Pengaruh Terapi Cistanoside A Terhadap Metabolisme Tulang Mencit yang Diovariektomi

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Abstrak

Cistanoside A (Cis A), adalah glikosida fenilethanoid aktif yang diisolasi dariCistanche deserticola YC Matelah mendapat perhatian kami karena kemungkinan perannya dalam pengobatanosteoporosis. Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi efek Cis A pada model tikus yang diovariektomi (OVX) dan menyelidiki mekanisme aksi molekuler yang mendasarinya. Setelah 12 minggu intervensi yang diberikan secara oral, Cis A (20, 40, dan 80 mg/kg berat badan/hari) menunjukkan efek antiosteoporosis yang signifikan pada tikus OVX, dibuktikan dengan peningkatan kekuatan tulang, kepadatan mineral tulang, dan peningkatan mikroarsitektur tulang trabekular. Sementara itu, aktivitas penanda resorpsi tulang, termasuk tartrat-resistant acid phosphatase (TRAP), deoxypyridinoline (DPD), dan cathepsin K, menurun, dan bioaktivitas penanda pembentukan tulang alkaline phosphatase (ALP) meningkat. Secara mekanis, Cis A menghambat ekspresi TNF-reseptor terkait faktor 6 (TRAF6), sebuah molekul hulu yang dimiliki oleh kedua faktor inti kappa light chain enhancer sel B teraktivasi (NF-κB) dan phosphatidylinositol 3-kinase ( PI3K)/Akt dan selanjutnya menekan level reseptor activator dari nuclear factor kappaB ligand (RANKL), menurunkan regulasi ekspresi NF-κB dan upregulated osteoprotegerin (OPG), PI3K dan Akt, yang berarti Cis A memiliki aktivitas antiosteoporosis pada mencit yang diovariektomi. melalui TRAF6-inaktivasi NF-kappaB yang dimediasi dan aktivasi PI3K/Akt. Secara keseluruhan, kami menyajikan temuan baru bahwa Cis A, dengan menurunkan regulasi TRAF6, mengoordinasikan penghambatan NF-κB dan stimulasi jalur PI3K/Akt untuk mendorong pembentukan tulang dan mencegah resorpsi tulang. Data ini menunjukkan potensi Cis A sebagai agen yang menjanjikan untuk pengobatanosteoporosispenyakit.

Kata kunci: cistanosida A; tikus ovariektomi; antiosteoporosis; TRAF6; RANKL

pengantar

Osteoporosis, "pembunuh diam-diam" kerangka sistemik, telah menjadi bahaya kesehatan utama yang menimpa lebih dari 2000 juta orang di seluruh dunia dalam beberapa tahun terakhir [1]. Hal ini ditandai dengan kepadatan massa tulang (BMD) yang rendah dan kerusakan mikro-arsitektur, yang berasal dari kelebihan resorpsi tulang di atas pembentukan tulang dan, akhirnya, mengakibatkan fraktur osteoporosis [2,3]. Saat ini, identifikasi agen untuk memblokir diferensiasi dan resorpsi osteoklastik adalah strategi yang umum dan berhasil untuk pengembangan obat terapeutik untukosteoporosis[4], dan memang ada banyak agen sintetis, termasuk estradiol valerat dan natrium alendronate, yang dapat mencegah dan mengobatiosteoporosis. Namun, obat untuk penyakit itu jauh dari ideal; beberapa obat ini dapat meningkatkan risiko kanker endometrium dan payudara dan juga memiliki tingkat efek samping, seperti hiperkalsemia, hiperkalsiuria, dll. [5], yang membatasi aplikasi klinisnya. Oleh karena itu, selama lebih dari satu milenium, obat-obatan tradisional Cina (TCM), terutama TCM yang dapat dimakan dengan senyawa dan fraksi bioaktif yang diisolasi, telah digunakan secara luas dan efektif di negara-negara Asia untuk mencegah dan mengobati berbagai penyakit, termasukosteoporosis[6,7].

Osteoporosisdicirikan sebagai peningkatan resorpsi tulang karena peningkatan osteoklastogenesis, dan proses ini melibatkan komitmen monosit hematopoietik ke dalam prekursor osteoklas, yang menyatu untuk membentuk osteoklas berinti banyak yang menargetkan situs tulang yang menjalani remodeling [4]. Aktivator reseptor untuk ligan faktor-κB nuklir (RANKL), faktor kunci yang disekresikan dari osteoblas, merangsang diferensiasi monosit menjadi osteoklas [8,9]. Interaksi RANKL dengan reseptornya RANK menghasilkan serangkaian kejadian intraseluler, termasuk NF-κB, PI3K/Akt, kalsium/kalmodulin-dependent kinase dengan merekrut protein sinyal adaptor TNF receptor-associated factor (TRAF6). Akibatnya, beberapa gen penanda terkait osteoklas, termasuk TRAP, cathepsin K dan DPD, diregulasi, dan proses resorpsi tulang dipercepat.

