Efek Antioksidatif Fenilethanoid Dari Cistanche Deserticola

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 dan Tsuneo Namba"

Ekstrak aseton-H2O (9:1) dari batang Cistanche deserticola menunjukkan aktivitas penangkap radikal bebas yang kuat. Sembilan senyawa fenilethanoid utama diisolasi dari ekstrak ini. Mereka diidentifikasi oleh NMR sebagai acteoside, isoacteoside, l^acetylacteoside, tubuloside B, echinacoside, tubuloside A, syringalide A 3z-a-rhamno-pyranoside, cistanoside A dan cistanoside F. Semua senyawa ini menunjukkan aktivitas penangkapan radikal bebas yang lebih kuat daripada a -tocopherol pada radikal 1,1 -diphenyI-2-picrylhydrazy 1 (DPPH) dan xanthine/xanthine oxidase (XOD) menghasilkan radikal anion superoksida (Oj). Di antara sembilan senyawa, isoacteoside dan tubuloside B, yang bagian caffeoylnya berada pada posisi d' dari glukosa, menunjukkan efek penghambatan pada XOD. Kami selanjutnya mempelajari efek fenilethanoid ini pada peroksidasi lipid pada mikrosom hati tikus yang diinduksi oleh metode enzimatik dan non-enzimatik. Seperti yang diharapkan, masing-masing dari mereka menunjukkan penghambatan yang signifikan pada kedua asam askorbat/Fe2 plus dan ADP/NADPH/Fe3 plus menginduksi peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus, yang lebih kuat daripada -tokoferol atau asam caffeic. Efek antioksidan ditemukan dipotensiasi oleh peningkatan jumlah gugus hidroksil fenolik dalam molekul.

Kata kunci: Cistanche deserticola; fenilethanoid;antioksidan; DPPH (1 ,1 -difenil-2-pikrilhidrazil) radikal; radikal anion superoksida; peroksidasi lipid

batang Cistanche deserticola

Batang Cistanche spp. (Cistanche Herbal, famili Orobanchaceae) adalah tonik dalam pengobatan tradisional Cina yang digunakan untuk defisiensi ginjal yang ditandai dengan impotensi, sensasi dingin di pinggang dan lutut, kemandulan wanita, dan sembelit karena kekeringan usus pada pikun.Sejumlah konstituen termasuk fenil-etmoid (kadang-kadang disebut fenilpropanoid),2) ir idoid3* dan polisakarida4) telah diisolasi dari tanaman ini. Sato et al5} melaporkan bahwa beberapa fenilethanoid dari obat kasar ini menunjukkan efek perlindungan terhadap penurunan perilaku seksual dan belajar pada tikus yang digantung dengan stres. Feniletanoid adalah konstituen utama dari tanaman ini dan dianggap berkontribusi pada berbagai tindakan obat ini.6)

Feniletanoid tersebar luas di kingdom tumbuhan dan beberapa telah ditemukan memiliki aktivitas anti-anoxia,7) anti-neoplasma, 8) penghambatan enzim,9* anti-inflamasi,10) antinefritis,1 n anti-mikroorganisme, dan immunomodulation.12) Studi tentang aktivitas antioksidan beberapa fenilethanoid dari Pedicularis juga dilaporkan,13 -15) tetapi tidak ada laporan yang ditemukan berhubungan dengan aktivitas antioksidan fenilethanoid dari spesies Cistanche.

Telah diketahui dengan baik bahwa radikal bebas terlibat secara kritis dalam berbagai patogen seperti kanker, gangguan kardiovaskular, radang sendi, peradangan, serta dalam proses degeneratif yang terkait dengan penuaan.16™18) Dalam penyaringan kami untuk agen anti-penuaan dari sumber daya alam , kami menemukan bahwa masing-masing ekstrak CHC13 (C), EtOAc (E), aseton (A), aseton-H2O (9:1) (AH), dan air (H) dari batang Cistanche deserticola menunjukkan DPPH yang kuat. aktivitas pemulungan radikal (Gbr. 1), di antaranya, yang terkuat ditunjukkan oleh ekstrak aseton—H?.(9:1) (AH). Ekstrak aseton-H2O (9:1) mengandung rasio fenilethanoid yang tinggi, yang mungkin merupakan konstituen aktif dari efek penangkal radikal bebas. Kami mengisolasi fenilethanoid utama dari ekstrak ini dan mempelajari efek antioksidan dengan mengaisnya pada radikal DPPH dan xanthine/XOD menghasilkan radikal anion superoksida, dan penghambatannya terhadap asam askorbat/Fe2 plus dan ADP/NADPH/Fe3 plus menginduksi peroksidasi lipid di hati tikus mikrosom.

