Pengaturan Koordinat Metabolisme Triptofan Sistemik Dan Ginjal Oleh Pengangkut Obat OAT1 Dan OAT3

Jeffry C. Granados¹, Anne Richelle², Jahir M. Gutierrez¹, Patrick Zhang³, Xinlian Zhang⁴, Vibha Bhatnagar⁵, Nathan E. Lewis^1,2,6, dan Sanjay K. Nigam^2,7,*

^Kontak:{0}}

pengalaman cistanche

Bagaimana organ merasakan metabolit yang beredar adalah pertanyaan kunci. Di sini, kami menunjukkan bahwa pengangkut anion organik multispesifik obat, OAT1 (SLC22A6 atau NKT) dan OAT3 (SLC22A8), berperan dalam indera organ. Analisis metabolisme dari serum tikus KO Oat1 dan Oat3 mengungkapkan perubahan turunan triptofan yang terlibat dalam metabolisme dan pensinyalan. Beberapa metabolit ini berasal dari mikrobioma usus dan terlibat sebagai toksin uremik dalamkronisginjalpenyakit. Interaksi langsung dengan transporter didukung dengan tes transportasi berbasis sel. Untuk menilai dampak hilangnya fungsi OAT1 atau OAT3 pada ginjal, organ di mana transporter serapan ini sangat diekspresikan, data transkriptomik knockout dipetakan ke model komputasi berbasis "tugas metabolisme" yang mengevaluasi lebih dari 150 fungsi seluler. Terlepas dari perubahan metabolit triptofan di kedua KO, hanya di KO Oat1 yang beberapa fungsi seluler terkait triptofan meningkat. Dengan demikian, kehilangan kemampuan untuk mengambil kynurenine, kynurenate, anthranilate, dan N-for-mylanthranilate melalui OAT1, ginjal merespons dengan mengaktifkan jalur biosintetik terkait triptofannya sendiri. Hasilnya mendukung Teori Penginderaan Jauh dan Pensinyalan, yang menjelaskan bagaimana pengangkut "obat" membantu mengoptimalkan tingkat metabolit dan molekul pensinyalan dengan memfasilitasi pembicaraan silang organ. Karena OAT1 dan OAT3 dihambat oleh banyak obat, data menunjukkan potensi interaksi obat-metabolit. Memang, pengobatan manusia dengan probenesid, penghambat OAT yang digunakan untuk mengobati asam urat, meningkatkan metabolit triptofan yang bersirkulasi. Lebih lanjut, mengingat bahwa badan pengatur telah merekomendasikan obat untuk diuji pengikatan atau pengangkutan OAT1 dan OAT3, maka metabolit ini dapat digunakan sebagai biomarker endogen untuk menentukan apakah kandidat obat berinteraksi dengan OAT1 dan/atau OAT3.

Pengangkut anion organik OAT1 (SLC22A6, awalnya NKT (1)) dan OAT3 (SLC22A8, awalnya ROCT (2)) ditemukan di tubulus proksimalginjaldan pleksus koroid otak dan mengontrol distribusi fisiologis dan eliminasi berbagai obat dan racun lingkungan serta metabolit endogen seperti -ketoglutarat, prostaglandin, dan urat (3, 4). Selain itu, OAT membantu mengatur kadar produk alami yang dicerna dan senyawa turunan mikrobioma usus (misalnya, epicatechin, 3-indoxyl sulfate, p-cresol sulfate) (5, 6).

OAT1 dan OAT3, anggota keluarga SLC22, adalah di antara pengangkut obat multispesifik yang paling terkenal. Kelompok pengangkut obat ini termasuk anggota superfamili SLC (pembawa zat terlarut) dan ABC (kaset pengikat ATP) (7, 8). Ada banyak literatur tentang peran farmasi dan toksikologi dari transporter ini, namun fungsi endogen dari protein yang dilestarikan secara evolusioner ini, serta jaringan regulasi di mana mereka berpartisipasi, baru mulai dikarakterisasi (9). Transporter multispesifik ini mempengaruhi banyak aspek fisiologi dan patofisiologi, kemungkinan dengan berfungsi dalam kombinasi dengan transporter spesifik mono atau oligo. Tiga contoh patofisiologi yang ditandai dengan baik adalah peran OAT1, OAT3, URAT1, dan ABCG2 dalam asam urat (10), peran OAT1 dan OAT3 dalam akumulasi racun uremik yang terkait dengan penyakit kronis.ginjalpenyakit (CKD) (11, 12), dan keluarga SLC22 di akutginjalcedera (13).

Karena susunan luas senyawa anion organik kecil yang diangkut oleh OAT1 dan OAT3, berbagai xenobiotik dan molekul endogen dapat bersaing untuk akses dan pembersihan ginjal oleh pengangkut OAT ini (14, 15). Ini memiliki implikasi penting karena banyak metabolit, termasuk yang timbul dari mikrobioma usus dan diangkut oleh OAT1 dan OAT3, mengatur fisiologi endogen dan telah dikaitkan dengan perkembangan gangguan klinis, seperti CKD, sindrom metabolik, dan diabetes (14, 16, 17). Misalnya, jumlah CMPF (3-karboksi-4-metil-5-propil-2- asam furan propanoat), substrat OAT3, dalam sirkulasi telah dikaitkan dengan diabetes. CMPF adalah metabolit asam lemak furan yang ditemukan dalam minyak ikan, minyak sayur, mentega, dan makanan lain dan mengganggu fungsi sel pankreas, yang menyebabkan intoleransi glukosa (18, 19). Konsekuensi potensial dari kompetisi tingkat transporter antara obat dan metabolit endogen yang diangkut meliputi (a) konsentrasi metabolit intraseluler yang berubah karena obat yang diangkut menghalangi masuknya metabolit ke dalam sel; (b) perubahan konsentrasi serum obat, metabolit, atau keduanya, yang menyebabkan peningkatan waktu paruh dan/atau kadar metabolit; dan (c) perubahan metabolisme sistemik yang timbul dari efek cascading distal pada beberapa jalur metabolisme yang bergantung pada OAT1 atau OAT3 atau keduanya.

Kami menerapkan pendekatan biologi sistem yang menggunakan data metabolomik dan transkriptomik dari tikus Oat1 dan Oat3knockout (KO) untuk menganalisis fungsi metabolisme utama yang dipengaruhi oleh OAT1 dan OAT3. Data metabolisme serum dari tikus Oat1 dan Oat3 KO mewakili dampak pengangkut ini terhadap metabolisme sistemik endogen. Kami menggunakan data transkriptomik dariginjal, yang merupakan tempat ekspresi gen pengkode pengangkut, untuk mengevaluasi aktivitas ratusan fungsi metabolisme menggunakan analisis tugas metabolik. Dengan melakukan itu, kami dapat melengkapi pemahaman tentang perubahan metabolit ekstraseluler karena hilangnya transporter OAT1 atau OAT3 dengan analisis jalur metabolisme intraseluler yang terpengaruh.

