HRMS UPLC-Q-ORBITRAP dikombinasikan dengan docking molekuler untuk menyelidiki dasar material dari rasa pahit dan hubungan efek-efek di Cistanchia desertica
Dec 18, 2024
Abstrak
Based on ultra performance liquid chromatography-quadrupole-electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) and molecular docking, the bitter taste presenting substances of Cistanchis deserticola extract were investigated to lay a research foundation for the de-bittering and correcting of the taste, and to investigate their relationship with the bitter taste efficacy. Pertama, HRMS UPLC-Q-Orbitrap digunakan untuk mengkarakterisasi konstituen C. deserticola, dan 69 komponen kimia diidentifikasi. Docking molekuler dari komponen kimia ini dengan reseptor rasa pahit menghasilkan skrining 20 zat penyajian pahit, termasuk 6 fenylethanol glikosida, 5 flavonoid, 3 asam fenolik, 2 terpene eter sikloallenil, 2 alkaloid dan 2 komponen lainnya. Ekstrak dengan asal yang sama dikumpulkan dari tempat asal yang sama, dan zat penyaji pahit diselidiki oleh docking molekuler. Komponen-komponen lain, sembilan batch sampel C. deserticola segar dikumpulkan dari bulan-bulan yang berbeda dari asal yang sama, dibagi menjadi beberapa bulan yang berbeda dan bagian yang berbeda, dan nilai kuantitatif kepahitan sampel ditentukan dengan metode lidah elektronik, dan konten dari enam komponen dalam tubos, pinusilosida, trikotesida, glycene-tuboside, glycenecene, glycide glycene, glycenecene, trikoteken, glycenide glycene, glycenecene, glycenecene, glycenecene, glycenecene, glycenecen, Jinshihuaoside, dan jingnipinoside) ditentukan oleh kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), dan total fenylethanol glikosida dalam sampel ditentukan dengan metode spektrofotometri uvvisible. Metode fotometrik untuk menentukan isi dari total fenylethanol glikosida, total polisakarida, total alkaloid, flavonoid total, dan asam fenolik total dalam sampel, dan akan dikombinasikan dengan analisis chemometrics pada basis ini, dan diverifikasi dengan analisis korelasi Pearson, analisis korelasi abu-abu, dan analisis korelasi abu-abu, dan analisis korelasi abu-abu, dan analisis korelasi abu-abu, dan analisis korelasi abu-abu, dan analisis Korelasi Pearson, dan analisis korelasi abu-abu, dan Organ. dalam C. deserticola, yang sesuai dengan hasil docking molekuler; dan akhirnya, dengan zat yang mempresentasikan pahit sebagai objek penelitian.
Ekstrak Cistanchis deserticola
Akhirnya, prediksi dan analisis farmakologis jaringan dilakukan dengan zat pahit sebagai target, dan hubungan antara target zat pahit dan kemanjuran pahit diselidiki. Hasil penelitian menunjukkan bahwa target utama zat bitter adalah EGFR, PIK3CB dan PTK2, dan bahwa zat pahit dapat mengerahkan kemanjuran pahit melalui aksi pada target penyakit yang relevan, yang berarti bahwa zat pahit C. desertica adalah dasar material dari efikasi yang pahit. Sebagai kesimpulan, penelitian ini menunjukkan bahwa fenylethanol glikosida, terutama pinealoside, mauritiana glycoside dan gibbe rellin, adalah dasar materi dari rasa pahit C. desertica, dan teknologi docking molekul yang memiliki peran panduan dalam penyaringan zat pahit dalam obat tradisional Tiongkok, dan bahwa hal -hal yang lebih baik memiliki efek panduan dalam penyaringan pahit dalam obat tradisional Tiongkok, dan bahwa hal -hal yang buruk memiliki c. "Selasa-efikasi" obat tradisional Tiongkok di masa depan. Zat -zat pahit dalam C. desertica memiliki selera dan efek yang pahit, yang akan memberikan ide dan referensi untuk penelitian masa depan tentang hubungan antara rasa dan efek dalam pengobatan tradisional Tiongkok
Kata kunci Ekstrak Cistanchis deserticola; HRMS UPLC-Q-ORBITRAP; farmakologi jaringan; docking molekuler; lidah elektronik; zat pahit;hubungan rasa-efek
