Trombomodulin Diregulasi di Ginjal Wanita Dengan Preeklamsia

{0}}

Trombomodulin glikoprotein endotel mengatur koagulasi, inflamasi vaskular, dan apoptosis. Dalamginjal, trombomodulin melindungi penghalang filtrasi glomerulus dengan memunculkan crosstalk antara endotel glomerulus dan podosit. Beberapa patologi glomerulus ditandai dengan hilangnya trombomodulin glomerulus. Pada wanita dengan preeklamsia, kadar serum trombomodulin terlarut meningkat, mungkin mencerminkan hilangnya endotel glomerulus. Kami berangkat untuk menyelidiki apakah ekspresi trombomodulin menurun pada ginjal wanita dengan pre-eklampsia dan tikus yang terpapar inhibitor angiogenesis. Ekspresi trombomodulin diperiksa menggunakan imunohistokimia dan qPCR diginjaljaringan otopsi dikumpulkan dari 11 wanita preeklampsia, 22 kontrol hamil, dan 11 wanita hipertensi tidak hamil. Lebih jauh,ginjaldari tikus diobati dengan peningkatan dosis sunitinib atau sunitinib dalam kombinasi dengan antagonis reseptor endotelin dipelajari. Kadar protein trombomodulin glomerulus meningkat padaginjaldari wanita dengan pre-eklampsia. Secara paralel, pada tikus yang terpapar sunitinib, trombomodulin glomerulus diregulasi dengan cara yang bergantung pada dosis, dan peningkatan regulasi trombomodulin glomerulus mendahului timbulnya perubahan histopatologis. Blokade ETAR selektif, tetapi bukan blokade ETA/BR ganda, menormalkan peningkatan ekspresi trombomodulin dan albuminuria yang diinduksi sunitinib. Kami mengusulkan bahwa ekspresi trombomodulin glomerulus meningkat pada tahap awalkerusakan ginjaldiinduksi oleh kondisi antiangiogenik. Peningkatan regulasi protein nefroprotektif ini dalam sel endotel glomerulus mungkin berfungsi sebagai mekanisme untuk melindungi penghalang filtrasi glomerulus pada preeklamsia.

Kata kunci;gagal ginjal; ginjal; kerusakan ginjal; Disfungsi ginjal; jaringan ginjal; ginjal

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN GAGAL GINJAL/GINJAL

Pre-eklampsia mempengaruhi 3-5 persen wanita hamil dan merupakan penyebab penting morbiditas dan mortalitas ibu dan bayi1. Pre-eklampsia ditandai dengan disfungsi plasenta dan produksi plasenta dari beberapa faktor antiangiogenik dan pro-inflamasi (misalnya Flt{6}} terlarut, endoglin terlarut, dan TNF-alfa), yang berkontribusi terhadap disfungsi endotel sistemik, peningkatan resistensi vaskular. , dan komplikasi pada beberapa organ2. Ituginjalsering terkena pada wanita dengan preeklamsia, dengan gejala mulai dari proteinuria ringan hingga proteinuria kisaran nefrotik dangagal ginjalpada stadium lanjut penyakit3. Perubahan patologis padaginjalwanita dengan preeklamsia ditandai dengan endotelin, penipisan prosesus kaki podosit, dan kehilangan podosit4,5. Apa yang mendorong perubahan patologis ini tidak sepenuhnya dipahami.Disfungsi ginjalpada preeklamsia kemungkinan disebabkan oleh gangguan jalur sinyal yang terlibat dalam mempertahankan penghalang filtrasi glomerulus6. Misalnya, peningkatan kadar Flt larut faktor antiangiogenik-1 menyebabkan gangguan pensinyalan VEGF di glomerulus, yang mengakibatkan gangguan penghalang filtrasi glomerulus, proteinuria, dan endoteliosis glomerulus7,8. Sesuai dengan itu, obat-obatan yang menghambat sinyal angiogenik seperti sunitinib dikaitkan dengan efek samping yang menyerupai pre-eklampsia.ginjalfenotipe9. Mediator penting lain dari hipertensi dancedera ginjalpada preeklamsia dan penghambatan VEGF adalah sistem endotelin10. Endotelin adalah vasokonstriktor kuat yang diproduksi oleh sel endotel yang memberi sinyal melalui tipe endotelin

