Aplikasi Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) Ekstrak Daun Sebagai Pemutih Kulit Dan Agen Anti-penuaan dalam Prototipe Kosmetik Alami

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Yan Yi Sim & Kar Lin Nyam

ABSTRAK

Di Malaysia, limbah industri dariHibiscus cannabinusIndustri L. (kenaf), terutama cuti, menyebabkan tantangan dalam keberlanjutan. Aktivitas biologis daun kenaf dilaporkan oleh beberapa penelitian sebelumnya, oleh karena itu, dapat dipercaya bahwa ekstrak daun kenaf (KLE) dapat digunakan sebagai bahan fungsional dalam formulasi kosmetik. Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan formulasi kosmetik alami yang mengandung KLE dan mengevaluasi karakteristik fisikokimia, sifat mikrobiologis, stabilitas penyimpanan, aktivitas biologis (antioksidan, antityrosinase, dananti-penuaan), sitotoksisitas in vitro (pada fibroblast dermal manusia normal dan Sel melanoma B16F10) dan uji melanogenesis (aktivitas tirosinase intraseluler dan pengurangan melanin produksi). Hasil penelitian menunjukkan bahwa lotion KLE (KLEL) yang disiapkan oleh 15% kenaf seed oil (KSO) (F2) dengan 0,1 % w/ w KLE menghasilkan stabilitas fisik dan mikrobiologis terbaik, tanpa toksisitas pada sel manusia. KLEL juga disajikan kandungan antioksidan hingga 1,84 ± 0,07 mg caffeic acid equivalent (CAE)/g dan 21,62 ± 0,76 mg catechin hydrate equivalent (CHE)/g untuk total phenolic content (TPC) dan total flavonoid content (TFC), masing-masing. Selain itu, KLEL mempresentasikan kapasitas antitirosinase pada penghambatan mikofenolat (30,28 ± 3,90 %) dan difenol (11,40 ± 0,29%) pembentukan, dan mengungkapkan, untuk pertama kalinya,anti-penuaanproperti dengan menghambat kolagenase (36,41 ± 0,54 %) dan elastase (23,13 ± 1,56%) kegiatan. Mengenai penghambatan melanogenesis aktivitas, KLEL menyajikan kemanjuran tinggi dalam menekan aktivitas tirosinase seluler dan kandungan melanin pada B16F10 Sel. Secara keseluruhan, hasil dari penelitian ini sangat menjanjikan terhadap pengembangan kosmetik alami prototipe menggunakan daun kenaf.

ramuan naga cistanche gurun: anti-penuaan

1. Pendahuluan

Baru-baru ini, model ekonomi sirkular yang dapat meningkatkan keberlanjutan pengelolaan sampah dengan meminimalisir produksi sampah dan mempertahankan nilai jangka panjang, sementara mengurangi konsekuensi negatif dari kelangkaan sumber daya dan degradasi lingkungan telah memperoleh kepentingan publik (Morseletto, 2020). Secara umum, sejumlah besar produk sampingan dengan nilai ekonomi rendah dihasilkan oleh industri tanaman industri setiap tahun.Hibiscus cannabinusL. KR9 (kenaf) industri, adalah salah satu dari sektor pertanian yang berkontribusi terhadap PDB Malaysia (domestik bruto produk) dengan berat produksi batang kering kenaf meningkat dari 7,1 (000 ton) pada tahun 2013 menjadi 7,6 (000 ton) pada tahun 2014, dan pasar kenaf global diproyeksikan akan melewati US$ 854 juta pada tahun 2025 (Abdelrhman et al., 2016). Namun, sejumlah besar produk sampingan dihasilkan, seperti kenaf biji dan daun, yang berkontribusi pada masalah keberlanjutan.

