Respons Sitotoksik Berkelanjutan Sel Mononuklear Darah Perifer Dari Individu yang Tidak Divaksinasi Masuk ICU Karena COVID Kritis-19 Sangat Penting Untuk Menghindari Hasil yang Fatal

Abstrak: Tujuan utama penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh aktivitas sitotoksik sel mononuklear darah tepi (PBMC) terhadap hasil akhir individu yang tidak divaksinasi dengan COVID-19 kritis yang dirawat di ICU. Sampel darah dari 23 orang dikumpulkan saat masuk dan kemudian setiap 2 minggu selama 13 minggu sampai kematian (kelompok Exitus) (n=13) atau keluar (kelompok bertahan hidup) (n=10). Kami tidak menemukan perbedaan signifikan antar kelompok dalam data sosiodemografi, klinis, atau biokimia yang dapat mempengaruhi hasil fatal. Namun, sitotoksisitas seluler langsung PBMC dari individu dalam kelompok Exitus terhadap sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV-2-pseudotipe berkurang secara signifikan saat masuk (−2.69-kali lipat; p=0. 0234) dan setelah 4 minggu di ICU (−5.58-kali lipat; p=0.0290), dibandingkan dengan individu yang selamat, dan tidak membaik selama dirawat di rumah sakit. Secara in vitro, pengobatan dengan IL-15 sel-sel ini tidak mengembalikan sitotoksisitas efektif hingga berakibat fatal, dan peningkatan ekspresi penanda kelelahan kekebalan diamati pada NKT, CD4+, dan CD 8+ sel T. Namun, pengobatan IL-15 pada PBMC dari individu dalam kelompok Survival secara signifikan meningkatkan sitotoksisitas pada Minggu ke-4 (6.{24}}kali lipat; p=0.0303). Oleh karena itu, pengobatan imunomodulator yang dapat mengatasi kelelahan kekebalan tubuh dan menginduksi aktivitas sitotoksik yang efisien dan berkelanjutan dapat menjadi hal yang penting untuk kelangsungan hidup selama dirawat di rumah sakit karena COVID yang kritis-19.

Kata Kunci: SARS-CoV-2; COVID-19; respon imun; respon sitotoksik; AKU-15

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

1. Perkenalan

Beberapa kasus pneumonia virus atipikal yang terkait dengan wabah di pasar makanan laut di Kota Wuhan (Provinsi Hubei, Tiongkok) terdeteksi pada bulan Desember 2019. Virus corona baru yang disebut sindrom pernapasan akut parah virus corona 2 (SARS-CoV-2) dengan cepat menyebar ke seluruh dunia menyebabkan pandemi penyakit virus corona 2019 (COVID-19) [1]. Sejak itu, sekitar 626 juta kasus COVID-19 dan 6,5 juta kematian terkait telah dilaporkan di seluruh dunia (diperbarui pada Oktober 2022) [2]. Berbagai faktor risiko dan penyakit penyerta dapat memengaruhi perkembangan COVID-19 di antara individu, yang memengaruhi perbandingan data klinis antara negara-negara yang terkena dampak sejak awal pandemi [3]. Namun, ditentukan bahwa manifestasi klinis COVID-19 dapat bervariasi dari infeksi tanpa gejala hingga sindrom gangguan pernapasan akut (ARDS) [4]. Di antara berbagai faktor risiko yang dikaitkan dengan kemungkinan lebih tinggi terjadinya bentuk COVID yang parah-19 adalah usia tua, jenis kelamin laki-laki, dan penyakit penyerta sebelumnya seperti diabetes, hipertensi, dan/atau obesitas [5,6]. COVID-19 yang parah dan kritis juga dikaitkan dengan sitopenia, sebagian besar limfosit CD4+ T, serta kelelahan berlebihan sel pembunuh alami (NK) dan sel T CD8+, yang mengakibatkan keadaan imunokompromais yang tidak mampu membersihkan infeksi, selain berkembangnya komplikasi serius seperti badai sitokin dan kejadian trombotik [7]. Penyebab utama berkembangnya penyakit yang parah dan kematian pada pasien COVID-19 dianggap sebagai respons peradangan berlebihan yang dapat memicu terjadinya syok dan/atau hipersitokinemia dengan disfungsi multiorgan [4]. Sindrom ini dikenal sebagai badai sitokin [8], dan mirip dengan penyakit hemophagocytic limfohistiositosis (sHLH), yang terdiri dari keadaan hiperinflamasi yang dipicu oleh infeksi virus [9,10]. Hal ini dapat dikaitkan dengan fakta bahwa SARS-CoV-2 menggunakan reseptor enzim pengubah angiotensin 2 (ACE2) untuk menginfeksi sel target. Pengikatan SARS-CoV-2 ke reseptor ACE2, yang diekspresikan secara luas oleh sel-sel dari jaringan berbeda [11], menyebabkan peningkatan angiotensin II, yang mengaktifkan faktor nuklir-κB (NF-κB). Aktivasi faktor transkripsi penting ini merangsang ekspresi sitokin proinflamasi, kemokin, dan molekul adhesi [12]. Meskipun terdapat respon inflamasi yang berlebihan, tampaknya tidak efektif untuk membersihkan infeksi dan, karena aktivasi sel T, dapat berakhir dengan apoptosis [13]. Badai sitokin ini dapat menyebabkan limfopenia [12,14] dan juga penurunan kadar sel T NK dan CD8+ dengan fenotipe yang habis dan peningkatan ekspresi reseptor penghambat seperti NKG2A dalam sel NK dan PD{{47 }} dalam CD8+ sel T [15,16]. Selain itu, ekspresi penanda degranulasi seperti CD107a biasanya berkurang pada permukaan sel-sel ini [15], membuktikan adanya penurunan kapasitas untuk menghilangkan sel yang terinfeksi pada individu dengan COVID yang parah dan kritis-19 [17 ]. Meskipun terdapat respons global yang cepat dalam mengembangkan dan memberikan vaksin yang efektif, munculnya varian baru yang mungkin tidak dapat dideteksi oleh respons imun yang dipicu oleh vaksin telah mengakibatkan penurunan yang cepat dalam perlindungan terhadap penyakit bergejala [18]. Oleh karena itu, penelitian untuk mendapatkan terapi yang efisien terhadap COVID harus dilanjutkan-19. Beberapa pengobatan telah diuji untuk memperbaiki status individu yang dirawat di rumah sakit karena penyakit parah dan kritis, namun belum ada yang terbukti spesifik untuk menghilangkan sel yang terinfeksi atau mengurangi tingkat infeksi [15,19]. Oleh karena itu, pengobatan suportif seperti terapi oksigen dan cairan masih merupakan salah satu strategi terpenting yang diterapkan untuk penatalaksanaan individu ini [2,4,16,20]. Perawatan yang tidak spesifik seperti kortikosteroid juga bermanfaat untuk mengendalikan dan mengurangi respon inflamasi yang berlebihan [21,22]. Baru-baru ini, beberapa obat telah diberi izin oleh FDA untuk pengobatan individu dengan COVID-19 ringan hingga sedang, seperti molnupiravir, nirmatrelvir, dan ritonavir, namun hanya dalam keadaan darurat bagi individu dengan risiko tinggi untuk berkembang menjadi penyakit parah [23-26]. Molnupiravir menunjukkan aktivitas antivirus berspektrum luas karena kemampuannya menginduksi mutagenesis RNA melalui interferensi dengan beberapa virus RNA-dependent RNA polimerase (RdRp), termasuk RdRp yang digunakan oleh SARS-CoV-2 untuk replikasi dan transkripsinya Genom RNA [27]. Kombinasi nirmatrelvir dan ritonavir juga telah terbukti mampu menghentikan penyebaran infeksi pada model hewan dengan menghambat protease virus utama 3CLpro dari SARS-CoV-2- 2 [28]. Namun, obat antivirus ini perlu diberikan bersamaan dengan tindakan lain seperti vaksin untuk memicu respons imun sitotoksik yang kuat dan mampu menghilangkan sel yang terinfeksi. Sebagian besar sel dengan aktivitas sitotoksik, seperti limfosit T CD8+ serta sel NK dan NKT, memerlukan keberadaan interleukin-15 (IL-15) untuk fungsi dan regulasi homeostatisnya [29]. IL-15 menyiapkan sel T CD8+ untuk aktivasinya oleh antigen spesifik dan juga meningkatkan sitotoksisitas dan proliferasi sel NK. Oleh karena itu, IL-15 dapat meningkatkan respon imun seluler bawaan dan adaptif terhadap sel yang terinfeksi [22,25]. IL-15 juga mencegah sel NK dan T dari apoptosis dengan meningkatkan regulasi faktor anti-apoptosis seperti Bcl-2 dan menurunkan regulasi faktor pro-apoptosis seperti GSK-3 [26], sehingga menghindari sitopenia. Oleh karena itu, IL-15 telah diusulkan sebagai sitokin imunomodulator baru dalam imunoterapi kanker dan telah dianggap sebagai bahan pembantu dalam rejimen vaksin [26,30]. Uji klinis fase 1 dengan infus bolus iv manusia IL-15 (rhIL-15) atau superagonis IL-15 N-803 telah menunjukkan bahwa sitokin ini dapat menginduksi ekspansi dan/atau aktivasi yang signifikan sel efektor CD4+, CD8+, dan NK in vivo, dan oleh karena itu, telah diterapkan untuk mengobati kanker atau infeksi virus seperti HIV [31-35]. Oleh karena itu, penggunaan agen imunomodulator seperti IL-15 yang dapat memulihkan aktivitas sitotoksik pada individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID{108}} yang kritis dapat berguna untuk membantu membersihkan virus dari organisme. Dalam studi observasional dan longitudinal ini, kami mengkarakterisasi evolusi respons imun sitotoksik terhadap SARS-CoV-2 pada sel mononuklear darah tepi (PBMC) yang diisolasi dari individu yang didiagnosis dengan COVID-19 yang dirawat di unit perawatan intensif. unit perawatan (ICU) karena komplikasi parah, serta pengaruh respons ini terhadap hasil akhir dibandingkan dengan faktor risiko penting lainnya. Kami juga mengevaluasi kapasitas sel-sel ini untuk merespons pengobatan dengan IL-15 dan meningkatkan respons antivirus sitotoksiknya. Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini dapat berkontribusi pada pemahaman yang lebih baik tentang peran respons sitotoksik terhadap kematian akibat COVID-19 dan memajukan pengembangan pengobatan imunomodulator efektif yang mendorong pembersihan virus.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Meningkatkan Imunitas