Glikosida feniletanoid dicirikan oleh asam sinamat dan gugus hidroksil fenil etil yang terikat pada -glukopiranosa (apiosa, galaktosa, rhamnosa, xilosa, dll) melalui ikatan glikosidik, yang tersebar luas pada tanaman obat [10]. Cistanoside A (Cis A) adalah glikosida fenilethanoid aktif dalamCistanche deserticola YC Ma. Menurut catatan farmakope Cina, C. deserticola secara tradisional digunakan untuk mengobati defisiensi ginjal-yin, kelemahan otot, kelemahan lumbal, dll, dan glikosida fenilethanoid adalah konstituen bioaktif utama dalam ramuan ini [11]. Berdasarkan teori 'ginjal' TCM, ginjal dapat mengatur sistem tulang, yang berarti perkembangan dan fungsi tulang bergantung pada inti ginjal, dan inti ginjal ini dapat berubah menjadi sumsum tulang untuk memberi makan tulang, mempromosikan pertumbuhan dan perbaikan kerangka dan memperkuat kerangka [12]. Karena C. deserticola dapat memperkuat ginjal, kami menduga bahwa Cis A dapat mencegah dan mengobatiosteoporosis. Oleh karena itu, penelitian ini dirancang untuk memvalidasi potensi Cis A dalam mencegahosteoporosisdengan menggunakan model tikus ovariektomi, dan penanda pembentukan dan resorpsi tulang, serta mekanisme potensial terkait, ditentukan untuk memperkirakan bioaktivitas antiosteoporosis dari agen ini.

Hasil

Pengaruh Cis A pada Pengujian Tekuk Tiga Titik Tulang

Untuk menganalisis apakah perawatan dengan Cis A membuat tulang lebih kuat, kami melakukan uji tekukan tiga titik pada tulang paha. Seperti ditunjukkan pada Gambar 1, beban maksimal yang diterapkan saat patah tulang adalah 21,5 persen dan 22,0 persen lebih tinggi pada hewan yang diobati dengan 20 mg/kg dan 80 mg/ kg Cis A, masing-masing, dibandingkan dengan hewan dalam kelompok ovariektomi (OVX) (p < 0.05).="" sementara="" itu,="" pengobatan="" dengan="" cis="" a="" juga="" meningkatkan="" kekakuan="" tulang;="" semua="" mencit="" yang="" diberi="" perlakuan="" cis="" a="" menunjukkan="" peningkatan="" kekakuan="" yang="" signifikan="" dengan="" data="" masing-masing="" 121.0="" ±="" 12,1="" (p=""><0,05), 124,1="" ±="" 16,2="" (p=""><0,05), dan="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p=""><0,01). ,="" jika="" dibandingkan="" dengan="" 102,2="" ±="" 10,7="" tikus="" ovx.="" hasilnya="" menunjukkan="" bahwa="" peningkatan="" kekuatan="" tulang="" pada="" tikus="" ovx="" yang="" diobati="" dengan="" cis="" a="" disebabkan="" oleh="" peningkatan="" jumlah="" tulang="" dan="" peningkatan="" kualitas="">

Pengaruh Cis A pada Mikroarsitektur Tulang

Mikroarsitektur tulang trabekular tiga dimensi tikus yang diukur dengan mikro-CT (Gambar 2 dan Tabel 1) secara intuitif menunjukkan bahwa tikus dalam kelompok OVX menunjukkan pengurangan yang mencolok pada area trabekular dan jumlah trabekular bila dibandingkan dengan kelompok palsu, yang menunjukkan bahwa ovariektomi dapat menyebabkan penurunan kepadatan massa tulang (BMD, 46 persen ), kandungan mineral tulang (BMC, 66 persen ), kandungan mineral jaringan (TMC, 85 persen ), fraksi volume tulang (BVF, 82 persen ), trabecular number (Tb. N, 76 persen ) dan peningkatan pemisahan trabecular (Tb. Sp, plus 80 persen ) tanpa modifikasi pada total tissue mineral density (TMD) dan ketebalan trabecular (Tb. Th) setelah operasi 12 minggu.