Daun Kenaf, menyumbang sejumlah besar total produk sampingan, adalah yang paling tidak dicirikan dan dihargai di antara semua produk sampingan yang dihasilkan. Karena pendekatan melingkar, penting untuk menggunakan kembali atau memulihkan daun kenaf menjadi produk bernilai tambah karena menawarkan banyak manfaat di bidang ekonomi, lingkungan, dan sosial (Coderoni dan Perito, 2019). Daun kenaf terdiri dari sumber senyawa bioaktif yang kaya seperti asam klorogenat, caffeic aid, kaempferol, dan katekin hidrat sebagai dibuktikan dengan penelitian yang dilakukan oleh Kho dkk. (2019); Sim dan Nyam (2019), dan Haw dkk. (2020). Namun, biasanya ditujukan untuk produksi produk bernilai ekonomi rendah: serat makanan dan pakan ternak (Lim dkk., 2020).

Istilah "kembali ke alam" telah banyak digunakan dalam kosmetik penelitian dan pengembangan industri, sebagai penggunaan ekstrak botani asal telah menghasilkan penerimaan yang baik oleh konsumen. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Sim et al. (2019), ekstrak daun kenaf (KLE) menunjukkan sifat antioksidan dan antityrosinase yang menjanjikan, berpotensi untuk digunakan sebagai bahan bernilai tambah dalam pengembangan kosmetik Produk. Penting untuk mengembangkan formulasi yang stabil dan aman yang mengandung KLE karena mengandung banyak senyawa polifenol yang menunjukkan kulitWhiteningdananti-penuaanProperti. Ada beberapa persyaratan yang harus diperhitungkan ketika mengembangkan yang baru formulasi kosmetik, seperti jenis formulasi, maksud penggunaan, dan potensi interaksi antara bahan-bahan yang digunakan dalam formulasi, yang secara keseluruhan, berkontribusi pada kebutuhan akan studi stabilitas dan keselamatan (Garbossa dan Maia Campos, 2016).

Studi stabilitas, yang meliputi studi fisika, kimia, dan karakteristik mikroba, diperlukan untuk formulasi kosmetik setelah proses pengembangan. Selain itu, untuk mencegah efek samping atau reaksi alergi, produk kosmetik juga harus diuji dengan menggunakan in uji sitotoksisitas vitro pada garis sel kulit manusia normal. Dengan demikian, tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengembangkan formulasi kosmetik alami berisi KLE (kle lotion- KLEL). Kemudian, KLEL dievaluasi untuk karakteristik fisikokimia, sifat mikrobiologis, penyimpanan stabilitas, sitotoksisitas in vitro (pada fibroblast kulit manusia normal dan Sel melanoma B16F10), dan uji melanogenesis (aktivitas tirosinase intraseluler dan pengurangan produksi melanin). Penelitian ini juga memungkinkan kami untuk menentukan, untuk pertama kalinya, tidak hanya aktivitas antioksidan dan anti-tirosinase KLEL tetapi juga aktivitas penghambatan mereka pada kolagenase dan elastase.

manfaat cistanche: Anti-penuaan

2. Bahan dan metode

2.1. Bahan tanaman dan bahan kimia

SegarHibiscus cannabinusL. KR9 (kenaf) daun 90 hari setelah disemai dan benih diperoleh dari Lembaga Kenaf &Tembakau Negara (LKTN, Malaysia). Span 20 dan Tween 80 dibeli dari SigmaAldrich (Munich, Jerman), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, dan Emulgade® SE-PF bersumber dari BASF (Malaysia), dan gliserin dibeli dari Croda International Plc. (Inggris Raya). Biasa garis sel human dermal fibroblast (NHDF) bersumber dari Lonza (Basel, Swiss) dan melanoma tikus (B16F10) dibeli dari ATCC (Manassas, VA, USA). Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) dibeli dari Nacalai Tesque (Jepang). Semua lainnya bahan kimia yang digunakan adalah dari kelas reagen analitik (Belgia, Jerman, Malaysia). Air ultra-murni (Millipore, AS) digunakan di seluruh analisisnya.

2.2. Metode

2.2.1. Pengeringan daun kenaf

Daun kenaf dibersihkan dengan air yang sangat murni, dikeringkan, dan kemudian disimpan pada − 80 ◦C semalaman. Kemudian, sampel dikeringkan dalam pengering beku (Christ, Jerman), di bawah 0,0004 bar selama 48 jam, digiling, dikemas vakum, dan disimpan pada suhu − 20 °C.