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Subjek Studi

Dua puluh tiga orang dengan COVID kritis-19 yang dirawat di ICU Rumah Sakit Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spanyol) dari Oktober 2020 hingga April 2021 direkrut untuk penelitian ini. Periode ini mencakup gelombang pandemi kedua dan ketiga COVID-19 di Spanyol (masing-masing dari bulan Juni hingga Desember 2020 dan dari Desember 2020 hingga Maret 2021). Para peserta direkrut secara acak saat dirawat di rumah sakit sesuai dengan kriteria berikut: otorisasi atas persetujuan saksi tertulis atau lisan untuk berpartisipasi dalam penelitian, dirawat di ICU karena COVID kritis-19, SARS-CoV positif-2 Uji RT-qPCR pada usapan nasofaring dilakukan saat masuk rumah sakit sesuai dengan protokol internal yang divalidasi, berusia lebih dari 18 tahun, dan tidak divaksinasi terhadap SARS-CoV-2 pada saat infeksi. Sampel darah tepi dan data klinis dikumpulkan setiap 2 minggu selama total 13 minggu, dan sampel darah diproses dan disimpan secara kriopreservasi hingga saat analisis. Periode ini dihitung dengan mempertimbangkan lama rawat inap di rumah sakit di Spanyol selama gelombang pandemi pertama diperkirakan rata-rata 35 hari [36], sehingga kami dapat melakukan setidaknya dua putaran perekrutan dan tindak lanjut. Setelah 13 minggu, para peserta dibagi menjadi dua kelompok berdasarkan hasil akhir: hasil fatal (n=13), selanjutnya Exitus; atau keluar dari rumah sakit (n=10), selanjutnya Bertahan Hidup.

2.2. Pernyataan Etis

Individu yang berpartisipasi dalam penelitian ini direkrut dari Rumah Sakit Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spanyol). Semuanya memberikan persetujuan tertulis untuk berpartisipasi dalam penelitian atau menyaksikan persetujuan lisan dengan persetujuan tertulis oleh perwakilan untuk menghindari penanganan dokumen yang terkontaminasi. Undang-undang Perlindungan Data Spanyol dan Eropa yang berlaku saat ini menjamin kerahasiaan dan anonimitas semua peserta. Protokol untuk penelitian ini (CEI PI 32_2020-v2) disiapkan sesuai dengan Deklarasi Helsinki dan sebelumnya ditinjau dan disetujui oleh Komite Etika Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) dan rumah sakit yang berpartisipasi.

2.3. Sel

Lima mililiter darah utuh dikumpulkan dalam tabung Vacutainer EDTA (Becton Dickinson, Madrid, Spanyol) dan segera diproses untuk mengisolasi PMBC dan plasma dengan sentrifugasi gradien kepadatan Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA), dan kemudian mereka adalah cryopreservasi sampai analisis. Viabilitas sel setelah pencairan dinilai dengan mikroskop optik dan flow cytometry. Garis sel Vero E6 (ginjal monyet hijau Afrika) (ECACC 85020206) disediakan oleh Dr. Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Spanyol), dan sel-sel ini dikultur dalam DMEM yang dilengkapi dengan 10% FCS, 2 mM L- glutamin, dan 100 unit/mL penisilin dan streptomisin (Lonza, Basel, Swiss).

manfaat cistanche untuk pria-memperkuat sistem kekebalan tubuh

2.4. Uji Infeksi SARS-CoV-2 Pseudotipe

Aktivitas sitotoksik terhadap SARS-CoV-2 PBMC dari para peserta dianalisis menggunakan sel Vero E6 yang terinfeksi oleh virus pseudotipe siklus tunggal pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_Ren. Virus ini mengkodekan glikoprotein lonjakan SARS-CoV-2 dengan mutasi D614G dalam genom HIV-1, serta gen Renilla luciferase yang dihasilkan seperti dijelaskan sebelumnya [37,38]. Varian SARS-CoV-2 yang mengandung mutasi D614G pada protein lonjakan (S) mulai beredar pada awal pandemi dan menjadi dominan dengan cepat di banyak wilayah [39,40]. Singkatnya, lapisan tunggal Vero E6 terinfeksi pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/well ) selama 48 jam. Kemudian sel dicuci dan dikultur bersama selama 1 jam dengan PBMC dari peserta (rasio 1:1), yang sebelumnya diobati atau tidak dengan IL-15 (13 ng/mL) selama 48 jam. Dosis IL-15 yang digunakan untuk penelitian ini dipilih, dengan mempertimbangkan dosis yang telah dijelaskan sebelumnya yang menyebabkan efek tertinggi pada proliferasi NK (10-25 ng/mL) [41] dan juga perluasan preferensi sitotoksik memori. CD8+ sel T (Kurang dari atau sama dengan 5 ng/mL) [42]. Aktivitas sitotoksik PBMC pada monolayer Vero E6 ditentukan setelah penghilangan supernatan dengan sel dalam suspensi dan disosiasi sel Vero E6 dari pelat dengan larutan trypsin-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Germany) dan kuantifikasi selanjutnya aktivitas caspase-3 dalam sel yang terlepas dengan pendaran menggunakan sistem Analisis Caspase-Glo 3/7 (Promega, Madison, WI, USA). Untuk menentukan populasi sel sitotoksik mana yang bertanggung jawab atas aktivitas ini, PBMC dikumpulkan dari supernatan dan kemudian dianalisis dengan flow cytometry.