Namun, tikus OVX yang diobati dengan Cis A menghasilkan peningkatan BMD (ditambah 43 persen ~57 persen), BMC (ditambah 65 persen ~73 persen), TMC (ditambah 83 persen ~90 persen), BVF (ditambah 80 persen ~88 persen ), penurunan Tb lebih besar. Sp (−79 persen ~88 persen ) dan lebih ditingkatkan Tb. N ( ditambah 73 persen ~82 persen ) dibandingkan dengan kelompok OVX. TMD tampaknya tidak dipengaruhi oleh ovariektomi tetapi meningkat secara signifikan dengan pengobatan dengan estradiol valerate (EV).

Efek Cis A pada Pembentukan Tulang dan Penanda Resorpsi

Efek Cis A pada penanda resorpsi tulang, termasuk TRAP, DPD, cathepsin K dan indeks pembentukan tulang ALP dan bone Gla-protein (BGP), ditunjukkan pada Gambar 3. Setelah 12 minggu operasi ovariektomi, aktivitas TRAP, DPD , dan cathepsin K pada kelompok OVX meningkat secara signifikan, terutama DPD yang meningkat hampir 55,6 persen ; TRAP dan cathepsin K masing-masing ditingkatkan sebesar 43,5 persen dan 38,1 persen, dibandingkan dengan kelompok palsu. Cis A, diberikan secara oral selama 12 minggu, menunjukkan potensi yang menonjol dalam mencegah semua penanda resorpsi tulang yang disebutkan di atas, terutama dosis tinggi (80 mg/kg) yang menunjukkan efek signifikan dalam menekan aktivitas DPD. sebesar 45.0 persen , TRAP masing-masing sebesar 49.0 persen dan cathepsin K sebesar 44.0 persen , (p < 0.01),="" dibandingkan="" dengan="" kelompok="" ovx="" (gambar="" 3).="" meskipun="" tren="" peningkatan="" aktivitas="" alp="" dan="" bgp="" ditunjukkan="" pada="" kelompok="" ovx,="" tidak="" ada="" perubahan="" signifikan="" yang="" diamati="" secara="" statistik.="" namun,="" peningkatan="" aktivitas="" alp="" yang="" signifikan="" diamati="" pada="" kelompok="" yang="" diobati="" dengan="" cis="" a="" rendah="" dan="" tinggi="" dibandingkan="" dengan="" kelompok="" palsu="" (p=""><>

Pengaruh Cis A pada Tingkat Ekspresi Protein TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG dan RANKL

Analisis Western blot mengungkapkan bahwa dibandingkan dengan kelompok palsu, kadar protein TRAF6, NF-κB, dan RANKL dalam kelompok OVX meningkat secara signifikan (p < 0.05),="" sementara="" opg,="" pi3k,="" dan="" akt="" menurun="" secara="" signifikan="" (gambar="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" atau="" 80="" mg/kg)="" secara="" signifikan="" menurunkan="" ekspresi="" traf6="" (p="">< 0.05),="" diikuti="" oleh="" ekspresi="" rankl="" menjadi="" menurun="" dan="" opg="" meningkat,="" yang="" berarti="" rasio="" opg/rankl="" diregulasi.="" akibatnya,="" kaskade="" pensinyalan="" nf-κb="" diturunkan="" regulasi="" dan="" pi3k/akt="" diregulasi="" oleh="" pengobatan="" cis="" a="" (p=""><0,05). molekul="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" dari="" 11="" 2.1.4.="" pengaruh="" cis="" a="" pada="" tingkat="" ekspresi="" protein="" traf6,="" nf-κb="" pi3k,="" akt,="" opg,="" dan="" rankl="" analisis="" western="" blot="" mengungkapkan="" bahwa="" dibandingkan="" dengan="" kelompok="" palsu,="" tingkat="" protein="" traf6,="" nf-κb,="" dan="" rankl="" dalam="" kelompok="" ovx="" adalah="" meningkat="" secara="" signifikan="" (p=""><0,05), sedangkan="" opg,="" pi3k,="" dan="" akt="" menurun="" secara="" signifikan="" (gambar="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" atau="" 80="" mg/kg)="" secara="" signifikan="" menurunkan="" regulasi="" ekspresi="" traf6="" (p=""><0,05), diikuti="" dengan="" penurunan="" ekspresi="" rankl="" dan="" peningkatan="" opg,="" yang="" berarti="" rasio="" opg/rankl="" meningkat.="" akibatnya,="" kaskade="" pensinyalan="" nf-κb="" diturunkan="" regulasi="" dan="" pi3k/akt="" diregulasi="" oleh="" pengobatan="" cis="" a="" (p=""><>