2.2.2. Persiapan ekstrak daun kenaf murni parsial (KLE)

Ekstraksi ultrasonic-assisted berdenyut (PUAE) dari KLE dibawa keluar menurut Sim dkk. (2019). Sampel ditimbang dengan pelarut ekstraksi (etanol) dengan perbandingan 1:10. Kemudian, campuran itu mengalami ekstraksi berdenyut ultrasonic-assisted (Sartorius, Jerman) pada amplitudo sonikasi 50%, periode durasi pulsa 1 menit, dan 1 menit periode interval pulsa dengan suhu dipertahankan pada 18–22 ± 3°C (tiga siklus). Kemudian, ekstrak disaring dan terkonsentrasi dalam evaporator putar vakum (Buchi, Swiss). Pemurnian parsial kle dilakukan menurut Seabra et al. (2010) dengan sedikit modifikasi. Ekstrak kasar diterapkan pada kolom yang diisi dengan silika gel dan dielusi dengan pelarut gradien n-heksana- etil asetat (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90, 00:100) dan etil asetatmetanol (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90, 00:100). Si KLE yang dimurnikan sebagian terkonsentrasi hingga kering dengan menggunakan evaporator putar dan disimpan pada suhu − 20 °C untuk penggunaan di masa mendatang.

2.2.3. Ekstraksi pelarut minyak biji kenaf (KSO)

KSO diekstraksi menurut Chew et al. (2015). Biji kenaf digiling menjadi bubuk halus menggunakan penggiling (Panasonic, Jepang) dan ditambahkan dengan heksana dalam perbandingan 1:5. Minyak diekstraksi dengan menggunakan ekstraktor Soxhlet pada 60 ◦C selama 3 jam, dan heksana dihilangkan dengan menggunakan evaporator putar. Setelah pembilasan dengan nitrogen, KSO disimpan di - 20 °C untuk penggunaan di masa depan (Chew et al., 2015).

2.2.4. Pengembangan eksperimental formulasi lotion yang mengandung KLE

Pada awalnya, formulasi basis lotion (tanpa KLE) dioptimalkan oleh menggunakan 4 konsentrasi minyak biji kenaf (KSO) yang berbeda (10%, 15%, 20 %, dan 25 %). Basis lotion kemudian dievaluasi secara komparatif untuk berbagai parameter: penampilan fisik, bau, homogenitas, pH, viskositas, sentrifugasi, dan evaluasi freeze-thaw, untuk memilih yang terbaik formulasi basis lotion untuk studi lebih lanjut. Mengenai hasil dari parameter di atas, yang paling cocok formulasi dasar lotion (15% KSO) dipilih untuk penggabungan dengan KLE (0,1 % w/w) (KLEL). Secara singkat, fase non-polar (Emulgade® SEPF, Span 20, dan KSO) dan fase polar (air, Tween 80, dan gliserin) bahan-bahan dipanaskan hingga 75 ± 2°C. Kemudian, fase non-polar adalah ditambahkan setetes demi setetes ke fase kutub dengan pengadukan cepat menggunakan magnet pengaduk (Thermo Fisher Scientific, AS) pada 350 rpm untuk membentuk primer emulsi, diikuti dengan homogenisasi geser tinggi menggunakan digital IKA T25 ULTRA-TURRAX® (Peralatan Laboratorium IKA, Jerman) pada 3200 rpm selama 3 menit dan homogenisasi ultrasonik pada amplitudo 40% selama 3 menit. Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, dan KLE ditambahkan dan dicampur di emulsi O / W pada suhu kamar. Basis lotion KSO tanpa KLE berfungsi sebagai kontrol (KSOL). Sedangkan basis lotion ditambahkan dengan kojic asam (0,1 % b/b) (KAL) (KAL) berfungsi sebagai kontrol positif untuk aktivitas anti-tirosinase dan uji melanogenesis. Basis lotion ditambahkan dengan katekin hidrat (0,1 % b/b) (CHL) berfungsi sebagai kontrol positif untuk aktivitas antikolegenase dan antielastase

2.2.5. Analisis fisikokimia

2.2.5.1. Penampilan, bau, dan homogenitas.

Menurut Hanifah dan Jufri (2018), formulasi lotion diperiksa warnanya, bau dan homogenitas, dan pemisahan fase.

