Sifat kimiawi Mannoglucan Dari Cistanche Deserticola

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

1. Bahan

Pasta oral untuk kuda dari dua produsen berbeda digunakan yang masing-masing mengandung 10 mg/g (A) atau 20 mg/g (B) ivermectin. Uji kuantitatif untuk ivermectin dilakukan dan isinya adalah 104,4– 107,7% dari konsentrasi yang dinyatakan.

2. Tes pembubaran

Tes ini dilakukan dengan ph. Eur. alat dayung (Pharma Test, Heinberg, Jerman), pada agitasi 75 rpm atau 50 rpm, pada 37 -0,5 C. Natrium lauril sulfat (BDH Chemicals, Poole, Inggris) 0,5% (b / v) larutan berair digunakan sebagai media pembubaran (900 ml). Pasta (4 g A atau 2 g B) ditempatkan ke dalam kapal dengan jarum suntik dengan kanula (A) atau menjatuhkan sampel pada permukaan media pembubaran (B). Setelah interval waktu (15, 30, 45, 60 menit, dan 2 jam), sampel media pembubaran ditarik (2 ml), disaring melalui filter kaca, dan dianalisis.

3. Analisis HPLC

Penentuan ivermectin dilakukan dengan metode HPLC yang dimodifikasi seperti yang dijelaskan dalam Ph. Eur. Larutan yang dianalisis diencerkan dengan metanol (1: 10). Sistem HPLC terdiri dari kolom oktadecyl (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integrator D-12500 A, detektor UV-Vis L-4250, pompa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Jerman). Campuran asetonitril: metanol: air (64: 24: 16) digunakan sebagai fase bergerak dengan laju aliran 1,9 ml / menit. Volume sampel yang disuntikkan adalah 20 ml dan deteksi dilakukan pada 254 nm.

4. Studi kelarutan

Akses zat dikocok dalam labu kaca yang tertutup rapat dengan pelarut yang sesuai (Tabel 1) selama 20 jam pada 37 0,1 C. Suspensi disaring dan filtrat, setelah pengenceran dalam metanol, dianalisis oleh HPLC.

5. Stabilitas dalam larutan asam

Larutan ivermectin dalam HCl 0,1 M disimpan dalam botol kaca yang tertutup rapat pada 20 C dan 37 C. Kromatogram larutan dicatat pada t 1/4 0 dan setelah 1, 2 dan 6 jam. Luas ivermectin (waktu retensi 10,5 menit) dan puncak tambahan dihitung.

Referensi

Panduan FDA untuk industri: SUPAC-SS bentuk sediaan semisolid nonsteril. Perubahan scale-up dan postapproval: kimia, manufaktur, dan kontrol; pengujian rilis in vitro dan dokumentasi bioequivalence in vivo. Mei 1997. Pedoman FIP untuk pengujian pembubaran produk oral padat (1997) Pembubaran. Teknol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Pedoman FIP / AAPS untuk pembubaran / in vitro rilis pengujian bentuk sediaan baru / khusus, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artikel 7 Pusat Penelitian Modern untuk Pengobatan Tradisional Cina, Sekolah Ilmu Farmasi, Pusat Ilmu Kesehatan Universitas Peking, Beijing, Cina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Diterima 13 Februari 2004, diterima 4 April 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Pusat Penelitian Modern untuk Pengobatan Tradisional Cina, Sekolah Ilmu Farmasi, Pusat Ilmu Kesehatan Universitas Peking, No. 38, Xueyuan Road, Distrik Haidian, Beijing 100083, Cina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Mannoglucan baru dariCistanche deserticoladari Cina dicirikan. Senyawa ini bertanggung jawab untuk stimulasi ringan proliferasi limfosit T dan B yang diinduksi mitogen.