Cistanche Deserticola Yc MA.adalah parasit akar abadi dari keluarga Orobanchaceae, genus Cistanche, umumnya dikenal sebagai Desert Cistanche [1]. Herbal klasik Shennong menyatakan bahwa Cistanche rasanya manis dan sedikit hangat. Namun, itu sebenarnya memiliki selera yang gigih dan sedikit pahit setelah diambil. "Rasa" dari lima rasa obat tradisional Tiongkok awalnya ditentukan berdasarkan rasa obat yang sebenarnya ketika rasanya, tetapi karena rasa obat terkait erat dengan efeknya, secara bertahap berevolusi menjadi menjelaskan dan merangkum efek obat dengan "rasa" [2]. Cistanche direkam dalam banyak buku medis kuno klasik. Ini memiliki efek dari memelihara ginjal dan mengisi kembali esensi, melembabkan usus dan menghilangkan sembelit. Sejak zaman kuno, telah digunakan untuk mengobati penyakit yang terkait dengan kekurangan ginjal, termasuk disfungsi seksual, infertilitas wanita, kehilangan esensi dan darah, rasa sakit pinggang dan lutut, usus kering dan sembelit, dll. [3]. Kepahitan obat tradisional Tiongkok adalah salah satu dari lima rasa teori pengobatan tradisional Tiongkok dan merupakan dasar teoritis yang penting untuk memandu penggunaan klinis pengobatan tradisional Tiongkok. Kepahitan adalah salah satu dari lima rasa obat tradisional Tiongkok. Karakteristiknya adalah pencahar, pengeringan, dan mengencang [4], dan memainkan peran penting dalam memandu penggunaan klinis pengobatan tradisional Tiongkok. Sebagian besar obat -obatan Cina tradisional dan persiapan obat tradisional Tiongkok memiliki rasa pahit. Obat tradisional Tiongkok percaya bahwa zat penyedap pahit (selanjutnya disebut sebagai zat pahit) dalam obat -obatan pahit adalah zat yang efektif [5]. Namun, hubungan antara zat pahit dalam obat -obatan tradisional Tiongkok dan kemanjurannya yang pahit masih belum jelas. Masih ada kurangnya penelitian ilmiah yang relevan tentang apakah zat pahit dalam obat -obatan tradisional Cina pahit memiliki kemanjuran pahit. Cistanche mengandung berbagai komponen kimia, terutama fenylethanol glikosida, terpene eter siklopentan, lignan dan glikosida, gula, dll. Selain itu, hanya mengandung flavonoid, asam fenolik, minyak komponen, asam amino, asam aminoid, asam aminan, inorganik, inorganik, asam aminoid, asam amino, inorganik, inorganik, asam aminan, asam aminan, asam aminan, asam amino, inorgan Di antara mereka, senyawa fenylethanol glikosida dianggap sebagai komponen efektif utama dalam cistanche [7]. Cistanche Deserticola memiliki dua musim panen: Musim Semi dan Musim Gugur. Penelitian telah menunjukkan bahwa kandungan polisakarida dari Spring Cistanche deserticola rendah, kandungan fenylethanol glikosida tinggi, dan rasanya pahit, tetapi kapasitas antioksidannya kuat [8]. Dapat dilihat bahwa komponen pahitnya memiliki korelasi tertentu dengan kemanjuran obat, tetapi dasar material dari rasa pahit Cistanche deserticola masih belum jelas, yang dapat membatasi perkembangan lebih lanjut.
Untuk mengeksplorasi basis zat pahitCistanche DeserticolaDan hubungannya dengan kemanjuran pahit (hubungan efek-efek), penelitian ini mengambil ekstrak Cistanche deserticola sebagai objek penelitian, dan menyaring zat-zat pahit dalam cistanche deserticola oleh bidang-bidang cairan-high-orbit-high-orbit-orbitrostk. Konten komponen obat pahit utama ditentukan olehkromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), dan isi setiap kategori utama zat pahit ditentukan oleh spektrofotometri yang terlihat UV. Tingkat kepahitan dievaluasi oleh lidah elektronik, dan komponen pahit ditemukan dalam kombinasi dengan kemometrik; Dan teknologi farmakologi jaringan digunakan untuk melakukan jalur KEGG dan analisis pengayaan GO tentang target zat pahit dalam pengobatan tradisional Tiongkok, dan target zat pahit berkorelasi dengan target kemanjuran pahit mereka, sehingga dapat mengeksplorasi hubungan antara zat pahit dan kemanjuran pahit dalam pengobatan tradisional Tiongkok. Gagasan penelitian ditunjukkan pada Gambar 1. Penelitian ini memanfaatkan sepenuhnya metode penelitian teknologi modern untuk mengeksplorasi informasi rasa Cistanche deserticola, mengungkapkan dasar material yang pahit dan hubungan efek-efek. Diharapkan untuk memberikan referensi untuk analisis ilmiah dasar material rasa obat tradisional Tiongkok, dan memberikan dasar untuk perkembangan mendalam dan tepat dan pemanfaatan sumber daya cistanche deserticola, membuat lima rasa rasa yang lebih jelas, dan rujukan yang distandarisasi secara ilmiah tentang hal-hal yang dieksekasikan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan, dan memberikan rujukan secara ilmiah tentang teori kepahitan dan rujukan. pengobatan tradisional Cina.