2.2.5.2. pH. Solusi standar digunakan untuk mengkalibrasi pH meter elektroda sebelum pengukuran.

pH sampel ditentukan dengan pH meter (Mettler Toledo, Swiss) pada suhu kamar.

2.2.5.3. Warna.

Warna akan dievaluasi dengan menggunakan colorimeter (Hunter Lab, Amerika Serikat). Hasilnya akan dinyatakan sesuai dengan ruang warna L* (cahaya), a* (hijau), b*(kuning), dan total warna diferensial (ΔE). Diferensial warna total (ΔE) untuk semua sampel adalah dihitung dengan menggunakan persamaan sebagai berikut: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ ( L∗ − L∗ 0 )2 + (a∗ − a∗ 0) 2 + ( b∗ − b∗ 0 )2 √

2.2.5.4. Viskositas.

Viskositas sampel dievaluasi dalam viskometer Brookfield menggunakan spindel LV-64 menurut Gyawali et al. (2016) dengan sedikit modifikasi. Sampel langsung direndam ke dalam spindel dengan laju rotasi 100 rpm dan viskositas (cP) diukur.

2.2.5.5. Penyebaran.

Penyebaran sampel ditentukan oleh metode pelat paralel (Gyawali et al., 2016). Sampelnya adalah ditimbang dengan tepat (1 g) dan ditempatkan di atas salah satu slide kaca (20 × 20 cm2 ). Kemudian, slide lainnya ditempatkan di atas sampel dan Berat 100 g ditempatkan pada slide atas, untuk memastikan bahwa sampel ditekan secara merata. Setelah 1 menit, beratnya dihilangkan, dan diameter sebaran (cm) diukur.

2.2.5.6. Evaluasi sentrifugasi.

Sampel dimuat ke dalam tabung sentrifugasi dan kemudian disentrifugasi pada 3750 rpm selama 30 menit (Eppendorf 5417R, Amerika Serikat). Uji sentrifugasi ini (sama dengan gravitasi 1 tahun) menentukan stabilitas sampel (Hiola et al., 2018).

2.2.5.7. Evaluasi pembekuan-pencairan.

Studi pembekuan-pencairan dilakukan menurut metode sebelumnya dengan beberapa modifikasi (Krongrawa dkk., 2018). Setiap sampel disimpan secara bergantian pada suhu dingin, 4 ± 1 ◦C (24 jam) dan suhu panas, 45 ± 1 ◦C (24 jam) dengan 75% ± 2% RH (kelembaban relatif) selama 6 siklus dalam wadah kaca kedap udara. Si viskositas sampel ditentukan setelah tekanan suhu daur.

2.2.6. Penentu kandungan antioksidan

2.2.6.1. Total konten fenolik (TPC).

Total konten fenolik adalah ditentukan menurut Lim et al. (2007). Sampel (10 mg/mL) adalah dicampur dengan reagen Folin-Ciocalteu 10% dan 7,5% (b/b) Na2CO3, diikuti oleh inkubasi 30 menit dalam gelap. Penyerapan diambil di 765 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-vis (Secoman, Prancis). Si persamaan kalibrasi untuk asam caffeic adalah y = 0,0269 + 9,69x ( r 2 = 0,999) (Sim et al., 2019). Hasilnya dinyatakan sebagai mg dari caffeic acid equivalent (CAE)/ g sampel.