Sebuah reseptor (ETAR) pada sel otot polos pembuluh darah, mengakibatkan vasokonstriksi11. Sebaliknya, sinyal endotelin melalui reseptor tipe B endotelin (ETBR) menghasilkan produksi oksida nitrat dan prostasiklin yang mendorong vasodilatasi11,12. Blokade ETR, dan antagonisme ETAR selektif khususnya, secara efektif mengurangi tekanan darah dan proteinuria pada model hewan pengerat pre-eklampsia dan penghambatan VEGF13. Demikian pula, kami baru-baru ini menunjukkan bahwa blokade ETAR selektif menyelamatkanginjalfenotipe tikus yang terpapar penghambatan VEGF14. Trombomodulin adalah glikoprotein transmembran yang diekspresikan terutama oleh sel endotel dan merupakan komponen glikokaliks permukaan endotel15. Trombomodulin mempertahankan homeostasis vaskular dengan mengatur koagulasi, inflamasi, dan apoptosis15,16. Pada wanita dengan pre-eklampsia, peningkatan kadar serum trombomodulin terlarut telah dilaporkan17, yang kemungkinan mencerminkan peningkatan pembelahan ektodomain trombomodulin dari endotel18. Trombomodulin memainkan peran penting dalam pemeliharaan penghalang filtrasi glomerulus pada tikus diabetes: sinyal trombomodulin yang terganggu menyebabkan peningkatan apoptosis sel endotel glomerulus dan podosit dan peningkatan aktivasi komplemen glomerulus, menghasilkan proteinuria dan glomerulosklerosis yang diperburuk19,20. Jadi, trombomodulin memiliki efek sitoprotektif penting pada penghalang filtrasi glomerulus, dan gangguan sinyal trombomodulin mungkin terlibat dalampenyakit ginjalpada preeklamsia. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki apakah ekspresi trombomodulin menurun padaginjalwanita dengan pre-eklampsia dan pada model tikus dengan penghambatan VEGF. Selanjutnya, kami menyelidiki peran sistem endotelin pada ekspresi trombomodulin ginjal pada model tikus ini dengan menggunakan antagonis ETAR selektif dan antagonis ETA/BR ganda.

Metode

Materi pasien. Kohort otopsi ginjal yang digunakan dalam penelitian ini telah dijelaskan sebelumnya (lihat:21). Singkatnya, pencarian nasional dari Dutch Pathology Registry (PALGA) dilakukan untuk mengumpulkanjaringan ginjaldari pasien yang sedang hamil dan dikonfirmasi kasus pre-eklampsia. Selain itu, dua kelompok kontrol dimasukkan: (1) wanita hamil tanpa gangguan hipertensi sebelum atau selama kehamilan dan (2) wanita muda tidak hamil dengan riwayat medis hipertensi kronis. Data patologi dihubungkan dengan catatan National Maternal Mortality Committee dari Dutch Society of Obstetrics. Pre-eklampsia didefinisikan berdasarkan kriteria diagnostik Masyarakat Internasional untuk Studi Hipertensi dalam Kehamilan (ISSHP)22. Tertanam parafinginjalsampel dari 11 wanita dengan pre-eklampsia, 22 kontrol hamil normotensif, dan 11 kontrol hipertensi tidak hamil tersedia untuk penelitian ini. Semua sampel otopsi diberi kode dan kemudian ditangani dan dianalisis secara anonim sesuai dengan pedoman etika nasional Belanda (Kode untuk Penggunaan Jaringan Manusia Sekunder yang Tepat, Federasi Masyarakat Ilmiah Medis Belanda). Penelitian ini telah disetujui oleh Komite Etika Medis Pusat Medis Universitas Leiden (nomor lisensi P12.107).