2.5. Analisis Aliran Sitometri

Untuk pewarnaan penanda fenotip permukaan sel, antibodi terkonjugasi berikut digunakan: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC, dan CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, dibeli dari BD Biosciences (San Jose, CA, USA). Untuk pewarnaan penanda kelelahan, antibodi terkonjugasi berikut digunakan: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC, dan PD1-BV650, dibeli dari BD Biosciences, serta CD4-PE, dibeli dari Immunostep SL (Salamanca, Spanyol) dan TIGIT-AlexaFluor700 yang dibeli dari Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Sampel diperoleh dengan menggunakan flow cytometer BD LSRFortessa X-20 dengan perangkat lunak FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) dan kemudian dianalisis menggunakan perangkat lunak FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , AS).

2.6. Deteksi RNAemia SARS-CoV-2

Total RNA diekstraksi dari sampel plasma menggunakan QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Madrid, Spanyol) dalam ekstraktor otomatis QIAcube (Qiagen, Hilden, Jerman). Deteksi RNA SARS-CoV-2 dilakukan dengan uji RT-qPCR dengan target dalam gen envelope (E) dan nukleokapsid (N), seperti yang dijelaskan sebelumnya [43], yang merupakan bagian dari Panduan Sementara Kesehatan Dunia Organisasi (WHO) untuk pengujian diagnostik SARS-CoV- 2 [44]. Sampel dianggap positif untuk dianalisis bila nilai siklus kuantifikasi (Cq) di bawah 45 siklus.

manfaat cistanche untuk pria-memperkuat sistem kekebalan tubuh

2.7. Analisis statistik

Semua analisis statistik dan grafik dilakukan menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism versi 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Perbandingan kelompok dilakukan dengan menggunakan uji Mann-Whitney U, uji peringkat berpasangan berpasangan Wilcoxon, ANOVA satu arah, dan uji perbandingan berganda Tukey. Uji eksak Fisher digunakan untuk mengevaluasi perbedaan karakteristik klinis antara kedua kelompok. Nilai p < 0.{{10}}5 (dua sisi) dianggap signifikan secara statistik. Rata-rata dan deviasi standar digunakan untuk menghitung statistik Cohen d dengan menggunakan kalkulator ukuran efek Excel [45]. Ukuran efek 0.2, 0.5, 0.8, atau Lebih besar dari atau sama dengan 1.2 masing-masing merupakan indikasi ukuran efek kecil, sedang, besar, dan sangat besar [46].

3. Hasil

3.1. Karakteristik Peserta

Studi observasional dan longitudinal ini melibatkan 23 pasien yang didiagnosis dengan COVID-19 yang dirawat di ICU karena komplikasi parah. Sampel darah dikumpulkan setiap 2 minggu selama total 13 minggu atau sampai hasil akhir diperoleh. Tidak ada satu pun peserta dalam penelitian ini yang dilaporkan menerima vaksinasi COVID-19 pada saat terinfeksi dan dirawat di rumah sakit. Karakteristik sosiodemografi dan klinis utama dari semua peserta dirangkum dalam Tabel 1.

Tabel 1. Data demografi dan klinis seluruh peserta dari kelompok Exitus dan kelompok Survival yang direkrut untuk penelitian ini.

Usia rata-rata kelompok Exitus adalah 65.0 tahun (IQR 62.0–69.0), sedangkan usia rata-rata kelompok Survival adalah 63.{{7} } tahun (IQR 59.0–68,5). Sebagian besar peserta (73,9%) adalah laki-laki, dan 65,2% memiliki setidaknya satu penyakit penyerta. Penyakit penyerta utama adalah dislipidemia (52,2%), hipertensi (39,1%), dan diabetes melitus (26,1%). Sebagian besar pasien menerima kortikoid (82,6%), antibiotik (82,6%), dan antikoagulan (82,6%) sebagai pengobatan standar. Mereka juga menerima pengobatan lain seperti tocilizumab (17,4%) dan remdesivir (8,7%). Tanda dan gejala yang paling umum adalah pneumonia (1{34}}0%), batuk dan dahak (87.0%), dispnea (87.0%), dan demam (87.0%). Selama dirawat di ICU, 12 pasien (92,3%) dari kelompok Exitus dan 10 pasien (100%) dari kelompok Survival memerlukan ventilasi mekanis invasif. Kami tidak menemukan perbedaan yang signifikan antara kedua kelompok dalam data sosiodemografi dan klinis. Kami juga menganalisis data biokimia darah pada awal (sampel pertama) antara kedua kelompok, dan kami juga tidak menemukan perbedaan yang signifikan antar kelompok. Informasi lebih rinci tentang data klinis, rawat inap, dan data biokimia darah setiap peserta ditunjukkan pada Tabel Tambahan S1 dan S2.

3.2. Lama Tinggal di Rumah Sakit dan ICU

Median lama rawat inap di rumah sakit adalah 59.0 (IQR 36.0–100.0) hari pada kelompok Exitus dan 73. 0 (IQR 44,5–90.{{20}}) hari dalam kelompok Survival (Gambar 1A). Median lama rawat inap di ICU adalah 49,0 (IQR 25,5–82,0) hari pada kelompok Exitus dan 44,0 (IQR 25,0–66,5) hari pada kelompok Survival (Gambar 1B). Tidak ada perbedaan signifikan dalam parameter yang ditemukan antara kedua kelompok.

Gambar 1. Lama rawat inap di rumah sakit dan ICU. Lama rawat inap di rumah sakit (A) dan ICU (B) (hari) pada individu dengan COVID kritis-19 yang dibagi menjadi dua kelompok berdasarkan hasil akhir: hasil fatal, kelompok Keluar (titik terisi); atau pemulihan dan keluar dari rumah sakit, Kelompok bertahan hidup (titik kosong). Setiap titik berhubungan dengan satu individu, dan garis vertikal mewakili mean ± standard error of the mean (SEM). Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U.

3.3. Kadar Limfosit Darah Perifer

Individu dari kelompok Exitus menunjukkan limfopenia (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Gambar 2. Jumlah limfosit darah tepi selama rawat inap karena COVID kritis-19. Jumlah limfosit (sel/mm3) ditentukan setiap 2 minggu selama total 13 minggu atau sampai hasil akhir pada sampel darah peserta kelompok Exitus (titik terisi) dan Survival (titik kosong). Ambang batas limfopenia ditunjukkan pada 1000 sel/mm3 dengan garis putus-putus. Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, uji Wilcoxon U digunakan.