2.2.6.2. Total kandungan flavonoid (TFC).

Kandungan flavonoid total adalah dievaluasi menurut Ogbunugafo et al. (2011). Secara umum, sampel (10 mg/mL) dicampur dengan 15% NaNO2, 10% larutan AlCl3, air ultra-murni, dan 1 M NaOH. Absorbansi diukur segera pada 510 nm dibandingkan dengan standar yang disiapkan menggunakan katekin hidrat (0,02− 0,1 mg/mL). Persamaan kalibrasi untuk katekin hidrat adalah y = 0,004 + 3,1x ( r 2 = 0,999) (Sim et al., 2019). Kandungan flavonoid total (TFC) dinyatakan sebagai miligram katekin setara hidrat (CHE)/ g sampel.

manfaat ekstrak cistanche: anti-penuaan

2.2.7. Aktivitas antikolasegenase

Aktivitas anti kolagenase berdasarkan degradasi proteolitik antara kolagenase dan substrat sintetis (FALGPA- N-(3-[2-Furyl]- akriloil)-Leu-Gly-Pro-Ala) pada 345 nm di hadapan kolagenase inhibitor dilakukan menurut Barrantes dan Guinea (2003) dengan beberapa modifikasi. Kolase 0,25 unit/mL (40 μL) diturunkan dari Clostridium histolyticum diizinkan untuk bereaksi dengan sampel uji 10 μL dan buffer tricine 20 μL 50 mM (pH 7,5, dengan CaCl2 100 mM dan 5 mM NaCl) dalam gelap selama 15 menit. Setelah pra-inkubasi, sejumlah 40 μL dari larutan FALGPA 2 mM ditambahkan ke setiap sumur. Setiap sampel disertai dengan kekosongan yang memiliki semua komponen kecuali FALGPA dan absorbansi ditentukan setelah diinkubasi selama 20 menit.

2.2.8. Analisis umur simpan bakteriologis KLEL

Metode yang digunakan untuk jumlah mikroba aerobik total (TAMC) dan total ragi dan jumlah cetakan (TYMC) klel dimodifikasi dari manual analisis bakteriologis FDA (BAM) (Huang et al., 2017). Sampel (1 g) dicampur dengan 1 mL steril Tween 80 dan volumenya adalah disesuaikan dengan air pepton steril untuk mendapatkan seri pengenceran lengkap dari 10− 1 hingga 10− 3. Untuk TAMC, sampel diinokulasi pada nutrisi agar-agar menggunakan metode spread plate, dan kemudian piring-piring itu diinkubasi pada 30 ± 2 ◦C selama 48 jam. Dalam kasus TYMC, sampelnya adalah diinokulasi pada piring agar dekstrosa kentang menggunakan metode spread plate, dan piring-piring tersebut kemudian diinkubasi pada 30 ± 2 ◦C selama 7 hari. Si lempeng diperiksa untuk pertumbuhan mikroba setelah masa inkubasi.

2.3. Analisis statistik

Semua hasil dianalisis menggunakan paket statistik Minitab 16.2.1 (Minitab Inc., Pennsylvania, AS), Analisis Varians Satu Arah (ANOVA) dilakukan, diikuti oleh tes Tukey untuk menentukan perbedaan yang signifikan (p< 0.05).="" means="" ±="" standard="" deviation="" (sd)="" (n="3)" was="" presented="" for="" data="">