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN FUNGSI GINJAL/GINjal

Tikus. Eksperimen dilakukan sesuai dengan pedoman dari Directive 2010/63/EU Parlemen Eropa dan Undang-Undang Eksperimen Hewan Belanda, setelah mendapat persetujuan dari Komite Etika Hewan Pusat Medis Eras mus (nomor lisensi 118-16-01). Tikus Wistar Kyoto jantan (WKY, 280-300 g) diperoleh pada usia 10 minggu. Hewan-hewan ditempatkan di ruang percobaan dengan suhu dipertahankan pada 21-22 derajat dan siklus terang / gelap 12-h. Hewan memiliki akses ke chow tikus laboratorium standar dan air ad libitum. Dua eksperimen berbeda digunakan dalam penelitian ini, dengan metode terperinci dan fenotipe hewan-hewan ini diterbitkan sebelumnya14,23. Singkatnya, tikus diobati dengan dosis sunitinib yang berbeda dengan atau tanpa antagonis ETR selama 8 hari. Tekanan darah aorta diukur menggunakan radiotelemetri. Sebelum dan sesudah pemberian perlakuan, tikus ditempatkan dalam kandang metabolik selama 48 jam. Hari pertama digunakan untuk aklimatisasi dan hari kedua untuk pengambilan sampel urin 24-jam. Dalam studi pertama, tikus secara acak ditugaskan untuk menerima dosis rendah, menengah atau tinggi sunitinib (7, 14 atau 26,7 mg/kg/hari po sunitinib-L-malat (Sutent, Pfizer), masing-masing) atau kendaraan selama 8 hari. . Pada akhir percobaan, tikus di-eutanasia dengan 60 mg/kg pentobarbital intraperitoneal dan ekssanguinasi melalui tusukan vena perut23. Dalam studi kedua, tikus diberikan kendaraan atau dosis menengah sunitinib (14 mg/kg/hari po) sendiri atau dalam kombinasi dengan macitentan (antagonis ETA/BR ganda, 100 mg/kg/hari po) atau sitaxentan (ETAR selektif). antagonis, 30 atau 100 mg/kg/hari po). Pada akhir percobaan, tikus di-eutanasia melalui overdosis anestesi Forane (isoflurane) dan ekssanguinasi melalui tusukan vena perut14. Dalam kedua studi, setelah eutanasia,ginjaldengan cepat dipotong untuk analisis selanjutnya.

Histologi ginjal.Bagian ginjal dievaluasi secara buta oleh ahli patologi untuk ada tidaknya pembengkakan sel endotel, pembengkakan sel epitel, iskemia, dan protein intra-epitel. Untuk mikroskop elektron dua glomeruli diperiksa, keberadaan endotelin glomerulus dan morfologi podosit dipelajari. Temuan histopatologis pada subjek manusia dan hewan yang terpapar dengan konsentrasi sunitinib yang berbeda telah diterbitkan sebelumnya21,23.

Imunohistokimia.Bagian ginjal dideparafinisasi. Pengambilan antigen yang diinduksi panas dilakukan dengan menggunakan buffer sitrat (antibodi trombomodulin anti-manusia) atau Tris/EDTA (antibodi anti-tikus trombomodulin dan anti-ETAR). Peroksidase diblokir dalam larutan hidrogen peroksida selama 20 menit.Ginjalsampel diinkubasi dengan trombomodulin anti-manusia monoklonal tikus (1:200, Leica Biosystems, Danvers), trombomodulin anti-tikus/tikus monoklonal kelinci (1:2000, Abcam) atau kelinci poliklonal anti-ETAR (1:700, Invitrogen, Carlsbad) antibodi selama satu jam pada suhu kamar. Pengikatan antibodi primer divisualisasikan dengan anti-tikus berlabel peroksidase atau polimer anti-kelinci berlabel (Dako, Denmark) dan diaminobenzidine sebagai kromogen.

Analisis pewarnaan.Pewarnaan trombomodulin dan ETAR dinilai oleh dua pengamat independen yang dibutakan sehubungan dengan diagnosis dan pengobatan klinis (CCLA dan MB). Dua puluh lima glomeruli yang dipilih secara acak per sampel diberi skor menggunakan skala semi-kuantitatif sebagai berikut: 0, tidak ada; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 persen pewarnaan glomerulus. Contoh representatif dari skor yang berbeda ditunjukkan pada Gambar Tambahan S1, S2, S3. Kesepakatan antarpengamat minimal cukup dalam semua percobaan penilaian (κ Lebih besar dari atau sama dengan 0,5). Ketika pengamat menilai glomeruli secara berbeda, konsensus diperoleh.