3.4. Aktivitas Sitotoksik PBMC terhadap Sel Vero E6 yang Terinfeksi SARS-CoV Pseudotip-2

Kami mengevaluasi aktivitas sitotoksik PBMC pasien yang dirawat di rumah sakit dalam sampel longitudinal dengan mengukur aktivasi caspase-3 dalam lapisan tunggal sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV-2 pseudotipe setelah kultur bersama selama 1 jam ( rasio 1:1). Kapasitas sitotoksik PBMC yang diisolasi dari individu dalam kelompok Exitus tidak berubah secara signifikan selama rawat inap, dan tetap rendah hingga berakibat fatal (Gambar 3). Aktivitas sitotoksik ini tidak meningkat secara signifikan ketika sel-sel ini distimulasi dengan IL-15 selama 48 jam. Pada kelompok Survival, aktivitas sitotoksik PBMC meningkat 2.69-kali lipat (p=0.0234; Cohen's d=1.12) pada sampel basal (t {{17} }) dibandingkan dengan kelompok Exitus, dan terus meningkat hingga Minggu ke 6 rawat inap. Peningkatan ini menunjukkan signifikansi statistik dalam perbandingan antar kelompok pada Minggu ke-4 (5.58-kali lipat; p=0.0290; Cohen's d=1.28). Mulai Minggu ke 6 dan seterusnya, aktivitas sitotoksik menurun pada kelompok Survival hingga keluar dari rumah sakit, yang sejalan dengan penurunan jumlah limfosit pada minggu yang sama saat dirawat di rumah sakit (lihat Gambar 2). Pengobatan dengan IL-15 meningkatkan rata-rata 2.30-aktivitas sitotoksik PBMC individu dari kelompok Survival di semua sampel selama masa tindak lanjut. Setelah 4 minggu dirawat di rumah sakit, aktivitas sitotoksik yang diinduksi IL-15-meningkat 6.18-kali lipat (p=0.0303; Cohen's d=1.05) pada PBMC di rumah sakit individu dari kelompok Survival.

Gambar 3. Sitotoksisitas seluler langsung PBMC yang diisolasi dari pasien rawat inap dengan COVID kritis-19. Kapasitas sitotoksik PBMC dari individu kelompok Keluar (titik terisi) dan Kelangsungan Hidup (titik kosong) diukur dengan mengukur aktivitas caspase-3 dalam lapisan tunggal sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV pseudotipe-2 setelah kultur bersama (1:1) selama 1 jam dalam kondisi basal (garis abu-abu) atau setelah perawatan dengan IL-15 selama 48 jam (garis hitam). Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, uji Wilcoxon U digunakan.

3.5. Kadar Sel NK dan NKT

Tingkat sel dengan fenotip sitotoksik dianalisis dalam PBMC yang dikultur bersama dengan sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV pseudotipe-2. Kami tidak menemukan perbedaan yang signifikan antara tingkat sel dengan fenotip NK (CD3-CD56+) antara kedua kelompok individu, bahkan setelah pengobatan dengan IL-15 (Gambar 4A). Ekspresi penanda degranulasi CD107a pada permukaan sel-sel ini tetap tidak berubah pada individu dari kelompok Exitus. Meskipun ekspresi ini terus meningkat dari Minggu ke-4 hingga keluar dari rumah sakit pada kelompok Survival, perbedaan ini tidak mencapai signifikansi statistik jika dibandingkan dengan kelompok Exitus (Gambar 4B). Pengobatan dengan IL-15 tidak secara signifikan mengubah ekspresi CD107a dalam sel-sel ini. Mulai Minggu ke-4, PBMC dari individu kedua kelompok menunjukkan peningkatan kadar sel dengan fenotip NKT (CD3+CD56+) sebesar 4.17-kali lipat lebih tinggi pada PBMC dari individu dari kelompok Exitus pada Minggu ke-6, meskipun perbedaan ini tidak mencapai signifikansi (p=0.0571; Cohen's d=3.15) (Gambar 5A). Peningkatan ini sedikit lebih tinggi ketika sel diberi IL-15 pada kedua kelompok, meskipun data juga tidak mencapai signifikansi statistik (Gambar 5A). Ekspresi CD107a tidak berubah secara signifikan antara kedua kelompok atau setelah pengobatan dengan IL-15 (Gambar 5B).

Gambar 4. Tingkat sel NK di PBMC dari individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID kritis-19. (A) Tingkat total sel NK (CD3-CD56+) dan (B) ekspresi penanda degranulasi CD107a dalam sel-sel ini dievaluasi dalam PBMC dalam kondisi basal (garis abu-abu) atau setelah pengobatan dengan IL-15 selama 48 jam (garis hitam) setelah kultur bersama (1:1) dengan sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV-2 pseudotipe selama 1 jam. Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, uji Wilcoxon U digunakan.

Gambar 5. Tingkat sel NKT di PBMC dari individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID kritis-19. Tingkat total sel NKT (CD3+CD56+) (A) dan ekspresi penanda degranulasi CD107a dalam sel ini (B) dievaluasi dalam kondisi basal (garis abu-abu) atau setelah pengobatan dengan IL{ {5}} selama 48 jam (garis hitam) setelah kultur bersama (1:1) selama 1 jam dengan sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV pseudotipe-2. Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, uji Wilcoxon U digunakan.

3.6. Tingkat CD8+ Sel T

Jumlah CD8 meningkat 2.07-kali lipat (p=0.0409; Cohen's d=0.94) pada sampel dasar (t=0) dari kelompok Exitus sebagai perbandingan dengan kelompok Survival, dan tingkat ini tetap stabil hingga berakibat fatal (Gambar 6A). IL-15 tidak menghasilkan efek menguntungkan yang signifikan pada tingkat populasi sel ini. Pada kelompok Survival, sel T CD8+ berkurang rata-rata 1.51-kali lipat dibandingkan dengan kelompok Exitus (Gambar 6A). Ekspresi CD107a menurun 1.53-kali lipat (p=0.0313) pada Minggu ke 4 pada sel T CD8+ dari individu kelompok Exitus, dan tetap tidak berubah hingga kematian hasil. Pengobatan dengan IL-15 menunjukkan sedikit manfaat dalam ekspresi penanda degranulasi ini, namun perbedaan ini tidak signifikan (Gambar 6B). Pada kelompok Survival, juga terjadi penurunan ekspresi CD107a pada sel T CD8+ pada Minggu ke-4, dan kemudian terjadi peningkatan, namun tidak ada signifikansi yang dicapai sebelum atau sesudah pengobatan dengan IL{{26 }} (Gambar 6B).

Gambar 6. Tingkat sel CD8+ T dalam PBMC dari individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID kritis-19. (A) Tingkat total sel T CD8+ (CD3+CD8+) dan (B) ekspresi penanda degranulasi CD107a dalam sel-sel ini dievaluasi dalam PBMC dalam kondisi basal (abu-abu garis) atau setelah pengobatan dengan IL-15 selama 48 jam (garis hitam) setelah kultur bersama (1:1) dengan sel Vero E6 yang terinfeksi SARS-CoV-2 pseudotipe selama 1 jam. Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, uji Wilcoxon U digunakan.

3.7. Tingkat Penanda Kelelahan

Tingkat ekspresi penanda kelelahan imun PD-1 (Protein kematian sel terprogram) dan TIGIT (imunoreseptor sel T dengan domain Ig dan ITIM) dianalisis dengan flow cytometry dalam sel T CD4+ dan sel sitotoksik dari semua peserta. Sampel yang diperoleh pada saat masuk rumah sakit (t=0) hingga Minggu ke 6 rawat inap dianalisis, karena kurangnya sampel yang tersedia setelah waktu tersebut. Sel T CD4+ dan CD8+ dari individu kelompok Exitus menunjukkan kadar PD-1 yang meningkat secara signifikan sebesar 1,72 (p=0.0095; Cohen's d {{ 11}}.87)- dan 2.92-kali lipat (p=0.0317; Cohen's d=2.07) masing-masing setelah 4 minggu dirawat di rumah sakit, dibandingkan dengan individu dari Kelompok bertahan hidup (Gambar 7A, B, grafik kiri). Dalam sel NKT, kadar TIGIT meningkat secara signifikan sejak masuk rumah sakit hingga 6 minggu rawat inap pada individu dari kelompok Exitus, dan kadar ini meningkat 1.76-kali lipat (p=0.0357 ; Cohen's d=0.33) setelah 2 minggu dirawat di rumah sakit, dibandingkan dengan kelompok Survival (Gambar 7C, grafik kanan).

