Prinsip Anti-Inflamasi Dari Jarum Pinus Taiwanensis Hayata Dan Dalam Studi Silico Dari Potensi Efek Anti-Penuaan Ⅱ

Jarum pinus diekstraksi dengan metanol dan dipartisi dengan heksana, etilasetat, dan air masing-masing untuk mendapatkan tiga lapisan larut. Ituantiinflamasipecahan, itulapisan etil asetat, dikenai kromato konvensional terus meneruskombinasi teknik grafis, dan lima senyawa yang tidak terdeskripsikan dikarakterisasitermasuk dua lignan baru, 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihidroksi-70 -(4-hidroksifenil)propan-80 -yloxy]asam benzoat (1), 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihidroksi-70 -(4-hidroksi-3-metoksifenil)-propan-80 -yloxy]-2-asam hidroksibenzoat (2), satu diterpenoid baru, (13E,12R)-12 -hidroksiagatikasam (3), satu monoterpenoid, 5-isopropil-3-oksosikloheks-1-ena-1-asam karboksilat (4), dan satufenilpropana, asam stiraksinolat (5). Struktur kimia dari senyawa baru inidibangun dengan bantuan elusidasi spektral NMR dan spektro MSanalisis metrik. Selain itu, tujuh puluh dua senyawa yang diketahui, terdiri dari satu steroid, -sitosterol (6); satu seskuiterpenoid, (-)-oplopan-4-satu-10- -O- -D-glukosida (7); satukumarin, umbelliferon (8); satualkaloid, indol-3-aldehida (9); empat diterpenoid,

Klik Di Sini Untuk Mendapatkan Krim Cistanche Anti Penuaan

3-metoksifenil)-1-propanon (64), 3-hidroksi-1-(4-hidroksifenil)-1-propanon (65),2-(4-hidroksifenil)asam asetat (66), asam fenilasetat (67), adalah asam vanilat (68), benzoatasam (69), vanilin (70), p-hidroksiasetofenon (71), natrium salisilat (72), asam vanilat4-O- -L-rhamnosida (73), trans-asam ferulat (74), natriump-kumarat (75), p-Coumaricasam (76), trans-metilp-kumarat (77), masing-masing, diidentifikasi dengan pemeriksaandata fisik dan spektroskopi mereka dengan yang sebelumnya diterbitkan (referensi diketahuisenyawa disediakan dalam Bahan Pelengkap Lampiran B).

3.1. Penjelasan Struktural Senyawa 1–5

Menggabungkan1 diisolasi sebagai sirup tak berwarna yang aktif secara optik, dan molekulerformula ditugaskan sebagai C16H16O6 oleh analisis HR-ESI-MS ([M− H]−, m/z 303.0855, kalcd.untuk C16H15O6, 303.0869, Gambar S1). Spektrum IR menunjukkan adanya hidroksil(3412 cm−1 ) dan gugus karbonil terkonjugasi (1598 cm-1).−1 ). Itu1Data H-NMR (Gambar S2)menunjukkan sinyal untuk duapara- gugus aromatik tersubstitusi [δH 6.72 (2H, d, J = 8.4 Hz,H-30 , -50 ), 6.86 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, -6), 7,24 (2H, d,J = 8.4 Hz, H-20 , -60 ), dan 7.83(2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, -5)], dua metin teroksigenasi [δH 4.48 (1H, m, H-80 ), dan 4.85(1H, d, J = 5.6 Hz, H-70 )], dan dua metin [δH 3,81 (1H, hh,J {{0}}.0, 4,0 Hz, H-90 a), dan 3.86 (1H, dd,J {{0}.0, 5,6 Hz, H-90 B)]. Itu13Spektrum C dan DEPT NMR (Gambar S3)dari1 menampilkan enam belas karbon, sesuai dengan satu gugus metilen, dua teroksigenasikarbon, dua belas karbon aromatik, dan satu karbonil terkonjugasi (Tabel1). Itu2 J- Dan3 J- korelasi HMBC dari H-2, -6 ke C-1 dan 4; dari H-3, 5 ke C-1 dan 7; dari H-20, 60 keC-40 dan 70 ; dari H-70 ke C-80 dan 90 ; dan dari H-80 ke C-1, masing-masing, diamati dispektrum HMBC dari1 (Gambar S4). Selain itu, konstanta penggandengan yang besar antara H-70 dan H-80 (J = 5.6 Hz) mendukung konfigurasi relatif dari1 di C-70 /C-80 sebagaibertiga[44]. Konfigurasi absolut di C-70 dan C-80 dari1 ditentukan oleh surat edaran elektronikanalisis dichroism (ECD). Efek Kapas positif pada 230 nm (∆ε ditambah 0.17) mengungkapkan 8S konfigurasi untuk1, menurut literatur yang diterbitkan [37,38] dan karenanya 70 R dan jugabertekad. Spektrum 2D lainnya (Gambar S5-S7) melengkapi penugasan penuh proton dansinyal karbon. Dengan demikian, struktur dari1 ditugaskan sebagai 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihidroksi-7 0 -(4-hidroksifenil)propan-80 -iloksi] asam benzoat seperti yang ditunjukkan pada Gambar1. 