Bersama-sama, pendekatan multi-omik dan analisis biologi sistem yang digunakan di sini memberikan potret jalur metabolisme dan pensinyalan lokal dan sistemik yang dimodulasi secara terpisah dan bersama-sama oleh OAT1 dan OAT3. Kami menunjukkan bahwa OAT1 tidak hanya mengatur metabolisme triptofan secara sistemik tetapi juga memainkan peran kunci dalam jalur metabolisme triptofan di dalam jaringan di mana ia ditemukan. Dengan demikian, hasil kami menunjukkan bahwa studi entitas obat baru tidak hanya harus mempertimbangkan efek interaksi obat-metabolit (DMI) dalam serum tetapi juga mengevaluasi potensi pergeseran dalam metabolisme seluler karena hilangnya masuknya metabolit melalui persaingan di tingkat transporter. Untuk mendukung relevansi manusia dari pekerjaan kami, kami menunjukkan bahwa banyak perubahan kadar serum metabolit triptofan terlihat pada tikus knockout juga diamati pada manusia setelah pemberian probenesid, obat yang digunakan untuk mengobati asam urat yang menghambat OAT1 dan OAT3.

\

manfaat cistanche pria

Hasil

Ringkasan pendekatan keseluruhan

Keluarga gen SLC22 (OATs, OCTs, OCTNs) mengkode untuk transporter yang berpartisipasi dalam penyerapan banyak senyawa unik di beberapa jaringan, meskipun banyak penelitian telah difokuskan pada beberapa anggota (SLC22A1, SLC22A2, SLC22A6, SLC22A8) yang menangani banyak obat umum (20, 21). Namun, gen ini sangat lestari, dengan ortolog pada lalat, cacing, ikan, dan bulu babi (22); ini menyiratkan mereka memiliki peran fisiologis penting di luar penanganan obat. Untuk menentukan peran endogen OAT1 dan OAT3 dalam mengendalikan metabolisme tingkat jaringan dan tingkat organisme terlepas dari perannya yang terkenal sebagai pengangkut obat dan toksin, kami menganalisis data transkriptomik spesifik jaringan dan data metabolisme serum (Gbr. 1). Kami membandingkan data dari tikus yang secara genetik kekurangan Oat1 atau Oat3 dan kontrol tipe liarnya. Kumpulan data ini sebelumnya telah diperiksa dari perspektif chemoinformatic (23) dan untuk memberikan gambaran luas tentang jalur yang terpengaruh (24), tetapi di sini kami menekankan pada peran spesifiknya dalam disposisi metabolit triptofan. Karena kedua transporter ini ditemukan diginjal, kami menganalisisginjaldata transkriptomik menggunakan Analisis Tugas Metabolik, metode biologi sistem yang mengelompokkan gen sesuai dengan peran terkoordinasinya dalam biosintesis serangkaian metabolit kunci intermediet terbatas dari input metabolit yang beragam (lihat bagian Metode untuk detail lebih lanjut). Kami mendukung studi ini dalam tes transportasi vitro; kami juga mendukung relevansi klinis temuan kami dengan data metabolisme manusia.

Karakteristik yang diketahui dari tikus Oat1 KO dan Oat3 KO Hampir semua karakteristik tikus yang kekurangan Oat1 atau Oat3 serupa dengan tikus tipe liar (25–27) (Tabel 1). Tikus knockout layak dengan kelangsungan hidup yang sebanding dengan tikus tipe liar. Selain itu, mereka tidak menunjukkan kelainan perkembangan atau pertumbuhan yang jelas, dan pemeriksaan histologis dan fisiologis dari berbagai KO ini (berusia ~ 2–8 bulan) mengungkapkan sedikit atau tidak ada perbedaan dari tipe liar, selain tikus Oat3 KO yang memiliki tekanan darah sedikit lebih rendah ( 28). Kecenderungan deposisi lipid hati di Oat1 KO juga telah dicatat tetapi hanya untuk tikus yang sangat tua (29).

Tikus knockout transporter ini juga telah dikarakterisasi dari sudut pandang farmakologi dan toksikologi (Tabel 2). OAT1 dan OAT3 memainkan peran penting dalam penanganan berbagai obat dan toksin, baik yang diproduksi secara lingkungan maupun endogen (30-38). Kedua tikus knockout telah mengubah respons terhadap loop dan diuretik thiazide karena ketidakmampuan obat ini untuk mengakses lumen nefron—suatu proses yang bergantung pada penyerapan yang dimediasi OAT1-atau OAT3-ke dalam sel tubulus proksimal . Hewan Oat1 KO dilindungi terhadap nefrotoksisitas yang diinduksi merkuri karena kurangnyaginjalpenyerapan konjugat merkuri. Kedua tikus mengumpulkan racun uremik dalam serum dan menunjukkan penurunan sekresi asam urat. Analisis ex vivo jaringan baik dari tikus Oat1 KO atau Oat3 KO menunjukkan penurunan penyerapan beberapa antivirus.

Kami telah melaporkan bahwa hewan yang kekurangan1-Oat mungkin telah mengurangi ekspresi OAT3 (39). Namun, sejumlah penelitian telah menunjukkan bahwa dampak fungsional dari ini adalah yang terbaik di keadaan basal. Misalnya, KO Oat1ginjaltelah secara nyata mengurangi transpor PAH, tetapi tidak tampak kehilangan transpor substrat OAT3, estron sulfat (26). Analisis chemoinformatic telah mengidentifikasi set sifat molekuler yang membedakan metabolit yang diubah dalam Oat1 dibandingkan dengan tikus yang kekurangan Oat3 (23). Selanjutnya, embrioginjalkultur organ dari kedua jalur tikus mengangkut set antivirus yang berbeda (36-38). Ada juga perbedaan jenis racun uremik yang ditemukan di Oat1 versus Oat3 KO (34).

Metabolisme triptofan diubah secara sistemik pada tikus Oat1 dan Oat3 KO

Analisis metabolomik yang dipublikasikan dari tikus Oat1 KO dan Oat3 KO menunjukkan perubahan fisiologis penting dalam penanganan metabolit endogen dan produk mikrobioma usus, termasuk beberapa racun uremik (34, 35). Di sini, kami menganalisis 731 metabolit dengan identitas yang diketahui dalam serum yang dikumpulkan dari tikus kontrol dan Oat1 KO. Demikian juga, 611 metabolit yang diketahui identitasnya dideteksi dalam serum dari tikus kontrol dan Oat3 KO.

