun amastigote.

Akhirnya, CD1c plus DC myeloid manusia primer dari mantel buffy diinkubasi dengan µMT amastigot L. mayor yang diinkubasi dengan serum LM atau serum dari pasien APS atau IVIG (MOI 3; Gbr. 7). Mengonfirmasi data murine kami menggunakan sel manusia, kami mengamati bahwa keberadaan IgG (lintas-reaktifatau khusus Leishmania) pada permukaan Leishmania sudah cukup untuk mempromosikan peningkatanparasitinternalisasioleh DC. Serum APS meningkatkan persentase DC yang terinfeksi hampir 100 persen , sedangkan serum LM dan IVIG meningkatkan serapan parasit sebesar 30 persen dibandingkan dengan parasit yang tidak diopsonisasi. Menariknya, serum NMS juga mengandung promosi IgG parasit-reaktifparasitinternalisasi.

Ara. 5 Tikus C57BL/6, IgMi, dan IgGi yang dilarutkan dengan serum yang berbeda atau terinfeksi dengan IgG opsonisasi L. mayor yang dimurnikan berbeda menunjukkan hasil penyakit yang lebih baik. Sekelompok tikus yang lebih besar dari atau sama dengan 5 C57BL/6, C57BL/6 IgMi, atau IgGi terinfeksi dengan inokula L. mayor dosis rendah fisiologis (103 promastigotes metacyclic). B Satu minggu sebelum infeksi, mencit C57BL/6 dan B6 IgMi dilarutkan ip dua kali dengan 100 µL serum tikus normal (NMS) atau serum imun (IS). C Sebelum infeksi tikus IgMi, parasit diopsonisasi dengan IgG yang diperkaya dari serum dengan mengikat kolom protein A [serum tikus normal (NMS), serum imun (IS), atau serum yang mengandung antibodi anti-fosfolipid (a-PL)]. Perkembangan Lesi A–C dinilai setiap minggu (rata-rata ± SEM, n=10 tikus/grup dari 2 eksperimen independen, *p Kurang dari atau sama dengan 0,05, **p Kurang dari atau sama dengan 0,005, dan *** p Kurang dari atau sama dengan 0,002 dibandingkan dengan C57BL/6 [A], C57BL/6 atau IgMi [B], atau tidak ada [C])

Ara. 6Antibodi antifosfolipid dalam serum manusia bereaksi silang dengan molekul permukaan utama L.. Promastigot metasiklik dari kultur fase diam atau amastigot lesional L. mayor yang diisolasi dari tikus µMT diopsonisasi dengan berbagai jenis serum manusia (5 persen ) atau IgG murni. Serum manusia normal (NHS) diperoleh dari subyek kontrol yang sehat. Sera dari pasien dengan leishmaniasis kulit yang terbukti (LM, didapat di Marocco, n=4) dan dari pasien dengan sindrom antifosfolipid (PL, n=3) juga digunakan. B IgG diperkaya dari serum LM menggunakan kolom protein A (n=3). Konsentrasi yang berbeda dari imunoglobulin intravena (IVIG, n=2) digunakan (µg/mL). Parasit A ​​dan B dianalisis untuk pengikatan permukaan total Ig manusia menggunakan flow cytometry. Pengikatan Ig dihitung dalam kaitannya dengan tingkat dasar dari parasit yang tidak teropsonisasi (rata-rata±SEM, *p Kurang dari atau sama dengan 0.05, **p Kurang dari atau sama dengan {{10 }}.005, dan ***p Kurang dari atau sama dengan 0.002)

