Potensi Antioksidan, Anti Radang, Dan Anti Penuaan Ekstrak Kalmia Angustifolia Dan Identifikasi Beberapa Senyawa Utama Bagian 2

Mohon hubungi{0}}untuk informasi lebih lanjut

3. Hasil

3.1.Evaluasi Viabilitas Sel

Keamanan ekstrak dinilai menggunakan uji MTT, yang mengevaluasi aktivitas metabolisme sel [27,28]. Oleh karena itu, memberikan wawasan tentang kelangsungan hidup sel, dan lebih tepatnya kelangsungan hidup keratinosit manusia primer dalam penelitian ini. Hasil penelitian menunjukkan bahwa setelah 48 jam perlakuan, ekstrak K. Angustifolia aman hingga 200 ug/mL dengan viabilitas sel 88±12 persen (Gambar 1). K. Angustifolia menyebabkan sitotoksisitas pada konsentrasi 400 ug/mL, dengan viabilitas sel 51 ±8 persen . Singkatnya, ekstrak K.angustifolia mempertahankan tingkat viabilitas sel yang tinggi pada konsentrasi dari 0 hingga 200 ug/mL.

Gambar 1. Penilaian sitotoksisitas ekstrak K. Angustifolia pada keratinosit manusia primer dilakukan dengan mengukur aktivitas metabolik dengan uji MTT. Semua eksperimen dilakukan setidaknya dalam rangkap tiga dan hasil yang disajikan mewakili setidaknya dua eksperimen yang berbeda (N=2, n=3). Data disajikan sebagai sarana dari rangkap tiga ± SD Garis horizontal diatur pada viabilitas sel 50 persen. Signifikansi statistik ditentukan menggunakan ANOVA satu arah diikuti dengan uji post hoc Dunnett (nilai p<0.05 compared="" to=""><>

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

3.2. Kapasitas Antioksidan

Potensi antioksidan dinilai dengan dua uji berbeda, uji ORAC dan uji berbasis sel menggunakan DCFH-DA. Yang pertama mengukur penghambatan radikal peroksil oleh ekstrak yang dipelajari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak K.angustifolia memiliki kapasitas antioksidan yang kuat, dengan nilai ORAC 16±3 mol TE/mg Tabel 1）.cistanche wirkungHasil ini sebanding dengan kontrol positif kuersetin dan katekin, yang dikenal sebagai senyawa antioksidan kuat, yang menunjukkan nilai ORAC masing-masing 21±2 dan 20±2 mol TE/mg, sehingga mengkonfirmasi kemampuan antioksidan dari ekstrak yang diteliti.

Tabel 1. Aktivitas antioksidan yang diukur dengan uji ORAC dari ekstrak K.angustifolia. Data disajikan dalam rangkap tiga ± SD Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan hasil yang disajikan mewakili setidaknya dua percobaan yang berbeda (N=2, n =3). Quercetin dan catechin digunakan sebagai kontrol positif.

Potensi antioksidan K.angustifolia selanjutnya dikonfirmasi menggunakan uji berbasis sel DCFH-DA pada fibroblas kulit manusia WS1 (Gambar 2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak K. Angustifolia merupakan antioksidan kuat pada konsentrasi serendah 3,13 ug/mL, dengan penghambatan 83,7±0,8 persen oksidasi DCFH. Hasil ini sebanding dengan kuersetin kontrol positif pada konsentrasi 1,56 ug/mL, yang menunjukkan persentase penghambatan oksidasi DCFH sebesar 87,41±0.03 persen . Namun, penentuan konsentrasi penghambatan setengah maksimal (IC50) menunjukkan bahwa quercetin kira-kira 2 kali lebih efisien dibandingkan dengan ekstrak K. Angustifolia dengan nilai IC masing-masing 0.168±{ {25}}.009 ug/mL dan 0,37±0,02ug/mL.