Untuk tikus Oat1 KO, kami menemukan bahwa 63 metabolit di Jalur Super Asam Amino (Tabel Tambahan S1) meningkat secara signifikan (p Kurang dari atau sama dengan 0.05, 54 metabolit, di antaranya 12 metabolit memiliki perubahan lipat lebih tinggi dari 3) atau cenderung meningkat secara signifikan (0.05 Kurang dari atau sama dengan p Kurang dari atau sama dengan 0,10, sembilan metabolit), menunjukkan bahwa mereka adalah substrat OAT1 atau bahwa konsentrasi serumnya bergantung pada OAT1. Untuk tikus Oat3 KO, kami menemukan bahwa sepuluh metabolit di Jalur Super Asam Amino meningkat secara signifikan, sementara 11 cenderung meningkat secara signifikan (Tabel Tambahan S2). Sebagai pelengkap nilai-p, kami juga menghitung Cohen's d, yang menunjukkan ukuran efek yang besar (berkisar dari 1,76 hingga 4,17) untuk metabolit triptofan. Konsisten dengan data farmakologis dan fisiologis lain yang diperoleh dari tikus knockout OAT1 dan OAT3 atau jaringannya yang menunjukkan perbedaan fungsional yang penting (23, 36, 38), perbandingan perubahan metabolit serum dengan cara Superpath Asam Amino antara Oat1 KO (63 metabolit) dan Oat3 KO (21 metabolit) tikus mengungkapkan hanya sepuluh metabolit yang tumpang tindih dalam himpunan bagian ini (Tabel Tambahan S3).

Setiap metabolit diklasifikasikan menggunakan perangkat lunak Metabolon menjadi salah satu dari delapan Superpathways (Asam Amino, Karbohidrat, Kofaktor, dan Vitamin, Energi, Lipid, Nukleotida, Peptida, Xenobiotik) dan satu dari 90 Subpathways. Dari 17 metabolit yang terakumulasi secara signifikan dalam serum hewan Oat1 KO dan Oat3 KO, empat termasuk dalam Jalur Metabolisme Triptofan, yang menunjukkan bahwa kedua pengangkut ini memiliki peran bersama yang penting dalam regulasi metabolisme triptofan sistemik (Gbr. 2) . Secara independen, Metabolisme Triptofan adalah salah satu jalur Sub yang paling diperkaya untuk kedua model sistem gugur (Gbr. 3). Enam belas Gambar 3. Metabolisme triptofan adalah salah satu jalur yang paling berubah pada kedua tikus KO. Plot gunung berapi untuk Oat1 KO (n=5) ​​menunjukkan metabolit triptofan terhadap semua metabolit terukur lainnya. B, metabolisme triptofan adalah jalur kedua yang paling diperkaya untuk metabolit yang meningkat secara signifikan. C, plot gunung berapi untuk Oat3 KO (n=3) yang menunjukkan metabolit triptofan terhadap semua metabolit terukur lainnya. D, metabolisme triptofan adalah jalur yang paling diperkaya untuk metabolit yang meningkat secara signifikan berdasarkan analisis subjalur metabolon. Peran OAT1 dan OAT3 dalam metabolisme triptofan 4 J. Biol. Kimia (2021) 296 100575metabolit triptofan diukur dalam serum kedua tikus, dan 12 secara signifikan diubah dalam setidaknya satu kelompok. Tikus Oat1 KO memiliki 11 metabolit yang meningkat, termasuk satu (N-formylant hranilate) yang tidak diukur dalam serum Oat3 KO (Tabel 3). Analisis Oat3 KO mengungkapkan bahwa enam dari 16 metabolit secara signifikan atau cenderung berubah secara signifikan. Beberapa metabolit ini, termasuk yang timbul dari bakteri dalam mikro-flora usus, diketahui memiliki efek distal pada beberapa organ lain. Misalnya, 3-indoxyl sulfate dikaitkan dengan perkembanganginjalpenyakit dan sindrom uremik (12, 40). Data menunjukkan bahwa OAT1 dan OAT3 bekerja sama untuk mengatur metabolisme triptofan sistemik, namun mereka juga memiliki fungsi spesifik dalam metabolisme triptofan dengan menangani set metabolit berbeda yang mempengaruhi reaksi biokimia yang berbeda.

Evaluasi interaksi obat-metabolit pada manusia yang melibatkan obat penghambat OAT dan metabolit triptofan

Probenesid, obat yang digunakan untuk mengobati asam urat, diberikan kepada manusia untuk menentukan dampak jangka pendek dari obat pengikat OAT afinitas tinggi pada tingkat metabolit yang bersirkulasi. Probenecid memiliki tiga target mapan: SLC22A12 (URAT1, Rst), OAT1, dan OAT3, yang semuanya merupakan gen yang terkait erat dalam kelompok pengangkut anion organik dari keluarga pembawa zat terlarut SLC22. URAT1 adalah pengangkut asam urat yang terletak di membran apikal (sisi yang menghadap urin) tubulus proksimal, sehingga OAT1 dan OAT3, yang multi-spesifik dan diekspresikan pada sisi yang menghadap darah dari tubulus proksimal, diharapkan efek yang lebih mendalam pada metabolisme serum. Perbandingan pengukuran metabolisme pada darah sebelum dan 5 jam setelah pemberian dosis menunjukkan perubahan besar pada Jalur Metabolisme Triptofan (Tabel 4). Karena platform yang berbeda, ada 22 metabolit di Sub-jalur ini, 16 di antaranya diubah secara signifikan. Empat belas metabolit diukur di ketiga platform dan mengungkapkan beberapa kesamaan antara tikus knockout dan manusia yang diberi probenesid (Gbr. 4). Misalnya, peningkatan 3-indoxyl sulfate, kynurenine, N-acetylkynurenine, dan indole lactate diamati pada kedua kelompok tikus knockout dan manusia. Namun, ada lebih banyak tumpang tindih antara tikus Oat1 KO dan manusia yang diobati dengan probenesid. Kedelapan metabolit yang meningkat secara signifikan dalam Oat1 KO juga meningkat secara signifikan pada manusia yang diobati dengan obat. Hanya serotonin, yang meningkat pada tikus Oat3 KO, yang tidak diubah pada manusia.

Tikus yang diobati dengan obat penghambat OAT menunjukkan perubahan dalam metabolisme triptofan

Sebagai perantara antara model tikus knockout kami dan manusia, kami memperlakukan tikus tipe liar dengan probenesid, obat penghambat OAT yang sudah mapan. Perawatan obat ini menyebabkan peningkatan enam metabolit triptofan, termasuk kynurenine, kynurenate, dan indolelactate (Gbr. 5). Metabolit ini meningkat dalam satu atau kedua percobaan knockout dan manusia yang diobati dengan probenesid.

