Menargetkan Cathepsin B Oleh Cycloastragenol Meningkatkan Kekebalan Antitumor Sel T CD8 Melalui Penghambatan Degradasi MHC-I Bagian 2

CAG menghambat degradasi lisosom MHC-I yang dimediasi CTSB

Glikosida cistanche juga dapat meningkatkan aktivitas SOD di jaringan jantung dan hati, dan secara signifikan mengurangi kandungan lipofuscin dan MDA di setiap jaringan, secara efektif mengais berbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi dari kerusakan DNA yang disebabkan oleh radikal OH. Cistanche phenylethanoid glycosides memiliki kemampuan pemulungan radikal bebas yang kuat, kemampuan reduksi yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktivitas SOD dalam suspensi sperma, mengurangi kandungan MDA, dan memiliki efek perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida Cistanche dapat meningkatkan aktivitas SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan jaringan paru-paru tikus tua yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangi kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, memiliki efek pemulungan yang baik pada DPPH, memperpanjang waktu hipoksia pada tikus tua, meningkatkan aktivitas SOD dalam serum, dan menunda degenerasi fisiologis paru-paru pada tikus tua eksperimental Dengan degenerasi morfologi seluler, percobaan telah menunjukkan bahwa Cistanche memiliki kemampuan antioksidan yang baik dan berpotensi menjadi obat untuk mencegah dan mengobati penyakit penuaan kulit. Pada saat yang sama, echinacoside di Cistanche memiliki kemampuan yang signifikan untuk mengais radikal bebas DPPH dan memiliki kemampuan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah degradasi kolagen yang diinduksi radikal bebas, dan juga memiliki efek perbaikan yang baik pada kerusakan anion radikal bebas timin.

Klik pada kuda laut maca ginseng cistanche

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa MHC-I terutama terdegradasi dalam lisosom selama perkembangan tumor, yang mengarah ke lolosnya kekebalan tumor.12 13 Kami berspekulasi apakah CAG juga dapat mengatur ekspresi MHC-I pada membran sel melalui protein targetnya CTSB . Kami pertama kali menggunakan interferensi RNA untuk merobohkan ekspresi CTSB dalam garis sel MC38, dan hasilnya menunjukkan bahwa tingkat ekspresi gen dan protein H2-k1 meningkat setelah membungkam CTSB (gambar 5A, B). Demikian pula, setelah knockdown dan overekspresi CTSB dalam garis sel HCT-116 manusia, tingkat mRNA atau ekspresi protein HLA-A masing-masing meningkat (gambar 5C, D) dan menurun (gambar 5E, F). Pada saat yang sama, kami menemukan bahwa sel-sel tumor dengan ekspresi CTSB yang tinggi menunjukkan kadar HLA-A yang lebih rendah, sementara sel-sel setelah knockdown CTSB meningkatkan ekspresi HLA-A (gambar 5G). Hasil ini menunjukkan bahwa CTSB memberikan efek pengaturan negatif pada ekspresi MHC-I. Kemudian, kami merawat garis sel MC38 dengan CAG dan menemukan bahwa CAG mempromosikan ekspresi MHC-I dan tidak berpengaruh pada CTSB (gambar 5H, I), yang konsisten dengan hasil penelitian sebelumnya pada jaringan tumor. Selain itu, kami menemukan bahwa setelah perawatan CAG, H2-Kd berkumpul dari sel ke membrannya (gambar 5J), yang selanjutnya membuktikan dugaan kami bahwa CAG dapat menghambat degradasi molekul MHC-I dan membuatnya berkumpul di membran sel, yang lebih mudah ditangkap oleh sel imun. Untuk lebih memvalidasi hipotesis kami, kami menggunakan percobaan Co-IP untuk menyelidiki apakah CTSB berikatan dengan MHC-I dan mengarah pada degradasinya. Kami menemukan bahwa CAG dapat menghambat pengikatan CTSB dan MHC pada sel MC38 tikus (gambar 5K), dan ekspresi MHC-I juga meningkat secara signifikan. Kami juga mengamati fenomena yang sama pada sel HCT116 manusia (gambar 5L). Selanjutnya, untuk mengonfirmasi lebih lanjut apakah CAG mempromosikan ekspresi MHC-I dan agregasi membran sel melalui CTSB, kami mentransfeksi plasmid mutan CTSB menjadi sel HCT-116 manusia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa setelah mentransfeksi plasmid mutan Y75A, A77V, dan G198V, fungsi CAG untuk meningkatkan ekspresi gen CD74 dan HLA-A dihancurkan (gambar 5M), dan molekul MHC-I diagregasi dari membran sel ke lisosom (gambar 5N). Hasil ini menunjukkan bahwa CAG menghambat degradasi MHC-I pada lisosom yang dimediasi oleh CTSB dan mempromosikan reagregasi MHC-I ke membran sel.