Rumus molekul dari2 ditugaskan sebagai C17H18O8 berdasarkan HR-ESI-MSdata analitik (m/z 349.0936 [M − H]−, Gambar S8). Penyerapan dalam spektrum IR(3425 dan 1541 cm−1 ) menunjukkan fungsi hidroksil dan karbonil terkonjugasi,masing-masing. Dibandingkan dengan spektrum NMR dari1 Dan2, itu bisa mengamati bahwa merekamemiliki gugus aromatik yang berbeda. Dua set cincin aromatik yang digabungkan dengan ABX dan satuGugus metoksi dapat dideteksi pada1H- (Gambar S9) dan13Data C-NMR (Gambar S10).dari2 (Meja1), dan itu menyarankan senyawa itu2 memiliki dua trisubstitusi daripadapara- gugus aromatik tersubstitusi. Korelasi HMBC yang signifikan (Gambar S11) dariH-3 ke C-1, C-5, dan C-7; dari H-6 ke C-4; dari OCH3-30 ke C-30 ; dari H-60 ke C-40 DanC-70; dari H-70 ke C-10 , C-20 , C-80 dan 90 ; dari H-80 ke C-1, masing-masing, menetapkan itustruktur dari2 juga merupakan kerangka neolignan. Melalui kombinasi kopling besarkonstanta (J7,8 = 5.2 Hz) dan efek Kapas positif pada 230 nm (∆ε ditambah 1,14), mutlakkonfigurasi dari2 ditugaskan sebagaitiga- dan (70 R,80 S)-bentuk, sama dengan1 [44,45]. LainnyaSpektrum 2D (Gambar S12-S14) melengkapi penugasan penuh sinyal proton dan karbon.Penemuan ini menyimpulkan struktur dari2 sebagai 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihidroksi-70 -(4-hidroksi-3-metoksifenil)propan-80 -yloxy]-2-asam hidroksibenzoat (Gambar1). 