qPCR.PCR kuantitatif dilakukan untuk mengukur ekspresi mRNA dari trombomodulin dan ET AR. RNA diisolasi dengan reagen TRIzol (Life Technologies, San Francisco, CA, USA). Sintesis cDNA dilakukan dengan AMV reverse transcriptase (Roche, Basel, Swiss), dan PCR kuantitatif SYBR Green dilakukan sesuai dengan protokol pabrikan (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, USA). Urutan primer dijelaskan dalam Tabel Tambahan S1. Ekspresi diukur dengan metode siklus ambang batas komparatif dan dinormalisasi menjadi ekspresi hipoksantin fosforibosiltransferase. Analisis kurva leleh dilakukan untuk memverifikasi spesifisitas aplikasi.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN GINJAL / RENAL DIALYSIS

Analisis statistik.Variasi antar pengamat ditentukan dengan menggunakan statistik kappa. Data kontinu yang terdistribusi normal dianalisis menggunakan ANOVA satu arah diikuti oleh uji post-hoc perbedaan paling signifikan untuk perbandingan kelompok berpasangan yang direncanakan. Untuk menganalisis perbedaan skor ekspresi trombomodulin glomerulus antara kelompok dalam kohort otopsi, regresi logistik ordinal untuk data cluster dengan persamaan estimasi umum (GEE) digunakan. Untuk menganalisis korelasi yang diduga antara ekspresi trombomodulin dan temuan histopatologi atau klinis, digunakan korelasi Pearson. Bentuk kurva respon trombomodulin dan ET AR pada rentang dosis sunitinib diperiksa dengan menggunakan garis regresi. p<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">

Hasil Trombomodulin glomerulus meningkat pada ginjal wanita dengan preeklamsia. Pewarnaan trombomodulin dianalisis dalam sampel ginjal dari 11 wanita dengan pre-eklampsia,22 kontrol hamil normotensif, dan 11 kontrol hipertensi tidak hamil. Kontrol hipertensi lebih tua daripada wanita dari 2 kelompok studi lainnya; dibandingkan dengan kontrol hamil, wanita pra-eklampsia memiliki kehamilan yang lebih lama dan tekanan darah yang lebih tinggi (Tabel Tambahan S2). Terlepas dari keberadaan trombomodulin di glomerulus, trombomodulin hadir di kapiler peritubular di semua sampel yang diteliti (Gambar Tambahan S1). Di glomeruli, ekspresi trombomodulin tampaknya berasal dari kutub vaskular (Gbr. 1A). Rata-rata, ekspresi trombomodulin glomerulus lebih tinggi pada pasien pra-eklampsia dibandingkan dengan kontrol hamil dan hipertensi (Gbr. 1); dibandingkan dengan pre-eklampsia, kontrol memiliki skor ekspresi trombomodulin glomerulus yang lebih rendah (kontrol hamil, OR: 3.0; 95 persen -CI: (1.1, 7.8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>

Ekspresi trombomodulin glomerulus pada tikus yang terpapar sunitinib.Untuk lebih memahami temuan kami di pra-eklampsiaginjal,pewarnaan trombomodulin glomerulus dipelajari pada tikus yang terpapar dengan peningkatan dosis inhibitor reseptor VEGF sunitinib. Pemberian sunitinib mengakibatkan peningkatan tekanan darah dan proteinuria dengan cara yang bergantung pada dosis23. Tikus yang terpapar sunitinib dosis rendah tidak memiliki anomali histopatologi; endotelin diamati diginjaltikus yang terpapar sunitinib dosis menengah dan tinggi; deposit fibrin hanya terlihat di kapiler glomerulus hewan yang terpapar sunitinib23 dosis tinggi. Tak satu pun dari skor glomeruli pada tikus yang negatif untuk trombomodulin. Protein trombomodulin glomerulus meningkat pada ginjal tikus yang terpapar sunitinib dosis rendah dan menengah (p < 0.05,="" gambar="" 2a),="" tetapi="" tidak="" pada="" tikus="" yang="" terpapar="" dosis="" tertinggi="" sunitinib.="" untuk="" mendukung="" temuan="" ini,="" model="" regresi="" menunjukkan="" bahwa="" kadar="" protein="" trombomodulin="" glomerulus="" berhubungan="" non-linier="" dengan="" dosis="" sunitinib="" sebagai="" hubungan="" kuadratik="" yang="" signifikan="" secara="" statistik="" (gbr.="" 2b,="" y="2.829" plus="" 0.="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the=""  etar,="" which="" mediates="">kerusakan ginjaldiinduksi oleh penghambatan VEGF. Pada tikus yang diobati dengan sunitinib dosis rendah dan menengah, tetapi tidak pada tikus yang diobati dengan sunitinib dosis tinggi, pewarnaan ETAR glomerulus meningkat dibandingkan dengan tikus kontrol (p < {{0}}.0="" 1,="" gambar="" 2c).="" sejalan="" dengan="" kadar="" trombomodulin,="" kadar="" etar="" glomerulus="" secara="" kuadrat="" terkait="" dengan="" dosis="" sunitinib="" (y="0.642" ditambah="" 0,087x−0,003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>