Gambar 2. Aktivitas antioksidan ekstrak K. Angustifolia pada garis sel WS1 fibroblas kulit manusia yang diobati dengan tertbutil hidroperoksida(t-BuOOH), ditentukan dengan uji berbasis sel menggunakan DCFH-DA. Semua eksperimen dilakukan setidaknya dalam rangkap tiga dan hasil yang disajikan mewakili setidaknya dua eksperimen yang berbeda(N=2, n=3). Data disajikan sebagai sarana dari rangkap tiga ± SD Garis horizontal diatur pada penghambatan 50 persen. Signifikansi statistik ditentukan menggunakan ANOVA satu arah diikuti dengan uji post hoc Dunnett (nilai p<0.05 compared="" to="" control="" of="" cells="" treated="" with="" only="" t-buooh（200μm）;*=""><0.05）or bonferroni's="" post="" hoc="" test=""><0.05 compared="" to="" positive="" control="" quercetin="" （1.56="" μg/ml）;#="" p-value=""><>

3.3. Potensi Anti-Peradangan

Aktivitas anti-inflamasi ekstrak K.angustifolia dievaluasi berdasarkan kemampuannya untuk menurunkan produksi nitrit dalam makrofag yang diaktifkan dengan LPS (Gambar 3).bioflavonoid jerukHasil yang disajikan pada Gambar 3 menunjukkan bahwa ekstrak K.angustifolia secara signifikan menghambat produksi NO berlebih pada konsentrasi serendah 20 ug/mL. Penghambatan yang lebih besar diamati pada konsentrasi 40 dan 80 ug/mL, dengan persentase penghambatan produksi NO masing-masing 25 ± 3 persen dan 49± 2 persen. Hal ini sebanding dengan kontrol positif L-NAME pada konsentrasi 250 uM (67 ug/mL), yang menghambat produksi NO berlebih sebesar 37± ​​2 persen .

3.4. Analisis Histologis

Potensi anti-penuaan ekstrak K. Angustifolia dievaluasi menggunakan pengganti kulit yang direkonstruksi yang diproduksi sesuai dengan metode perakitan sendiri.manfaat cynomoriumAnalisis histologis bagian yang diwarnai trichrome Masson (Gambar 4A) mengkonfirmasi integritas pengganti kulit untuk setiap kondisi, karena setiap pengganti kulit menampilkan bejana dermal dan epidermis yang berbeda. Dari bagian histologis ini, pengukuran ketebalan epidermis dan dermis yang hidup dilakukan (Gambar 4B). Untuk epidermis hidup, tidak ada peningkatan signifikan yang diamati dengan ekstrak Kangustifolia, dengan perubahan lipatan sebesar 1.0(didefinisikan sebagai rasio ketebalan pengganti yang diberi perlakuan dengan ketebalan kontrol tanpa perlakuan). Adapun dermis, peningkatan yang signifikan dalam ketebalan dermal (dengan perubahan lipatan 1,36) diamati untuk ekstrak K.angustifolia pada 25 ug/mL, menunjukkan bahwa ekstrak memiliki efek pada lapisan dermal dan lebih tepatnya pada fibroblas, dan bahkan dapat mempromosikan sintesis komponen matriks ekstraseluler.

Kontrol DMSO {{0}}.2 persen (u/o) diuji untuk setiap percobaan karena ekstrak dilarutkan dalam 0.2 persen DMSO, tetapi tidak ada perbedaan yang diamati dibandingkan dengan kontrol tanpa perlakuan (data tidak ditampilkan). Selanjutnya, konsentrasi 50 ug/mL dan 100 ug/mL K. Angustifolia juga diuji pada pengganti kulit dan peningkatan ketebalan dermal yang sama diamati pada 25 ug/mL, dengan perubahan lipatan masing-masing 1,3 dan 1,2 (data tidak ditampilkan). Jadi, 25 ug/mL adalah konsentrasi optimal dan analisis lebih lanjut dilakukan dengan konsentrasi ini.