Cistanche deserticola

BAHAN DAN METODE

Reagen Poliamida C-200 (75一150/zm) dan bubuk silika (Wakogel C-200, 75—150^m) untuk kromatografi kolom, DPPH (1,1 -difenil{{ 8}}pikrilhidrazil), xanthine, XOD (xanthine oxidase), NBT (nitroblue tetrazolium), ADP, g-NADPH, asam caffeic dan a-tocopherol dibeli dari Wako Pure Chemicals, Osaka, Jepang. Malonaldehyde bis(dimethylacetal) berasal dari Tokyo Kasei, Tokyo, Jepang. BSA (bovine serum albumin) dan allopurinol berasal dari sigma, St. Louis, USA Bahan kimia lainnya adalah kelas analitis.

Instrumen UV absorbansi diukur pada aSpektrofotometer perekaman Shimadzu UV-2200, spektrum NMR dilakukan pada sistem JEOL GX-400 atau JEOL JNM-LA 400WB FT NMR.

Bahan Tanaman Obat mentah komersial (diproduksi di Nei Monggol, dibeli di Pasar Obat Mentah Bozhou, provinsi Anhui, Cina, 1995; spesifikasi voucher, TMPW No. 15479 disimpan di Museum Materia Medica, Pusat Penelitian Analitik untuk Etnomedis, Penelitian Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) diidentifikasi sebagai batang Cistanche deserticola YC Ma dengan membandingkan karakter morfologi dan anatominya dengan sampel otentik yang diberikan oleh Profesor Dawen Shi, Departemen Farmakognosi, Universitas Kedokteran Shanghai, Cina.

Ekstraksi dan Isolasi Serbuk obat kasar (5,87 kg) diekstraksi secara berurutan dengan CHC13 (12, 9 1x2) dan EtOAc (9 1 x 3) pada suhu kamar dan direfluks dengan aseton (9 1 x 3), aseton-玦0 (9:1,91x3) dan H2O (7.5 1x4) menghasilkan ekstrak CHC13 (C) (28,7g), EtOAc (E) ( 13,4g), aseton (A) (95g), aseton-H2O (9:1) (AH) (175 g) dan H2O (H) (2,51kg), masing-masing. Sebagian dari lOOg ekstrak aseton-H2O (9:1) dimasukkan ke dalam kolom poliamida C-200 (4{{50}}0 g) dan dielusi dengan H2O ({{41 }}) dan kemudian MeOH (5 1). Eluen MeOH (20 g) dimasukkan ke dalam kolom silika gel (600 g) dan dielusi dengan CHCl3-MeOH-H2O (8: 3:0.3) (5 1) untuk menghasilkan 10 fraksi. Masing-masing fraksi dimasukkan ke dalam kolom Sephadex LH-20 dan dielusi dengan berbagai perbandingan MeOH-H2O (0一50 persen ); sembilan fenilethanoid utama 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , 9 (75 mg) diperoleh.

Hewan Jantan Std: tikus Wistar (8 minggu, 230一 250 g) digunakan. Hewan-hewan tersebut dibeli dari Pusat Hewan Laboratorium Shizuoka dan diberi makan pelet chow laboratorium (Clea Japan) dan diberi air ad libitum.