Dengan demikian, hasil keseluruhan pada manusia dan tikus yang diobati dengan probenesid, serta tikus KO, mendukung peran OAT1 dan OAT3 dalam mengatur tingkat metabolit triptofan yang bersirkulasi.

Metabolit triptofan berinteraksi dengan tes transportasi in vitro OAT1 dan OAT3 manusia Untuk mengkonfirmasi temuan kami, kami melakukan tes transportasi in vitro menggunakan sel yang mengekspresikan OAT1 dan OAT3 manusia secara berlebihan. Banyak metabolit di Subpathway ini telah diuji terhadap transporter ini (Tabel 3), tetapi metabolit lain masih belum dijelajahi. Tes transportasi untuk asam indoleacetic (ILA) mengungkapkan bahwa ILA berinteraksi dengan OAT1 dan OAT3 (IC50=229.1 ± 74,56 M, 74,49 ± 23,29 M masing-masing) (Gbr. 6). Selanjutnya, serotonin, yang secara unik meningkat pada Oat3 KO, berinteraksi hanya dengan OAT3 in vitro (IC50=288.2 ± 167.0 M) (data tidak ditampilkan). Nilai IC50 kemudian diintegrasikan dengan nilai Km yang diketahui untuk menghitung konstanta penghambatan. Konstanta penghambatan (Ki) untuk ILA dengan OAT1 adalah 119,3 M.

Analisis tugas metabolisme ginjal KO menunjukkan peran penting untuk OAT1 dalam penginderaan tubulus proksimal dari metabolit triptofan

Kami menggunakan data microarray dariginjaldari Oat1 KO, Oat3 KO, dan kontrol tipe liarnya untuk mengidentifikasi bagaimana perubahan transporter memengaruhiginjalfungsi metabolisme. Untuk tujuan ini, kami menggunakan metode biologi sistem (analisis tugas metabolisme (41) dari alat CellFie) yang memprediksi bagaimana perubahan ekspresi gen berdampak pada daftar 175 tugas metabolisme yang telah ditentukan sebelumnya (Tabel Tambahan S4), yang mencakup sistem metabolisme umum a sel (energi, nukleotida, karbohidrat, asam amino, lipid, vitamin dan kofaktor, dan metabolisme glikan). Seperti dijelaskan dalam Metode, perhitungan "skor tugas metabolik" mengambil data transkriptomik dan mengaitkan skor aktivitas gen untuk setiap gen. Model metabolisme skala genom digunakan untuk menyusun daftar reaksi yang diperlukan untuk menyelesaikan masing-masing dari 175 tugas metabolisme. Dengan demikian, analisis transkriptomik dapat langsung digunakan untuk secara kuantitatif membandingkan aktivitas relatif dari setiap fungsi metabolisme di bawah berbagai kondisi (misalnya, tipe liar versus Oat1 KO, tipe liar versus Oat3 KO).

Kami menemukan bahwa tugas metabolisme terkait triptofan adalah umum di antara mereka yang memiliki perbedaan besar antara Oat KO dan tikus tipe liar. Apa yang tidak terduga, bagaimanapun, adalah bahwaginjaltugas metabolisme terkait triptofan bergantung pada OAT1 tetapi tidak pada OAT3. Pada tikus Oat1 KO, sintesis kynurenine, kynurenate, anthranilate, dan N-for-mylanthranilate dari triptofan telah meningkatkan skor tugas metabolisme, sementara masing-masing tugas tersebut memiliki skor tugas metabolisme yang menurun di Oat3 KO. Hal ini konsisten dengan analisis metabolomik serum, yang menunjukkan peningkatan signifikan dalam kadar kynurenine, kynurenate, anthranilate, dan N-for-mylanthranilate di Oat1 KO.

Diskusi

OAT1 dan OAT3 diakui perannya dalam eliminasi ratusan obat (42). Namun, studi in vivo dan in vitro dari OAT1 dan OAT3 telah menunjukkan bahwa protein ini terlibat dalam pengangkutan berbagai metabolit endogen dan mikroba yang diturunkan dari usus, toksin uremik, molekul pemberi sinyal, nutrisi yang dicerna, racun industri, dan produk alami (9, 24, 26, 34, 35, 43). Ini juga tampaknya menjadi kasus untuk pengangkut obat multispesifik lainnya, menunjukkan bahwa kontribusi mereka terhadap metabolisme endogen sangat kurang dihargai (44).

Pengangkut obat multispesifik ini sangat diekspresikan di hampir semua jaringan dan memainkan peran yang sangat penting dalam Gambar 4. Metabolit triptofan meningkat pada tikus knockout Oat dan manusia yang diobati dengan probenesid. Diagram Venn dari metabolit triptofan yang diubah secara signifikan pada tikus KO dan manusia yang diobati dengan probenesid. Dari 14 metabolit yang umum untuk ketiga platform, 12 meningkat secara signifikan dalam setidaknya satu percobaan. Empat metabolit meningkat secara signifikan di setiap percobaan. B, struktur kimia metabolit meningkat pada setiap percobaan: 3-indoxyl sulfate, indolelactate, kynurenine, dan N-acetylkynurenine. C, plot kotak untuk setiap metabolit pada manusia yang diberi probenesid (n=20), tikus Oat1 KO (n=5), dan tikus Oat3 KO (n=3). Garis dalam boxplot menunjukkan median. Peran OAT1 dan OAT3 dalam metabolisme triptofan. Biol. Kimia (2021) 296 100575 7penghalang epitel dan endotel antara darah dan cairan/kompartemen tubuh lainnya (misalnya, sawar darah-otak, sawar darah-retina, sawar darah-CSF, sawar hidung-otak, sawar darah-urin). Sebagai pengatur metabolisme sistemik, serta metabolisme lokal di dalam jaringan ekspresi mereka, jenis studi dan analisis yang telah kami jelaskan di sini jika dilakukan untuk semua pengangkut "obat", dapat secara radikal mengubah pandangan fisiologis kami tentang protein yang dilestarikan secara evolusi ini.