Kombinasi antibodi CAG dan PD-1 secara efektif meningkatkan kemampuan membunuh tumor dari sel CD8 plus T

Pelarian imun tumor terutama disebabkan oleh hilangnya fungsi presentasi antigen sel tumor dan penghambatan pos pemeriksaan imun. Menurut hasil kami, kami berspekulasi apakah CAG dapat digunakan dalam kombinasi dengan antibodi PD-1 untuk membunuh tumor, baik untuk mengatasi kekurangan presentasi antigen tumor maupun menyelesaikan penipisan sel CD8 plus T yang disebabkan oleh PD{ {2}}/ jalur PD-L1. Jadi, kami mentransplantasikan sel kanker MC38 ke tikus C57BL/6 dan membentuk kelompok kombinasi antibodi PD-1 dan CAG. Hasilnya menunjukkan bahwa kelompok kombinasi antibodi CAG dan PD-1 menunjukkan efek antitumor yang lebih baik daripada kelompok CAG dan PD-1 (gambar 6A–D). Selain itu, kami mengamati peningkatan yang signifikan dalam jumlah sel H2-Kd plus yang terinfiltrasi, sel CD45 plus, dan sel CD8 plus dalam jaringan tumor (gambar 6E–G), dan ekspresi gen terkait presentasi antigen H2-K1, Psmb8, dan B2m juga ditingkatkan (gambar 6H–J). Sementara itu, ekspresi gen Ifng dan Tnf juga meningkat secara signifikan (gambar 6K, L), dan pewarnaan imunohistokimia menunjukkan bahwa ekspresi H2-Kd meningkat secara signifikan (gambar 6M).

Oleh karena itu, penelitian ini terutama mengklarifikasi mekanisme antitumor CAG, terutama dengan menghambat degradasi MHC-I yang dimediasi oleh CTSB, mempromosikan agregasi molekul MHC-I ke membran sel, dan kemudian meningkatkan kemampuan presentasi antigen sel kanker. Selain itu, dikombinasikan dengan antibodi PD-1, dapat membunuh sel kanker dengan sangat efektif (gambar 6N).

CAG mempromosikan ekspresi MHC-I dalam organoid kanker kolorektal dan meningkatkan kemampuan membunuh sel T CD8

Untuk menyelidiki lebih lanjut apakah efek farmakologis CAG dapat diterapkan secara klinis, organoid kanker kolorektal manusia digunakan. Kami menemukan bahwa organoid yang diinkubasi dengan CAG meningkatkan ekspresi MHC-I (gambar 7A), dan ekspresi gen terkait penyaji antigen ANXA1, B2M, dan HLA-A juga meningkat (gambar 7B). Dalam percobaan sebelumnya, kami menemukan bahwa CAG meningkatkan efek pembunuhan sel T CD8 dengan mempromosikan ekspresi presentasi antigen dari sel tumor, dan efeknya lebih unggul bila digabungkan dengan antibodi PD-1. Untuk lebih memverifikasi hasil ini, kami mengumpulkan darah tepi orang sehat dan mengisolasi sel T CD8, dan kemudian menginkubasinya dengan organoid yang distimulasi CAG selama 24 jam (gambar 7C). Hasil penelitian menunjukkan bahwa dibandingkan dengan kelompok DMSO, sel T CD8 pada organoid tumor yang diobati dengan CAG tidak lagi menjauh tetapi lebih terkonsentrasi pada permukaan organoid; pada saat yang sama, ada lebih sedikit sel T CD8 yang hanyut dalam kelompok CAG dan PD-1 (gambar 7D). Kami menemukan bahwa IFN-G yang disekresikan oleh sel T CD8 yang diaktifkan juga ditingkatkan (gambar 7E-H).