Pembuatan Suspensi Mikrosom Hati Tikus Fraksi mikrosomal hati tikus dibuat dengan metode Kiso et al.l9) tetapi tanpa perlakuan awal fenobarbital. Setelah hewan dipuasakan selama 24 jam, hati diperfusi dengan larutan 0,9 persen NaCl dingin in situ, kemudian dipotong-potong tipis dan dihomogenkan dalam larutan KC1 dingin 1,15 persen (1,{{9} } ml/g berat hati basah). Homogenat diencerkan empat kali dengan larutan KC1 1,15 persen dan disentrifugasi pada 8000 g selama 20 menit pada 4 derajat. Fraksi supernatan kemudian dikumpulkan dan ultrasentrifugasi pada 105000 g selama 60 menit. Pelet yang diperoleh disuspensikan kembali dalam volume yang sama dengan larutan KC1 1,15 persen. Kandungan protein ditentukan dengan metode Lowry et menggunakan albumin sebagai standar.

Persiapan Sampel Sampel yang diuji dilarutkan dalam air atau etanol dan diencerkan dengan air hingga berbagai konsentrasi. Konsentrasi akhir etanol berada di bawah 1 persen di semua sistem pengujian kecuali pengujian radikal DPPH. Etanol pada konsentrasi akhir di bawah 1 persen tidak menunjukkan efek pada sistem pengujian ini.

DPPH Radical Scavenging Effect Efek scavenging sesuai dengan intensitas quenching DPPH radikal, seperti yang dijelaskan oleh Hatano et al.21) Lima ratus /A dari 60 m DPPH dalam EtOH ditambahkan ke 500 /zl larutan sampel dan dibiarkan bereaksi selama 30 menit pada suhu kamar, kemudian densitas optik diukur pada 520 nm. Untuk blanko, EtOH digunakan sebagai pengganti larutan DPPH, dan untuk kontrol, H2O digunakan sebagai pengganti larutan sampel. Nilai IC50 dihitung dari garis regresi di mana absis mewakili konsentrasi senyawa yang diuji dan ordinat rata-rata persen reduksi radikal DPPH dari empat pengujian terpisah.

Efek pada Generasi Radikal Anion Superoksida Produksi anion superoksida dalam sistem xantin/XOD ditentukan dengan menggunakan metode setengah ukuran dari Imanari et al.22) Campuran terdiri dari 900/zl dari 0.05m Na2CO3 (pH 10.2), 50 /il masing-masing 3mM xanthine, 3mM EDTA, 1.5mg/ml BSA, 0.75 mM NBT dan sampel yang diuji ditambahkan dengan 50 dari 0.1 mg/ml XOD untuk memulai reaksi. Setelah inkubasi selama 30 menit, reaksi dihentikan dengan 50 /il 6 mM CuCl2 dan absorbansi diukur pada 560 nm. Larutan kontrol disiapkan dengan cara yang sama, tetapi 50 /il H2O digunakan sebagai pengganti larutan sampel. Dalam larutan blanko, 50 /il H2O digunakan sebagai pengganti larutan XOD. Nilai IC50 dihitung dari garis regresi di mana absis mewakili konsentrasi log senyawa yang diuji dan ordinat rata-rata persen penghambatan pengurangan NBT empat dalam uji dependen.

Efek Penghambatan pada Aktivitas XOD Efek penghambatan pada aktivitas XOD diperkirakan dengan metode Hatano et al.* dengan beberapa modifikasi. Campuran yang terdiri dari 600/11 buffer (0,1 m larutan fosfat, pH 7,5), 50 larutan XOD (0,068 U/ml dalam buffer) dan 50 1 larutan sampel diinkubasi selama 10 menit pada 25 derajat. Kemudian, 300 pl larutan xantin (0,1 mM dalam buffer) ditambahkan ke dalam campuran, dan larutan yang dihasilkan diinkubasi selama 30 menit pada 25 derajat. Reaksi enzim dihentikan dengan menambahkan 1 n HC1 (100 /zl), dan absorbansi campuran reaksi diukur pada 295 nm. Konsentrasi asam urat yang terbentuk dalam campuran dihitung dari absorbansi, setelah dikurangi absorbansi larutan blanko yang dibuat seperti dijelaskan di atas, kecuali larutan XOD diganti dengan 50 /zl buffer. Efek penghambatan pada XOD diekspresikan oleh persen penghambatan ( persen) pembentukan asam urat vs yang di kontrol, di mana air digunakan sebagai pengganti larutan sampel. Inhibitor XOD yang terkenal, allopurinol, digunakan sebagai kontrol positif.