Gambar 4. Pengaruh ekstrak K.angustijolia pada histologi pengganti kulit yang direkonstruksi. (A) Analisis histologis bagian pengganti kulit bernoda trichrome Masson. Stratum korneum berwarna biru tua, epidermis hidup berwarna ungu, dan dermis berwarna biru muda. Objektif 10×, bilah skala: 100 um. (B) Perubahan lipatan dalam ketebalan epidermis dan dermis yang hidup. Perubahan lipatan didefinisikan sebagai rasio nilai ketebalan pengganti yang diberi perlakuan terhadap nilai ketebalan kontrol (tanpa perlakuan). Dua pengganti untuk setiap kondisi dianalisis dan dikonfirmasi dengan tiga populasi sel yang berbeda (N =3, n =6). Data disajikan sebagai sarana dari tiga populasi sel yang berbeda ± SD Signifikansi statistik ditentukan menggunakan uji-t,**p-value<>

3.5. Pewarnaan imunofluoresensi

Empat protein yang jumlahnya umumnya menurun pada penuaan kulit diamati dengan pewarnaan imunofluoresensi: elastin, kolagen tipe I (kolagen-1), kolagen tipe semua kolagen-3）, dan aquaporin-3 Gambar 5）. Ekstrak K. Angustifolia pada 25 ug/mL tampaknya meningkatkan ekspresi elastin (Gambar 5E) di kompartemen dermal dibandingkan dengan kontrol (Gambar 5A). Pada kondisi kontrol (tanpa perlakuan), protein elastin diekspresikan dengan lemah. Semi-kuantifikasi intensitas fluoresensi dilakukan pada bagian yang diwarnai dengan imunofluoresensi untuk mendapatkan wawasan tentang peningkatan fluoresensi setelah perawatan.eceng gondok gurunAnalisis intensitas piksel mengkonfirmasi hasil yang ditunjukkan pada Gambar 5. Pengganti kulit yang diperlakukan dengan ekstrak K. Angustifolia pada 25 ug/mL menunjukkan peningkatan intensitas piksel untuk elastin sebesar 18 persen dibandingkan dengan kontrol tanpa perlakuan. Berkenaan dengan kolagen-1, perlakuan K. Angustifolia meningkatkan ekspresinya (Gambar 5F), dibandingkan dengan kontrol (Gambar 5B). Memang, perlakuan dengan ekstrak pada 25 ug/mL menghasilkan peningkatan intensitas piksel tertinggi untuk kolagen-1, dengan peningkatan 46 persen . Namun, untuk kolagen-3, ekspresinya tetap sama (Gambar 5G), dibandingkan dengan rekannya (Gambar 5C). Akhirnya, ekspresi aquaporin-3, protein membran yang ditemukan pada keratinosit epidermis, juga tampak serupa setelah perawatan pada 25 ug/mL (Gambar 5H) dibandingkan dengan kontrol (Gambar 5D). Tidak ada peningkatan intensitas piksel yang signifikan untuk ekspresi kolagen-3 dan aquaporin-3 setelah perlakuan dengan ekstrak K. Angustifolia pada 25 ug/mL.

Gambar 5. Penanda penuaan divisualisasikan dengan pewarnaan imunofluoresensi. Ekspresi elastin(A, E),kolagen-1(B, F), kolagen-3(C, G), dan aquaporin-3(D, H), yang biasanya menurun selama kulit penuaan, ditunjukkan pada pengganti kulit sehat yang tidak diobati (AD) dan diobati dengan ekstrak K.angustifolia pada 25 ug/mL(EH). Inti diwarnai dengan DAPI (biru). Garis putus-putus mewakili pemisahan antara epidermis dan dermis. Dua pengganti untuk setiap kondisi dianalisis dan dikonfirmasi dengan tiga populasi sel yang berbeda (N= 3, n= 2; bilah skala: 100 um).