Tidak ada perbedaan signifikan antara kelompok yang diamati dalam tingkat ekspresi penanda kelelahan dalam sel NK (Gambar 7D).

Gambar 7. Tingkat ekspresi penanda kelelahan pada PBMC dari individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID kritis-19. Tingkat ekspresi PD-1 dan TIGIT dalam sel T CD4+ (A), sel T CD8+ (B), sel NKT (C), dan sel NK (D). Setiap titik sesuai dengan rata-rata data, dan garis vertikal mewakili SEM. Signifikansi statistik antar kelompok dihitung menggunakan uji Mann-Whitney U, dan dalam kelompok, ANOVA digunakan.

3.8. Kuantifikasi RNAemia SARS-CoV-2 dalam Plasma

Kehadiran RNA dari SARS-CoV-2 dianalisis dalam plasma semua individu dalam sampel basal (t=0), dan tidak ada hasil positif yang diperoleh pada peserta mana pun, dengan nilai Cq di bawah batas deteksi positif 45 siklus.

4. Diskusi

Infeksi SARS-CoV-2 dapat menyebabkan beberapa gejala klinis COVID-19 yang berkisar dari infeksi tanpa gejala hingga penyakit parah, kritis, atau bahkan fatal [4]. Meskipun vaksinasi umum pada masyarakat telah banyak mengurangi bentuk penyakit yang parah, kemunculan varian baru SARS-CoV-2 meningkatkan jumlah orang yang mengidap COVID kritis-19 dan perlu dicegah dirawat di rumah sakit karena infeksi terobosan [47,48]. Oleh karena itu, pengembangan strategi pencegahan dan terapi yang dapat mencegah berkembangnya bentuk kritis COVID-19 dan kematian pada pasien rawat inap masih menjadi prioritas. Telah dijelaskan bahwa orang lanjut usia dengan penyakit penyerta memiliki risiko lebih tinggi terkena COVID yang parah dan kritis{{1{{30}}}} [49]. Di Spanyol, prediktor kematian independen paling signifikan akibat COVID-19 adalah pria berusia di atas 50 tahun dengan penyakit penyerta terkait seperti hipertensi dan diabetes [36]. Dalam penelitian kami, sebagian besar peserta dari kedua kelompok menunjukkan karakteristik ini, tanpa perbedaan signifikan di antara mereka dalam data sosiodemografi, klinis, atau biokimia yang dapat mempengaruhi tingkat keparahan penyakit atau hasil yang fatal. Faktanya, kedua kelompok menunjukkan peningkatan kadar parameter biokimia yang dikaitkan dengan risiko lebih tinggi terhadap dampak buruk COVID-19, seperti protein C-reaktif (CRP) dan laktat dehidrogenase (LDH) [50–56 ]. Di sisi lain, meskipun telah dilaporkan bahwa individu dengan COVID-19 parah mungkin memiliki SARS-CoV-2 RNAnemia [54], yang dikaitkan dengan peningkatan risiko kematian [55], tidak ada peserta dalam penelitian kami yang menunjukkan RNA yang terdeteksi dalam serum, jadi kami tidak dapat menentukan korelasi antara viremia yang terdeteksi dan hasil yang fatal. Terakhir, COVID-19 menunjukkan lama rawat inap dan angka kematian yang lebih tinggi dibandingkan dengan penyakit menular lain yang memerlukan rawat inap di ICU, seperti pneumonia yang didapat dari komunitas (CAP) atau sepsis [56], dan diperkirakan pada tahun 35 rata-rata hari bagi individu yang dirawat di rumah sakit di Spanyol selama gelombang pandemi pertama [36]. Dalam penelitian kami, median lama rawat inap di rumah sakit adalah serupa antara kelompok Exitus dan Survival (masing-masing 59,0 dan 73,0 hari), dan 50% dari seluruh peserta tinggal lebih dari 40 hari di ICU. Oleh karena itu, faktor diferensial lain harus dipertimbangkan untuk menjelaskan hasil fatal pada kelompok Exitus dan pemulihan pada kelompok Survival.

Manfaat cistanche tubulosa-memperkuat sistem kekebalan tubuh

Limfopenia juga dianggap sebagai faktor risiko keparahan penyakit yang berhubungan dengan lama rawat inap di rumah sakit yang lebih lama [57]. Dalam penelitian kami, 73,9% peserta kelompok Exitus dan Survival menunjukkan jumlah limfosit yang rendah. Namun, tingkat limfosit total rata-rata lebih tinggi pada peserta kelompok Survival, dibandingkan dengan kelompok Exitus. Hal ini sesuai dengan pengamatan sebelumnya bahwa orang-orang yang meninggal karena COVID-19 mengembangkan limfopenia yang lebih parah dari waktu ke waktu dibandingkan dengan mereka yang bertahan hidup [58] dan bahwa limfosit ini biasanya menunjukkan fenotipe yang lemah, yang mengakibatkan imunodefisiensi bertahap [15,16]. Karena respons antivirus sitotoksik yang efektif sangat penting untuk mengendalikan infeksi virus, termasuk SARS-CoV-2 [17], pemulihan kekebalan sangat penting untuk pemulihan dari COVID-19. Percepatan pemulihan kekebalan ini sangat bergantung pada ekspansi limfosit homeostatis di perifer, yang bisa menjadi strategi yang baik untuk meningkatkan hasil individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID yang parah-19 [58]. IL-15 adalah sitokin yang diperlukan untuk fungsi dan homeostasis sel T CD8+, sel NK, dan NKT [29], dan telah diusulkan sebagai pengobatan imunomodulator baru untuk beberapa penyakit seperti kanker dan infeksi HIV [26,30,35,59]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami mengevaluasi apakah pengobatan in vitro dengan IL-15 dapat meningkatkan respons sitotoksik pada PBMC individu yang dirawat di rumah sakit dengan COVID yang parah dan kritis-19 seiring perkembangan infeksi, untuk menentukan validitasnya sebagai kandidat untuk merangsang pemulihan kekebalan selama COVID-19. Dengan pengujian dosis, kami mengamati peningkatan keseluruhan respons sitotoksik terhadap sel target yang terinfeksi SARS-CoV pseudotipe-2 dalam PBMC dari individu yang selamat dari COVID-19 rata-rata setelah 44 hari dirawat di rumah sakit di ICU. Respons sitotoksik ini secara efektif meningkat rata-rata 2.3-kali lipat setelah pengobatan dengan IL-15 di semua sampel yang dikumpulkan selama masa tindak lanjut, dengan Minggu ke-6 rawat inap menjadi titik balik penghitungan jumlah limfosit dan aktivitas sitotoksik mulai menurun hingga keluar dari rumah sakit. Meskipun memiliki karakteristik sosiodemografi, klinis, dan biokimia yang serupa serta telah dirawat di rumah sakit dalam jangka waktu yang hampir sama (total 59 hari, dimana 49 hari di antaranya berada di ICU), kelompok individu yang tidak selamat dari COVID{{34} } menunjukkan PBMC yang tidak responsif terhadap keberadaan sel target yang terinfeksi, bahkan ketika sel tersebut distimulasi dengan IL-15. Tingkat total limfosit berada di atas ambang batas limfopenia pada individu dari kelompok ini sejak Minggu ke-2 rawat inap. Namun, tingkat ini tidak meningkat secara signifikan selama masa rawat inap, dan tidak ada tanggapan antivirus efektif yang terdeteksi, bahkan dengan adanya IL-15 pada dosis yang telah diuji. Tidak adanya respons terhadap IL-15 telah dijelaskan untuk infeksi kronis lainnya seperti human immunodeficiency virus (HIV), virus hepatitis C (HCV), virus hepatitis B (HBV), dan human T limfotropic virus (HTLV), di mana kelelahan imun dapat mempengaruhi ekspresi reseptor spesifik IL-15, CD122, dalam sel T CD8+ [60], menjadikannya tidak responsif terhadap stimulus homeostatis ini. Kelelahan kekebalan yang merupakan karakteristik COVID-19 tidak hanya diamati pada sel T CD8+ tetapi juga pada jenis sel sitotoksik lainnya seperti sel NK dan NKT [15,16]. Oleh karena itu, tidak adanya respons terhadap IL-15 pada PBMC dari kelompok Exitus mungkin terkait dengan peningkatan kelelahan kekebalan yang tidak dapat diatasi dengan pengobatan IL-15 saja pada dosis yang telah diuji. Hal ini juga telah diamati dalam uji klinis Fase I di mana monoterapi dengan IL-15 tidak efektif meskipun terdapat ekspansi besar sel sitotoksik [31,32]. Oleh karena itu, pengobatan kostimulasi lain akan diperlukan untuk menginduksi respons yang efektif pada individu-individu ini, seperti inhibitor pos pemeriksaan imunologi atau antibodi monoklonal yang menargetkan sel yang terinfeksi, untuk meningkatkan sitotoksisitas seluler yang bergantung pada antibodi (ADCC).