Efek Penghambatan Peroksidasi Lipid pada Mikrosom Hati Tikus Peroksidasi lipid pada mikrosom hati tikus yang diinduksi secara non-enzimatik oleh askorbat/Fe2 plus dan secara enzimatik diinduksi oleh ADP/NADPH/Fe3 plus diukur dengan metode Kiso et al.l9) dengan beberapa modifikasi .

a) Asam Askorbat/Fe2 ditambah Induksi Peroksidasi Lipid dalam Mikrosom Hati Tikus: Campuran reaksi terdiri dari 390/11 dari 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50pl fraksi mikrosomal dalam 1,15 persen KC1 (20mg protein/ml) dan 50 larutan sampel. Setelah menambahkan 10/11 dari 10 mM asam askorbat/0.5mM FeSO4 dan kemudian diinkubasi pada 37 derajat selama 20 menit, campuran reaksi didinginkan dalam es untuk menghentikan reaksi. Peroksidasi lipid diukur dengan metode asam tiobarbiturat24) dan dinyatakan sebagai produksi MDA (malondialdehid). Itu

b) ADP/NADPH/Fe3 plus Induced Lipid Peroxidation di Mikrosom Hati Tikus: Campuran reaksi mengandung 290贝 dari 100mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il suspensi mikrosomal dalam 1,15 persen KC1 (20mg protein/ml) dan 50 sampel dalam air. Lima puluh baru disiapkan 20 mM ADP, 50//I 1 mM NADPH dan 10 dari 2mM FeCl3 ditambahkan dan kemudian diinkubasi pada 37 derajat selama 30 menit. Peroksidasi lipid diukur dan IC50 dihitung dengan metode di atas.

manfaat cistanche: melindungi hati

HASIL

Penentuan Struktur Dengan membandingkan langsung data ^H-NMR dan 13C-NMR mereka dengan literatur,2* kesembilan fenilethanoid diidentifikasi sebagai 2,-acetylacteoside (1), cistanoside A (2), tubuloside A (3), echinacoside ( 4), acteoside (5), syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6), tubuloside B (7), isoacteoside (8) dan cistanoside F (9), masing-masing (Gbr. 2). Namun, untuk akteosida, senyawa representatif fenilethanoid, penetapan sinyal 13C-NMR dari C-3 dan C-4 dalam gugus aglikon, C-3, C-4 , C-5 dan C-6 di bagian caffeic dalam laporan sebelumnya25) membingungkan. Dengan metode 2D-NMR seperti HMBC dan HMQC, kami menetapkan dengan jelas data 13C-NMR dari akteosida sebagai bagian aglikon Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; bagian caffeoyl Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; bagian glukosa C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; dan bagian rhamnose: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C-6 : 18.46.

Hubungan struktur-aktivitas dipelajari untuk kesembilan fenilethanoid ini oleh radikal DPPH dan xantin/XOD yang menghasilkan aktivitas penangkapan radikal anion superoksida, asam askorbat/Fe2 plus dan ADP/NADPH/Fe3 plus menginduksi peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus. Asam caffeic dan a-tocopherol yang dikenal sebagai penangkal radikal bebas dan antioksidan digunakan sebagai zat kontrol positif.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC50=6.29 /im) > a-tocopherol (IC{{10) }}.2//m). Tubuloside B ,echinacoside (4), 2/-acetylacetoside (1), tubuloside A (3), acteoside (5) dan isoacteoside (8) (IC5O=2.99一3,49 /im), masing-masing memiliki empat gugus hidroksil fenolik dalam molekul yang sama menunjukkan aktivitas yang lebih kuat daripada cistanoside A (2) yang 3-OH dari bagian aglikon dimetilasi. Syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) yang hanya memiliki satu gugus OH pada bagian aglikon menunjukkan aktivitas yang relatif lemah. Cistanoside F (9), yang hanya memiliki dua gugus hidroksil yang terletak di bagian caffeoyl tetapi tidak memiliki feniletanol aglikon, menunjukkan aktivitas yang paling lemah.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 m).