3.6.Isolasi dan Identifikasi Beberapa Senyawa Utama Ekstrak K. Angustifolia

Pemurnian ekstrak dilakukan pada kolom Diaion9 terbuka dengan mengelusi dengan MeOH/H2O dengan meningkatnya persentase MeOH (0-100 persen ). Pemurnian pertama ini menghasilkan perolehan empat fraksi (Pecahan AD). Fraksi B menjadi sasaran kromatografi kolom silika gel, dan ini menyebabkan isolasi katekin dan epikatekin (fraksi B1). Identitas senyawa ditentukan dengan analisis NMR dan dibandingkan dengan standar komersial. Katekin dan epikatekin telah diidentifikasi pada K. Angustifolia [9]. Fraksi C juga dimurnikan dengan kromatografi kolom silika gel dan proses ini menghasilkan 7 fraksi terpisah (C1 sampai C7). Pemurnian fraksi C3 yang dilakukan pada kolom kromatografi oktadesilsilane menghasilkan isolasi senyawa berwarna kuning pucat. Rumus molekul (C20Hj8O) senyawa ini ditentukan dari spektrum HR-ESI-MS berdasarkan puncak ion kuasimolekul pada m/z 434,3511 [M ditambah H]t. Berdasarkan spektrum NMR 'H dan 13C, senyawa hasil isolasi diidentifikasi sebagai avicularia (fraksi C3B). Sejauh pengetahuan kami, senyawa ini pertama kali dilaporkan di K. Angustifolia tetapi umum untuk banyak tanaman [29]. Fraksi C4 juga mengalami pemurnian kolom kromatografi octadecylsilane, dan ini menyebabkan isolasi proanthocyanidin A2 (epicatechin dimer; fraksi C4A) dan dimer epicatechin lainnya diidentifikasi sebagai epicatechin-(2 -O-7, {{ 25}})-ent-epicatechin (proanthocyanidin Ax; fraksi C4C). Kedua senyawa ini diidentifikasi berdasarkan data NMR [30,31]. Sejauh pengetahuan kami, ini adalah pertama kalinya proanthocyanidin Axe telah diidentifikasi di K. Angustifolia, tetapi proanthocyanidin A2 telah diidentifikasi [9].metode ekstraksi flavonoid pdfPemurnian berturut-turut dari fraksi Don silika gel menghasilkan senyawa berupa kristal putih (fraksi D4). Data NMR berhubungan dalam segala hal dengan data yang dilaporkan untuk biotin dalam literatur [32]. Asotin telah diidentifikasi dalam genus Kalmia [33].

3.7.Aktivitas Biologis dari Senyawa Ekstrak K.angustifolia yang teridentifikasi

Investigasi senyawa aktif K.angustifolia dilakukan dengan menilai potensi antioksidan dan anti-inflamasi dari masing-masing senyawa yang diidentifikasi (Tabel 2). Untuk aktivitas antioksidan, dan uji ORAC dan uji berbasis sel menggunakan DCFH-DA dilakukan. Menurut tes ini, catechin, avicularia, proanthocyanidin A2 dan proanthocyanidin Axe menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat, sedangkan epicatechin menunjukkan aktivitas antioksidan sedang. Nilai ORAC masing-masing adalah 6,7±0.3,4,1±0.3, 4,5±0.8,5,3±0.6, dan 4,6±{{ 23}}.6 molTE/μmol, sedangkan IC0 untuk uji berbasis sel masing-masing adalah 0.8±0.3, 0.4{{ 33}} ± 0.03,0.30 ± 0.03,0.24 ±0.02 dan 1,22± 0.06 uM Kontrol positif, quercetin, dan Trolox, menyajikan nilai ORAC 7,6 ±0,7 dan 0,91±0,11 mol TE/mol masing-masing, dan ICso 0,21±0,024±0,002μM.

Tabel 2. Aktivitas antioksidan dan anti inflamasi dari senyawa K. Angustifolia yang teridentifikasi. Data disajikan dalam rangkap tiga ±S.ID.Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan hasil yang disajikan mewakili setidaknya dua percobaan yang berbeda(N=2,n=3). Quercetin dan Trolox digunakan sebagai kontrol positif.