Menggabungkan3 diperoleh sebagai bubuk tidak berwarna dan rumus molekulnya adalahditugaskan sebagai C20H30O5 berdasarkan data analitik HR-ESI-MS (m/z 349.2024 [M − H]−, Gambar S15). Menggabungkan3 menunjukkan puncak serapan pada 3450 (OH), dan 1648 (karboksilatasam) cm−1 dalam spektrum IR-nya. Hal itu dibuktikan dengan13Spektrum C-NMR (Gambar S16) didi mana dua fungsi karboksilat diamatiδC 167.2 (C-15) dan 181.5 (C-19). Di dalam-nya1H-NMR (Gambar S17), resonansi diδH 4,03 (1H, hh,J = 9.2, 2,8 Hz, H-12) danδC 75,5 (C-12) menunjukkan adanya gugus alkohol sekunder. Metilen terminalkelompok dapat dibentuk karena resonansi proton diδH 4.53 (1H, s, H-17a) dan4.91 (1H, s, H-17b), dan sinyal karbon diδC 106,9 (C-17) dan 150,2 (C-8), masing-masing.Dua kelompok metil diδH 0.63 (3H, s, CH3-20) dan 1,21 (3H, s, CH3-18) terhubungkarbon kuarter (C-10 dan C-4) dibuktikan dengan korelasi HMBC (Gambar S18).Efek perisai dari gugus karboksilat pada C-4 menghasilkan pergeseran CH ke atas3-20 (δH 0.63), menyarankannya-konfigurasi [46]. Selain itu, pergeseran kimia dari H-17a (δH 4.53) muncul di wilayah upfield, menunjukkan 12R konfigurasi [47]. Di HMBC-nyaspektrum, korelasi dari H-12 ke C-9, C-14, dan C-16; dari H-17 ke C-7 dan C-9;dari CH3-16 ke C-12 dan C-14; dari CH3-18 ke C-3, C-4 dan C-19; dari CH3-20 ke C-1, C-5,C-9 dan C-10, masing-masing, menyusun struktur planar dari3 seperti yang dilaporkan sebelumnyauntuk 12-asam hidroksiagatik [46]. Namun, konfigurasi C-13 dari3 ditentukansebagaiE oleh data analitik NOESY (Gambar S19), yang menampilkan efek NOE di antaraH-5/H-9, H-5/H-18, dan H-12/H-14. Selain itu, NOE antara H-14 dan CH3-16, yang harus dicatat dalam 12-asam hidroksiagatik [46], tidak terdeteksi di3. Lainnyaspektrum 2D (Gambar S20 – S21) melengkapi penugasan penuh sinyal proton dan karbon.Kesimpulannya, struktur dari3 ditetapkan sebagai (13E,12R)-12-asam hidroksiagatik asditunjukkan (Gambar1).

Spektrum HR-ESI-MS dari4 menunjukkan [M− H]− puncak ion dim/z 181.0855 (Gambar S22), konsisten dengan rumus pseudomolekul C10H13O3. Penyerapanpuncak pada 3456 dan 1635 cm-1-1 dalam spektrum IR-nya menampilkan hidroksil dan karbonil terkonjugasikelompok, masing-masing. Dua proton metin diδH 2,09 (1H, m, H-5) dan 6,32 (1H, dd,J = 2.4, 1,2 Hz, H-2), dua gugus metilen padaδH 1.84 (1H, m, H-4a), 2.02 (1H, m, H-4b), 2.50 (1H, ddd,J = 19.2, 9.2, 4.8, 2.4 Hz, H-6a) dan 2.70 (1H, dddd,J = 19.2, 5.2, 5.2, 1.2 Hz,H-6b), dan satu set proton isopropil diδH 0.88 (3H, d, J = 6.8 Hz, CH3-9), 0.98 (3H, d, J = 6.8 Hz, CH3-10) dan 2,31 (1H, hept,J = 6.8 Hz, H-8) muncul di1spektrum H-NMRdari4 (Gambar S23). Selain itu, satu karbon karbonil terkonjugasi diδC 174.8 (C-7), dan satukarboksil karbon diδC 205.7 (C-3) dapat diamati di dalamnya13C- dan spektrum DEPT NMR(Gambar S24). Korelasi HMBC yang diamati (Gambar S25) dari H-2 ke C-7; dari H-4 keC-3; dari H-6 ke C-1, C-2, dan C-5; dari CH3-9 ke C-5, dan CH3-10; dari CH3-10 ke C-8,masing-masing, membangun struktur4 sebagai 5-isopropil-3-oksosikloheks-1-ena-1-karboksilatasam (Gambar1). Spektrum 2D lainnya (Gambar S26–S28) melengkapi penugasan penuh protondan sinyal karbon. Namun, stereokimia di C-5 tetap tidak dapat ditentukan.