Sejauh ini, kami menemukan bahwa CAG mempromosikan ekspresi penyaji antigen dari tumor untuk meningkatkan efek antitumor sel T CD8, dan kombinasi antibodi CAG dan PD-1 memiliki efek antitumor yang unggul. Selain itu, kami menganalisis data kanker usus besar dalam database Cancer Genome Atlas (TCGA) dan menemukan bahwa gen terkait presentasi antigen HLA-A, HLA-B, HLA-C, CD74, dan B2M menunjukkan tingkat ekspresi yang rendah pada tumor, dan tingkat kelangsungan hidup gen-gen ini dengan ekspresi rendah sangat buruk (gambar 7I, J, gambar 7A–H).

Oleh karena itu, kami menemukan bahwa ekspresi HLA-A, CD74, dan gen lain yang diatur ke atas oleh CAG bermanfaat bagi pasien tumor. Selain itu, kami menemukan bahwa pasien dengan ekspresi HLA-A yang tinggi, serta IFNG, memiliki tingkat kelangsungan hidup yang lebih tinggi (angka 7K); pasien dengan ekspresi HLA-A yang tinggi dan ekspresi PDCD1 yang rendah juga memiliki tingkat kelangsungan hidup yang lebih baik (gambar 7L). Semua temuan ini menunjukkan bahwa CAG akan menjadi kandidat obat untuk pengobatan kanker kolorektal.

DISKUSI

Pelarian kekebalan adalah alasan penting untuk kegagalan sistem kekebalan untuk mengendalikan pertumbuhan tumor, tetapi bagaimana varian pelarian muncul selama imunoterapi masih kurang dipahami.34 Penelitian telah menunjukkan bahwa hilangnya fungsi penyaji antigen tumor, perubahan epigenetik, ekspresi antiapoptotik protein, dan reseptor imunosupresif terkait erat dengan pelarian imun tumor. 6 7 35–37 Dalam beberapa tahun terakhir, meskipun imunoterapi yang diwakili oleh antibodi PD-1 telah membuat terobosan besar, fenomena resistensi obat dan pengobatan kanker kolorektal yang tidak responsif telah menyebabkan ketidakpuasan yang besar.38 39 Oleh karena itu, menemukan bahan kimia yang dapat meningkatkan presentasi antigen tumor dan bersinergi dengan antibodi PD-1 dapat mencegah lolosnya kekebalan tumor dengan lebih baik.

Studi terbaru menemukan bahwa molekul aktif dari pengobatan tradisional Tiongkok memainkan peran efektif dalam pengobatan penyakit, seperti celastrol dalam pengobatan sindrom metabolik,32 andrographolide pada kolitis dan kanker,40 baicalin dalam penurun lipid dan trifolirhizin dalam pengendalian tumor. 41 42 CAG adalah molekul aktif dalam A. membranaceus dan memiliki fungsi penyakit kardiovaskular, perlindungan hati, antibakteri, dan pengobatan aneurisma aorta perut.18 43–45 Namun, ada sedikit penelitian mengenai hal itu di bidang kanker kolorektal. Oleh karena itu, kami bertujuan untuk menyelidiki apakah dan bagaimana CAG menghambat pertumbuhan kanker usus besar murine