Adapun potensi anti-inflamasi, dinilai dengan penghambatan produksi NO berlebih pada makrofag RAW 264,7 yang distimulasi LPS, tidak ada senyawa yang diisolasi yang menunjukkan potensi anti-inflamasi yang dapat bertanggung jawab atas aktivitas anti-inflamasi K.anqustifolia.

4. Diskusi

Beberapa bahan aktif alami telah membuktikan kemanjuran dalam mengurangi penuaan kulit dengan studi kemanjuran lengkap, yang membatasi pengembangan berdasarkan bukti ilmiah produk perawatan kulit yang secara signifikan dapat mengurangi penuaan kulit. Model in vitro adalah alat yang hebat untuk menetapkan keamanan dan kemanjuran produk di bidang kosmetik, sehingga memungkinkan untuk menghindari penggunaan model hewan, yang sangat kontroversial dan bahkan dilarang atau dibatasi di negara atau negara bagian tertentu seperti Uni Eropa, Kanada, India , Brasil (tujuh negara bagian), Selandia Baru, Australia, dan Amerika Serikat (California, Nevada, Illinois)[34-37]. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi keamanan dan kemanjuran ekstrak K.angustifolia menggunakan pengganti kulit yang direkonstruksi untuk menetapkan potensi penggunaan K, Angustifolia dalam kosmetik. Studi ini menyoroti potensi anti-penuaan dari ekstrak K. Angustifolia.

Untuk digunakan dalam produk perawatan kulit, bahan-bahannya harus terbukti aman untuk kulit terlebih dahulu, demikian juga untuk sel-sel kulit. Evaluasi toksisitas setiap bahan kosmetik dari suatu formulasi merupakan dasar untuk menilai keamanan produk kosmetik. Dalam penelitian ini, ekstrak terbukti aman untuk digunakan pada keratinosit pada konsentrasi hingga 200 ug/mL. Keamanan ekstrak K.angustifolia pada 25 ug/mL juga didukung oleh analisis histologis pengganti kulit yang direkonstruksi. Analisis ini menunjukkan bahwa integritas semua lapisan kulit yang direkonstruksi (epidermis dan dermis) dipertahankan pada konsentrasi 25 ug/mL. Bahkan ketika diperlakukan dengan ekstrak, ketebalan epidermis yang hidup sebanding dengan pengganti kulit yang tidak diobati (kontrol) dan ketebalan dermal ditingkatkan. Pengganti kulit dirawat tiga kali selama satu minggu, menunjukkan keamanan ekstrak K.angustifolia dengan perawatan berulang. Dengan demikian, K Angustifolia dapat digunakan dalam dermo-cosmetics karena tampaknya mempertahankan viabilitas sel. Eksperimen lebih lanjut, seperti penyerapan perkutan, juga harus dilakukan untuk mengkonfirmasi pemanfaatan ekstrak ini mengikuti pedoman contoh yang tepat [38].

