Vaksin Menimbulkan Kekebalan Seluler yang Sangat Reaktif Silang Terhadap Varian Omikron SARS-CoV-2

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 Beth Israel Deaconess Medical Center, Boston, MA, AS;

2 Institut Ragon MGH, MIT, dan Harvard, Cambridge, MA, AS

Varian SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) yang sangat bermutasi telah terbukti menghindari sebagian besar respons antibodi penetralisir yang ditimbulkan oleh vaksin saat ini yang mengkodekan imunogen1 Spike WA1/2020, menghasilkan peningkatan infeksi terobosan dan mengurangi kemanjuran vaksin. Respon imun seluler, terutama respons sel CD8 plus T, kemungkinan penting untuk perlindungan terhadap penyakit SARS-CoV-2 yang parah2-6. Di sini kami menunjukkan bahwa imunitas seluler yang diinduksi oleh vaksin SARS-CoV-2 saat ini sangat reaktif silang terhadap varian Omikron SARS-CoV-2. Individu yang menerima vaksin Ad26.COV2.S atau BNT162b2 menunjukkan respons sel T CD8 plus dan CD4 plus yang tahan lama yang menunjukkan reaktivitas silang yang luas terhadap varian Delta dan Omicron, termasuk dalam subpopulasi seluler memori pusat dan efektor. Median Omikron-spesifik CD8 ditambah tanggapan sel T adalah 82-84 persen dari WA1/2020- CD8 spesifik ditambah tanggapan sel T. Data ini menunjukkan bahwa vaksin saat ini dapat memberikan perlindungan yang cukup besar terhadap penyakit parah dengan varian Omikron SARS-CoV-2 meskipun ada pengurangan substansial dari respons antibodi penetralisir.

manfaat kesehatan cistanche: meningkatkan kekebalan

Studi terbaru menunjukkan bahwa antibodi penetralisir yang ditimbulkan vaksin (NAbs) secara substansial direduksi menjadi varian Omikron SARS-CoV-2 yang sangat bermutasi, menghasilkan penyebaran global yang cepat, termasuk infeksi terobosan pada individu yang divaksinasi penuh1. Untuk mengevaluasi reaktivitas silang dari respons imun seluler yang ditimbulkan oleh vaksin terhadap varian Omikron SARS-CoV-2, kami menilai respons sel T CD8 plus dan CD4 plus pada 51 orang yang divaksinasi dengan Ad26 berbasis vektor adenovirus. Vaksin COV2.S7 (Johnson & Johnson; N=20) atau vaksin BNT162b2 berbasis mRNA8 (Pfizer; N=31).