Menggabungkan5 memiliki rumus molekul C11H14O5 ditentukan dari deprotonasipuncak ion molekuler dalam mode negatif analisis HR-ESI-MS (m/z 225.0767 [M − H]−, AngkaS29). Dalam spektrum IR-nya, hidroksil (3421 cm-1).−1 ) dan karboksil (1572 cm−1 ) fungsi dapat dideteksi. Itu1Spektrum H-NMR (Gambar S30) mengungkapkan dua jarak jauhkopling proton aromatik diδH 6.86 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4) dan 7.31 (1H, d,J = 2,4 Hz, H-6), satu gugus metoksi diδH 3.56 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-9), dan satu setproton propanol diδH 1,82 (2H, tt,J {{0}.0, 6,8 Hz, H-8), 2,61 (2H, t,J {{0}.0 Hz, H-7) dan 3,56(2H, t, J = 6.8 Hz, H-9). Selain itu, satu gugus karboksilat terletak diδC 176,2 (C-10) di-nya13Spektrum C-NMR (Gambar S31). Struktur planar dari5 didirikan oleh signifikanKorelasi HMBC (Gambar S32) dari OCH3-3 ke C-3; H-6 ke C-2, C-4, C-7, dan C-10; H-7ke C-4, C-5, dan C-8; H-9 ke C-7, dan C-8, masing-masing. Spektrum 2D lainnya (Gambar S33–S35)melengkapi penugasan penuh sinyal proton dan karbon. Bukti di atas menunjukkanstruktur dari5 sebagai 2-hidroksi-5-(3-hidroksipropil)-3-asam metoksibenzoat (Gambar1), yang sudah dilaporkan sebagai asam styraxinolic dalam literatur sintetik sebelumnya [48]. Namun demikian, penelitian ini adalah laporan pertama dari5 dari sumber alami.

3.2. Aktivitas Anti-Inflamasi

Peradangan adalah salah satu mekanisme pertahanan diri utama yang dirangsang oleh bakteri,virus, luka, atau berbagai faktor lingkungan lainnya. Ini adalah respons pertama dari kekebalan tubuhsistem terhadap infeksi dan iritasi. Neutrofil termasuk jenis yang melimpahmakrofag dan memainkan peran utama dalam peradangan, dan biasanya limfo pertamasel untuk mencapai daerah yang terinfeksi [49]. Neutrofil mengeluarkan serangkaian sitotoksin sepertianion superoksida dan elastase sebagai respons terhadap aktivasi sistem kekebalan tubuh [50]. Di dalambeberapa tahun terakhir, berbagai penyakit manusia telah dibuktikan terkait dengan neutrofilekspresi berlebihan [51–55]. Hubungan antara peradangan dan kanker telah ditetapkan, dan penulis menunjukkan bahwa pembentukan sel kanker berhubungan langsungperadangan [49]. Oleh karena itu, senyawa antiinflamasi baru sangat bermanfaatstudi lebih lanjut tentang pengobatan kanker. Empat puluh tiga senyawa terisolasi dievaluasipenghambatan pembentukan anion superoksida dan pelepasan elastase oleh neutrofil manusiadalam menanggapi fMLF/CB [56] (lihat Bahan Pelengkap, Tabel S2). Yang signifikan dalamhasil penghambatan (Tabel2) menunjukkan bahwa hanya45, 47, 48, 49, Dan50 (Angka2) ditampilkanpenghambatan signifikan pembentukan anion superoksida, dengan IC50 nilai mulai dari3.3 ± 0.9 ke7.7 ± 0.9 µM dibandingkan dengan kontrol positif LY294002 (IC50 1.1 ± 0.3 µM). Lebih-lebih lagi,48, 50, Dan51 (Angka2) mengungkapkan penghambatan signifikan pelepasan elastasedengan IC50 nilai mulai dari 5,3± 0.2 hingga 8.3± 0.8 µM dibandingkan dengan yang positifkontrol LY294002 (IC50 3.2 ± 1.0 µM) (Tabel2). Senyawa48 Dan50 ditampilkan keduanyapenghambatan pembentukan anion superoksida dan pelepasan elastase, menunjukkan kelipatannyabioaktivitas anti-inflamasi. Jarum dariP. morrisonicolatelah dilaporkan memilikiefek anti-inflamasi pada makrofag RAW 264.7 [13]. Para penulis mengusulkan ituepikatekin danp-asam coumaric diidentifikasi dalamP. morrisonicolamungkin bahan aktifnya.Pada penelitian kali ini, semua senyawa aktif yang mengandung tulang punggung flavon serupauntuk yang epicatechin danp-coumaroyl moiety juga dapat diamati pada49, 50, Dan51. Hal ini menunjukkan bahwa flflavonoid danpgugus fungsional -coumaroyl dapat berkontribusibioaktivitas anti-inflamasi dalam penelitian ini. Hasil bioassay ini menunjukkan bahwaflavonoid memainkan peran kunci dalamPinusspesies untuk bioaktivitas anti-inflamasi.