Parameter penting lainnya dalam pengembangan produk perawatan kulit tidak diragukan lagi adalah khasiat bahan aktif yang didukung oleh bukti ilmiah. Berbagai eksperimen dan analisis dapat dilakukan untuk mengevaluasi aspek ini. Dengan ekstrak tumbuhan, penilaian potensi antioksidannya biasanya dilakukan untuk menetapkan kemanjurannya39-41]. Penuaan kulit adalah fenomena kompleks yang melibatkan mekanisme yang berbeda, dan beberapa teori telah diajukan untuk menjelaskan dasar molekuler[1]. Salah satu penjelasan ini adalah stres oksidatif. Beberapa faktor lingkungan yang menyebabkan penuaan kulit, seperti radiasi matahari, polusi udara, dan asap rokok, menghasilkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang ditambahkan ke ROS yang diproduksi secara alami di dalam sel [42-44]. Peningkatan kadar ROS ini menyebabkan ketidakseimbangan antara radikal bebas dan antioksidan alami, sehingga menyebabkan stres oksidatif dan kerusakan jaringan, oleh karena itu pentingnya senyawa antioksidan dalam produk anti penuaan kulit [45]. Antioksidan dalam produk perawatan kulit membantu memperkuat kapasitas antioksidan kulit untuk melawan efek berbahaya dari stres oksidatif. Evaluasi aktivitas antioksidan dari ekstrak K. Angustifolia, dinilai dengan uji ORAC, menunjukkan bahwa ekstrak tersebut memiliki potensi antioksidan yang serupa dengan quercetin dan catechin kontrol positif, dua senyawa antioksidan kuat, menunjukkan kapasitas antioksidan yang sangat baik. Hasil yang diperoleh untuk kontrol positif sesuai dengan penelitian sebelumnya oleh Ou et al., menunjukkan bahwa tes ini dapat diandalkan [24]. Tumbuhan lain dari famili Ericaceae yang juga ditemukan di hutan boreal dan dimanfaatkan potensi antioksidannya adalah Rhododendron groenlandicum. Kapasitas antioksidan R.groenlandicum dinilai dalam penelitian sebelumnya yang dilaporkan oleh Dufour et al. dan ekstrak yang dipelajari menunjukkan kapasitas antioksidan dibandingkan dengan nilai ORAC untuk ekstrak K. Angustifolia, menegaskan sekali lagi potensi antioksidan yang besar dari ekstrak ini dan minat menggunakan ekstrak tumbuhan ini dalam kosmetik [39]. Aktivitas antioksidan ekstrak K. Angustifolia diukur dengan uji ORAC dikonfirmasi dengan uji DCFH-DA, yang lebih mewakili lingkungan biologis. Hasil uji berbasis sel menggunakan DCFH-DA untuk mengetahui aktivitas antioksidan seluler sesuai dengan hasil ORAC. Mengingat hasil ini, ekstrak K. Angustifolia harus menjadi bahan aktif yang bagus dalam kosmetik sebagai senyawa antioksidan. Ini harus digunakan pada konsentrasi minimal 3,13 ug/mL jika potensi antioksidan dicari dengan tetap memperhatikan tingkat keamanan ekstrak.

Aktivitas antioksidan ekstrak K.angustifolia dapat disebabkan oleh senyawa fenolik yang terdapat pada komponennya, seperti( plus )-catechin,(-)-epicatechin, dan proanthocyanidin A2, yang telah diisolasi dari ekstrak, dan p-coumaric. acid, quercetin 3-O-galactoside (peroxide), quercetin 3-O-rhamnoside (quercitrin) dan myricetin, yang telah diidentifikasi dalam penelitian lain, tetapi penyelidikan lebih lanjut akan diperlukan untuk mengkonfirmasi hipotesis ini [9 ,10,39, A6]. Dalam studi ini, dua senyawa diidentifikasi untuk pertama kalinya di Kangustifolia yang juga bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan ekstrak. Avicularia, suatu flavonoid, dan proanthocyanidin Axe, suatu proanthocyanidin tipe-A, keduanya ditemukan dalam ekstrak K. Angustifolia, menunjukkan potensi antioksidan yang menarik berdasarkan nilai ORAC dan pengujian berbasis selnya.