Cistanche deserticolaY. C. Ma adalah holoparasit yang tumbuh di akar tanaman dikotil Haloxylon ammodendron Bunge yang tersebar luas di barat laut Cina. Karena merupakan tonik penting dalam pengobatan oriental, banyak komponen aktif dan kegiatan farmakologis telah diklaim (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa dkk. 1990). Sifat-sifat ini mungkin terkait dengan beberapa komponen polisakarida dariCistancheyang belum diselidiki. Polisakarida pektik tensil mikogenik dan polisakarida netral telah diisolasi dan dikarakterisasi dariCistanche deserticoladari Mongolia (Radna et al. 1996; Anna dkk. 1997; Bozena dkk. 1999). Di sini kami melaporkan sifat kimia mannoglucan baru dariCistanche deserticoladari Cina, yang bertanggung jawab untuk stimulasi ringan proliferasi limfosit T dan B yang diinduksi mitogen. Setelah batangCistanche deserticolaY. C. Ma diekstraksi dengan etanol 95%, air suling dingin digunakan untuk mengekstraksi residu. Ekstrak air dingin diendapkan dengan EtOH, protein dihilangkan dan dialisis, memperoleh CCDP polisakarida kasar. Polisakarida mentah difraksinasi pada kolom DEAE dan kolom Sephadex G-150 untuk menghasilkan polisakarida bebas protein (CDP-6), yang terdiri dari glukosa (89,2%) dan mannosa (10,4%), dan di mana rata-rata Mr diperkirakan 6,8 -104. Polisakarida CDP-6 menunjukkan [a 20 D 42 (c 1, H2O). Konfigurasi absolut gula ditentukan oleh GC TMS (– )-2-butil glikosida. CDP-6 dimetilasi (Needs et al. 1993), dihidrolisis, diubah menjadi asetat alditol, dan dianalisis oleh GC dan GC-MS (Tabel). Hasil ini bersama dengan data rasio molar dari analisis metilasi menunjukkan bahwa CDP-6 memiliki Glcp yang sebagian besar terkait dengan 1,6 dan tulang punggung 1,6- yang terkait dengan tingkat yang lebih kecil yang bercabang pada O-3 mannose. Analisis metilasi dua polimer (CDP-6-1, CDP-6-2) dari hidrolisis parsial mengkonfirmasi bahwa CDP-6 memiliki tulang punggung yang terdiri dari residu glukosil terkait 1,6 dan residu mannosil terkait 1,6,6, yang disubstitusi pada O-3 mannose oleh cabang yang terdiri dari terminal, residu glukosil terkait 1,6-terkait, dan residu mannosil yang terhubung 1,3,6. Menurut rasio molar dan literatur (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), spektrum NMR 13C dari CDP-6 menunjukkan sinyal karena karbon anomerik dari a- d-Glcp (C-1 pada 98,4 ppm), bd-Map (C-1 pada 104,3-104,9 ppm) dan a-d-Map (C-1 pada 100,0 ppm). Spektrum 1 H NMR CDP-6-2 dalam D2O menunjukkan sinyal proton yang sesuai dengan a-d-Glcp (H-1 pada 4,94–4,95 ppm) dan a- d-Map (H-1 pada 4,96–5,00 ppm). Spektrum NMR 13C DARI CDP-6-2 dalam D2O menunjukkan sinyal proton yang sesuai dengan a-D-Glcp (C-1 pada 98,6 ppm) dan a-d-Map (C-1 pada 98,4ppm). Mannoglucan dilaporkan memiliki glucopyrannan 1,4-linked dan 1,4-linked mannopyrannan backbone (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 memiliki beberapa fitur struktural yang berbeda dengan Glcp yang terhubung dengan a-1,6 dan tulang punggung Peta yang terhubung dengan b-1,6, dan digantikan oleh cabang Mannoglucan (Gbr.). Untuk menyelidiki penggunaanCistanche deserticoladalam pengobatan tradisional, efek CDP-6 pada sistem sel T dan B dievaluasi. Itu ditemukan untuk sedikit merangsang proliferasi limfosit T dan B yang diinduksi mitogen.