3. Hasil dan diskusi

3.1. Optimalisasi formulasi basis lotion

Menurut Hiola et al. (2018), optimalisasi basis lotion (pra-formulasi) memiliki peran penting untuk mendapatkan formulasi yang baik dan stabil. Oleh karena itu, basis lotion dioptimalkan dengan menggunakan 4 persentase berbeda dari KSO seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1. Mereka dievaluasi oleh penampilan, bau, homogenitas, stabilitas fisik, pH, daya sebar, viskositas, dan analisis pencairan beku (bahan tambahan- S1 dan S2). Semua basis lotion formulasi yang disiapkan dengan menggunakan KSO memiliki kuning susu muda hingga susu warna kuning, dengan bau harum (Chu dan Nyam, 2020). Berdasarkan hasil yang diperoleh, semua nilai pH formulasi basis lotion berada di dalam kisaran pH kulit (4-6), dan ini penting untuk meminimalkan alergi reaksi dan memastikan stabilitas formulasi kosmetik atas penyimpanan waktu (Chu dan Nyam, 2020). Semua formulasi dasar lotion menunjukkan penurunan viskositas setelah analisis freeze-thaw, tetapi masih dalam kisaran untuk lotion yang baik (500–5000 cP) (Kusuma et al., 2017). Untuk spreadabilitas, semakin tinggi konsentrasi KSO, semakin kecil spreadability-nya diameter karena viskositas tinggi. Semakin besar daya sebarannya, semakin mudah formulasi kosmetik dapat diterapkan pada permukaan kulit. Untuk stabilitas uji dengan ketahanan terhadap sentrifugasi, F2 dan F3 tidak menunjukkan pemisahan fase, menunjukkan bahwa kedua formulasi stabil selama 1 tahun. Namun, F3 tidak dapat dituangkan dengan mudah dan memberikan tampilan yang menyerupai persiapan krim karena memiliki viskositas yang lebih tinggi daripada F2. Oleh karena itu, F2 dipilih sebagai basis lotion yang dioptimalkan untuk digabungkan dengan KLE.

untuk apa cistanche digunakan: anti-penuaan

3.2. Evaluasi formulasi kle lotion (KLEL)

3.2.1. Analisis fisikokimia

Berdasarkan hasil pada Tabel 2, basis lotion ditambahkan dengan KLE menunjukkan warna susu terang dengan aroma yang menyenangkan dan tidak ada pemisahan fase Diamati. KLEL menunjukkan nilai pH yang lebih tinggi daripada kontrol, menunjukkan Penambahan KLE ke dalam formulasi kosmetik dapat mengakibatkan peningkatan pH nilai. Nilai pH sampel semuanya kompatibel dengan pH kulit jangkauan dan aman untuk kulit. Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam viskositas dan spreadabilitas antara KLEL dan kontrol, yang menunjukkan penambahan KLE ke dalam emulsi tidak mempengaruhi viskositas dan daya sebaran. Penting perubahan diamati dalam nilai L*, a*, dan b* klel dibandingkan dengan kontrol, yang membuktikan bahwa warna lotion adalah dipengaruhi oleh warna hijau alami daun kenaf. KLEL memiliki terhijau untuk nilai a* (-2,24 ± 0,03) dan nilai tersulap untuk nilai b* (15,54 ± 0,01). Perbedaan warna total (ΔE) klel dibandingkan dengan kontrol yang signifikan secara statistik p<0,05, dengan="" nilai="" 6,82="" ±="" 0,04="" untuk="" klel.="" studi="" sebelumnya="" menganggap="" δe="2" sebagai="" ambang="" batas="" untuk="" diskriminasi="" visual="" (zhou="" et="" al.,="" 2009).="" dengan="" demikian,="" hasil="" δe="" membuktikan="" bahwa="" penambahan="" kle="" dapat="" mempengaruhi="" warna="" kosmetik="">

3.2.2. Analisis kandungan antioksidan

Tabel 3 menyajikan jumlah total fenolik (TPC) dan flavonoid konten (TFC). Hasil yang diperoleh menunjukkan basis lotion yang dirumuskan dengan KLE mengandung TPC yang jauh lebih tinggi (1,84 ± 0,07 mgCAE/g) daripada kontrol (1,64 ± 0,06 mgCAE /g). Sementara, untuk TFC, KLEL juga menunjukkan signifikan lebih tinggi di TFC (21.62 ± 0.76 mgCHE/g) dibandingkan dengan kontrol (19,42 ± 0,27 mgCHE/g). Dalam kisaran yang sama dari beberapa produk sampingan tanaman, dimasukkannya KLE secara dermatologis masih ada kandungan antioksidan yang tinggi, menyoroti potensi sumber senyawa polifenol dalam industri kosmetik (Adhikari et al., 2019; Rodrigues dkk., 2014). Menurut studi oleh Haw et al. (2020), daun kenaf kaya akan berbagai jenis senyawa polifenol seperti sebagai asam caffeic, asam tanat, katekin, dan asam klorogenat.