Setelah vaksinasi BNT162b2, kami mengamati respons NAb spesifik WA1/2020-yang tinggi pada bulan 1, diikuti oleh penurunan tajam pada bulan ke-8, seperti yang diharapkan9,10 (Gbr. 1a). Setelah vaksinasi Ad26.COV2.S, terdapat respons NAb spesifik WA1/2020-awal yang jauh lebih rendah pada bulan 1, tetapi respons ini lebih tahan lama dan bertahan pada bulan ke 89,11 (Gbr. 1a). Namun, NAbs spesifik Omikron reaktif silang minimal diamati untuk kedua vaksin (Gbr. 1a), konsisten dengan data terbaru tanpa adanya peningkatan tambahan1. Respon antibodi pengikat spesifik domain pengikat reseptor (RBD) dinilai oleh ELISA dan menunjukkan tren yang sama, dengan antibodi pengikat spesifik Omikron reaktif silang minimal (Gbr. 1b). Berbeda dengan respons antibodi, respons imun seluler spesifik Spike dinilai dengan pooled peptide IFN-g ELISPOT assays menunjukkan reaktivitas silang yang substansial terhadap Omicron (Extended Data Gbr. 1). Kami selanjutnya menilai respons sel T CD8 plus dan CD4 plus spesifik Spike dengan uji pewarnaan sitokin intraseluler. Ad26.COV2.S menginduksi respons median Spike-spesifik IFN-g CD8 plus sel T sebesar 0.061 persen , 0.062 persen , dan {{ 72}}.051 persen terhadap WA1/2020, Delta, dan Omicron, masing-masing, pada bulan ke 8 setelah vaksinasi (Gbr. 2a). BNT162b2 menginduksi respons median Spike-spesifik IFN-g CD8 plus sel T masing-masing sebesar 0 0,028 persen dan 0,023 persen terhadap WA1/2020 dan Omicron, pada bulan ke 8 setelah vaksinasi (Gbr. 2a). Data ini menunjukkan bahwa CD8 spesifik Omikron plus respons sel T adalah 82-84 persen cross-reactive dengan WA1/2020-respons CD8 plus sel T spesifik. Respon sel T CD4 plus IFN-g spesifik lonjakan yang ditimbulkan oleh Ad26.COV2.S adalah median masing-masing 0,026 persen , 0,030 persen , dan 0,029 persen terhadap WA1/2020, Delta, dan Omicron, dan oleh BNT162b2 adalah median dari 0,033 persen dan 0,027 persen terhadap WA1/2020 dan Omicron, masing-masing, menunjukkan reaktivitas silang substansial dari CD4 plus tanggapan sel T juga (Gbr. 2b). Reaktivitas silang Omicron yang substansial juga diamati untuk TNF-a dan IL spesifik Spike yang mensekresi CD8 plus dan CD4 plus respons sel T (Data yang Diperluas Gambar 2).

Analisis regresi linier menunjukkan bahwa CD8 spesifik Omikron ditambah respons sel T berkorelasi dengan WA1/2020-respons CD8 plus sel T spesifik untuk vaksin Ad26.COV2.S untuk kedua titik waktu (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Data kami menunjukkan bahwa Ad26.COV2.S dan BNT162b2 memperoleh kekebalan seluler lintas-reaktif secara luas terhadap varian SARS-CoV-2 termasuk Omicron. Konsistensi pengamatan ini di dua teknologi platform vaksin yang berbeda (vektor virus dan mRNA) menunjukkan generalisasi dari temuan ini. Reaktivitas silang ekstensif dari respons sel T CD8 plus dan CD4 plus spesifik Omicron sangat kontras dengan respons antibodi penetral dan pengikatan spesifik Omikron yang sangat berkurang. Data ini konsisten dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan reaktivitas silang yang lebih besar dari respons imun seluler yang ditimbulkan oleh vaksin dibandingkan dengan respons imun humoral terhadap varian SARS-CoV -2 Alpha, Beta, dan Gamma12. Reaktivitas silang 82-84 persen dari CD8 plus respons sel T terhadap Omicron konsisten dengan prediksi teoretis berdasarkan mutasi Omicron6.

Studi praklinis telah menunjukkan bahwa sel CD8 plus T berkontribusi terhadap perlindungan terhadap SARS-CoV-2 pada kera rhesus, terutama ketika respons antibodi tidak optimal5. Respon CD8 plus dan CD4 plus T yang tahan lama juga telah dilaporkan setelah infeksi dan vaksinasi2- 4,6,9,11,13,14. Mengingat peran sel CD8 plus T dalam pembersihan infeksi virus, kemungkinan kekebalan seluler berkontribusi besar terhadap perlindungan vaksin terhadap penyakit SARS-CoV-2 yang parah. Ini mungkin sangat relevan untuk Omicron, yang menghindari sebagian besar respons antibodi. Data kami menunjukkan bahwa vaksin saat ini dapat memberikan perlindungan substansial terhadap penyakit parah akibat varian Omikron SARS-CoV-2 meskipun respons antibodi penetralisir berkurang dan peningkatan infeksi terobosan.