Efek Penghambatan pada Aktivitas XOD Hanya isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang bagian caffeoylnya berada pada posisi 6z dari glukosa, memiliki efek penghambatan pada aktivitas XOD, dan fenilethanoid lainnya, yang memiliki bagian caffeoyl pada ^- posisi glukosa, tidak menunjukkan efek pada konsentrasi yang diuji (25-200 m) (Tabel 1). mengisolasi sembilan senyawa fenilethanoid utama dari ekstrak ini dan menentukan strukturnya dengan NMR. sistem sebagai tubuloside B (7)M2'-acetylacteoside (1) iso-acteoside (8) echinacoside (4) tubuloside A (3) M acteo side (5) > syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanosida F (9); dalam sistem ADP/NADPH/Fe3 plus sebagai tubuloside B (7)2,-acetylacteoside (^^iso acteoside (8) acteoside (5) > tubuloside A (3) > echinaco side (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9). Kedua ordo ini mirip dengan yang ada pada uji penangkap radikal bebas di atas, terutama pada uji penangkap radikal DPPH. Namun, jumlah gugus hidroksil fenolik dalam molekul memainkan peran paling penting dalam penghambatan peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus.

efek cistanche

DISKUSI

Kami menguji aktivitas penangkapan radikal bebas dari berbagai ekstrak pelarut batang Cistanche deserticola pada radikal DPPH dan menemukan bahwa ekstrak aseton-H2O (9:1) menunjukkan aktivitas terkuat. Untuk menemukan konstituen aktif dari aktivitas penangkapan radikal bebas, kami mengisolasi sembilan senyawa fenilethanoid utama dari ekstrak ini dan menentukan strukturnya dengan NMR.

Efek antioksidan dari fenilethanoid ini dievaluasi oleh aktivitas penangkapan radikal bebas dan aktivitas peroksidasi anti-lipid. A-tokoferol yang dikenal luas digunakan sebagai zat kontrol positif. sebagailipofilisitas a-tokoferol dapat mempengaruhi aktivitasnya dalam sistem uji ini kecuali dalam uji pemulung radikal DPPH, kami menggunakan asam caffeic sebagai zat kontrol positif lainnya.

Pertama, kami melakukan tes pada aktivitas penangkal radikal bebas. Semua 9 fenilethanoid yang diuji tidak diragukan lagi menunjukkan aktivitas radikal DPPH dan radikal anion superoksida yang lebih kuat daripada -tokoferol, tetapi beberapa lebih kuat dan yang lain lebih lemah daripada asam caffeic. Aktivitas penangkapan radikal meningkat dengan peningkatan jumlah gugus hidroksil fenolik. Paralelisme yang tidak lengkap dari radikal DPPH dan aktivitas penangkapan anion superoksida diyakini disebabkan oleh karakter yang berbeda antara spesies radikal dan beberapa faktor lain yang terlibat dalam dua sistem reaksi ini,21,26) karena radikal DPPH adalah radikal yang diinduksi secara kimia yang bereaksi dengan pemulung radikal dalam cara kimia sederhana, sedangkan radikal anion superoksida dihasilkan oleh xanthin/XOD, suatu reaksi enzim.

Jika fenilethanoid menghambat radikal anion superoksida yang dihasilkan xantin/XOD, penghambatan tersebut dapat dianggap sebagai hasil dari aktivitas penangkapan radikal anion superoksidanya atau (dan) penghambatannya terhadap enzim XOD,23 maka kami melakukan uji efek penghambatan xantin oksidase. Sangat menarik bahwa, secara selektif, hanya isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang bagian caffeoylnya berada pada posisi 6/- dari glukosa, yang menunjukkan penghambatan. Mereka menunjukkan efek pada konsentrasi 25-200jtiM pada 3,4xlO^3U/ml (10jug/ml) XOD, meskipun aktivitasnya lebih lemah daripada allopurinol; senyawa lain, yang bagian caffeoylnya berada pada posisi dari glukosa, tidak menunjukkan efek penghambatan. Hasil ini memberikan laporan pertama tentang efek penghambatan fenilethanoid pada enzim XOD. Chan et al21) melaporkan bahwa asam caffeic dan beberapa analognya memiliki efek penghambatan pada aktivitas XOD, namun, kami tidak menemukan efek asam caffeic seperti itu di bawah kondisi reaksi saat ini. Dalam pengujian ini, konsentrasi XOD serupa dengan pengujian efek pada pembentukan radikal anion superoksida (4,3 /zg/ml), tetapi konsentrasi senyawa jauh lebih tinggi daripada yang terakhir. Oleh karena itu, penghambatan pembentukan Oj oleh fenilethanoid ini disebabkan oleh aktivitas penangkapan radikalnya, tetapi tidak karena aktivitas penghambatannya terhadap enzim XOD.