Diskusi

Penyembuhan dari leishmaniasis kutaneus membutuhkan pelepasan sel T yang efisien dan pelepasan IFN, keduanya bergantung pada DC yang terinfeksi untuk menghadirkan antigen ke sel T yang naif. Tidak seperti fagositosis dependen CR3-oleh MΦ, kami telah menunjukkannyaparasitinternalisasioleh DC terjadi melalui Fc RI dan Fc RIII, yang dapat saling menggantikan. Dengan demikian, tikus defisien Fc -, Fc RI/ Fc RIII, dan tikus defisien sel B µMT (semuanya dengan latar belakang C57BL/6) mengembangkan lesi yang lebih besar dan penyembuhan tertunda, jika dibandingkan dengan tikus tipe liar, karena gangguan DC- priming sel T tergantung. Studi kami saat ini mengkonfirmasi pengamatan sebelumnya, tetapi di samping itu, data kami menggunakan tikus IgMi dan IgGi juga menunjukkan bahwa memang antibodi yang disekresikan, dan bukan hanya keberadaan sel B, sangat penting untuk meningkatkan respons yang efektif terhadap parasit. Dengan demikian, mirip dengan tikus yang kekurangan sel B, tikus IgMi dengan sel B yang tidak mampu memproduksi IgG menunjukkan ukuran lesi yang lebih besar dibandingkan dengan tikus IgGi atau tikus tipe liar.

Karena amastigotes yang diopsonisasi NMS dan IS diambil ke tingkat yang sama dan promastigotes yang diopsonisasi NMS tidak difagositosis oleh DC (dengan pengikatan IgM yang efisien ke permukaannya), kami sebelumnya menyimpulkan bahwa IgM tidak diperlukan untuk serapan parasit. Dalam penelitian ini, kami dapat mengkonfirmasi temuan ini dengan menggunakan serum tikus normal pada tikus yang kekurangan sel B sama sekali atau hanya mengeluarkan antibodi. Selanjutnya, kami dapat menunjukkan bahwa serum yang mengandung IgG1-dapat meningkatkan masuknya amastigot ke DC manusia dan tikus.

Masih belum terselesaikan bagaimana respons sel B awal berkembang tanpa adanya DC yang terinfeksi. Salah satu kemungkinannya adalah di kumpulan IgG "alami",lintas-reaktifantibodi mungkin dapat mengenali parasit dan berfungsi sebagai pengganti antibodi spesifik Leishmania yang berkembang di kemudian hari (meningkat antara minggu ke-4 dan minggu ke-6 pasca infeksi). Selain antibodi spesifik antigen, apa yang disebut antibodi alami diproduksi oleh sel B-1 pada tikus dan manusia setelah lahir. Beberapa memiliki kemampuan untuk mengenali antigen diri; untuk waktu yang lama, diyakini mereka kurang spesifik untuk antigen asing. Belakangan, data memberikan bukti IgM alami yang mengenali beragam antigen mikroba dan berkontribusi pada eliminasi patogen. Namun baru-baru ini, beberapa penelitian mengungkapkan bahwa IgG alami berperan dalambawaan kekebalandemikian juga. Itu terbukti berinteraksi dengan lektin terkait patogen (misalnya, MBL), dan membentuk kompleks imun untuk membersihkan patogen. IgG alami yang terikat patogen juga diharapkan berinteraksi dengan PRR lain, seperti C1q, untuk mengaktifkan jalur komplemen klasik. Telah ditunjukkan bahwa IgG alami secara khusus bekerja sama dengan lektin terkait patogen untuk mendapatkan aksi antimikroba yang efektif melawan infeksi oportunistik Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus.

Selama kematian sel apoptosis, paparan fosfatidilserin (PS) pada badan apoptosis diamati. Pengenalan inang terhadap PS pada permukaan sel yang sekarat atau mati melalui antibodi merupakan langkah penting dalam pembersihannya. Dalam proses yang disebut "mimikri apoptosis", parasit Leishmania diketahui juga mengekspos PS di permukaannya sendiri yang berfungsi sebagai sinyal "makan-saya" untuk sel fagosit, mirip dengan yang terlihat oleh sel apoptosis. Selain itu, beberapa promastigotes tahap menular mati (tanpa keterlibatan caspases) dan mengekspos PS sendiri. Bentuk kehidupan amastigote intraseluler wajib, bagaimanapun, semua mengekspos PS di permukaannya memungkinkan mereka untuk memasuki sel inang secara efisien. Kami sekarang menilai apakah antibodi PL yang diinduksi secara artifisial mampu mengenali parasit Leishmania dan apakah ini aktif secara fungsional untuk memfasilitasi masuknya parasit ke dalam sel inang yang relevan. Kami mengamati bahwa antibodi anti-fosfolipid murine dan manusia mengikat bentuk kehidupan Leishmania. Menggunakan pendekatan yang berbeda, kami mengidentifikasilintas-reaktifantibodi dalam serum PL yang tampaknya secara istimewa mengikat fosfolipid permukaan L. mayor. Menariknya, meskipun parasit promastigote juga mengekspresikan fosfolipid ini seperti yang ditunjukkan dengan menggunakan antigen parasit terlarut dari bentuk kehidupan parasit ini dalam ELISA, fosfolipid permukaan tampaknya lebih terekspos pada amastigote. Selain itu, kami menunjukkan bahwa opsonisasi IgG ini cukup untuk mendorong penyerapan parasit oleh DC. Yang penting, in vivo, parasit PL-opsonisasi menginduksi hasil penyakit yang lebih baik dengan volume lesi yang lebih kecil dan resolusi lesi yang lebih awal. Jadi, sejalan dengan pengamatan sebelumnya dari kelompok kami, karena adanya peningkatan infeksi DC(reaktif silang)IgG pada parasit, induksi preferensi sel Th1/Tc1 diinduksi terkait dengan penurunan jumlah sel Th2 dan Treg, dan dengan demikian hasil penyakit yang lebih baik.