Meja 2.Efek penghambatan senyawa yang dimurnikan pada pembentukan anion superoksida dan pelepasan elastaseoleh neutrofil manusia sebagai respons terhadap fMLF/CB.

Gambar 2.Struktur prinsip anti-inflamasi45, 47, 48, 49, 50, Dan51. 

3.3. Studi Docking Molekuler

Penurunan kadar GH terkait usia dianggap sebagai gejala neuroendokrinpenuaan [57]. Fenomena ini ada pada beberapa spesies mamalia seperti manusia, domestikanjing, dan hewan pengerat laboratorium [57]. Pada manusia, kadar GH dalam plasma mulai menurundengan usia setelah pematangan fisik penuh dan berlanjut selama dekade kehidupan [57]. Ghrelin diidentifikasi sebagai ligan endogen untuk GHSR dan merupakan pengatur utamasekresi GH [18,19]. Ghrelin terlibat dalam berbagai fisiologis dan patofisiologismekanisme pada manusia seperti penuaan [24,25]. Selain itu, ghrelin dapat dipikirkanterkait dengan aktivitas anti-inflamasi. Aktivasi sel kekebalan dibatasi oleh ghrelinpengobatan melalui penghambatan NF-κAktivasi B dan sekresi MCP-1 berikutnya [26]. Sebuah peptida pelepas hormon pertumbuhan analog ghrelin sintetik-2 (GHRP-2) dilaporkanuntuk mengurangi faktor peradangan pada tikus rematik, dan mendukung sel kekebalan tubuhdimediasi oleh aktivasi reseptor ghrelin [27]. Neves dkk. juga diusulkanregulasi peradangan sebagai intervensi anti-penuaan [58]. Dengan demikian, menurutdata eksperimen bioassay anti-inflamasi,45, 47, 48, 49, 50, Dan51 (Angka2) menunjukkanefek penghambatan yang signifikan dan dipilih untuk menentukan kemampuan mengikat mereka kereseptor ghrelin. Sebelum simulasi docking, native ligand (8QX) dimasukkan ke dalam 6KO5File PDB dipasang kembali untuk validasi. Interaksi antara 8QX dan 6KO5 danpose terbaik dari hasil perhitungan menunjukkan kemiripan dan keterulangan yang tinggi dengan data asli(data tidak ditampilkan). Hasilnya menunjukkan akurasi yang tinggi dari sistem simulasi yang adadan mendukung komputasi lebih lanjut.