Pengembangan teknologi scRNA-seq dan scATAC-seq telah sangat memajukan penelitian penyakit. Oleh karena itu, kami menggunakan teknologi multi-omics sel tunggal untuk menganalisis mekanisme antitumor spesifik CAG. Ditemukan bahwa CAG mempromosikan fungsi penyaji antigen sel kanker, dan fungsi sel CD8 plus T, sel CD4 plus T, dan sel NK dalam limfosit ditingkatkan ke berbagai tingkat. Di sisi lain, sel Spp1 plus TAM dalam sel myeloid lebih cenderung pada transformasi respon inflamasi, dan sinyal hipoksia secara signifikan dihambat setelah pengobatan CAG. Hasil ini konsisten dengan hasil yang dilaporkan dalam penelitian sebelumnya, penghambatan sinyal hipoksia Spp1 plus TAM dan peningkatan respons inflamasi dapat menghambat pertumbuhan tumor.49 Oleh karena itu, kami berspekulasi bahwa CAG mempromosikan fungsi penyaji antigen sel kanker, jadi CD8 plus sel T dan makrofag yang sesuai dapat mengenali dan membunuh sel kanker secara efektif. Kami selanjutnya memverifikasi dugaan kami dengan eksperimen in vitro. Analisis flow cytometry juga menunjukkan bahwa CAG meningkatkan infiltrasi sel imun CD45, termasuk sel T CD8 plus dan sel NK. Selain itu, kemampuan IFN- dan GZMB yang disekresikan oleh sel CD8 plus T juga ditingkatkan secara signifikan oleh CAG. Untuk menentukan apakah sel T CD8 atau makrofag memainkan peran utama dalam percobaan antitumor CAG, kami menguji dugaan kami dengan tumor yang ditransplantasikan pada tikus telanjang. Karena gangguan perkembangan sel T yang disebabkan oleh imunisasi timus pada tikus telanjang sementara fungsi makrofag masih ada. Namun, hasil menunjukkan bahwa CAG tidak dapat secara efektif membunuh tumor yang ditransplantasikan pada tikus telanjang. Hasil ini menunjukkan bahwa CAG dapat meningkatkan efek pembunuhan sel CD8 plus T pada tumor dengan mempromosikan presentasi antigen sel kanker.

Selanjutnya, kami mengeksplorasi bagaimana CAG mempromosikan presentasi antigen sel kanker dengan teknologi TRAP untuk menemukan protein target CAG untuk menjelaskan fenomena tersebut. CTSB adalah sistein hidrolase, yang dapat berinteraksi dengan protein lain dan terdegradasi dalam lisosom.50 Kami berspekulasi bahwa CTSB mungkin berinteraksi dengan protein terkait presentasi antigen untuk menyebabkan degradasinya. Dan telah dilaporkan bahwa molekul MHC-I terdegradasi dalam lisosom, mengakibatkan hilangnya fungsi penyaji antigen sel tumor. Oleh karena itu, kami menduga bahwa CTSB dapat berikatan dengan molekul MHC-I dan menyebabkan degradasinya dalam lisosom. Kami memverifikasi hipotesis ini bahwa CAG dapat mencegah degradasi MHC-I dengan menghambat interaksi CTSB dan MHC-I. Organoid adalah model yang efektif untuk mempelajari perkembangan penyakit tumor dan sangat penting untuk mempromosikan pengobatan pasien tumor klinis dengan menyelidiki efek obat pada pertumbuhan organoid tumor dan mekanisme spesifiknya.51 52 Melalui percobaan kami, kami menemukan bahwa kombinasi dengan antibodi CAG dan PD-1 memiliki kemampuan yang baik untuk menghambat pertumbuhan tumor baik pada model tumor transplantasi tikus atau organoid kanker usus besar manusia. Kekurangan dari penelitian ini adalah jumlah sampel xenograft dan organoid pasien yang terbatas. Meskipun ada kesimpulan serupa antara model murine dan organoid manusia, diperlukan penyelidikan lebih lanjut.

Di sini, kami menjelaskan mekanisme spesifik dimana CAG menghambat pertumbuhan kanker usus besar, terutama dengan menghambat degradasi MHC-I yang dimediasi oleh CTSB, untuk meningkatkan kekebalan antitumor sel CD8 plus T. Di satu sisi, ini mempromosikan presentasi antigen sel kanker, dan di sisi lain, mengurangi keadaan penipisan CD8 plus sel T. Hasil percobaan juga menegaskan bahwa kombinasi antibodi CAG dan PD-1 memiliki efek antitumor yang unggul.