Gambar 7DC myeloid primer dari darah manusia secara istimewa menginternalisasi parasit denganlintas-reaktifIgG antifosfolipid terikat pada permukaannya. CD1a plus DC manusia myeloid diisolasi dari mantel buffy menggunakan manik-manik MACS dan disepuh pada 2 × 105 sel/mL. Amastigot yang diisolasi dari tikus µMT diinkubasi dengan serum 5 persen atau 10 µg/mL IVIG sebelum koinkubasi dengan DC (1:3). Setelah 18 jam, tingkat infeksi ditentukan pada sitospin dengan mikroskop cahaya (n=3, *p Kurang dari atau sama dengan 0,05, dan ***p Kurang dari atau sama dengan 0,002 dibandingkan dengan kontrol yang tidak diopsonisasi)

Menariknya, kami menemukan bahwa parasit yang diopsonisasi dengan NMS meningkatkan hasil penyakit yang lebih baik dibandingkan dengan parasit yang tidak diopsonisasi yang menunjukkan adanya IgG alami di NMS yang mampu mengenali Leishmania. Ini paling baik terlihat di IgMi (tanpa sel B yang mampu menghasilkan IgG apa pun) diganti dengan NMS. Di sini, ukuran lesi tikus IgMi yang jelas lebih besar direduksi menjadi ukuran tikus C57BL / 6 tipe liar (Gbr. 5). Namun, keberadaannya alami, Leishmanialintas-reaktifIgG juga diamati pada tikus tipe liar yang terinfeksi parasit yang diopsonisasi NMS dibandingkan dengan parasit yang tidak diopsonisasi. Spesifisitas IgG alami ini dalam murine dan serum manusia tidak jelas hingga saat ini. Sangat menggoda untuk berspekulasi bahwa ini juga merupakan antibodi yang mengenali PS pada permukaan parasit karena mereka secara istimewa mengikat amastigotes dengan paparan PS yang diketahui lebih tinggi dibandingkan dengan promastigotes juga.

Kami menemukan bahwa serum subjek kontrol manusia yang sehat (dari daerah di mana leishmaniasis hanya dilaporkan sebagai penyakit perjalanan dan tidak ada riwayat infeksi sebelumnya) juga mengandung IgG yang mampu mengikat L. amastigotes mayor dan meningkatkan penyerapan parasit oleh DC. Penting untuk dicatat bahwa IVIG yang digunakan untuk penelitian kami disiapkan di Jerman (non-endemik untuk leishmaniasis). Menariknya, IgG manusia yang diperkaya dari IVIG dari individu Leishmania-negatif sehingga mengandung IgG yang mampu mengikat promastigotes dan (mungkin karena paparan PS yang lebih tinggi) L. amastigotes mayor. Sejalan dengan itu, serum pasien APS dengan antibodi antifosfolipid tingkat tinggi mengandung IgG yang lebih disukai terikat pada amastigotes, lebih rendah pada promastigotes. Baik IgG dari sera APS maupun IgG dari IVIG mempromosikan penyerapan parasit yang ditingkatkan oleh DC manusia primer ke tingkat yang sebanding (atau bahkan lebih baik dalam kasus sera APS yang mengandung PL) dengan IgG yang diturunkan dari serum imun dari pasien leishmaniasis.