Pengobatan dengan sitaxentan penghambat ETAR menormalkan ekspresi trombomodulin.Untuk mempelajari apakah ekspresi trombomodulin diatur oleh pensinyalan endotelin, tikus yang terpapar sunitinib dosis menengah diobati dengan agen penghambat ETR. Pengobatan dengan antagonis ETAR selektif (sitaxentan) menormalkan tekanan darah dan albuminuria pada tikus yang diobati dengan sunitinib14 (Gambar Tambahan S4). Sebaliknya, pengobatan dengan antagonis ETA/BR ganda (macitentan) menghasilkan normalisasi tekanan darah tetapi tidak pada normalisasi albuminuria yang diinduksi sunitinib14 (Gambar Tambahan S4).

Ekspresi mRNA trombomodulin meningkat pada ginjal tikus yang terpapar sunitinib dibandingkan dengan kontrol (Gbr. 3A, p<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,=""  thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">

Diskusi

Di sini, kami menunjukkan bahwa trombomodulin protein nefroprotektif meningkat padaginjalglomerulus pada wanita dengan preeklamsia. Selanjutnya, kami menunjukkan bahwa pada tikus yang terpapar inhibitor angiogenesis sunitinib, trombomodulin glomerulus diregulasi dengan cara yang bergantung pada dosis, dan peningkatan trombomodulin glomerulus mendahului timbulnya manifestasi histopatologis. Akhirnya, kami menunjukkan bahwa memblokir ETAR menormalkan peningkatan regulasi trombomodulin glomerulus yang diinduksi sunitinib. Temuan kami menunjukkan bahwa peningkatan regulasi trombomodulin endotel glomerulus terjadi pada tahap awal pra-eklampsia.kerusakan ginjaldan berfungsi sebagai mekanisme untuk melindungi penghalang filtrasi glomerulus. Penelitian kami adalah yang pertama melaporkan peningkatan ekspresi trombomodulin glomerulus pada preeklamsia. Karena kami sebelumnya menemukan bahwa pada plasenta wanita dengan pre-eklampsia, trombomodulin mengalami penurunan regulasi24,

peningkatan kadar serum ektodomain trombomodulin terlarut pada pasien preeklamsia17 mungkin berasal dari endotel glomerulus. Selanjutnya, kami menemukan hubungan terbalik antara ekspresi trombomodulin glomerulus dan keberadaan endotelin glomerulus, menunjukkan bahwa peningkatan regulasi trombomodulin berfungsi sebagai mekanisme perlindungan glomerulus. Gagasan ini didukung oleh bukti praklinis pada tikus diabetes, di mana trombomodulin secara kritis mempertahankan kelangsungan hidup sel glomerulus dan menekan aktivasi komplemen glomerulus19,20. Berbeda dengan temuan kami bahwa keadaan antiangiogenik meningkatkan kadar trombomodulin glomerulus, penelitian sebelumnya menemukan bahwa pengobatan sFlt-1 mengurangi ekspresi trombomodulin glomerulus pada tikus dengan glomerulonefritis bulan sabit25. Hara et al.25 tidak mempelajari efek sFlt-1 pada trombomodulin glomerulus pada tikus sehat. Oleh karena itu, meskipun peningkatan kadar faktor inflamasi juga ditemukan pada preeklamsia, penurunan regulasi trombomodulin glomerulus dalam penelitian ini dapat dijelaskan oleh inflamasi glomerulus derajat tinggi yang terdapat pada glomerulonefritis (sitokin proinflamasi, aktivasi komplemen), yang sangat menekan ekspresi trombomodulin26 .