Energi ikat terendah dari masing-masing ligan dianggap sebagai konformasi terbaik. Ituafinitas yang mengikat tercantum dalam Tabel3. Peptida 6 pelepas hormon pertumbuhan (GHRP-6) adalahdigunakan sebagai kontrol positif untuk berlabuh ke kantong pengikat reseptor ghrelin seperti pada kamilaporan sebelumnya. Meskipun AutoDock Vina tidak dibuat untuk docking antar peptidadan protein, beberapa hasil sukses telah dipublikasikan dalam laporan sebelumnya [59–61]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, GHRP-6 pertama kali dihitung untuk menentukan akurasi darimodel docking saat ini dan hasilnya bertepatan dengan baik (Gambar3A). Dibandingkan dengan GHRP-6,energi ikat dari49, 50, Dan51 lebih rendah dari−10,3 kkal/mol (Tabel3). Inimenyarankan itu49, 50, Dan51 bisa berlabuh ke kantong reseptor ghrelin serupa ataubahkan lebih baik daripada GHRP-6. Untuk49, ikatan hidrogen dapat diamati antaradua gugus karbonil (C-4 danp-coumaroyl) dan Arg283, C-5 hidroksil dan Gln120,C-7 hidroksil dan Tyr313, dan C-40 hidroksil dan Cys304, masing-masing. Arg199 membentuk aikatan hidrogen konvensional dengan gugus karbonilp-coumaroyl. Selain itu,49 duluterkait dengan residu Arg283, Arg102, Asp99, Phe279, Phe312, Leu181, dan Pro200 darireseptor ghrelin melalui efek yang berbeda sepertiπ-kation,π-anion,π–π berbentuk T, danπinteraksi -alkil. Senyawa yang diizinkan ini49 dan protein untuk membentuk kompleks yang stabil(Angka3B). 50 terikat dengan Asp99, Arg102, Gln120, Arg283, Leu103, Asn305, danArg199 melalui berbagai ikatan hidrogen, sedangkan interaksi lainnya (π–kation,π–anion,π–π berbentuk T, danπ–alkyl) juga diamati dengan Asp99, Arg102, Arg283, Phe279, Phe312,Leu181, dan Leu210 (Gambar3C). 51 juga membentuk ikatan hidrogen atau karbon-hidrogendengan Tyr313, Ser123, Arg283, Arg102 dan Asn305, bersama dengan interaksi lainnya (π-kation,π-anion,π-sigma,π–π berbentuk T, danπ-alkil) untuk dihubungkan dengan Asp99, Arg283, Arg102, Leu181,Residu reseptor ghrelin Phe312, dan Pro200 dapat dideteksi (Gambar3D). Dibandingkan dengansenyawa45, 47, Dan48 dengan49, 50, Dan51, kelompok sebelumnya memiliki flflavonoidkerangka saja sementara kelompok terakhir memiliki bagian gula dan coumaroyl. Dilaporkan bahwagugus coumaroyl yang melekat pada gula sangat penting untuk afinitas pengikatan pada ghrelinreseptor [34]. Struktur celah GHSR berinteraksi dengan gugus asam asil ghrelinmengakibatkan transformasi reseptor ghrelin menjadi konfigurasi aktif [43]. Selain itu, kantong pengikat GHSR bercabang dua oleh jembatan garam antara Glu124dan Arg283, dan wilayah ini kaya akan asam amino hidrofobik [43]. menurut kamidata, skor docking dari49, 50, Dan51 lebih tinggi dari mereka45, 47, Dan48, yangmenyarankan kemampuan mengikat yang lebih baik. Karakteristik struktural utama adalahkelompok coumaroyl daripada bagian gula dan ini dapat dibuktikan lebih lanjut olehpemeriksaan lebih banyak senyawa yang memiliki fungsi coumaroyl. Dalam penelitian ini, parabahan aktif49, 50, Dan51 tidak hanya memiliki bioaktivitas anti-inflamasi tetapi jugapotensi pengikatan reseptor ghrelin. Ini menunjukkan bahwa efek anti-penuaan yang diklaim dariteh jarum pinus mungkin juga didasarkan pada senyawa seperti teh ghrelin ini.

4. Kesimpulan

Sebanyak tujuh puluh tujuh isolat yang terdiri dari lima belas senyawa yang tidak terdeskripsikan dimurnikandiverifikasi dari ekstrak metanol dariP. taiwanensisjarum. Struktur mereka dicirikanmelalui analisis spektroskopi dan spektrometri. Empat puluh tiga senyawa murni adalahdiperiksa untuk merekaanti inflamasi aktivitasolehpenghambatan pembentukan anion superoksidaDanpelepasan elastase pada model neutrofil. Hasilnya menunjukkan bahwa45, 47, 48, 49, 50, Dan51 memiliki signifikanpotensi anti-inflamasi. Docking molekul lebih lanjuthasil komputasi didukung49, 50, Dan51 menunjukkan afinitas yang mengikat untuk aktifkantong reseptor ghrelin. Oleh karena itu, ekstrak kasar dan konstituen yang dimurnikanP. taiwanensismemiliki potensi untuk dikembangkan sebagai obat antiinflamasi timbal baru ataubahan makanan.