Singkatnya, data kami menunjukkan bahwa serum manusia dan tikus normal, bahkan diambil dari individu yang tidak pernah terpapar Leishmania, mengandung antibodi IgG yang mampu mengikat parasit ini, memfasilitasi penelanannya oleh DC, dan meningkatkan respons kekebalan pelindung dari tuan rumah. Meskipun antigen Leishmania yang dikenali tidak sepenuhnya jelas, beberapa reaktivitas dapat diarahkan terhadap fosfolipid yang lebih banyak pada amastigote, dibandingkan dengan permukaan promastigote. Temuan kami dapat membuka jalan untuk merancang terapi yang lebih baik untuk parasit ini dan bahkan dapat berfungsi sebagai tindakan pencegahan lini pertama bagi individu yang bepergian ke daerah yang terinfeksi Leishmania.

Terima kasih

Para penulis dengan tulus berterima kasih kepada Mark C. Udey dan Philipp von Landenberg atas diskusi yang membantu dan menyediakan sampel pasien.

Kontribusi penulis 

FD, SLK, dan ST melakukan percobaan yang dijelaskan dalam naskah ini. ST, AW, dan EvS mendapatkan pendanaan untuk proyek tersebut dan mengawasi pekerjaan tersebut. AW dan EvS menulis naskahnya.

Pendanaan

Pendanaan Akses Terbuka diaktifkan dan diselenggarakan oleh Projekt DEAL. Studi ini didukung oleh dana dari DFG (SFB 490 ke EvS dan AW dan SFB 1292 ke EvS, AW, dan ST) dan Center for Molecular Medicine (CMMC) Cologne ke EvS.

Ketersediaan data dan bahan 

Tak dapat diterapkan.

Deklarasi

Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi

Semua percobaan dengan tikus dilakukan sesuai dengan panduan negara bagian Rhineland Pfalz.

Persetujuan untuk publikasi

Semua penulis menyetujui untuk publikasi.

Kepentingan yang bersaing

Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan yang bersaing.

Akses Terbuka Artikel ini dilisensikan di bawah Creative Commons Attribution 4.0 Lisensi Internasional, yang mengizinkan penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam media atau format apa pun, selama Anda memberikan penghargaan yang sesuai kepada penulis aslinya (s) dan sumbernya, berikan tautan ke lisensi Creative Commons, dan tunjukkan jika ada perubahan. Gambar atau materi pihak ketiga lainnya dalam artikel ini termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel kecuali dinyatakan lain dalam batas kredit materi. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan tujuan penggunaan Anda tidak diizinkan oleh peraturan undang-undang atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta.

Referensi

1.Burza S, Croft SL, Boelaert M (2018) Leishmaniasis Lancet 392:951–970.

2. von Stebut E, Tenzer S (2018) Cutaneous leishmaniasis: fungsi berbeda dari sel dendritik dan makrofag dalam interaksi sistem kekebalan inang dengan Leishmania mayor. Int J Med Microbiol 308:206–214.

3. Sacks D, Noben-Trauth N (2002) Imunologi kerentanan dan resistensi terhadap Leishmania mayor pada tikus. Nat Rev Immunol 2:845–858.

4. de Freitas ESR, von Stebut E (2021) Mengungkap peran pos pemeriksaan kekebalan dalam leishmaniasis. Immunol depan 12:620144.

5. Schonlau F, Scharfetter-Kochanek K, Grabbe S, Pietz B, Sorg C, Sunderkotter C (2000) Dalam defisiensi leishmaniasis eksperimental CD18 menghasilkan penyebaran parasit yang terkait dengan perubahan fungsi makrofag dan respons sel Th1 yang tidak lengkap.Eur J Immunol 30: 2729–2740.