Penjelasan lain untuk proses penuaan adalah peradangan kronis. Mengumpulkan bukti dari mempelajari proses penuaan kulit telah mengarah pada hipotesis peradangan molekuler dengan penuaan. Salah satu penjelasannya adalah bahwa kerusakan sel, misalnya disebabkan oleh kelebihan ROS, dikenali oleh sistem imun, menyebabkan infiltrasi dan aktivasi sel imun seperti makrofag [1]. Peningkatan sitokin pro-inflamasi, seperti IL-1, IL-6dan TNF-, umumnya diamati dengan penuaan kulit [46]. Dengan demikian, potensi anti-inflamasi adalah fitur yang menarik untuk bahan aktif anti-penuaan. Aktivitas anti-inflamasi yang dinilai dengan tingkat produksi NO mengungkapkan potensi anti-inflamasi yang baik untuk ekstrak K.angustifolia pada konsentrasi 40 dan 80 ug/mL, dibandingkan dengan konsentrasi yang lebih rendah dari kontrol positif, L-NAME. Karena konsentrasi ekstrak yang lebih tinggi sebanding dengan 250 M L-NAME, ini menunjukkan bahwa K. Angustifolia juga dapat digunakan dalam kosmetik sebagai bahan anti-inflamasi. Ini berhasil menghambat sebagian produksi, sehingga menunjukkan aktivitas anti-inflamasi. Tak satu pun dari senyawa yang diidentifikasi dalam ekstrak K. Angustifolia menunjukkan aktivitas anti-inflamasi yang dapat menjelaskan ekstrak tersebut. Penyelidikan lebih lanjut dari komposisi ekstrak akan diperlukan untuk menilai senyawa anti-inflamasi.

Senyawa antioksidan menghadirkan fitur menarik untuk produk dermo-cosmetic. Memang, diketahui bahwa spesies oksigen reaktif (ROS), yang dihasilkan oleh beberapa faktor lingkungan yang menyebabkan penuaan kulit, dapat menyebabkan degradasi komponen penting dari matriks ekstraseluler dermal seperti kolagen dan elastin [47-49]. Penurunan kuantitasnya umumnya disebabkan oleh peningkatan matriks metaloproteinase (MMPs) dan penurunan sintesisnya [48,50]. Keseimbangan yang baik antara produksi endogen antioksidan dan oksidan memungkinkan pemeliharaan homeostasis kulit. Namun, dengan penuaan kulit, terjadi ketidakseimbangan dan penggunaan antioksidan eksogen menjadi relevan. Dengan demikian, potensi antioksidan ekstrak K. Angustifolia menyebabkan studi potensi anti-penuaan.

Dengan penuaan kulit, penurunan ketebalan epidermis dan dermis yang hidup sering dapat diamati. Yang pertama disebabkan oleh penurunan proliferasi keratinosit, sedangkan yang kedua disebabkan oleh degradasi matriks ekstraseluler dan penurunan sintesisnya [4751-53]. Dengan demikian, peningkatan ketebalan masing-masing dicari dengan produk anti-penuaan. Tidak ada peningkatan signifikan dalam ketebalan epidermis hidup yang diamati dengan ekstrak K, Angustifolia pada 25 ug/mL. Namun, peningkatan yang signifikan p-value<0.05） in="" the="" dermal="" thickness="" was="" observed.="" an="" increase="" could="" suggest="" matrix="" reorganization,="" or="" even="" an="" increase="" in="" the="" synthesis="" of="" dermal="" extracellular="" matrix="" components,="" such="" as="" elastin="" or="" collagens,="" which="" is="" an="" interesting="" property="" for="" an="" anti-aging="" extract.="" the="" immunofluorescence="" staining="" of="" several="" proteins="" was="" performed="" to="" further="" investigate="" the="" effect="" of="" the="" extract="" on="" the="" extracellular="">