3.2.3. Analisis aktivitas antioksidan

Kemampuan pemulung radikal bebas dari lotion diselidiki dengan menggunakan uji DPPH dan ABTS. Tabel 3 menunjukkan bahwa KLEL menunjukkan DPPH yang lebih tinggi (1,16 ± 0,18 mgTEAC/g) dan ABTS (0,50 ± 0,04 mgTEAC/g) aktivitas pemulungan radikal dibandingkan dengan menguasai. Temuan uji DPPH dan ABTS telah menunjukkan pola yang sama seperti di TPC dan TFC, di mana ia dapat sangat meningkatkan aktivitas antioksidan dengan menambahkan KLE ke dalam basis lotion, temuan ini telah menyarankan bahwa KLE mengandung pemulung radikal bebas yang bila diterapkan ke dalam formulasi kosmetik, dapat memainkan peran penting sebagai antioksidan utama dalam menekan radikal bebas yang menyebabkan penuaan kulit. Selain itu, KLEL (0,69 ± 0,20 mgTEAC/g) juga menunjukkan kemampuan reduksi ion besi tertinggi yang signifikan daripada kontrol (0,46 ± 0,09 mgTEAC/g), sesuai dengan DPPH dan ABTS. Sana adalah kebutuhan akan pasokan senyawa antioksidan yang konstan dari eksternal sumber-sumber seperti kosmetik untuk mengembalikan sistem pertahanan antioksidan kulit individu terhadap ROS yang menyebabkan penuaan kulit (Działo et al., 2016). Di selain itu, formulasi lotion dengan aktivitas pemulungan radikal dan mengurangi kekuatan dapat digunakan sebagai kulitWhiteningagen oleh produksi melanin yang diinduksi UV yang diatur ke bawah (Działo et al., 2016).

3.2.4. Aktivitas penghambatan enzim

Lotion diuji terhadap tirosinase, yang mengandung tembaga enzim metalloprotein yang terlibat dalam biosintesis melanin, untuk penilaian aktivitas antityrosinase in vitro. Tabel 5 menunjukkan bahwa KLEL (30,28 ± 3,90 %) tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dalam aktivitas anti-tirosinase dengan kontrol positif (34,05 ± 4,60 %) ketika menggunakan L-tirosina sebagai substrat. Namun, ALL (11,40 ± 0,29 %) menunjukkan aktivitas antitirosinase yang lebih rendah daripada kontrol positif (15,01 ± 0,84 %), saat menggunakan L-DOPA sebagai substrat. Ini menunjukkan bahwa KLEL terutama menghambat mikofenol daripada difenol. In vitroanti-penuaansifat dievaluasi melalui aktivitas penghambatan kolagenase dan elastase. Enzim seperti kolagenase dan elastase dapat mendegradasi kolagen dan elastin, yang bertanggung jawab atas kulit integritas dan elastisitas (Jesumani et al., 2019). Jadi, penghambatan aktivitas elastase dan kolagenase akan mengurangi degradasi elastin dan kolagen sehingga mencegah pembentukan kerutan, salah satu tanda utama penuaan. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 5, KLEL menunjukkan aktivitas anti kolagenase (36,41 ± 0,54 %) dan antielastase (23,13 ± 1,56%) yang luar biasa dibandingkan dengan kontrol positif (CHL). KSOL juga menunjukkan antityrosinase (18,82 ± 0,17% (L-tirosina sebagai substrat); 8,48 ± 0,29% (L-DOPA sebagai substrat), anti kolagenase (18,84 ± 0,63 %) dan aktivitas antielastase (5,78 ± 0,59%), tetapi lebih rendah dari ALL. Ini mungkin menunjukkan bahwa kombinasi KLE dan KSO menunjukkan efek sinergis dengan aktivitas penghambatan enzim yang lebih baik. Hal ini didukung oleh studi yang dilakukan oleh Pascoal et al. (2015) dan Chew et al. (2016), di mana KSO kaya akan tokoferol, sedangkan KLE kaya akan turunan quercetin dan kaempferol. Senyawa ini menunjukkan kulitWhiteningdananti-penuaanproperti, dengan minat pada pengurangan hiperpigmentasi kulit dan produksi keriput (Lin et al., 2007; Keen dan Hassan, 2016).