Kami juga menentukan jenis sel yang terutama terlibat dalam pengembangan respons sitotoksik yang ditingkatkan ini pada kelompok individu yang selamat dari COVID-19. Telah dibuktikan bahwa keberadaan sel T CD8+ yang fungsional sangat penting untuk melindungi model hewan dari perkembangan COVID yang parah-19 [61,62]. Selain itu, tidak adanya respons sitotoksik yang dimediasi oleh CD8-telah dianggap sebagai faktor penting dalam peningkatan kerentanan orang lanjut usia untuk terkena COVID yang parah atau kritis-19 [63]. Yang mengejutkan, kadar sel T CD8+ adalah 2.07-kali lipat (p=0.0409) lebih tinggi pada kelompok Exitus pada saat dirawat di rumah sakit (t=0) , dan mereka tetap ditingkatkan sampai hasil yang fatal, dibandingkan dengan kelompok Survival. Meskipun individu dari kelompok Exitus menunjukkan jumlah limfosit sedikit di atas ambang batas limfopenia, tingkat ini hampir tidak berubah selama mereka dirawat di rumah sakit. Selain itu, telah dijelaskan bahwa limfopenia dapat menyebabkan pola penekanan dan aktivasi yang terjadi bersamaan di mana terdapat hilangnya sel T di perifer bersamaan dengan proliferasi intensif kumpulan sel T CD8+ [64,65]. Hal ini menyebabkan sedikit peningkatan kadar sel T CD8+ yang diamati pada PBMC peserta dari kelompok Exitus sejak Minggu ke-6 rawat inap dan seterusnya, meskipun kadar total limfosit tetap tidak berubah dan berada di atas ambang limfopenia, juga menunjukkan potensi pengurangan sel T CD{19}}. Namun, sel T CD8+ ini menunjukkan aktivitas sitotoksik yang rendah, sebagaimana ditentukan oleh rendahnya ekspresi penanda degranulasi CD107a pada permukaan sel, sedangkan ekspresi penanda ini meningkat pada sel T CD8+ dari peserta kelompok Survival dari Minggu 4 dan seterusnya. Ekspresi CD107a dianggap sebagai biomarker untuk mengevaluasi kapasitas sitotoksik [66], dan telah dijelaskan bahwa ekspresi CD107a berkurang pada permukaan sel yang diisolasi dari individu dengan COVID-19, dibandingkan dengan donor sehat yang tidak terinfeksi [15 ].

Oleh karena itu, peningkatan ekspresi CD107a pada permukaan sel T CD8+ setidaknya dapat menjelaskan sebagian kontribusi sel-sel ini terhadap peningkatan aktivitas sitotoksik yang diamati pada PBMC peserta dari kelompok Survival. Selain itu, kami mengamati peningkatan ekspresi penanda kelelahan PD-1 pada sel T CD4+ dan CD8+ dari individu kelompok Exitus, yang juga dapat berkontribusi pada berkurangnya sitotoksik. aktivitas dan respons terhadap IL-15 sel-sel ini. Populasi sel lain mungkin terlibat dalam aktivitas sitotoksik terhadap sel yang terinfeksi SARS-CoV-2-pseudotipe, seperti sel NK dan NKT. Seperti yang terjadi pada infeksi akut parah lainnya, sel NK dapat direkrut ke lokasi infeksi SARS-CoV-2 [67], yang menjelaskan berkurangnya jumlah sel NK yang bersirkulasi yang diamati pada semua peserta. Selain itu, badai sitokin yang berkembang selama COVID-19 yang parah dan kritis-19 dapat mengakibatkan status disfungsi sel NK yang akan mengekspresikan reseptor pos pemeriksaan penghambatan tingkat tinggi seperti NKG2A atau PD-1 [68]. Dalam penelitian kami, kadar sel NK serupa antara kedua kelompok hingga Minggu ke-6, di mana peserta kelompok Survival menunjukkan peningkatan progresif hingga keluar dari rumah sakit. Hal ini berkorelasi dengan peningkatan ekspresi CD107a, yang telah dikaitkan dalam sel NK dengan peningkatan sekresi sitokin dan peningkatan lisis sel target [7,69], meskipun persentase sel NK yang mengekspresikan penanda aktivasi seperti CD107a telah digambarkan sebagai lebih rendah pada individu dengan COVID-19 dibandingkan dengan kontrol yang sehat [70]. Sebaliknya, meskipun kadar sel NKT meningkat pesat pada kelompok Survival mulai Minggu ke-6 dan seterusnya, ekspresi CD107a hampir tidak berubah, sementara mereka menunjukkan peningkatan kadar penanda kelelahan TIGIT pada permukaan sel yang terus meningkat hingga Minggu ke-6 rawat inap. . Salah satu keterbatasan terpenting penelitian kami adalah berkurangnya ukuran sampel. Namun demikian, signifikansi statistik dicapai antar kelompok dalam beberapa parameter penting yang juga menunjukkan besaran efek yang besar atau sangat besar ketika perbedaan gabungan antar kelompok dihitung.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

5. Kesimpulan

Kesimpulannya, kontribusi paling penting dari penelitian ini dalam memerangi imunopatologi yang disebabkan oleh infeksi SARS-CoV-2 adalah konfirmasi bahwa gangguan kapasitas antivirus pada PBMC tampaknya menjadi faktor penting dalam perkembangan menjadi COVID yang fatal{ {2}}, bahkan melebihi faktor sosiodemografi, klinis, dan biokimia lainnya. Oleh karena itu, penggunaan perawatan imunomodulator yang dapat meningkatkan sitotoksisitas dapat berkontribusi terhadap hasil positif selama rawat inap karena COVID kritis-19. Peningkatan aktivitas sitotoksik yang dimediasi oleh IL-15 pada individu dari kelompok Survival kemungkinan besar tidak bergantung pada peningkatan kadar sel sitotoksik tetapi pada imunokompeten sel-sel ini untuk merespons stimulus tersebut. Oleh karena itu, pemantauan ekspresi penanda kelelahan dan respons terhadap rangsangan homeostatis seperti IL-15 dari populasi sel pada individu yang dirawat di rumah sakit dapat berguna sebagai penanda prediktor hasil fatal untuk memulai tindakan tambahan untuk mencegah dia. Oleh karena itu, penelitian observasional ini merupakan bukti konsep bahwa penggunaan IL-15 pada individu yang dirawat di rumah sakit karena COVID-19 dapat meningkatkan respons imun antivirus, meskipun stimulus ini saja tidak akan efektif pada individu yang tidak responsif terhadap virus. sel karena kelelahan imun atau gangguan jalur pensinyalan IL-15R, yang penting dalam pencegahan kelelahan [71], bahkan ketika sel tersebut menunjukkan jumlah limfosit di atas ambang limfopenia. Diperlukan lebih banyak penelitian dengan populasi yang lebih besar untuk mengevaluasi kombinasi peningkatan dosis IL-15 dengan agen imunomodulator lain seperti penghambat pos pemeriksaan kekebalan atau antibodi monoklonal yang menargetkan sel yang terinfeksi untuk membantu memulihkan dan meningkatkan respons antivirus selama bentuk kritis COVID -19.