Diskusi

Mengingat keterbatasan pilihan terapi saat ini untukosteoporosispenyakit, perlu adanya alternatif dari makanan atau tanaman obat alami yang dapat dimakan. Sebagai bagian dari upaya berkelanjutan kami untuk menemukan agen antiosteoporosis yang efektif dari TCM, kami menemukan serangkaian ekstrak, fraksi, dan senyawa yang memiliki efek sifat antiosteoporosis [13,14].Deserticola Cistancheadalah TCM klasik yang penting, yang ditemukan memiliki profil keamanan yang menguntungkan [15] dan fungsi obat yang luas untuk pengobatan defisiensi ginjal, dll. [16]. Menurut teori TCM, TCM yang memiliki efek menyegarkan ginjal biasanya digunakan untuk mengobatiosteoporosis; glikosida fenilethanoid adalah konstituen bioaktif utama dalam ramuan ini, sehingga menyiratkan bahwa glikosida fenilethanoid yang terkandung dalam C. deserticola mungkin memiliki sifat antiosteoporotic. Ekstrak C. deserticola terbukti secara signifikan dapat menghambat penurunan BMD dan mencegah kerusakan mikroarsitektur trabekular yang disebabkan oleh OVX [17]. Dalam percobaan in vitro, itu juga secara signifikan meningkatkan ALP, protein morfogenetik tulang-2, dan mRNA osteopontin, serta mineralisasi tulang dari osteoblas yang dikultur [18]. Echincoside, komponen bioaktif utama dalam C. deserticola yang secara resmi tercatat dalam farmakope Cina [11], menunjukkan aktivitas antiosteoporosis dengan dosis tinggi 30~270 mg/kg berat badan/hari [19], dan lebih lanjut hasil in vitro menunjukkan bahwa itu dapat meningkatkan regenerasi tulang dengan meningkatkan rasio OPG/RANKL dalam sel MC3T3-E1 Subclone 14 [20]. Cis A adalah salah satu glikosida fenilethanoid yang diisolasi dari C. deserticola, dan beberapa laporan mengungkapkan bahwa senyawa ini memiliki aktivitas antioksidan [21] dan sifat anti-inflamasi [22,23]. Sebuah makalah yang baru-baru ini diterbitkan menemukan bahwa Cis A menunjukkan aktivitas protektif pada CCl4 dan hepatotoksisitas yang diinduksi alkohol pada tikus, dan juga menunjukkan sifat protektif pada kerusakan yang diinduksi etanol pada hepatosit tikus kultur primer in vitro [24]. Dalam penelitian kami saat ini, hasil menunjukkan bahwa Cis A memiliki aktivitas antiosteoporosis pada dosis rendah (20~80 mg/kg berat badan/hari) dengan menggunakan model mencit yang diovariektomi, dan bioaktivitas ini dilakukan dengan menurunkan kadar TRAF6, menekan ekspresi RANKL dan NF-κB dan stimulasi OPG, PI3K, dan Akt, yang berarti efek terapeutik Cis A pada tikus OVX adalah melalui mekanisme inaktivasi NF-kappaB yang dimediasi oleh TRAF6-dan aktivasi PI3K/Akt.

Diketahui bahwa ovariektomi dapat menyebabkanosteoporosisdengan penurunan yang jelas pada BMD, kekuatan biomekanik, kualitas tulang, dan mikroarsitektur tulang trabekular, dan perubahan di atas sebagian disebabkan oleh defisiensi estrogen [25]. Sekarang, dalam percobaan in vivo saat ini, penelitian kami menunjukkan bahwa ovariektomi-inducedosteoporosismenghasilkan penurunan yang signifikan dalam kekuatan biomekanik dan parameter struktural trabekular, termasuk BMD, BMC, TMC, dan Tb. N, dan meningkatkan Tb. Sp; dan pengobatan Cis A secara signifikan meningkatkan sifat mekanik tulang termasuk beban dan kekakuan maksimum, meningkatkan BMD, dan meningkatkan sebagian besar parameter struktur mikroarsitektur trabekular tulang dibandingkan dengan tikus dalam kelompok OVX, menunjukkan bahwa Cis A efektif dalam memperbaiki kualitas tulang dan mikroarsitektur trabekular pada tikus OVX.