Kepentingan farmasi klinis transporter ini sangat besar, dan badan pengatur telah merekomendasikan skrining entitas obat baru terhadap setidaknya tujuh transporter obat multispesifik (OAT1, OAT3, OATP1B1, OATP1B3, OCT2, P-GP, BCRP) untuk membatasi kemungkinan obat- interaksi obat (DDI)—kasus di mana dua atau lebih obat bersaing untuk mendapatkan akses ke transporter yang sama. DDI yang dimediasi transporter dapat mengubah konsentrasi obat dalam darah, yang berpotensi menyebabkan efek klinis yang merugikan (45). Mengingat jumlah substrat untuk OAT1 dan OAT3, fenomena serupa dapat terjadi antara obat dan metabolit yang beredar. DMI ini juga berpotensi mempengaruhi fungsi jaringan, karena metabolit dan molekul pemberi sinyal mungkin tidak dapat memasuki sel dan memberikan efeknya pada fisiologi seluler normal. Penelitian ini mendukung kemungkinan ini.

Dalam analisis metabolomik kami dari serum tikus knockout Oat1 dan Oat3, ada perubahan yang nyata dalam metabolit terkait triptofan. Peningkatan kadar metabolit sistemik, karena tidak adanya transporter ini pada antarmuka darah denganginjal, meningkatkan kemungkinan penurunan konsentrasi intraseluler dalamginjalsel tubulus proksimal. Bagaimana sel-sel ini pada gilirannya akan merespons? Kami menggunakan analisis tugas metabolik berbasis transkriptomik untuk menjawab pertanyaan ini. Kami mengidentifikasi beberapa tugas metabolisme terkait triptofan lokal (ginjal) yang dipengaruhi oleh tidak adanya pengangkut. Perubahan skor tugas metabolik ini disebabkan oleh peningkatan kompensasi dalam ekspresi gen terkait tugas metabolik dalam konteks defisiensi OAT1. Sementara banyak jalur metabolisme disurvei oleh analisis tugas metabolisme berbasis metabolomik dan transkriptomik, penggunaan kedua pendekatan memberi kami wawasan unik tentang bagaimana pengangkut obat tertentu berpartisipasi dalam komunikasi antara jaringan dan lingkungan ekstraseluler. Jadi, sementara metabolit triptofan diatur oleh kedua pengangkut pada tingkat sistemik, tugas metabolisme terkait triptofan di dalam ginjal terutama bergantung pada OAT1.

Hasilnya menunjukkan bahwa tubulus proksimalginjal, di mana OAT ditemukan, bukan hanya saluran untuk eliminasi metabolit triptofan ginjal; ia merasakan metabolit triptofan dan merespons perubahan dalam kelimpahan intraseluler mereka. Secara kolektif, data mendukung pandangan bahwa OAT1 memainkan peran kunci tidak hanya dalam membersihkan metabolit terkait triptofan dari sirkulasi dengan mempromosikan penyerapannya olehginjaltetapi juga bahwa transporter ini mengatur metabolisme intraseluler, terutama metabolisme triptofan.

Ini mendukung pandangan bahwa transpor kynurenine, kynurenate, anthranilate, dan N-for-mylanthranilate yang dimediasi oleh OAT adalah penting untukginjalfungsi (Gbr. 8). Keempat metabolit ini termasuk dalam subjalur kynurenine dari degradasi triptofan, dan kecuali kynurenate, mereka terlibat dalam produksi energi seluler melalui sintesis NAD plus (46). Dengan demikian, mungkin saja kekurangan OAT1 menyebabkan gangguan metabolisme seluler yang dapat, setidaknya sebagian, dipulihkan melalui produksi metabolit ini.

Hampir semua triptofan yang tertelan dimetabolisme menjadi tiga jalur utama: kynurenine, serotonin, dan indole (47, 48). Selain perannya dalam memproduksi NAD plus , subjalur kynurenine menghasilkan metabolit yang memiliki berbagai fungsi baik dalam keadaan sehat maupun sakit (46, 49). Jalur serotonin menghasilkan neurotransmitter, serotonin, yang memiliki peran dalam berbagai proses fisiologis, terutama sebagai pengatur fungsi SSP (50). Subpathway indole, yang dimediasi oleh mikrobioma usus, menghasilkan molekul sinyal yang berpartisipasi dalam komunikasi host-mikroba (51). Secara sistemik, OAT1 dan OAT3 memodulasi bioavailabilitas metabolit triptofan dari masing-masing dari tiga subjalur, meskipun sebagian besar metabolit berasal dari subjalur kynurenine dan indole.

Mempertimbangkan segudang peran pensinyalan yang dimiliki metabolit yang meningkat, ada potensi OAT1 dan OAT3 untuk mempengaruhi banyak aspek fisiologi. Misalnya, kynurenate mengaktifkan GPR35, target obat, dan GPCR yang terlibat dalam respon inflamasi dan penyakit kardiovaskular (52). Banyak dari metabolit triptofan yang diubah secara signifikan juga terbentuk atau ligan diduga dari reseptor hidrokarbon aril (AhR) (Tabel 3), regulator transkripsi yang diekspresikan di hampir semua jaringan yang merespons xenobiotik (53).

Studi metabolomik dari dua tikus knockout menunjukkan bahwa fungsi endogen kunci OAT1 dan OAT3 adalah untuk mengatur tingkat sistemik metabolit triptofan. Dengan demikian, obat yang menargetkan OAT1 dan OAT3 diharapkan memiliki dampak serupa pada metabolom. Seperti yang diperkirakan, potensi translasi tikus knockout kami sebagai model DMI sangat didukung oleh hasil dari manusia yang diobati dengan probenesid, obat penghambat OAT yang digunakan di seluruh dunia untuk mengobati asam urat. Beberapa metabolit triptofan meningkat pada serum manusia dan tikus KO.

Dengan demikian, ada potensi senyawa yang meningkat dalam penelitian pada manusia dan hewan pengerat untuk digunakan sebagai biomarker untuk entitas obat baru yang dapat menghambat OAT1 dan OAT3. Sementara model tikus knockout (yang memiliki harapan hidup normal) dan manusia yang diobati dengan probenesid sehat, beberapa metabolit yang meningkat dikenal sebagai toksin uremik yang meningkat dalam serum manusia yang menderita gagal ginjal kronis dan terkait dengan hasil negatif (54 , 55). Tumpang tindih metabolit yang terlibat dalam aspek CKD dan penelitian kami menunjukkan bahwa OAT mungkin memainkan peran kunci dalam manifestasi CKD atau perkembangannya, meskipun mungkin juga konsentrasi metabolit dapat meningkat karena hilangnya sekresi sebagai akibat dari jaringan. kerusakan (56, 57). CKD juga dapat menyebabkan kegagalan multiorgan, sebagian karena akumulasi racun uremik, dan ini mungkin sebagian karena penyerapan ke jaringan lain melalui transporter obat SLC dan ABC (12, 58).