Untuk menjelaskan apakah pada pre-eklampsia, trombomodulin glomerulus diregulasi sebagai akibat dari penghambatan reseptor VEGF sistemik, kami mempelajari ekspresi trombomodulin pada tikus yang terpapar sunitinib. Sunitinib tergantung dosis meningkatkan trombomodulin glomerulus pada dosis rendah dan menengah, tetapi tidak pada dosis tertinggi. Karena perubahan histologis tidak terlihat pada ginjal tikus yang terpapar sunitinib23 dosis rendah, peningkatan ekspresi trombomodulin glomerulus mendahului timbulnya kerusakan histopatologis glomerulus yang disebabkan oleh sunitinib. Pada tikus yang terpapar sunitinib dosis menengah, tingkat ekspresi tertinggi dari trombomodulin glomerulus diamati, dan ini secara langsung terkait dengan jumlah albuminuria. Fenotip histopatologi ginjal dari kasus preeklamsia manusia kami sebanding dengan kerusakan ginjal tikus yang diobati dengan sunitinib dosis menengah: endotelin diamati pada 6 dari 11 preeklamsia

kasus dan mikrotrombi diamati pada 1 dari 11 kasus pre-eklampsia21, sedangkan pada model tikus, tikus yang diberi dosis menengah memiliki endotelin dan tikus yang diobati dengan dosis tertinggi memiliki endotelin yang dikombinasikan dengan deposit fibrin23. Kami mengusulkan bahwa ekspresi trombomodulin glomerulus meningkat pada tahap awal pre-eklampsia dan penghambatan angiogenik, sebagai mekanisme pelindung untuk mengimbangi stres antiangiogenik pada penghalang filtrasi glomerulus. Sebaliknya, pada tikus yang diobati dengan dosis tertinggi, ekspresi trombomodulin berkurang ke tingkat kontrol. Sebuah studi baru-baru ini menemukan bahwa dimensi lapisan glikokaliks endotel berkurang pada wanita dengan pre-eklampsia onset dini yang parah27. Oleh karena itu, kami juga mengusulkan bahwa pada tikus yang diobati dengan sunitinib dosis tinggi, glikokaliks endotel terpengaruh, yang memunculkan interaksi antara trombomodulin dan enzim, sehingga berkontribusi pada pembelahan proteolitik dan hilangnya protein trombomodulin glomerulus. Dalam kasus pre-eklampsia kami, peningkatan kadar trombomodulin glomerulus dikaitkan dengan berkurangnya endotel glomerulus, lesi yang secara langsung disebabkan oleh gangguan sinyal VEGF glomerulus. Studi in vitro telah mengidentifikasi VEGF sebagai faktor penginduksi yang kuat dari ekspresi trombomodulin dalam sel endotel28. Oleh karena itu, peningkatan regulasi trombomodulin ginjal dalam kondisi antiangiogenik seperti preeklamsia dan penghambatan angiogenik mungkin tampak berlawanan dengan intuisi. Menariknya, satu penelitian menunjukkan bahwa VEGF meningkat di glomeruli wanita dengan pre-eklampsia29, kemungkinan mencerminkan mekanisme kompensasi glomerulus dalam upaya untuk mengimbangi bioavailabilitas VEGF yang berkurang. Dengan demikian, peningkatan regulasi trombomodulin dapat disebabkan oleh peningkatan kompensasi VEGF glomerulus dalam kondisi antiangiogenik sistemik. Selanjutnya, pensinyalan endotelin mungkin terlibat dalam regulasi trombomodulin glomerulus. Kadar endotelin plasma meningkat pada wanita dengan pre-eklampsia30 dan berhubungan dengan kadar sFlt-1 sistemik31,32. Dalam model tikus kami, kedua perawatan dengan sitaxentan (antagonis ETAR) dan macitentan (antagonis ETA / BR ganda) menghasilkan normalisasi hipertensi yang diinduksi sunitinib pada tikus kami14. Namun, hanya pengobatan dengan sitaxentan (antagonis ETAR) yang menormalkan peningkatan regulasi trombomodulin ginjal yang diinduksi sunitinib dan menurunkan albuminuria. Ini menunjukkan bahwa regulasi ekspresi trombomodulin ginjal tidak tergantung pada kerusakan endotel yang dimediasi hipertensi, yang juga didukung oleh kurangnya peningkatan ekspresi trombomodulin pada pasien kontrol hipertensi kami. Masih harus diselidiki apakah ETAR menginduksi ekspresi trombomodulin melalui efek sistemik atau melalui pensinyalan dalam sel endotel glomerulus secara khusus. Menariknya, ekspresi trombomodulin hanya dinormalisasi pada tingkat mRNA setelah blokade ETAR pada tikus yang diobati dengan sunitinib, tetapi tidak pada tingkat protein. Perbedaan ini dapat dijelaskan oleh efek pasca-translasi, waktu paruh protein, dan faktor-faktor yang mempengaruhi pembelahan trombomodulin dari endotelium.