Gbr. 1 Rute studi tentang hubungan antara zat presentasi pahit dan kemanjuran pahit ekstrak Cistanche deserticola
1 bahan
1.1 Bahan Obat
Sampel cistanche deserticola segar dikumpulkan di Aksu, Xinjiang dari April hingga Desember 2023. Sampel diidentifikasi oleh Li Mingjie, seorang apoteker di Rumah Sakit Rakyat Wilayah Shaya, seperti yang berasal dari kumpulan keluarga Cistanche, sebuah tanaman dari genus Cistanche di dalam keluarga or orranche. Spesimen voucher disimpan di Laboratorium Penelitian Farmasi Universitas Kedokteran Xinjiang. Sampel dibersihkan dari kotoran, diiris segar dan pucat dalam air selama 5 menit sesuai dengan literatur, dan kemudian diproses, dikeringkan pada 60 derajat, dihancurkan, dan disaring melalui saringan mesh 40-, lihat Tabel 1.
Tabel Sampel Informasi Cistanche Deserticola
| TIDAK. | Kode | Waktu pengumpulan | Pretreatment sebelum pengeringan | Situs Deteksi |
|---|---|---|---|---|
| 1 | M1 | 2023-04-10 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 2 | M2 | 2023-05-08 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 3 | M3 | 2023-06-15 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 4 | M4 | 2023-07-10 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 5 | M5 | 2023-08-11 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 6 | M6 | 2023-09-10 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 7 | M7 | 2023-10-09 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 8 | M8 | 2023-11-14 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 9 | M9 | 2023-12-10 | Irisan Tanaman Utuh | Seluruh tanaman |
| 10 | P1 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Epidermis Atas |
| 11 | P2 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Korteks atas |
| 12 | P3 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Empulur atas |
| 13 | P4 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Epidermis Tengah |
| 14 | P5 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Korteks Tengah |
| 15 | P6 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Empulur tengah |
| 16 | P7 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Epidermis yang lebih rendah |
| 17 | P8 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Korteks bawah |
| 18 | P9 | 2023-08-11 | Bagian - Irisan tertentu | Empulur lebih rendah |
1.2 Database dan Perangkat Lunak
TCMSP (https://tcmspw.com/tcmsp.php), Genecards (https://www.genecards.org), omim (https://www.omim.org), uniprot (https:/www.uniprot.org), uniprot (https:/www.uniprot), uniprot (https:/www.uniprot), uniprot), https:/www.uniprot), https), https:/www.uniprot), https), https:/www.uniprot), https), https:/uniprot), https), https), https), https), https), https), htts (http://www.rcsb.org), string (https://string-db.org), pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), David (https://david.ncifcrf.gov/), https://david.ncifcrf.gov/),), https://david.ncifcrf.gov/),)), https (https://alphafold.ebi.ac.uk/), alphafold2 dan autodockvina (https://alphafold.ebi.ac.uk/) digunakan untuk docking molekuler. IBM SPSS Statistis 25 digunakan untuk analisis Pearson. Perangkat Lunak: Analisis Asosiasi Abu-abu dilakukan dengan menggunakan situs web online SPSSPRO (https://www.spsspro.com), analisis diskriminan kuadrat parsial ortogonal (OPLS-DA) dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak SIMCA14.1, dan analisis farmakologi jaringan dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak siklus.
1.3 Instrumen dan Reagen
Vanquish Kinerja Ultra-High Kinerja Cair Chromatograph, Orbitrap Exploris 120 Spektrometer Massa Resolusi Tinggi (Thermofisher Scientific, USA); SA -402 B Lidah elektronik (insen, Jepang); Lc -20 kromatografi cair berkinerja tinggi (Shimadzu, Jepang); Spektrofotometer UV-terlihat (Shanghai Yoeke Instrument Co., Ltd.); AUW2200 Neraca Elektronik (Pabrik Shimadzu Filipina); SK250 Ultrasonic Cleaner (Shanghai Kedao Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Dhg -9246 oven pengeringan suhu konstan listrik (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.); Instrumen Air Ultrapure Plusel+Chorusl (Veolia, Prancis).
The reference substances echinacoside (purity Greater than or equal to 98%, batch number PCL-#-A003), verbascoside (purity Greater than or equal to 98%, batch number PCL-#-M235), tubuloside A (purity Greater than or equal to 99%, batch number PCL-#-T003), scutellarin (purity Greater than or equal to 99%, batch number PCL-#-D005), dan isovalascoside (kemurnian lebih besar dari atau sama dengan 98%, nomor batch PCL-#-I236) dibeli dari Sichuan Puxi'ao Standard Material Technology Co., Ltd.; Zat referensi geniposide (kemurnian lebih besar dari atau sama dengan 98%, jumlah batch WP23120502), rutin (kemurnian lebih dari atau sama dengan 98%, jumlah batch WP32110405), asam galat (puritas lebih besar dari atau sama dengan 98%, bilangan batch wp32140706), dan taruhan tifitas atau tifitas 98%dari 98%dari wp321406), dan tifitas 98%dari 98%dari 98%lebih besar dari 98%lebih besar dari 98%lebih besar WP33654874) dibeli dari Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.; Garam Reinstein, glukosa anhidrat (tingkat analitik), asetonitril, metanol (tingkat kromatografi), dan asam fosfat dibeli dari Sinopharm Chemical Reagen Co., Ltd.