Jalur metabolisme triptofan memerlukan koordinasi fungsi beberapa organ. Triptofan diserap oleh usus, dimodifikasi oleh hati atau organ lain, dan metabolit akhirnya diangkut olehginjal, sebagian melalui fungsi OAT1 dan OAT3. Secara konvensional, ini dipandang hanya sebagai jalur eliminasi. Hasil kami, yang menunjukkan bahwa sel-selginjalmenanggapi tidak adanya metabolit ini dan molekul pensinyalan dengan bersiap untuk memproduksinya, menyarankan sebaliknya. Meskipun peran khusus mereka dalamginjaltubulus proksimal kurang jelas, jelas bahwa banyak intermediet yang dihasilkan adalah neurotransmiter dan memiliki peran penting dalam fungsi SSP (46, 49, 59, 60). Selain komunikasi antar organ, metabolisme triptofan juga mencerminkan komunikasi antar organisme antara inang dan mikrobioma usus. Memang, serum tikus bebas kuman mengalami penurunan kadar 3-indoxyl sulfate, indolepropionate, dan serotonin (61). Lebih lanjut, penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa di dalam sel positif OAT1-ginjal, 3-indoksil sulfat berfungsi dalam pensinyalan sel dengan mengaktifkan AhR dan mengatur sekresinya sendiri melalui OAT1 (62). Temuan kami bahwa metabolit yang diturunkan dari usus meningkat dalam serum tikus Oat1 KO dan Oat3 KO — bersama dengan demonstrasi kami bahwa beberapa adalah ligan in vitro, memberikan dukungan tambahan untuk pentingnya pengangkut ini dalam mengatur komunikasi antara inang dan komensal organisme. Secara keseluruhan, hasil kami sejalan dengan Remote Sensing and Signaling Theory, yang mengusulkan bahwa pengangkut obat dan enzim metabolisme obat berpartisipasi dalam komunikasi antar organ dan antar organisme melalui pengangkutan dan modifikasi molekul kecil untuk mempertahankan homeostasis (63, 64). Dengan demikian, sangat penting untuk memahami keseluruhan fungsi fisiologis endogen pengangkut obat secara sistemik dan lokal.

Dengan data metabolomik yang ditingkatkan, kami mengidentifikasi metabolit yang dipengaruhi oleh tidak adanya OAT1 dan OAT3 pada model hewan pengerat dan metabolit yang dipengaruhi oleh penghambatan OAT1 dan OAT3 pada manusia yang diobati dengan obat penghambat OAT. Kelompok kami sebelumnya telah menggunakan jaringan rekonstruksi metabolik untuk memprediksi fungsi metabolisme dan melaporkan beberapa jalur bersama dan unik yang diatur oleh OAT1 dan OAT3 (43, 65). Namun, studi ini dibatasi oleh versi awal alat rekonstruksi dan data metabolomik yang sangat sedikit. Di sini, menggunakan pendekatan yang berbeda, Analisis Tugas Metabolik menempatkan penekanan yang jauh lebih besar pada peran OAT1 dalam metabolisme triptofan intraseluler dariginjal. Pendekatan kami dapat diterapkan untuk menyelidiki fungsi endogen dari anggota keluarga SLC dan ABC lainnya dan membangun jaringan yang terpisah tetapi tumpang tindih untuk semua pengangkut obat ini, yang ditemukan tidak hanya pada tikus tetapi juga secara penuh dan cacing (20, 66). Representasi tersebut juga akan memfasilitasi pemahaman sepenuhnya DMI untuk obat berinteraksi dengan OAT1, OAT3, atau keduanya, yang kemungkinan melampaui persaingan sederhana di tingkat transporter.

Prosedur eksperimental

Hewan

Semua protokol eksperimental yang melibatkan penggunaan hewan telah disetujui oleh UCSD Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Semua hewan ditangani sesuai dengan Pedoman Kelembagaan Penggunaan Hewan Hidup untuk Penelitian. WT dewasa, Oat1 KO, dan Oat3 KO jantan ditempatkan secara terpisah di bawah siklus terang-gelap 12-h dan diberikan akses ad libitum ke makanan dan air. Hewan-hewan ini telah dijelaskan dalam publikasi sebelumnya (26, 27). Tikus yang diobati dengan probenesid diberikan injeksi intraperitoneal harian 200 mg / kg probenesid atau PBS selama 3 hari sebelum pengorbanan. Injeksi terakhir diberikan 2 jam sebelum pengorbanan. Kumpulan data yang digunakan untuk analisis ini juga telah dijelaskan sebagian (23, 24). Kumpulan data Oat1 KO telah dipelajari sebagian dari perspektif kemoinformatika, tetapi analisis jalur terperinci tidak dilakukan (23). Kumpulan data Oat3 KO dianalisis ulang dan hanya dua kelompok yang dibandingkan (24).

Studi manusia dengan probenesid

Semua protokol eksperimental ditinjau dan disetujui oleh Institutional Review Board dan mematuhi Deklarasi Prinsip Etika Helsinki. Sampel darah lengkap dikumpulkan dari 20 individu (14 perempuan, enam laki-laki). Usia rata-rata adalah 30,85 ± 10,98, dan rata-rata BMI adalah 24,18 ± 3,52. Partisipan yang tidak mengonsumsi obat apa pun dan menjalani diet vegetarian selama masa penelitian. Dosis oral 1 gram probenesid diberikan, dan setelah 5 jam, seluruh darah dikumpulkan lagi. Setiap sampel disimpan beku pada -80 derajat sampai analisis metabolomik.

Metabolomik Sampel serum manusia segera disimpan pada suhu -80 derajat dan dikirim dalam es kering ke Metabolon Inc. Sampel serum tikus dikumpulkan dan dianalisis, seperti yang dijelaskan sebelumnya (23, 24). Untuk rekapitulasi singkat, untuk setiap sampel, profil metabolomik yang ditargetkan dilakukan oleh Metabolon Inc. Sistem MicroLab STAR dari Hamilton Company digunakan untuk menyiapkan setiap sampel, dan beberapa standar pemulihan ditambahkan untuk kontrol kualitas. Serum diendapkan dengan metanol dan diaduk dengan Glen Mills GenoGrinder 2000 untuk menghilangkan protein dari serum dan melepaskan molekul yang terikat pada protein tersebut. Solusi yang dihasilkan dipisahkan menjadi empat sampel yang lebih kecil. Dua dianalisis dengan fase balik (RP) ultraperformance liquid chromatography (UPLC) mass spectrometry (MS) dengan mode ion positif electrospray ionization (ESI). Satu sampel dianalisis dengan RP/UPLC-MS/MS dengan mode ion negatif ESI. Satu sampel dianalisis dengan HILIC/UPLC-MS/MS. Pelarut organik dihilangkan dengan menempatkan setiap sampel pada TurboVap (Zymark).