Kadar elastin, kolagen-1, dan kolagen-3 biasanya menurun pada penuaan kulit, yang antara lain menyebabkan pembentukan kerutan, hilangnya kekuatan tarik, peningkatan kerapuhan, dan gangguan penyembuhan luka [ 54]. Penurunan komponen matriks ekstraseluler dermal disebabkan oleh peningkatan degradasi protein ini dan penurunan ekspresi gennya, dan oleh karena itu dalam sintesisnya [1,53-55]. Degradasi mereka terutama disebabkan oleh elastase (seperti elastase neutrofil manusia, dan neprilysin) dan MMPs (seperti MMP-1 dan MMP-3). Induksi MMP terjadi pada penuaan kulit melalui aktivasi berbagai jalur transduksi [46,56]. Dalam proses penuaan kulit, beberapa produk, seperti ROS dan tumor necrosis factor (TNF- ), dapat menyebabkan aktivasi jalur nuclear factor-kappa B (NF-kB) atau mitogen-activated protein (MAP) kinase. jalur, termasuk ekstraseluler signal-regulated kinase (ERK), p38 mitogen-activated protein kinase (p38) dan c-Jun N-terminal kinase (JNK) [57,58]. Aktivasi ini kemudian akan mengarah pada ekspresi faktor transkripsi NF-kB atau protein aktivator faktor transkripsi 1(AP-1), yang berperan dalam transkripsi MMP. Aktivasi NF-kB atau AP-1 meningkatkan ekspresi MMP dan dengan demikian meningkatkan degradasi komponen dermal. Dalam penelitian ini, peningkatan ekspresi elastin dan kolagen-1 dengan pengobatan menunjukkan bahwa K.angustifolia dapat secara efisien melawan beberapa karakteristik utama penuaan kulit. Peningkatan kadar elastin yang terdaftar setelah perawatan K. Angustifolia sangat meyakinkan karena relatif didokumentasikan dengan baik bahwa protein ini biasanya lemah atau bahkan tidak disintesis dalam dermis yang direkonstruksi menggunakan kondisi kultur yang dilengkapi dengan asam askorbat, seperti yang terjadi pada model kulit kami. (seperti yang ditunjukkan dengan kontrol tanpa perlakuan, Gambar 5A). Memang, meskipun askorbat meningkatkan produksi matriks ekstraseluler, terutama sintesis kolagen oleh fibroblas dermal, beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa askorbat juga memiliki efek penghambatan pada proses blastogenesis, sehingga mengakibatkan penurunan akumulasi elastin [59,60]. Jadi, jika 25 ug/mL ekstrak cukup dan cukup ampuh untuk mengatasi efek askorbat pada model kulit kita, K. Angustifolia harus menjadi kandidat potensial besar dalam produk perawatan kulit untuk melawan penuaan kulit pada konsentrasi ini. Ini bisa membantu kulit untuk mendapatkan kembali kekuatan, kekencangan, dan elastisitas, dan dengan demikian mengurangi munculnya kerutan, tetapi studi klinis lebih lanjut harus dilakukan untuk mengkonfirmasi anggapan ini.

5. Kesimpulan

Dalam penelitian ini, kami telah membuktikan bahwa model pengganti kulit yang dikembangkan di pusat penelitian kami adalah alat yang berguna untuk menilai kemanjuran anti-penuaan di bidang dermo-kosmetik. Kami telah menunjukkan tidak hanya bahwa ekstrak K.angustifolia tampaknya aman untuk digunakan dalam kosmetik, tetapi juga memiliki kapasitas antioksidan yang kuat dan aktivitas anti-inflamasi yang baik. Studi ini menunjukkan bahwa ekstrak K.angustifolia pada 25 ug/mL dapat memiliki efek anti-penuaan potensial pada kompartemen dermal karena ekstrak meningkatkan ketebalan dermal, dan meningkatkan ekspresi elastin dan kolagen-1. Studi lebih lanjut tentang mekanisme yang terlibat dalam potensi anti-penuaan ekstrak akan menarik. Isolasi dan karakterisasi beberapa senyawa dalam ekstrak K.angustifolia memungkinkan kami untuk menetapkan bahwa khasiat anti-penuaan sebagian dapat berasal dari potensi antioksidan senyawa ini. Namun komposisi K.angustifolia masih sangat sedikit dipelajari dan perlu diteliti lebih mendalam untuk mengetahui sejauh mana aktivitas biologisnya dan mengidentifikasi senyawa aktifnya. Dengan demikian, penelitian ini menunjukkan bahwa K.angustifolia akan menjadi bahan aktif alami yang menarik untuk dermo-cosmetics. K. Angustifolia memiliki efek antioksidan dan anti-penuaan yang menjanjikan, terutama pada matriks ekstraseluler dermal.

Artikel ini disarikan dari Antioksidan 2021, 10, 1373. https://doi.org/10.3390/antiox10091373 https://www.mdpi.com/journal/antioksidan