bubuk cistanche

Metode

Populasi studi

Sampel dari individu yang menerima vaksin BNT162b2 diperoleh dari spesimen biorepositori Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC). Sampel dari individu yang menerima Ad26.COV2.S diperoleh dari studi COV1001 (NCT04436276). Kedua studi telah disetujui oleh dewan peninjau kelembagaan BIDMC. Semua peserta memberikan persetujuan. Individu dikeluarkan dari penelitian ini jika mereka memiliki riwayat infeksi SARS-CoV- 2, menerima vaksin COVID-19 lainnya atau menerima obat imunosupresif. Uji antibodi penetralisir virus pseudo

Pseudovirus -2 SARS-CoV yang mengekspresikan gen reporter luciferase digunakan untuk mengukur antibodi penetral pseudovirus. Singkatnya, kemasan itu menyusun psPAX2 (Program Reagen dan Sumber Daya AIDS), plasmid reporter luciferase pLentiCMV Puro-Luc (Addgene), dan pcDNA3 yang mengekspresikan protein spike.1-SARS-CoV-2 SΔCT adalah co- ditransfusikan ke dalam sel HEK293T (ATCC CRL_3216) dengan lipofectamine 2000 (ThermoFisher Scientific). Pseudovirus varian SARS-CoV-2 dihasilkan dengan menggunakan strain WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, ID aksesi GISAID: EPI_ISL_402124), varian B.1.1.7 (Alfa, ID aksesi GISAID: EPI_ISL_601443), varian B.1.351 (Beta, ID aksesi GISAID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, ID aksesi GISAID: EPI_ISL_2020950), atau B.1.1.529 (Omicron, ID GISAID: EPI_ISL_7358094.2). Supernatan yang mengandung virus pseudotype dikumpulkan 48 jam setelah transfeksi; virus pseudotype dimurnikan dengan penyaringan dengan filter 0.45-μm. Untuk menentukan aktivitas netralisasi serum manusia, sel HEK293T-hACE2 diunggulkan dalam 96-pelat kultur jaringan sumur dengan kepadatan 1,75 × 104 sel per sumur semalaman. Pengenceran serial tiga kali lipat dari sampel serum yang tidak diaktifkan panas disiapkan dan dicampur dengan 50 ul pseudovirus. Campuran diinkubasi pada 37 derajat selama 1 jam sebelum ditambahkan ke sel HEK293T-hACE2. Setelah 48 jam, sel-sel dilisiskan dalam Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) sesuai dengan instruksi pabriknya. Titer netralisasi SARS-CoV-2 didefinisikan sebagai pengenceran sampel di mana pengurangan 50 persen (NT50) dalam unit cahaya relatif diamati relatif terhadap rata-rata sumur kontrol virus.

Uji imunosorben terkait enzim (ELISA)

SARS-CoV-2 antibodi pengikat spesifik domain pengikat reseptor (RBD) dalam serum dinilai dengan ELISA. 96-piring sumur dilapisi dengan 2 ug/mL SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Beta), atau B.1.1.529 (Omicron) protein RBD dalam 1x Dulbecco phosphate-buffered saline (DPBS) dan diinkubasi pada 4 derajat semalaman. Setelah inkubasi, pelat dicuci sekali dengan buffer pencuci (0,05 persen Tween 20 dalam 1 × DPBS) dan diblokir dengan 350 L larutan blok kasein per sumur selama 2 hingga 3 jam pada suhu kamar. Setelah inkubasi, larutan blok dibuang dan pelat dikeringkan. Pengenceran serial serum yang tidak diaktifkan panas yang diencerkan dalam blok Kasein ditambahkan ke sumur, dan pelat diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar, sebelum 3 kali pencucian lagi dan inkubasi 1-jam dengan pengenceran anti- human IgG horseradish peroxidase (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) pada suhu kamar dalam gelap. Pelat dicuci 3 kali, dan 100 L larutan SeraCare KPL TMB SureBlue Start ditambahkan ke setiap sumur; pengembangan pelat dihentikan dengan menambahkan 100 L larutan SeraCare KPL TMB Stop per sumur. Absorbansi pada 450 nm, dengan referensi pada 650 nm, direkam dengan pembaca pelat mikro VersaMax (Perangkat Molekuler). Untuk setiap sampel, titer titik akhir ELISA dihitung menggunakan kurva logistik parameter 4-yang cocok untuk menghitung pengenceran serum timbal balik yang menghasilkan nilai absorbansi terkoreksi (450 nm-650 nm) sebesar 0,2. Titer titik akhir yang diinterpolasi dilaporkan.