Selain BMD total, tes tekuk tiga titik dan pengukuran mikroarsitektur tulang trabekular dapat langsung mendiagnosisosteoporosis, penanda pembentukan tulang, termasuk ALP dan BGP, dan indeks resorpsi tulang, termasuk TRAP, DPD, dan cathepsin K, juga digunakan untuk menjelaskan mekanisme antiosteoporosis terkait Cis A. Dalam penelitian kami, aktivitas ALP pada tikus kelompok OVX menunjukkan tren peningkatan yang tidak signifikan, yang menunjukkan peningkatan laju pergantian tulang [26,27] pada pascamenopauseosteoporosis; dosis tinggi (80 mg/kg berat badan/hari) dan rendah (20 mg/kg berat badan/hari) dosis perawatan Cis A menunjukkan peningkatan yang signifikan pada aktivitas ALP dibandingkan dengan kelompok palsu, sedangkan aktivitas BGP tampaknya tidak dipengaruhi oleh ovariektomi pada semua kelompok yang diobati; TRAP, DPD dan cathepsin K meningkat secara signifikan pada kelompok OVX, dan pemberian Cis A terutama menurunkan ketiga penanda resorpsi tulang. Data di atas menyiratkan bahwa Cis A memiliki aktivitas antiosteoporosis potensial, dan efek ini diberikan oleh regulasi metabolisme tulang, termasuk menekan resorpsi tulang dan meningkatkan pembentukan tulang.

Koordinasi antara osteoblas dan osteoklas merupakan faktor penting dalam pemeliharaan integritas tulang. Osteoklas, yang mengekspresikan TRAP, menempel pada permukaan tulang melalui pembentukan zona penyegelan yang terikat aktin, di mana enzim proteolitik, seperti cathepsin K, dilepaskan, yang mengarah pada pembentukan lubang resorpsi. Modulasi osteoklastogenesis oleh sel-sel imatur dari garis keturunan osteoblastik dimediasi oleh RANKL dan OPG [28]. OPG adalah reseptor umpan yang menghambat aktivasi RANKL dari osteoklastogenesis, sehingga menurunkan resorpsi tulang. RANKL, yang memberikan sinyal penting kepada progenitor osteoklas, adalah molekul terikat membran dari keluarga ligan faktor nekrosis tumor yang mendorong pembentukan osteoklas. Rasio ekspresi OPG/RANKL diyakini menjadi parameter kunci aktivitas osteoklastogenik, dan kaskade pensinyalan yang diaktifkan oleh RANKL termasuk jalur NF-κB dan PI3K [29]. Pentingnya jalur NF-κB menuju osteoklastogenesis ditunjukkan oleh fakta bahwa penghapusan NF-κB pada tikus kecil mengakibatkan tidak adanya osteoklas dewasa [30]. TRAF6 terbukti sebagai target yang menjanjikan untuk obat anti-osteoporosis baru. Tikus-tikus yang kekurangan TRAF6-menunjukkan osteoklastogenesis yang rusak dan osteopetrosis parah dengan demikian menunjukkan pentingnya TRAF6 dalam metabolisme tulang. Bukti yang muncul menunjukkan fungsi regulasi penting untuk TRAF6 dalam kaskade pensinyalan yang dimediasi RANKL/RANK [4,31]. Data penelitian saat ini menunjukkan bahwa pengobatan Cis A pada tikus OVX mengakibatkan penurunan regulasi tingkat ekspresi protein TRAF6, penurunan RANKL, dan peningkatan ekspresi OPG dan dengan demikian mencegah aktivasi RANKL dari NF-κB hilir dan mengaktifkan jalur sinyal PI3K/Akt , menyarankan bahwa Cis A menghambat diferensiasi osteoklas melalui inaktivasi NF-kappaB yang dimediasi oleh TRAF6-dan aktivasi PI3K/Akt dan meningkatkan rasio OPG/RANKL, selanjutnya menghambat osteoklastogenesis dan mendorong pembentukan tulang.