3.2.5. Uji melanogenesis in vitro

Untuk lebih mengeksplorasi kulitWhiteningproperti KLEL, B16F10 model sel melanoma digunakan untuk mempelajari efek penghambatan pada melanogenesis. Untuk aktivitas tirosinase seluler, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5a, KLEL (32.35 %) pada 500 μg/mL menunjukkan penghambatan yang jauh lebih kuat pada aktivitas tirosinase seluler daripada KAL (14,85 %) dan KSOL (13,64 %), jika dibandingkan dengan sel kontrol yang diobati a-MSH. Untuk kandungan melanin ekstraseluler dan intraseluler, klel tergantung dosis mengurangi kandungan melanin sel B16F10 (Gbr. 5b dan c). ALL (500 μg/mL) ditemukan memiliki penghambatan yang sebanding efek pada kandungan melanin ekstraseluler (56,13 %) (dibandingkan dengan sel kontrol yang diolah MSH) dengan KAL (54,53 %). Selain itu, KLEL (36,52 %) juga menunjukkan efek penghambatan yang lebih kuat pada intraseluler kandungan melanin dari KAL (7,98 %). Sementara, KSOL juga menunjukkan penghambatan efek pada konten melanin ekstraseluler (17,73 %), tetapi tidak berpengaruh pada kandungan melanin intraseluler. Dibandingkan dengan KAL, dampak penghambatan KLEL yang lebih kuat pada penghambatan melanogenesis dapat diklarifikasi dengan aktivitas sinergis antara KSO dan KLE, yang dapat meningkatkan Sifat pemutihan kulit KLE di dasar lotion. Hasil ini lebih lanjut membuktikan bahwa KLE dapat digunakan sebagai agen pemutih kulit yang efektif di prototipe kosmetik alami.

3.2.6. Uji sitotoksisitas in vitro

Dengan menilai biokompatibilitas KLEL (analisis MTT), Viabilitas sel NHEF (setelah 24, 48, 72 jam) tumbuh di hadapan konsentrasi KLEL yang berbeda (0,125− 2 mg/mL) dipertahankan di atas 95 % (Gbr. 4a). Ini menunjukkan bahwa KLEL tidak akan menyebabkan toksisitas manusia. Sementara sel-sel melanoma B1610 banyak digunakan dalam studi untuk kulitWhiteningagen (Chatatikun et al., 2019; Lee dkk., 2019). Sebelum pengukuran kemampuan KLEL untuk menekan melanogenesis pada sel melanoma B16F10, sitotoksisitas KLEL dinilai. Seperti yang ditunjukkan dalam Gambar 4b, dipastikan bahwa KLEL tidak beracun bagi melanoma B16F10 sel pada konsentrasi lebih rendah dari 500 μg/mL. Dengan demikian, 32,5− 500 μg/mL KLEL digunakan untuk percobaan berikut.

4. Kesimpulan

Penelitian ini terbukti sangat penting dalam surat edaran yang dipenuhi model ekonomi, karena memperkenalkan aplikasi baru yang mungkin untuk kenaf daun sebagai bahan bernilai tambah tinggi dengan sifat perawatan kulit untuk industri kosmetik, yaitu antioksidan,anti-penuaan, dan kegiatan anti melanogenik. Temuan yang dipaparkan dalam penelitian ini juga menunjukkan bahwa formulasi lotion yang disusun oleh 15% KSO (F2) dengan KLE 0,1% menghasilkan stabilitas fisik dan mikrobiologis terbaik, tanpa toksisitas pada sel manusia. Sebagai kelanjutannya, studi lebih lanjut juga harus difokuskan pada tes tantangan mikroba KLEL dan kemanjuran klinis.

suplemen cistanche