Referensi

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, DIA; Clements, TP Panduan untuk COVID-19: Pandemi global yang disebabkan oleh virus corona baru SARS-CoV-2. FEBS J.2020, 287, 3633–3650. [Ref Silang] [PubMed]

2. Dasbor Virus Corona (COVID-19) WHO. Tersedia online: https://covid19.who.int/ (diakses pada 18 Oktober 2022).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Rocco, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Rocco, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; dkk. Fase eksponensial pandemi COVID-19 di Italia tengah: Jalur perawatan terpadu. Int. J.Lingkungan. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Penggemar, G.; Xu, J.; Gu, X.; dkk. Gambaran klinis pasien yang terinfeksi virus corona baru 2019 di Wuhan, Tiongkok. Lancet 2020, 395, 497–506. [Ref Silang] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Penyakit kronis yang mendasari dan infeksi-19 COVID: Tinjauan mutakhir. Jundishapur J. Dis Kronis. Peduli 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM Dinamika global kelompok SARS-CoV dan hubungannya dengan epidemiologi COVID. Sains. Rep.2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. Manifestasi hematologi dan komplikasi COVID-19. Adv. Klinik. Contoh. medis. 2021, 30, 101–107. [Referensi Silang]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. Badai sitokin dan COVID-19. J.Med. virus. 2021, 93, 250–256. [Referensi Silang]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Sindrom hemofagositik dewasa. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [Referensi Silang]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Coklat, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; atas nama HLH Across Specialty Collaboration, Inggris. Lintas Spesialisasi. COVID-19: Pertimbangkan sindrom badai sitokin dan imunosupresi. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [Referensi Silang]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. Ekspresi gen reseptor sel SARS-CoV-2 ACE2 di berbagai jaringan manusia. Menulari. Dis. Kemiskinan 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Badai sitokin pada COVID-19: Dari infeksi virus hingga respons imun, diagnosis, dan terapi. Int. J.Biol. Sains. 2022, 18, 459–472. [Ref Silang] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Kehidupan dan kematian sel T teraktivasi: Apa bedanya dengan sel T naif? Depan. imunol. 2017, 8, 1809. [Ref Silang] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Limfopenia pada penyakit virus corona yang parah-2019 (COVID-19): Tinjauan sistematis dan meta-analisis. J. Perawatan Intensif 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Lagu, G.; Liu, S.; Matahari, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Kelelahan fungsional limfosit antivirus pada pasien COVID-19. Sel. mol. imunol. 2020, 17, 533–535. [Referensi Silang]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; dkk. PD-1-yang mengekspresikan sel T CD8+ spesifik SARS-CoV-2-tidak habis, namun berfungsi pada pasien dengan COVID-19. Imunitas 2021, 54, 44–52. [Referensi Silang]

17. Vigon, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Korona, M.; Saez-Marin, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; dkk. Gangguan Respons Sitotoksik pada PBMC dari Pasien COVID-19 Masuk ICU: Biomarker untuk Memprediksi Keparahan Penyakit. Depan. imunol. 2021, 12, 665329. [Referensi Silang]

18. SIAPA. Pernyataan Sementara tentang Pertimbangan Pengambilan Keputusan untuk Penggunaan Vaksin COVID-19 Varian yang Diperbarui. Tersedia online: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of varian-updated-covid{{15} }vaksin (diakses pada 15 Agustus 2022).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Kabar terkini satu tahun mengenai pandemi-19 COVID: Di mana kita sekarang? Akta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Patogenesis imun molekuler dan diagnosis COVID-19. J.Pharm. Dubur. 2020, 10, 102–108. [Referensi Silang]

21. Grup KKR. Deksametason pada pasien COVID yang dirawat di rumah sakit-19. N.Inggris. J.Med. 2021, 384, 693–704. [Referensi Silang]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Li, P.; Wang, J.; Matahari, S.-C. Deubiquitinase Otub1 mengontrol aktivasi sel T CD8+ dan sel NK dengan mengatur priming yang dimediasi IL-15-. Nat. imunol. 2019, 20, 879–889. [Referensi Silang]

23. Parums, DV Status terkini pengobatan obat antivirus oral untuk infeksi SARS-CoV-2 pada pasien yang tidak dirawat di rumah sakit. medis. Sains. Pantau. 2022, 28, e935952-1. [Ref Silang] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. Pil antivirus dapat mengubah arah pandemi. Saya. Asosiasi. Adv. Sains. 2021, 12, 799–800. [Ref Silang] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Menargetkan pos pemeriksaan sel NK untuk imunoterapi kanker. Saat ini. Pendapat. imunol. 2017, 45, 73–81. [Ref Silang] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interleukin 15: Sitokin kunci untuk imunoterapi. Faktor Pertumbuhan Sitokin Rev. 2016, 31, 49–59. [Referensi Silang]

27. Kabinger, F.; Masih, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokik, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Mekanisme mutagenesis SARS-CoV-2 yang diinduksi molnupiravir. Nat. Struktur. mol. biologi. 2021, 28, 740–746. [Ref Silang] [PubMed]

28. Digantung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Terapi Nirmatrelvir/Ritonavir Oral untuk COVID-19: Fajar dalam Kegelapan? Antibiotik 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Imunobiologi kompleks IL-15/IL-15R sebagai agen antitumor dan antivirus. Faktor Pertumbuhan Sitokin Rev. 2017, 38, 10–21. [Referensi Silang]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Efek biologis IL-15 pada sel kekebalan dan potensinya untuk pengobatan kanker. Int. Imunofarmakol. 2021, 91, 107318. [Referensi Silang]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 dalam Kombinasi Imunoterapi Kanker. Depan. imunol. 2020, 11, 868. [Referensi Silang]

32. Dubois, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Muller, JR; Shih, JH; dkk. IL-15 jangka pendek yang diberikan sebagai infus berkelanjutan menyebabkan ekspansi besar-besaran sel NK yang efektif: Implikasi terhadap terapi kombinasi dengan antibodi antitumor. J. Imun lainnya. Kanker 2021, 9, e002193. [Referensi Silang]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; dkk. IL15 melalui Infus Intravena Berkelanjutan pada Pasien Dewasa dengan Tumor Padat dalam Subset Sel NK Dramatis yang Diinduksi Uji Coba Fase I. Klinik. Res Kanker. 2019, 25, 4945–4954. [Referensi Silang]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, Bpk; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; dkk. Studi klinis fase 1 pertama pada manusia dari kompleks superagonis IL-15 ALT-803 untuk mengobati kekambuhan setelah transplantasi. Darah Am. J.Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [Ref Silang] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; dkk. Keamanan dan dampak virologi dari superagonis IL-15 N-803 pada orang yang hidup dengan HIV: Uji coba fase 1. Nat. medis. 2022, 28, 392–400. [Ref Silang] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratala, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; dkk. Karakteristik dan prediktor kematian di antara 4035 pasien COVID yang dirawat di rumah sakit secara berturut-turut-19 di Spanyol. Klinik. Mikrobiol. Menulari. 2020, 26, 1525–1536. [Referensi Silang]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. Strategi baru berdasarkan virus rekombinan sebagai alat untuk menilai kerentanan obat terhadap human immunodeficiency virus tipe 1. J. Med. virus. 2007, 79, 127–137. [Ref Silang] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Li, P.; Pertengahan.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; dkk. Karakterisasi lonjakan glikoprotein SARS-CoV-2 pada masuknya virus dan reaktivitas silang imunnya dengan SARS-CoV. Nat. Komunitas. 2020, 11, 1–12. [Ref Silang] [PubMed]