Trombomodulin memiliki sifat anti-inflamasi yang penting, yang mencakup penghambatan infiltrasi leukosit dengan mengasingkan molekul proinflamasi seperti antigen Lewis y dan HMGB-133,34, menurunkan aktivitas NF-κB35 dan menghambat aktivasi komplemen20. Sebelumnya, kami melaporkan bahwa dalam kasus pre-eklampsia kami, aktivasi komplemen glomerulus meningkat dibandingkan dengan kontrol hamil dan hipertensi36. Hal ini menunjukkan bahwa peningkatan regulasi trombomodulin endotel glomerulus pada preeklamsia berfungsi sebagai mekanisme anti inflamasi dan anti komplemen. Selain efek anti-peradangannya yang terkenal, sebuah penelitian baru-baru ini menemukan bahwa trombomodulin memiliki sifat proinflamasi; trombomodulin mengikat integrin leukosit LFA-1 dan Mac1, sehingga mendorong adhesi leukosit ke endotel secara in vitro37. Oleh karena itu, peningkatan trombomodulin glomerulus juga dapat secara langsung berkontribusi pada peradangan dan kerusakan glomerulus. Kita harus mengakui keterbatasan penelitian kita. Pertama, wanita dengan pre-eklampsia yang kami selidiki ekspresi trombomodulin glomerulus semuanya meninggal karena konsekuensi dari pre-eklampsia. Hal ini membuat para wanita ini menjadi subkelompok khusus pasien pre-eklampsia dan oleh karena itu hasil penelitian ini mungkin tidak berlaku untuk semua wanita yang mengalami pre-eklampsia. Kedua, tikus jantan yang diobati dengan sunitinib digunakan sebagai model untuk mempelajari regulasi trombomodulin dalam kondisi antiangiogenik. Selain itu, sunitinib menyebabkan penghambatan beragam reseptor tirosin kinase dan bukan merupakan penghambat spesifik VEGF. Jelas, model ini tidak sepenuhnya meniru pre-eklampsia, namun, pengobatan sunitinib menyebabkan hipertensi dan proteinuria23. Oleh karena itu, kami dapat menggunakan model ini untuk mempelajari regulasi trombomodulin dalam kondisi antiangiogenik. Terlepas dari keterbatasan penelitian kami, penelitian ini mengedepankan wawasan menarik tentang mekanisme kerusakan ginjal pada preeklamsia. Kesimpulannya, ekspresi trombomodulin ginjal meningkat pada preeklamsia dan pada model penghambatan angiogenik yang diinduksi oleh sunitinib. Kami berspekulasi bahwa peningkatan kadar trombomodulin glomerulus mencerminkan mekanisme reno-protektif sebagai respons terhadap stres antiangiogenik pada penghalang filtrasi glomerulus. Selanjutnya, pengobatan dengan antagonis ETAR menormalkan ekspresi mRNA trombomodulin ginjal bersamaan dengan pengurangan proteinuria pada tikus yang diobati dengan sunitinib. Penelitian lebih lanjut diperlukan pada peran trombomodulin dalam penghalang filtrasi glomerulus.