Sebagai kesimpulan, sejauh pengetahuan kami, temuan ini menyoroti bahwa penurunan regulasi CTSB memberikan kekebalan antitumor. Penelitian kami juga menjelaskan mekanisme spesifik CAG dalam menghambat pertumbuhan kanker kolorektal. Perlu disebutkan bahwa CAG memiliki potensi besar sebagai produk kesehatan di pasar Eropa dan Amerika. Hasil penelitian kami memberikan kandidat obat antikanker yang potensial.

Afiliasi penulis

1 State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, Chemistry and Biomedicine Innovation Center (ChemBIC), Department of Biotechnology and Pharmaceutical Sciences, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu, China

2 Departemen Bioinformatika Kedokteran Prediktif, Institut Informatika Biomedis, Laboratorium Transduksi Sinyal Sel, Sekolah Ilmu Kedokteran Dasar, Universitas Henan, Kaifeng, Henan, Republik Rakyat Tiongkok

3 Jiangsu Collaborative Innovation Center of Traditional Chinese Medicine in Prevention and Treatment of Tumor, The First Clinical College, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Jiangsu, China

4 Departemen Bedah Umum, Shanghai Jiao Tong University Berafiliasi dengan Sixth People's Hospital, Shanghai, Republik Rakyat Tiongkok

5 Laboratorium Utama Metabolisme Obat dan Farmakokinetik Provinsi Jiangsu, Laboratorium Utama Obat Alami Negara, Universitas Farmasi China, Nanjing, Jiangsu, China

6 Genergy Bio-technology (Shanghai) Co. Ltd, Shanghai, China

7 Laboratorium Kunci Jiangsu untuk Penelitian Obat Baru dan Farmasi Klinis, Universitas Kedokteran Xuzhou, Xuzhou, Jiangsu, Tiongkok

KontributorYS, HC, dan DS menyusun proyek ini dan merancang studinya. GD, BW, dan XS melakukan eksperimen dan menganalisis data. LZ dan HC menganalisis data scRNA-seq dan scATAC-seq. DS dan HC memberikan dukungan metodologis dan saran konseptual. YS dan GD menulis naskahnya. YS, sebagai penjamin, memikul tanggung jawab penuh atas pekerjaan dan/atau pelaksanaan penelitian dan berhak untuk mengakses data dan mengontrol keputusan pelepasan.

PendanaanKarya ini didukung oleh National Key Research and Development Project (2017YFC1700602), National Science Science Foundation of China (Nos. 81930117, 81872877, 82074318), Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions and Mountain-Climbing Talents Project of Nanjing University (T/A), Proyek Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Shanghai, Rencana Aksi Inovasi Ilmiah dan Teknologi (No. 22ZR1447400).

Kepentingan yang bersaingTidak ada yang diumumkan.

Persetujuan pasien untuk publikasiTak dapat diterapkan.

Persetujuan etikaStudi organoid kanker usus besar manusia telah disetujui oleh Komite Penelitian dan Etika Rumah Sakit Afiliasi Universitas Kedokteran Tiongkok Nanjing dan mematuhi semua peraturan etika yang relevan (2020-NL-094- 02). Peserta memberikan persetujuan untuk berpartisipasi dalam penelitian sebelum mengambil bagian

Provenance dan peer reviewTidak ditugaskan; peer-review eksternal.

pernyataan ketersediaan dataSemua data yang relevan dengan penelitian dimasukkan dalam artikel atau diunggah sebagai informasi tambahan online.

Bahan pelengkapKonten ini disediakan oleh penulis. Itu belum diperiksa oleh BMJ Publishing Group Limited (BMJ) dan mungkin belum ditinjau oleh rekan sejawat. Setiap pendapat atau rekomendasi yang dibahas semata-mata milik penulis dan tidak didukung oleh BMJ. BMJ menafikan semua kewajiban dan tanggung jawab yang timbul dari ketergantungan yang ditempatkan pada konten. Di mana konten mencakup materi terjemahan, BMJ tidak menjamin keakuratan dan keandalan terjemahan (termasuk namun tidak terbatas pada peraturan setempat, pedoman klinis, terminologi, nama obat, dan dosis obat), dan tidak bertanggung jawab atas segala kesalahan dan/ atau penghilangan yang timbul dari penerjemahan dan adaptasi atau lainnya.