ekstrak cistanche deserticola: meningkatkan kekebalan

Uji immuno-spot terkait-enzim (ELISPOT).

Pelat ELISPOT dilapisi dengan antibodi monoklonal IFN-antimanusia tikus dari MabTech pada 1 g/sumur dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 derajat. Pelat dicuci dengan DPBS dan diblokir dengan media R10 (RPMI dengan 10 persen FBS yang tidak diaktifkan panas dengan 1 persen 100x penisilin-streptomisin, 1M HEPES, 100mM Sodium piruvat, 200mM L-glutamin, dan 0,1 persen 55mM 2-Mercaptoethanol) selama 2-4 jam pada 37 derajat . SARS-CoV-2 mengumpulkan S peptida dari SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), atau B.1.1.529 (Omicron) (Biokimia Abad ke-21) disiapkan dan berlapis pada konsentrasi 2 g/sumur, dan 100,000 sel/sumur ditambahkan ke piring. Peptida dan sel diinkubasi selama 15-20 jam pada 37 derajat. Semua langkah setelah inkubasi ini dilakukan pada suhu kamar. Pelat dicuci dengan buffer pencuci ELISPOT dan diinkubasi selama 2-4 jam dengan antibodi monoklonal IFN-monoklonal tikus yang terbiotinilasi dari MabTech (1 g/mL). Pelat dicuci untuk kedua kalinya dan diinkubasi selama 2-3 jam dengan AP anti-biotin Kambing terkonjugasi dari Rockland, Inc. (1,33 g/mL). Pencucian terakhir diikuti dengan penambahan larutan substrat garam indolyl phosphate p-toluidine salt (NBT/BCIP chromagen) (NBT/BCIP chromagen) selama 7 menit. Kromagen dibuang dan pelat dicuci dengan air dan dikeringkan di tempat redup selama 24 jam. Pelat dipindai dan dihitung pada Cellular Technologies Limited Immunospot Analyzer.

Uji pewarnaan sitokin intraseluler (ICS)

Respons CD4 plus dan CD8 plus sel T dihitung dengan uji pewarnaan sitokin intraseluler (ICS) yang dirangsang peptida. Kumpulan peptida mengandung 15 peptida asam amino yang tumpang tindih dengan 11 asam amino yang mencakup SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), atau B.1.1 .529 (Omikron) Protein lonjakan (Biokimia Abad 21). 106 sel mononuklear darah tepi disuspensikan kembali dalam 100 L media R10 yang dilengkapi dengan antibodi monoklonal CD49d (1 g/mL) dan antibodi monoklonal CD28 (1 g/mL). Setiap sampel dinilai dengan tiruan (100 L R10 ditambah 0,5 persen DMSO; kontrol latar belakang), peptida (2 g/mL), dan/atau 10 pg/mL phorbol myristate acetate (PMA) dan 1 g/ml ionomycin (Sigma- Aldrich) (100µL; kontrol positif) dan diinkubasi pada suhu 37 derajat selama 1 jam. Setelah inkubasi, 0,25 L GolgiStop dan 0,25 L GolgiPlug dalam 50 L R10 ditambahkan ke setiap sumur dan diinkubasi pada 37 derajat selama 8 jam dan kemudian ditahan pada 4 derajat semalaman. Hari berikutnya, sel dicuci dua kali dengan DPBS, diwarnai dengan pewarna hidup/mati aqua selama 10 menit dan kemudian diwarnai dengan titer antibodi monoklonal yang telah ditentukan sebelumnya terhadap CD279 (klon EH12.1, BB700), CD4 (klon L200, BV711), CD27 (kloning M-T271, BUV563), CD8 (kloning SK1, BUV805), CD45RA (kloning 5H9, APC H7) selama 30 menit. Sel kemudian dicuci dua kali dengan buffer FBS/DPBS 2 persen dan diinkubasi selama 15 menit dengan 200 L larutan BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization. Sel dicuci dua kali dengan buffer 1X Perm Wash (BD Perm/WashTM Buffer 10X dalam kit CytoFix/CytoPerm Fixation/ Permeabilization yang diencerkan dengan air MilliQ dan melewati filter 0,22µm) dan diwarnai dengan antibodi monoklonal intraseluler terhadap IFN- (klon B27; BUV395), dan CD3 (kloning SP34.2, Alexa 700), selama 30 menit. Sel dicuci dua kali dengan buffer 1X Perm Wash dan difiksasi dengan 250µL formaldehida 1,5 persen yang baru disiapkan. Sel tetap dipindahkan ke 96-pelat dasar bulat dan dianalisis dengan sistem BD FACSymphony™. Data dianalisis menggunakan FlowJo v9.9.