Bahan Pelengkap:Berikut ini tersedia secara online di, Lampiran A: Prosedur ekstraksi dan isolasi lengkap,Lampiran B: Referensisenyawa yang diketahui, Tabel S1: Skrining bioaktivitas awal dari jarumP. taiwanensispada superoksidagenerasi anion dan pelepasan elastase oleh neutrofil manusia sebagai respons terhadap fMLF / CB,Tabel S2: Efek penghambatan senyawa yang dimurnikan pada pembentukan anion superoksida dan elastasedilepaskan oleh neutrofil manusia sebagai respons terhadap fMLF/CB, Gambar S1–S35: spektrum HRMS dan NMR darisenyawa baru

1–5. Kontribusi Penulis:Konseptualisasi, P.-CK dan JTCT; Metodologi, P.-CK dan T.-LH;Investigasi, Y.-CL, AMK dan M.-LY; Resources, S.-YW; Kurasi data, Y.-CL dan G.-HY;Penulisan—penyusunan draf asli, P.-CK dan Y.-CL; Menulis—review dan editing, P.-CK Allpenulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan:Studi ini disponsori oleh Kementerian Sains dan Teknologi, Taiwan (MOST). Itupenelitian didukung sebagian oleh Proyek Sprout Pendidikan Tinggi, Kementerian Pendidikan hinggaMarkas Besar Kemajuan Universitas di National Cheng Kung University (NCKU).

Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan:Kajian dilakukan dengan persetujuan InstitusionalBadan Peninjau Rumah Sakit Chang Gung Memorial (IRB No. 201800369A3).Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan:Pernyataan tersebut dapat diberikan berdasarkan permintaan.

Pernyataan Ketersediaan Data:Data asli dapat diperoleh dari penulis yang sesuai atas permintaan.

Ucapan terima kasih:Penulis juga berterima kasih kepada Chang Gung Memorial Hospital (CMRPD1B0281~3,CMRPF1D0442~3, CMRPF 1F0011~3, CMRPF1F0061~3 dan BMRP450 diberikan kepada T.-LH) untukdukungan keuangan parsial dari penelitian ini. Para penulis berterima kasih atas penggunaan NMRperalatan milik Pusat Instrumen Universitas Nasional Cheng Kung.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi

1. Xie, Q.; Liu, Z.; Li, Z. Komposisi kimia dan aktivitas antioksidan dari minyak atsiri enamPinustaksa asli Cina.Molekul2015, 20, 9380–9392. [CrossRef] 

2. Kim, KY; Chung, senyawa rasa HJ dari teh kecambah pinus dan teh jarum pinus.J.Agri. Makanan Kimia.2000, 48, 1269–1272. [CrossRef] 

3. Taman, G.; Paudyal, DP; Hwang, saya.; Tripati, GR; Yang, Y.; Cheong, H. Produksi ekstrak jarum fermentasi dari pinus merah dankarakterisasi fungsional mereka.Bioteknologi. Bioproses Eng.2008, 13, 256. [CrossRef]

4. Idžojti´c, M.; Kajba, D.; Franji'c, J. Diferensiasi hibrida F1P.nigraJF Arnold× P. sylvestrisL., P.nigraJF Arnold× P. densifloraSiebold et Zucc.,P.nigraJF Arnold× P. thunbergianaFranco dan spesies induknya dengan komposisi volatil jarum.Biokimia.Sistem. Ekol.2005, 33, 427–439. [CrossRef] 

5. Kim, YS; Shin, DH Komponen yang mudah menguap dan efek antibakteri jarum pinus (Pinus densiflfloraS. dan Z.) ekstrak.Mikrobiol Pangan.2005, 22, 37–45. [CrossRef] 

6. Dob, T.; Berramdane, T. Komposisi minyak atsiri dariPinus halepensisPabrik. dari tiga wilayah berbeda di Aljazair.J.Esensi. Minyak Res.2007, 19, 40–43. [CrossRef] 

7. Nam, AM; Tomi, F.; Gibernau, M.; Casanova, J.; Bighelli, A. Komposisi dan variabilitas kimia minyak jarum dariPinus halepensistumbuh di Korsika.kimia Keanekaragaman hayati.2016, 13, 380–386. [CrossRef] 

8. Sezik, E.; Üstün, O.; Demirci, B.; Ba¸ser, KHC Komposisi minyak atsiri dariPinus nigraArnold dari Turki.Turki. J.Chem.2010, 34, 313–325.