Akses terbukaIni adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan oleh lisensi Creative Commons Attribution Non-Commercial (CC BY-NC 4.0), yang mengizinkan orang lain untuk mendistribusikan, mencampur ulang, mengadaptasi, membangun berdasarkan karya ini secara nonkomersial, dan melisensikan karya turunannya dengan ketentuan yang berbeda, asalkan karya aslinya dikutip dengan benar, kredit yang sesuai diberikan, perubahan apa pun yang ditunjukkan, dan penggunaannya bersifat non-komersial.

REFERENSI

1 Siegel RL, Miller KD, Fuchs HE, dkk. Statistik kanker, 2022. CA A Cancer J Clinicians 2022;72:7–33.

2 Kuipers EJ, Grady WM, Lieberman D, dkk. Kanker kolorektal. Nat Rev Dis Primer 2015;1:15065.

3 Biller LH, Schrag D. Diagnosis dan pengobatan kanker kolorektal metastatik. JAMA 2021;325:669–85.

4 Oliveira AF, Bretes L, Furtado I. Tinjauan penghambat PD-1/PD-L1 pada kanker kolorektal dMMR/MSI-H metastatik. Front Oncol 2019;9:396.

5 Das M, Zhu C, Kuchroo VK. Tim-3 dan perannya dalam mengatur kekebalan antitumor. Immunol Rev 2017;276:97–111.

6 Jiang X, Wang J, Deng X, dkk. Peran lingkungan mikro tumor dalam pelepasan imun tumor yang dimediasi PD-L1/PD-1-. Kanker Mol 2019;18:10.

7 Dhatchinamoorthy K, Colbert JD, Rock KL. Penghindaran kekebalan kanker melalui hilangnya presentasi antigen MHC kelas I. Front Immunol 2021;12:636568.

8 Zhu Y, Qian Y, Li Z, dkk. Sel T neoantigen-reaktif: peran yang muncul dalam imunoterapi seluler adopsi. MedComm 2021;2:207–20.

9 Vries JE, Yssel H, Spits H. Interaksi antara kompleks TCR/CD3 dan CD4 atau CD8 dalam aktivasi limfosit T sitotoksik. Immunol Rev 1989;109:119–42.

10 Huang J, Meyer C, Zhu C. Pengenalan antigen sel T pada membran sel. Mol Immunol 2012;52:155–64.

11 Alison JP. Interaksi CD28-B7 dalam aktivasi sel-T. Curr Opin Immunol 1994;6:414–9.

12 Liu X, Bao X, Hu M, dkk. Penghambatan PCSK9 mempotensiasi terapi pos pemeriksaan kekebalan untuk kanker Alam 2020;588:693–8.

13 Yamamoto K, Venida A, Yano J, dkk. Autophagy mempromosikan penghindaran kekebalan terhadap kanker pankreas dengan menurunkan MHC-I Alam 2020;581:100–5.

14 Chen X, Zhao Y, Luo W, dkk. Celastrol menginduksi apoptosis yang dimediasi ROS melalui penargetan langsung peroxiredoxin-2 dalam sel kanker lambung. Theranostika 2020;10:10290–308.

15 Kong N, Chen X, Feng J, dkk. Baicalin menginduksi ferroptosis pada sel kanker kandung kemih dengan menurunkan regulasi FTH1. Acta Pharm Sin B 2021;11:4045–54.

16 Deng G, Chen W, Wang P, dkk. Penghambatan piroptosis yang dimediasi inflamasi NLRP3 dalam makrofag oleh sikloastragenol berkontribusi pada perbaikan peradangan kulit seperti psoriasis yang diinduksi imiquimod pada tikus. Int Immunopharmacol 2019;74:105682.