suplemen cistanche:meningkatkan kekebalan

Referensi

1. Cele S, Jackson L, Khan K, dkk. SARS-CoV-2 Omicron memiliki pelepasan Pfizer BNT162b2 yang ekstensif tetapi tidak lengkap sehingga menimbulkan netralisasi dan membutuhkan ACE2 untuk infeksi. medRxiv 2021.

2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, dkk. Memori imunologis terhadap SARS-CoV-2 dinilai hingga 8 bulan setelah infeksi. Sains 2021;371.

3. Set A, Crotty S. Kekebalan adaptif terhadap SARS-CoV-2 dan COVID-19. Sel 2021;184:861-80.

4. Goel RR, Pelukis MM, Apostolidis SA, dkk. vaksin mRNA menginduksi memori kekebalan yang tahan lama terhadap SARS-CoV-2 dan varian yang menjadi perhatian. Sains 2021;374:abm0829.

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, dkk. Korelasi perlindungan terhadap SARS-CoV-2 pada kera rhesus. Alam 2021;590:630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, dkk. Target Respon Sel T terhadap SARS-CoV-2 Coronavirus pada Manusia dengan Penyakit COVID-19 dan Individu yang Tidak Terpapar. Sel 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, dkk. Keamanan dan Khasiat Vaksin Ad26.COV2.S Dosis Tunggal terhadap Covid-19. N Engl J Med 2021;384:2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, dkk. Keamanan dan Khasiat Vaksin BNT162b2 mRNA Covid-19. N Engl J Med 2020.

9. Collier AY, Yu J, McMahan K, dkk. Kinetika Diferensial dari Respons Kekebalan yang Dipicu oleh Vaksin-19 Covid. N Engl J Med 2021;385:2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, dkk. Netralisasi SARS-CoV-2 dengan Vaksin BNT162b2 Dosis 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, dkk. Respons Kekebalan Seluler dan Humoral yang Tahan Lama 8 Bulan setelah Vaksinasi Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021;385:951-3.

12. Ubah G, Yu J, Liu J, dkk. Imunogenisitas vaksin Ad26.COV2.S terhadap varian SARS-CoV-2 pada manusia. Alam 2021;596:268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, dkk. Infeksi SARS-CoV-2 menghasilkan memori imunologis yang terlokalisasi di jaringan pada manusia. Ilmu imunologi 2021;6:eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, dkk. Korelasi Netralisasi terhadap Varian SARS-CoV-2 oleh Sera Pandemi Awal. J Virol 2021;95:e0040421.

manfaat suplemen cistanche:meningkatkan kekebalan