Statistik

Untuk sampel manusia dan tikus, nilai mentah dinormalisasi ke volume, ditransformasi log, dan nilai yang hilang diganti dengan nilai terendah yang diamati untuk setiap senyawa. Dalam sampel serum manusia, signifikansi statistik ditentukan menggunakan kontras ANCOVA yang menggabungkan BMI dan usia. Untuk sampel serum tikus, signifikansi ditentukan menggunakan uji t dua sampel Welch dengan metabolit yang mencapai signifikansi statistik (p Kurang dari atau sama dengan 0.05), serta yang mendekati signifikansi ( 0.05 Kurang dari atau sama dengan p Kurang dari atau sama dengan 0,10) termasuk dalam analisis selanjutnya. Pengayaan ditentukan menggunakan Persamaan 1, di mana k adalah jumlah metabolit yang berubah secara signifikan dalam Subpathway, m adalah jumlah metabolit dalam Subpathway, n adalah jumlah metabolit yang diubah secara signifikan dalam kumpulan data total, dan N adalah jumlah mengukur metabolit dalam set data total.

Analisis tugas metabolik

Kami menggunakan analisis tugas metabolik, seperti yang diimplementasikan dalam modul CellFie di GenePattern, untuk mengukurginjalfungsi metabolisme dan pengaruh perubahan transporter OAT dari data ekspresi gen (41) (yaitu, data microarray dari ginjal Oat1 KO, Oat3 KO, dan kontrol tipe liarnya). Analisis ini memprediksi aktivitas kumpulan ratusan tugas yang mencakup tujuh aktivitas metabolisme utama sel (pembangkit energi, nukleotida, karbohidrat, asam amino, lipid, vitamin dan kofaktor, dan metabolisme glikan) langsung dari data transkriptomik dengan menggunakan genom- model skala metabolisme manusia. Lebih khusus lagi, perhitungan aktivitas relatif dari tugas metabolik (yaitu, skor tugas metabolik) pertama-tama bergantung pada pra-pemrosesan data transkriptomik yang tersedia dan atribusi skor aktivitas gen untuk setiap gen (67). Model skala genom metabolisme manusia selanjutnya digunakan untuk mengidentifikasi daftar reaksi yang diperlukan untuk menyelesaikan setiap tugas metabolisme dan, dengan demikian, untuk mengidentifikasi daftar gen yang dapat berkontribusi pada perolehan fungsi metabolisme berdasarkan aturan GPR (mis. , aturan Reaksi Protein Gen). Oleh karena itu, skor tugas metabolik dihitung sebagai skor aktivitas rata-rata dari semua gen yang berkontribusi pada fungsi metabolisme. Dengan demikian, data transkriptomik dapat langsung digunakan untuk mengukur aktivitas relatif dari setiap fungsi metabolisme dalam kondisi tertentu.

Tes transportasi in vitro

Embrio manusiaginjal(HEK)-293 sel-sel yang secara stabil mengekspresi OAT1 dan OAT3 manusia (Solvo Biotechnology) secara berlebihan ditumbuhkan untuk bertemu di Dulbecco's Modified Eagle'sMedium (Invitrogen) yang dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi dan 1 persen penisilin/streptomisin dan dipertahankan dalam 5 persen CO2 pada 37 C. Sel pengekspresi OAT1-dipilih dengan adanya blasticidin, dan sel pengekspresi OAT3-dipilih dengan adanya puromisin. Kedua garis sel diuji negatif untuk kontaminasi Mycoplasma. Sebelum pengujian fungsional, sel dilapisi ke 96-piring sumur, diinkubasi selama 24 jam, dan dilengkapi dengan media. Eksperimen serapan kompetitif dilakukan dengan menginkubasi sel dalam larutan buffer dengan konsentrasi tetap 10 M6-carboxyfluorescein dan konsentrasi yang diencerkan secara serial dari substrat yang diusulkan mulai dari 2 mM. Buffer dihilangkan setelah inkubasi 10-menit pada suhu kamar, dan sel dibilas dengan DPBS tiga kali. Fluoresensi FL kemudian dinilai menggunakan pembaca pelat fluoresen FL. Nilai IC50 ditentukan menggunakan GraphPad Prism 8.

Nilai intensitas fluoresen dinormalisasi sehingga nilai terendah ditetapkan ke 0 persen dan nilai tertinggi ditetapkan ke 100 persen . Setelah normalisasi, data sesuai dengan model nonlinier, dan IC50 ditentukan menggunakan Persamaan 2.

Ki kemudian dihitung untuk setiap metabolit menggunakan persamaan Cheng–Prusoff (Persamaan 3), dengan Km untuk sel hOAT1 HEK293 yang diturunkan dari percobaan sebelumnya (68).

ketersediaan data

Semua data metabolomik yang relevan terkandung dalam artikel dan materi tambahan. Data transkriptomik tersedia atas permintaan dari snigam@health.ucsd.edu. hipotesis, mengawasi proyek, merancang eksperimen, dan menulis serta mengedit artikel.

Pendanaan dan informasi tambahan—Karya ini didukung oleh hibah dari National Institutes of Health (NIH) untuk SKN dari National Institute of General Medical Sciences (NIGMS)(R01GM132938). Dukungan untuk JCG berasal dari hibah pelatihan yang diberikan oleh National Institute of Biomedical Imaging and bioengineering (NIBIB) (T32EB009380) dan suplemen untuk R01GM132938. Pekerjaan ini didanai sebagian oleh dana murah hati dari NIGMS ke NEL (R35GM119850), Institut Nasional Alergi dan Penyakit Menular (NIAID) ke NEL (UH2AI153029), beasiswa LIFA ke AR, dan beasiswa ke JMG dari pemerintah Meksiko ( CONACYT) dan Institut Universitas California untuk Meksiko dan Amerika Serikat (UC-MEXUS). Konten sepenuhnya menjadi tanggung jawab penulis dan tidak selalu mewakili pandangan resmi NIH. Beberapa angka dihasilkan menggunakan Biorender. Artikel ini didedikasikan untuk mengenang Vibha Bhatnagar, MD, MPH.

Konflik kepentingan—Penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan dengan isi artikel ini.

Singkatan—Singkatan yang digunakan adalah: AhR, reseptor aril hidrokarbon; CKD, kronisginjalpenyakit; DMI, interaksi obat-metabolit; ESI, ionisasi semprotan listrik; HEK, embrio manusiaginjal; ILA, asam indol asetat; KO, KO; RP/UPLC/MS, kromatografi cair ultrakinerja fase terbalik–spektrometri massa.