17 Li M, Li S-chun, Dou B-kai, dkk. Cycloastragenol meningkatkan ekspresi SIRT1, melemahkan apoptosis, dan menekan peradangan saraf setelah iskemia otak. Acta Pharmacol Sin 2020;41:1025–32.

18 Chen C, Ni Y, Jiang B, dkk. Turunan anti-penuaan dari sikloastragenol yang diproduksi oleh biotransformasi. Nat Prod Res 2021;35:2685–90.

19 Fauce SR, Jamieson BD, Chin AC, dkk. Peningkatan farmakologis berbasis telomerase dari fungsi antivirus CD8 manusia ditambah limfosit T. J Immunol 2008;181:7400–6.

20 Wang B, Wang Y, Sun X, dkk. CXCR6 diperlukan untuk kemanjuran antitumor sel CD8 plus T intratumoral. J Immunother Cancer 2021;9:e003100.

21 Butler A, Hoffman P, Smibert P, dkk. Mengintegrasikan data transkriptomik sel tunggal di berbagai kondisi, teknologi, dan spesies. Nat Biotechnol 2018;36:411–20.

22 Yu G, Wang LG, Han Y, dkk. clusterProfiler: paket R untuk membandingkan tema biologis di antara kelompok gen. OMICS: Jurnal Biologi Integratif 2012;16:284–7.

23 Stuart T, Butler A, Hoffman P, dkk. Integrasi komprehensif data sel tunggal. Sel 2019;177:1888–902.

24 Granja JM, Corces MR, Pierce SE, dkk. ArchR adalah paket perangkat lunak yang dapat diskalakan untuk analisis aksesibilitas kromatin sel tunggal yang terintegrasi. Nat Genet 2021;53:403–11.

25 Korsunsky I, Millard N, Fan J, dkk. Integrasi data sel tunggal yang cepat, sensitif, dan akurat dengan harmoni. Metode Nat 2019;16:1289–96.

26 Trapnell C, Cacchiarelli D, Grimsby J, dkk. Dinamika dan pengatur keputusan nasib sel diungkapkan oleh urutan pseudo-temporal sel tunggal. Nat Biotechnol 2014;32:381–6.

27 Qiu X, Hill A, Packer J, dkk. Kuantifikasi mRNA sel tunggal dan analisis diferensial dengan sensus. Metode Nat 2017;14:309–15.

28 Qiu X, Mao Q, Tang Y, dkk. Penyematan grafik terbalik menyelesaikan lintasan sel tunggal yang kompleks. Metode Nat 2017;14:979–82.

29 Patel AP, Tirosh I, Trombetta JJ, dkk. RNA-seq sel tunggal menyoroti heterogenitas intratumoral pada glioblastoma primer Sains 2014;344:1396–401.

30 Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, dkk. Analisis pengayaan set gen: pendekatan berbasis pengetahuan untuk menafsirkan profil ekspresi genome-wide. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:15545–50.

31 Tian Y, Wan N, Ding M. Chemoproteomics memetakan beberapa target glikolitik dalam sel kanker. bioRxiv 2020.

32 Zhu Y, Wan N, Shan X, dkk. Celastrol menargetkan protein terkait adenilil siklase 1 untuk mengurangi peradangan yang dimediasi makrofag dan memperbaiki sindrom metabolik yang diinduksi diet tinggi lemak pada tikus. Acta Pharm Sin B 2021;11:1200–12.

33 Driehuis E, Kretzschmar K, Clevers H. Pembentukan organoid kanker yang diturunkan pasien untuk aplikasi skrining obat. Nat Protoc 2020;15:3380–409.

34 Lin KY, Lu D, Hung CF, dkk. Ekspresi ektopik dari molekul adhesi sel vaskular -1 sebagai mekanisme baru untuk penghindaran kekebalan tumor. Cancer Res 2007;67:1832–41.

35 Kriegsman BA, Vangala P, Chen BJ, dkk. Kehilangan IRF2 yang sering pada kanker menyebabkan penghindaran kekebalan melalui penurunan presentasi antigen MHC kelas I dan peningkatan ekspresi PD-L1. Ji 2019;203:1999–2010.