Reaksi berantai radikal bebas yang akhirnya mengarah pada peroksidasi lipid sudah diketahui dengan baik.28,29) Oleh karena itu kami mempelajari senyawa fenilethanoid ini untuk efeknya pada peroksidasi lipid pada mikrosom hati tikus yang diinduksi oleh sistem enzim ADP/NADPH/Fe3 plus dan yang diinduksi oleh sistem non-enzimatik asam askorbat/Fe2 plus. Semua senyawa ini menunjukkan efek peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat daripada asam caffeic dan -tokoferol di kedua sistem. Secara umum diterima bahwa kedua sistem dikatalisis oleh ion besi, baik Fe2 plus atau Fe3 plus , yang terlibat dengan radikal peroksil lipid,30,31) dan radikal hidroksil OH memainkan peran paling penting dalam peroksidasi lipid,32 _34) meskipun inisiasi OH telah dipertanyakan dalam beberapa laporan.35祁6) Di sisi lain, radikal anion superoksida OJ, yang merupakan produk utama dari serangan e_ pada O2 dalam rantai radikal, adalah reaksi yang agak buruk. radikal reaktif dan tidak menghasilkan peroksidasi lipid itu sendiri. Meskipun fenilethanoid ini menunjukkan aktivitas pemulungan yang lebih lemah pada radikal anion superoksida daripada asam caffeic, mereka menunjukkan aksi peroksidasi anti-lipid yang jauh lebih kuat daripada yang terakhir. Oleh karena itu, kami percaya bahwa mereka, seperti beberapa polifenol pemecah rantai aromatik lainnya, dapat menghambat peroksidasi lipid di atas dalam mikrosom hati tikus dengan mengkelat ion Fe2 plus atau Fe3 plus, dan juga dengan mengais radikal superoksida Oj untuk memecah reaksi berantai radikal. .37,38) Selain itu, mereka juga dapat mengais spesies radikal yang lebih beracun seperti radikal hidroksil dan radikal peroksil lipid untuk secara langsung mengganggu peroksidasi lipid pada potensi yang lebih tinggi daripada asam caffeic.38,39)

Li dkk. mempelajari beberapa glikosida fenilethanoid termasuk acteoside (verbascoside) (5), isoacteoside (iso-verbascoside) (1), dan echinacoside (4) dari Pedicularis untuk penghambatan autoksidasi asam linoleat dalam misel, sistem non-biologis,13) untuk perlindungan mereka terhadap hemolisis oksidatif in vitro,14''1 dan juga untuk efek pembilasan mereka pada NBT/PMS/NADH menghasilkan superoksida dan penghambatan peroksidasi lipid yang diinduksi oleh asam askorbat/Fe2 plus dalam mikrosom hati tikus.15) Aktivitas serupa -hubungan struktur diamati dalam laporan Li et al. dan hasil kami. Artinya, aktivitas fenilethanoid untuk menghambat peroksidasi lipid terutama bergantung pada jumlah dan posisi sterik gugus hidroksil fenolik.15) Atas dasar kimia stereonya, gugus hidroksil fenolik dari bagian caffeoyl pada acteoside (5), tubuloside A ( 3), dan echinacoside (4), yang memiliki caffeoyl pada posisi 4z dari glukosa, akan lebih mudah membentuk ikatan hidrogen dengan gugus hidroksil rhamnosyl daripada pada isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang memiliki caffeoyl pada posisi 6'- dari glukosa. Dengan demikian, yang terakhir menyimpan lebih banyak gugus hidroksil fenolik bebas daripada yang pertama dan karenanya menunjukkan aktivitas peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat. Kami juga memperhatikan bahwa asetilasi 2z dari fenilethanoid ini, meskipun sedikit, meningkatkan efek antioksidannya. Misalnya, acteoside (5) dan isoacteoside (8), ketika 2'- asetilasi menjadi 2/-acetylacteoside (1) dan tubuloside B (7), masing-masing, menunjukkan aktivitas yang lebih kuat di keempat sistem pengujian. Karena keunggulan kimia stereo dan 2'-asetilasi, tubulosida B (7) menunjukkan aktivitas antioksidan terkuat di antara sampel yang diuji. Mungkin karena substitusi bagian gula ketiga pada posisi 6'~, korelasi ini tidak cocok dengan baik dalam kasus tubulosida A (3) atau echinacosida (4); namun, dalam sistem ADP/NADPH/Fe3 plus, tubulosida A masih menunjukkan aktivitas peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat daripada echinacosida (4).