39.Volz, E.; Bukit, V.; McCrone, JT; Harga, A.; Jorgensen, D.; O'Toole, Á.; Gerbang Selatan, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; dkk. Mengevaluasi dampak mutasi lonjakan SARS-CoV-2 D614G terhadap penularan dan patogenisitas. Sel 2021, 184, 64–75. [Referensi Silang]

40. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Pencuri, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; dkk. Melacak perubahan lonjakan SARS-CoV-2: Bukti bahwa D614G meningkatkan infektivitas virus COVID-19. Sel 2020, 182, 812–827. [Referensi Silang]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Peran penting jalur IL-15–PI3K–mTOR dalam fungsi efektor sel pembunuh alami. Depan. imunol. 2014, 5, 187. [Referensi Silang]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Brasi, L.; Adamina, M.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; dkk. Respons Diferensial terhadap IL-2, IL-7, dan IL-15 Sitokin Rantai Reseptor Umum oleh Sel T Naif Darah Periferal atau Memori Sitotoksik CD8+ Spesifik Antigen dari Donor Sehat dan Pasien Melanoma. J. Imun lainnya. 2009, 32, 252–261. [Referensi Silang]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brunink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; dkk. Deteksi virus corona baru (2019-nCoV) 2019 dengan RT-PCR waktu nyata. Pengawasan Euro 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. SIAPA. Pengujian Diagnostik SARS-CoV-2: Panduan Sementara, 11 September 2020; Organisasi Kesehatan Dunia: Jenewa, Swiss, 2020.

45. Becker, LA Ukuran Efek (ES); Universitas Colorado Colorado Springs: Colorado Springs, CO, AS, 2000.

46. ​​Cohen, J. Analisis Kekuatan Statistik untuk Ilmu Perilaku; Routledge: Abingdon, Inggris, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Iga, saya.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Pasien rawat inap dengan terobosan COVID-19: Gambaran klinis dan prediktor hasil yang buruk. Int. J. Menginfeksi. Dis. 2022, 118, 89–94. [Ref Silang] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Taman, Bank Dunia; Choe, PG; Lagu, K.-H.; Kim, ES; Taman, S.-W. Terobosan COVID-19 Infeksi pada Periode Dominan Varian Delta: Diperlukan Perawatan Individual Berdasarkan Status Vaksinasi. J. Kedokteran Korea. Sains. 2022, 37, e252. [Ref Silang] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdullah, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 dan penyakit penyerta: Dampak buruk pada pasien yang terinfeksi. J. Menginfeksi. Kesehatan Masyarakat 2020, 13, 1833–1839. [Ref Silang] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Halo, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 dan sistem kardiovaskular: Tinjauan komprehensif. J.Hum. Hipertensi. 2021, 35, 4–11. [Referensi Silang]

51. Zhang, JJ; Daun bawang; Ang, LW; Leo, YS; Muda, BE Faktor risiko penyakit parah dan kemanjuran pengobatan pada pasien yang terinfeksi COVID-19: Tinjauan sistematis, meta-analisis, dan analisis meta-regresi. Klinik. Menulari. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [Referensi Silang]

52. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. Peran biomarker dalam diagnosis COVID-19–Tinjauan sistematis. Ilmu Kehidupan. 2020, 254, 117788. [Referensi Silang]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrilove, JL; Sacks, H. Biomarker dan hasil rawat inap-19 COVID: Tinjauan sistematis dan meta-analisis. BMJ Terbukti. Berbasis Med. 2021, 26, 107–108. [Referensi Silang]

54. Li, Y.; Schneider, SAYA; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Orang bukan Yahudi, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gushterova, saya.; Khanna, HK; dkk. Viremia-2 SARS-CoV dikaitkan dengan jalur proteomik yang berbeda dan memprediksi hasil-19 COVID. J.Klin. Selidiki. 2021, 131, e148635. [Referensi Silang]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; dkk. Deteksi RNA SARS-CoV-2 dalam serum dikaitkan dengan peningkatan risiko kematian pada pasien COVID-19 yang dirawat di rumah sakit. Sains. Rep.2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI Perjalanan klinis dan hasil pasien sakit kritis dengan infeksi COVID-19: Tinjauan sistematis. Klinik. Mikrobiol. Menulari. 2021, 27, 47–54. [Ref Silang] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; dkk. Faktor risiko yang terkait dengan tingkat keparahan penyakit dan lama rawat inap di rumah sakit pada pasien-19 COVID. J. Menginfeksi. 2020, 81, e95–e97. [Referensi Silang]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, imunobiologi sel T RC dan badai sitokin COVID-19. Pindai. J. Imunol. 2021, 93, e12989. [Ref Silang] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Potensi terapi IL-15 dan N-803 pada infeksi HIV/SIV. Virus 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, disfungsi sel T EJ CD8 selama infeksi virus kronis. Saat ini. Pendapat. imunol. 2007, 19, 408–415. [Referensi Silang]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Petrus, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; dkk. Korelasi perlindungan terhadap SARS-CoV-2 pada kera rhesus. Alam 2021, 590, 630–634. [Referensi Silang]

62.Zhuang, Z.; Lai, X.; Matahari, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; dkk. Pemetaan dan peran respons sel T pada tikus yang terinfeksi SARS-CoV-2. J.Eks. medis. 2021, 218, e20202187. [Referensi Silang]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; dkk. Gangguan respon sel CD8+ T sitotoksik pada pasien COVID-19 lanjut usia. MBio 2020, 11, e02243-20. [Referensi Silang]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Ikan, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; dkk. Tanda kekebalan COVID-19 yang dinamis mencakup hubungan dengan prognosis yang buruk. Nat. medis. 2020, 26, 1623–1635. [Referensi Silang]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, SAYA; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Mathew, D.; Baxter, AE; Vella, LA; dkk. Pemetaan komprehensif mengenai gangguan kekebalan tubuh yang terkait dengan COVID parah-19. Sains. imunol. 2020, 5, eabd7114. [Referensi Silang]

66. Aktas, E.; Kukuksezer, UC; Bilgis, S.; Erten, G.; Deniz, G. Hubungan antara ekspresi CD107a dan aktivitas sitotoksik. Sel. imunol. 2009, 254, 149–154. [Referensi Silang]

67. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Sel pembunuh alami dalam kekebalan antivirus. Nat. Pendeta Imunol. 2022, 22, 112–123. [Ref Silang] [PubMed]

68. Disfungsi sel Bi, J. NK pada pasien COVID-19. Sel. mol. imunol. 2022, 19, 127–129. [Ref Silang] [PubMed]

69. Mengubah, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a sebagai penanda fungsional untuk identifikasi aktivitas sel pembunuh alami. J. Imunol. Metode 2004, 294, 15–22. [Ref Silang] [PubMed]

70. Gustin, JN; Jones, D. Imunopatologi Hiperinflamasi pada COVID-19. Saya. J.Klin. jalan. 2021, 191, 4–17. [Ref Silang] [PubMed]

71. Dia, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, saya.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; dkk. Koekspresi IL-7 meningkatkan terapi sel CAR T berbasis NKG2D pada kanker prostat dengan meningkatkan ekspansi dan menghambat apoptosis dan kelelahan. Kanker 2020, 12, 1969. [CrossRef]