36 Gomez S, Tabernacki T, Kobyra J, dkk. Menggabungkan terapi epigenetik dan imun untuk mengatasi resistensi kanker. Semin Cancer Biol 2020;65:99–113.

37 Mandal R, Barrón JC, Kostova I. Caspase-8: pedang bermata dua. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 1873;2020:188357.

38 Qin S, Xu L, Yi M, dkk. Target pos pemeriksaan kekebalan baru: bergerak melampaui PD-1 dan CTLA-4. Kanker Mol 2019;18:155.

39 Lizardo DY, Kuang C, Hao S, dkk. Kemanjuran imunoterapi pada kanker kolorektal yang tidak dapat diperbaiki dengan baik: dari bangku ke samping tempat tidur. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 2020;1874:188447.

40 Guo W, Sun Y, Liu W, dkk. Penghambatan inflamasi NLRP3 yang dimediasi oleh mitofag kecil yang digerakkan oleh molekul bertanggung jawab untuk pencegahan kanker terkait kolitis. Autophagy 2014;10:972–85.

41 Dai J, Liang K, Zhao S, dkk. Kemoproteomik mengungkapkan baicalin mengaktifkan CPT1 hati untuk memperbaiki obesitas akibat diet dan steatosis hati. Proc Natl Acad Sci USA 2018;115:E5896–905.

42 Sun D, ​​Tao W, Zhang F, dkk. Trifolirhizin menginduksi apoptosis yang bergantung pada autophagy pada kanker usus besar melalui pensinyalan AMPK / mTOR. Sig Transduct Target Ther 2020;5:174.

43 Gu M, Zhang S, Zhao Y, dkk. Cycloastragenol meningkatkan steatosis hati dengan mengaktifkan pensinyalan reseptor farnesoid X. Penelitian Farmakologi 2017;121:22–32.

44 Wang J, Wu ML, Cao SP, dkk. Cycloastragenol memperbaiki kerusakan jantung eksperimental pada tikus dengan mempromosikan autophagy miokard melalui penghambatan pensinyalan AKT1-RPS6KB1. Biomed Pharmacother 2018;107:1074–81.

45 Wang Y, Chen C, Wang Q, dkk. Efek penghambatan sikloastragenol pada aneurisma aorta perut dan mekanisme terkaitnya. Br J Pharmacol 2019;176:282–96.

46 Lee JJ, Bernard V, Semaan A, dkk. Penjelasan heterogenitas tumor-stroma dan interaksi ligan-reseptor oleh transkriptomik sel tunggal dalam biopsi kanker pankreas dunia nyata. Res Kanker Klinik 2021;27:5912–21.

47 Zhang L, Li Z, Skrzypczynska KM, dkk. Analisis Sel Tunggal menginformasikan mekanisme terapi Myeloid-Targeted pada kanker usus besar Sel 2020;181:442–59.

48 Gao J, Wu Z, Zhao M, dkk. Penghambatan alosterik mengungkapkan SHP2-memediasi imunosupresi tumor pada kanker usus besar dengan transkriptomik sel tunggal. Acta Pharm Sin B 2022;12:149–66.

49 Wei J, Chen Z, Hu M, dkk. Mengkarakterisasi komunikasi antar sel kanker pan mengungkapkan SPP1 plus makrofag terkait tumor yang diperluas dalam hipoksia dan mempromosikan keganasan kanker melalui Data RNA-Seq sel tunggal. Front Cell Dev Biol 2021;9:749210.

50 Chen X, Yu C, Kang R, dkk. Sistem degradasi seluler dalam ferroptosis. Perbedaan Kematian Sel 2021;28:1135–48.

51 Puschhof J, Pleguezuelos-Manzano C, Martinez-Silgado A, dkk. Kokultur organoid usus dengan mikroba. Nat Protoc 2021;16:4633–49.

52 Lee SH, Hu W, Matulay JT, dkk. Evolusi tumor dan respons obat pada model organoid kanker kandung kemih yang diturunkan dari pasien. Sel 2018;173:515–28.

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】