Cistanche tubulosa mencegah penyakit ginjal, klik di sini untuk mendapatkan sampelnya

Dari 1Departemen Bioteknologi, 2Departemen Pediatri, 3Departemen Biologi, 4Divisi Biostatistika dan bioinformatika,Departemen Kedokteran Keluarga dan Kesehatan Masyarakat,5Departemen Kedokteran Keluarga dan Pencegahan,6NovoNordisk Foundation Center for Biosustainability di UC San Diego, dan 7Departemen Kedokteran, University of California SanDiego, La Jolla, California, ASDiedit

oleh Mike Shipston

Referensi

1. LopezNieto, CE, You, GF, Bush, KT, Barros, EJG, Beier, DR, dan Nigam, SK (1997) Kloning molekuler dan karakterisasi NKT, produk gen yang terkait dengan keluarga pengangkut kation organik yang hampir secara eksklusif diekspresikan dalamginjal. J.Biol. Kimia 272, 6471–6478

2. Brady, KP, Dushkin, H., Fornzler, D., Koike, T., Magner, F., Her, H., Gullans, S., Segre, GV, Green, RM, dan Beier, DR (1999 ) Sebuah transporter diduga baru dipetakan ke mutasi osteosklerosis (oc) dan tidak diekspresikan pada tikus mutan OC. Genomik 56, 254–261

3. Riedmaier, AE, Nies, AT, Schaeffeler, E., dan Schwab, M. (2012) pengangkut anion organik dan implikasinya dalam farmakoterapi.Pharmacol. Wahyu 64, 421–449

4. Ahn, SY, dan Bhatnagar, V. (2008) Update pada fisiologi molekuler pengangkut anion organik. Curr. pendapat. Nefrol. Hipertensi. 17, 499–505

5. Nigam, SK (2018) Keluarga pengangkut SLC22: Sebuah paradigma untuk dampak pengangkut obat pada jalur metabolisme, pensinyalan, dan penyakit. annu. Pdt. Pharmacol. 58, 663–687

6. Lowenstein, J., dan Grantham, JJ (2016) Kelahiran kembali minat fungsi tubulus ginjal. Saya. J. Fisiol. Ginjal 310, F1351–F1355

7. Govindarajan, R., dan Sparreboom, A. (2016) Pengangkut obat: Kemajuan dan peluang. klinik farmasi. Ada. 100, 398–403

8. You, GF, dan Morris, ME (2014) Kata Pengantar. Dalam Karakterisasi Molekul Pengangkut Obat dan Perannya dalam Disposisi Obat, Edisi ke-2. Disk Obat Wiley Ser, Hoboken, NJ. Xix

9. Nigam, SK, Wu, W., Bush, KT, Hoenig, MP, Blantz, RC, dan Bhatnagar, V. (2015) Penanganan obat, metabolit, dan toksin uremik olehginjalpengangkut obat tubulus proksimal. klinik Selai. Soc. Nefrol. 10, 2039–2049

10. Bhatnagar, V., Richard, EL, Wu, W., Nievergelt, CM, Lipkowitz, MS, Jeff, J., Maihofer, AX, dan Nigam, SK (2016) Analisis ABCG2 dan transporter urat lainnya dalam asam urat homeostasis kronisginjalpenyakit: Potensi peran penginderaan jauh dan pensinyalan. klinikGinjalJ. 9, 444–453 Peran OAT1 dan OAT3 dalam metabolisme triptofan

12 J.Biol. Kimia (2021) 296 100575

11. Nigam, SK, dan Bhatnagar, V. (2018) Sistem biologi pengangkut asam urat: Peran penginderaan jauh dan pensinyalan. Curr. pendapat. Nefrol. Hipertensi. 27, 305–313

12. Nigam, SK, dan Bush, KT (2019) Sindrom uremik kronisginjalpenyakit: Perubahan penginderaan jauh dan pensinyalan. Nat. Pdt. Nefrol. 15, 301–316

13. Saito, H. (2010) regulasi patofisiologi transporter organisasi SLC22A ginjal pada akutginjalcedera: Implikasi farmakologis dan toksikologis. farmasi. Terapi. 125, 79–91

14. Lepist, EI, dan Ray, AS (2017) Di luar interaksi obat-obat: Efek penghambatan transporter pada antibiotik, nutrisi, dan racun. Pendapat Ahli. Metabolisme Obat. racun. 13, 1075–1087

15. Duan, P., Li, SS, Ai, N., Hu, LQ, Welsh, WJ, and You, GF (2012) Inhibitor ampuh pengangkut anion organik manusia 1 dan 3 dari perpustakaan obat klinis: Penemuan dan karakterisasi molekuler . mol. Farmasi. 9, 3340–3346

16. Evers, R., Piquette-Miller, M., Polli, JW, Russel, FGM, Sprowl, JA, Tohyama, K., Ware, JA, de Wildt, SN, Xie, W., Brouwer, KLR, dan Consortium, IT (2018) Perubahan terkait penyakit pada transporter obat dapat berdampak pada farmakokinetik dan/atau toksisitas obat: Buku putih dari International Transporter Consortium. klinik farmasi. Ada.104, 900–915

17. Masereeuw, R., Mutsaers, HA, Toyohara, T., Abe, T., Jhawar, S., Manis, DH, dan Lowenstein, J. (2014)ginjaldan pembuangan toksin uremik: Glomerulus atau tubulus? mani. Nefrol. 34, 191–208

18. Liu, Y., Prentice, KJ, Eversley, JA, Hu, C., Batchuluun, B., Leavey, K., Hansen, JB, Wei, DW, Cox, B., Dai, FHF, Jia, WP , dan Wheeler, MB (2016) Peningkatan CMPF yang cepat dapat bertindak sebagai titik kritis dalam perkembangan diabetes. Perwakilan Sel 14, 2889–2900

19. Prentice, KJ, Luu, L., Allister, EM, Liu, Y., Jun, LS, Sloop, KW, Hardy, AB, Wei, L., Jia, WP, Fantus, IG, Manis, DH, Sweeney , G., Retnakaran, R., Dai, FF, dan Wheeler, MB (2014) Metabolit asam lemak furan CMPF meningkat pada diabetes dan menginduksi disfungsi sel beta. Metab Sel. 19, 653–666

20. Engelhart, DC, Granados, JC, Shi, D., Saier, MH, Jr., Baker, ME, Jr., Abagyan, R., dan Nigam, SK (2020) Analisis biologi sistem mengungkapkan delapan subkelompok transporter SLC22, termasuk OATs, OCTs, dan OCTNs.Int. J. Mol. Sci. 21, 1791