Referensi

1. Lane, NE Epidemiologi, etiologi, dan diagnosisosteoporosis. Saya. J. Obstet. Ginekol 2006, 194 (Suppl. S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, Ambang Intervensi WD dan Diagnosis dariOsteoporosis. J. Penambang Tulang. Res. 2015, 30, 1747-1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Aktivitas antiosteoporotic dari central-icaridin (CIT) pada metabolisme tulang tikus yang diovariektomi. Molekul 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Bu, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Penghambatan Osteoklastogenesis dan Resorpsi Tulang in vitro dan in vivo oleh prenyl flavonoid xanthohumol dari hop. Sci. Rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, Estrogen AS dalam pencegahan dan pengobatan pascamenopauseosteoporosis: Sebuah tinjauan. Saya. J. Med. 1988, 85, 847–850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Efek antiosteoporosis dan karakterisasi proteomik dari target dan mekanisme Er-Xian Decoction pada UMR osteoblastik-106 dan osteoklas yang diinduksi dari RAW264.7. Molekul 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Matahari, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Aktivitas antiosteoporosis antrakuinon dari Morinda Officinalis pada osteoblas dan osteoklas. Molekul 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Osteosit yang menakjubkan. J. Penambang Tulang. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Penanda molekuler untuk kanker payudara: prediksi perilaku tumor. Dis. Penanda 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside—Tinjauan tentang kemunculannya, (bio)sintesis, dan signifikansi farmakologisnya. Bioteknologi. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Pharmacopoeia, Komite Editorial Chinese Pharmacopoeia. Farmakope Republik Rakyat Tiongkok; Pers Sains dan Teknologi Medis Tiongkok: Beijing, Tiongkok, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Efek dari persiapan herbal tradisional Cina pada osteoblas dan osteoklas. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K; Qin, L.-P. Flavonoid antiosteoporosis dari Podocarpium podocarpum. fitokimia. Lett. 2013, 6, 118-122. [CrossRef]

14. Kamu, T.; Bu, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Aktivitas antiosteoporosis dan konstituen Podocarpium podocarpus. Fitomedika 2015, 22, 94-102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; Dia, L.; Yao, S.; Zhao, P. Penilaian keamanan bubukCistanche deserticola YCMadengan uji makan 90-hari pada tikus Sprague-Dawley. Kimia Obat. racun. 2016, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Studi tentang toksisitasCistanche Deserticola. Dagu. J.Laboratorium Kesehatan. teknologi. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Efek anti-osteoporosis dariEkstrak Cistanche deserticola Mapada tikus yang diovariektomi. Trop. J. Farmasi. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Halo, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHEkstrak Cistanche deserticolameningkatkan pembentukan tulang pada osteoblas. J. Farmasi. farmasi. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Aktivitas antiosteoporosis echinacosida pada tikus yang diovariektomi. Fitomedika 2013,

20, 549–557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinacoside mendorong regenerasi tulang dengan meningkatkan rasio OPG/RANKL dalam sel MC3T3-E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, T.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Efek antioksidan fenilethanoid dariDeserticola Cistanche. Biol. Farmasi. Banteng. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Fenilethanoid glikosida dengan aktivitas anti-inflamasi dari batangDeserticola Cistanchedibudidayakan di gurun Tarim. Fitoterapia 2013, 89, 167-174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, T.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Trans, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Penghambatan oksida nitrat oleh fenilethanoid di makrofag diaktifkan. Eur. J. Farmakol. 2000, 400, 137-144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Efek perlindungan Cistanchis A pada kerusakan yang diinduksi etanol pada hepatosit tikus kultur primer. Bioma. apoteker. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Bu, MH; Nian, SS; Xu, LL Aktivitas antiosteoporosis icariin pada tikus yang diovariektomi. Fitomedika 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. penanda biokimia pergantian tulang. klinik Chim. Akta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y; Cha, SH; Kim, YT Efek pencegahan ekstrak kulit kayu Eleutherococcus senticosus dalam induksi OVXosteoporosispada tikus. Molekul 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Irlandia, DC; Beavan, SR; Compston, JE Efek estrogen pada osteoprotegerin, RANKL, dan ekspresi reseptor estrogen dalam osteoblas manusia. Tulang 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimunologi: mekanisme bersama dan crosstalk antara sistem kekebalan dan tulang. Nat. Pdt. Imunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Pantai, EW; Coklat, KD; Leonardi, A.; Trans, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Persyaratan untuk NF-kappaB dalam perkembangan osteoklas dan sel-B. Gen Dev. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indra, IR; Kunyah, N.; Yong, EL TRAF6 menengahi penekanan osteoklastogenesis dan pencegahan keropos tulang yang diinduksi ovariektomi oleh prenyl flavonoid baru. J. Penambang Tulang. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Aktivitas antiosteoporosis senyawa fenolik dari Curculigo orchioides. Fitomedika 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]