6. Woelbing F, Kostka SL, Moelle K, Belkaid Y, Sunderkoetter C, Verbeek S, Waisman A, Nigg AP, Knop J, Udey MC, dkk (2006) Penyerapan Leishmania mayor oleh sel dendritik dimediasi oleh reseptor Fcgamma dan memfasilitasi perolehan kekebalan protektif. J Exp Med 203:177–188

7. Nagele EP, Han M, Acharya NK, DeMarshall C, Kosciuk MC, Nagele RG (2013) Autoantibodi IgG alami berlimpah dan ada di mana-mana dalam serum manusia dan jumlahnya dipengaruhi oleh usia, jenis kelamin, dan penyakit. PLoS SATU 8:e60726.

8. Lutz HU, Binder CJ, Kaveri S (2009) Autoantibodi alami dalam homeostasis dan penyakit. Tren Immunol 30:43–51.

9. Wanderley JL, Barcinski MA (2010) Apoptosis dan mimikri apoptosis: koneksi Leishmania. Sel Mol Life Sci 67:1653–1659.

10. Waisman A, Croxford AL, Demircik F (2008) Alat baru untuk mempelajari peran sel B dalam infeksi sitomegalovirus. Med Mikrobiol Immunol 197:145–149

11. Von Stebut E, Ehrchen JM, Belkaid Y, Kostka SL, Molle K, Knop J, Sunderkotter C, Udey MC (2003) Interleukin 1alpha mempromosikan diferensiasi Th1 dan menghambat perkembangan penyakit pada tikus BALB / c yang rentan terhadap Leishmania. J Exp Med 198:191–199

12. Levine JS, Subang R, Nasr SH, Fournier S, Lajoie G, Wither J, Rauch J (2006) Imunisasi dengan protein pengikat sel apoptosis merekapitulasi nefritis dan munculnya autoantibodi berurutan dari lupus eritematosus sistemik. J Immunol 177:6504–6516.

13. Wanderley JLM, DaMatta RA, Barcinski MA (2020) Mimikri apoptosis sebagai strategi untuk pembentukan infeksi parasit: fosfatidilserin yang berasal dari parasit dan inang sebagai molekul kunci. Sinyal Komunikasi Seluler 18:10.

14.McDonnell T, Wincup C, Buchholz I, Pericleous C, Giles I, Ripoll V, Cohen H, Delcea M, Rahman A (2020) Peran beta-2-glikoprotein I dalam struktur asosiasi kesehatan dan penyakit dengan fungsi : lebih dari sekedar APS. Darah Wahyu 39:100610.

15. Dominguez M, Torano A (1999) Opsonophagocytosis yang dimediasi oleh kepatuhan imun: mekanisme infeksi Leishmania. J Exp Med 189:25–35.

16. Belkaid Y, Hofmann KF, Mendez S, Kamhawi S, Udey MC, Wynn TA, Sacks DL (2001) Peran interleukin (IL)-10 dalam kegigihan Leishmania mayor di kulit setelah penyembuhan dan potensi terapeutik antibodi reseptor anti-IL-10 untuk penyembuhan steril. J Exp Med 194:1497–1506.

17. Waisman A, Kraus M, Seagal J, Ghosh S, Melamed D, Song J, Sasaki Y, Classen S, Lutz C, Brombacher F et al (2007) Pensinyalan reseptor sel IgG1 B dihambat oleh CD22 dan mendorong perkembangan Sel B yang kelangsungan hidupnya kurang bergantung pada Ig{alpha}/{beta}. J Exp Med 204:747–758

18. Panda S, Ding JL (2015) Antibodi alami menjembatani imunitas bawaan dan adaptif. J Immunol 194:13–20.

19. Puga I, Cerutti A (2013) Perlindungan oleh IgG alami: kemitraan manis dengan lektin terlarut berhasil! EMBO J 32:2897–2899.

20. Duncan AR, Winter G (1988) Situs pengikatan C1q pada IgG. Alam 332:738–740.

21. Panda S, Zhang J, Tan NS, Ho B, Ding JL (2013) Antibodi IgG alami memberikan perlindungan bawaan terhadap bakteri opsonisasi usus besar. EMBO J 32:2905–2919.

22. El-Hani C, Borges V, Wanderley JL, Barcinski M (2012) Apoptosis dan mimikri apoptosis di Leishmania: perspektif evolusi. Sel Depan Menginfeksi Mikrobiol 2:96.

Untuk info lebih lanjut, silakan hubungi kami di:david.deng@wecistanche.com tel:0013632399501