Selain itu, urutan aktivitas penangkapan radikal DPPH menunjukkan paralelisme yang lebih baik dengan anti-lipid peroksidasi daripada urutan aktivitas penangkapan radikal anion superoksida. Ini membuktikan lagi bahwa DPPH radikal scavenging assay adalah metode yang nyaman dan dapat diandalkan untuk assay antioksidan, 26) meskipun radikal DPPH adalah radikal yang diinduksi secara kimia sedangkan radikal anion superoksida bisa menjadi radikal endogen biologis.

Kesimpulannya, semua sembilan fenilethanoid menunjukkan aktivitas radikal bebas yang signifikan dan efek peroksidasi anti-lipid dalam penelitian ini. Efek antioksidan diperkuat oleh peningkatan jumlah gugus hidroksil fenolik dalam molekul. Seperti yang dapat dibayangkan, efek antioksidan dari fenileta noid ini terbukti di sini mungkin memainkan peran penting dalam aksi obat Cistanchis Herba dan mungkin sebagian menjelaskan mekanisme aktivitas beberapa fenil etanoid melawan neoplasma,8* inflamasi10) dan nefritis, 1 n di mana radikal bebas terlibat secara serius.

Cistanche Echincoside: Anti-oksidasi

REFERENSI

1) Namba T., "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Obat Tradisional Sino-Jepang) dengan Gambar Berwarna,5, Vol. II, Hoikusha, Tokyo, 1994, hlm. 16—17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Banteng, 32, 3009—3014 (1984); b) Idem, ibid., 32, 3880—3885 (1984); c) Idem, ibid., 33, 1452-1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562-566 (1986); e) Idem, ibid., 106, 721-724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Farmasi. Banteng., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Farmasi. Banteng., 32, 1729-1734 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Fitokimia, 40, 709-715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131-1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・,Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456— 58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Banteng., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Ester and Pharmacology/ ed. oleh Scalbert A., Fenomena Polifenol, Edisi INRA, Paris, 1993, hlm. 237-245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Digantung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z.M,, Jia ZJ, Chem. fisik. Lemak. 65, 151-154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu M., Jia J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Tukang Cukur DA, Harris SR, Farmasi Amerika. 34, 26一35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949-956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419—29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Kimia.. 193, 265—275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496-497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T, Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Farmasi. Banteng., 38, 1224-1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biokimia., 95, 351一358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481— 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen X.), Mitsuhashi H., Fitokimia. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid,, 38, 997-1001 (1995),

26) Marsden SB, Alam (London), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Antikanker Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biokimia. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Sel Induk, 12, 289-303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Metode Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biofis. Res, Kom., 108, 1025一1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biofis. Res. Kom., 183, 945一951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Sel. 75, 241-251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biokimia. Biofis. Res, Commmun., Ill, 777-784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Farmasi. Banteng.. 19, 779—782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763—1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biokimia. Pharmacol.. 37, 837-841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・, Cillard P., Cillard J., Toksikologi in Vitro, 9, 695一702 (1995)