Eksperimental

1. Prosedur umum

Rotasi optik diukur dengan polarimeter otomatis W22-1S. Spektrum IR ditentukan pada spektrometer Perkin-Elmer 599B. Analisis GC dilakukan pada instrumen Agilent HP6890N, dilengkapi dengan detektor FID. GC-MS dilakukan pada instrumen Finnigan Trace GC-MS. Homogenitas dan Mr dari CDP-6 diperkirakan dari kurva kalibrasi volume elusi dextrans standar, yang dilakukan pada

peralatan seri Agilent 1100 dengan kolom Shodex KS-805.1 H NMR dan spektrum NMR 13C direkam dengan instrumen INOVA-500. Kandungan protein dianalisis dengan metode Bradford (Andre et al. 1975). Monosakarida dianalisis mengenai alditol asetat mereka setelah mereka dihidrolisis (2 M TFA, 2 jam, 110 C), berkurang dan asetat. Hidrolisat dianalisis menggunakan TLC pada pelat gel silika yang mengandung 5% natrium dihidrogen fosfat dalam BuOH-EtOAc-isopropyl alcohol-HOAC––H2Opyridine (3,5: 10: 6: 3,5 : 3 : 3) dan gula terdeteksi dengan cara disemprotkan dengan orcinol-H2SO4. Asetat alditol yang dihasilkan dianalisis oleh GLC menggunakan kolom kapiler HP-5 (30 m 0,32 mm). CDP-6 dimetilasi dengan metode Ciucanu, diikuti oleh hidrolisis, dan dianalisis sebagai asetat alditol metilasi sebagian oleh GC-MS. Setelah hidrolisis parsial, produk dialisis dan dipisahkan, memperoleh dua polimer, CDP-6-1 dan CDP-6-2.

2. Bahan tanaman

Pabrik ini dikumpulkan dari Provinsi Mongolia Dalam di Cina pada Agustus 2001 dan diidentifikasi oleh Hu-Biao Chen, Departemen Kedokteran Alam, Sekolah Ilmu Farmasi, Pusat Ilmu Kesehatan Universitas Peking. Spesimen voucher [E-1-(9)] dari pabrik ini disimpan di Sekolah Ilmu Farmasi, Universitas Peking. 3. Ekstraksi, isolasi, dan pemurnian polisakarida CDP-6 BatangCistanche deserticolaY. C. Ma (1500 g) diekstraksi dengan etanol 95% (6 L) di bawah refluks. Residu etanol kering yang tidak larut dimaserasi tiga kali dengan air suling dingin per 12 jam. Ekstrak air dingin disaring dan filtrat disentrifugasi. Setelah presipitasi dengan empat volume EtOH (pengadukan dan berdiri selama 24 jam pada 4 C), produk endapan (35,5 g) diperoleh. Protein dalam endapan dihilangkan dengan metode Savage. Setelah pembubaran dalam air suling, residu (25,5 g) dialisis dan diliofilisasi (hasil: 10,6 g). Polisakarida kasar (8 g) dilarutkan dalam air suling (100 mL, 8% b / v) dan dipisahkan menggunakan kolom DEAE (70 5 cm, gradien 0-2 M NaCl, per 1,5 L). Fraksi eluted air (600 mg) diperoleh. Sampel (250 mg) dimurnikan dengan kromatografi permeasi gel kolom pada kolom Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL per fraksi). Fraksi CDP-6 (1500-1600 mL) dikumpulkan, dialisis, dan dikeringkan beku. Setelah di desalted oleh Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) diperoleh dan ditentukan sebagai puncak tunggal oleh HPSGC.

Pengakuan:Penulis berterima kasih kepada Dr. Baomei Shao dan Prof. Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, untuk mengukur aktivitas imunomodulasi CDP-6.