Kajian Pemisahan Dan Imunokompetensi Ekstrak Air Polisakarida Dari Cistanche Tubulosa

untuk informasi lebih lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

1. Sekolah Farmasi, Universitas Kedokteran Xinjiang, Urumqi 830011, Tiongkok;2. Kolase Houbo, Universitas Kedokteran Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, Cina）

ABSTRAK TUJUAN:Untuk mengisolasi ekstrak air daripolisakarida dari Cistanche tubulosa, dan untuk menyelidiki imunokompetensi mereka secara in vitro. METODE: AB{{{{30}}}} resin adsorpsi makropori digunakan untuk menghilangkan warna polisakarida C. tubulosa. Proses dekolorisasi dioptimalkan dengan uji ortogonal dengan skor komprehensif tingkat retensi dan tingkat dekolorisasi polisakarida, dan menggunakan tingkat adsorpsi, waktu dekolorisasi, konsentrasi sampel sebagai faktor. Tes verifikasi dilakukan. DEAE-650Kolom penukar ion M digunakan untuk memisahkan ekstrak air polisakarida C. tubulosa yang tidak berwarna. Uji CCK-8 digunakan untuk mendeteksi efek berbagai konsentrasi polisakarida（6.25-100 ug/mL）sebelum dan sesudah isolasi pada tingkat proliferasi makrofag tikus RAW264.7. Metode Griess dan uji ELISA diadopsi untuk mendeteksi efek polisakarida konsentrasi rendah, sedang dan tinggi（12.5,25,50 ug/mL）pada pelepasan NO,IL-6 dan TNF- dalam sel RAW264.7 yang diinduksi LPS. HASIL: Pada proses dekolorisasi optimal resin adsorpsi makropori AB-8, laju alir adsorpsi 1,2 BV/jam, waktu dekolorisasi 9 jam, dan konsentrasi sampel 25 mg/mL. Nilai komprehensif dari 3 kali uji verifikasi masing-masing adalah 63,43％ ,63,29％ dan 63,34％ , dengan rata-rata 63,35％（RSD＝0.11％ ,n＝3）. Satu polisakarida netral CTZ） dan 5 polisakarida asam CT1,CT2,CT3,CT4,CT5） diisolasi dari polisakarida C. cistanche, isinya adalah 299.2.168.0,123.2.121.6,54,4, 11,2 mg/g. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, 6.25-100 ug/mL CTZ kecuali untuk 6,25 g/mL）,CT2,CT4,CT5 dan 6,25 g/mL CTC polisakarida sebelum pemisahan） secara signifikan dapat meningkatkan laju proliferasi sel RAW264.7（P＜{{80}}.05）, sedangkan 6.25-100 ug/mL CT1, CT3 dan 50 ug/mL CTC dapat menurunkan laju proliferasi RAW264. 7 sel P＜0,05）. Dibandingkan dengan kelompok LPS, pelepasan NO menurun secara signifikan pada kelompok konsentrasi rendah, sedang dan tinggi CTC,CT2,CT3 dan CT5,CTZ kelompok konsentrasi rendah（P＜0,05）, sedangkan meningkat secara signifikan pada kelompok konsentrasi tinggi CT1 dan CT4 P＜0,05）. Pelepasan IL-6 kecuali kelompok konsentrasi tinggi CT1 dan kelompok konsentrasi rendah CT5） dan TNF- kecuali kelompok konsentrasi sedang CT1） menurun secara signifikan pada kelompok konsentrasi rendah, sedang dan tinggi（P＜0,05 . KESIMPULAN: Teknologi penghilangan warna yang dioptimalkan dari resin adsorpsi makropori stabil dan layak dalam penelitian ini. Satu polisakarida netral dan 5 polisakarida asam dapat diisolasi dari ekstrak air polisakarida C. tubulosa, di antaranya polisakarida CT2 memiliki kemampuan antiinflamasi yang lebih kuat.

KATA KUNCI:polisakarida Cistanche tubulosa; Dekolorisasi; Pemisahan; Imunokompetensi

Cistanche tubulosaadalah batang yang kering dan berdaging dengan daun bersisikCistanche tubulosa (Schenk) Beratdari keluarga Lidanaceae. Studi modern telah menunjukkan bahwa Cistanche Tubula mengandung glikosida phenethyl alkohol, glikosida iridoid, lignan, polisakarida, alkaloid, dan zat aktif biologis lainnya, yang memiliki sifat afrodisiak, pencahar, pelindung hati dan anti-penuaan. , Anti-kelelahan meningkatkan kekebalan, dan efek nootropik [1-4], dapat digunakan untuk pengobatan klinis defisiensi Yang ginjal, defisiensi esensi dan darah, impotensi dan infertilitas, kelemahan pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering, dan sembelit [5].

Klik untuk produk herbal Cistanche

Ekstrak air dariPolisakarida Cistanche tubulosaberwarna kuning kecoklatan. Eksperimen sebelumnya dari kelompok penelitian kami menemukan bahwa selainCistanche tubulosa polisakarida, ekstrak air juga mengandung komponen non-target seperti pigmen dan protein yang larut dalam air. Ini berkontribusi pada pemisahan dan pemurnian polisakarida. Penelitian aktivitas biologis telah menyebabkan kesulitan besar. Perlakuan penghilangan warna pelarut organik tradisional akan menghancurkan struktur kimia komponen target dalam ekstrak kasar, dan mengurangi aktivitas farmakologis orang tersebut, dan masuknya bahan berbahaya ke tubuh manusia [6]. Resin adsorpsi makropori adalah bahan umum untuk dekolorisasi polisakarida dalam ekstrak obat Cina. Ini adalah bahan adsorpsi polimer yang hemat biaya dengan sifat fisik dan kimia yang stabil. Ini dapat ditargetkan oleh adsorpsi selektif dan kinerja penyaringan untuk komponen pigmen. Untuk menghilangkan pigmen dalam ekstrak obat tradisional Cina, selain itu dapat diregenerasi dengan pengawetan dan pencucian alkali, sehingga banyak digunakan [7]. Penelitian ini bertujuan untuk menggunakan resin adsorpsi berpori makro untuk menghilangkan warna ekstrak air polisakarida Cistanche Tubula, dan menggunakan eksperimen ortogonal untuk mengoptimalkan kondisi dekolorisasi; setelah dekolorisasi ekstrak, sesuai dengan sifat yang berbeda dari kelompok yang dibawa oleh polisakarida, direncanakan untuk menggunakan Metode kromatografi kolom penukar ion selanjutnya memisahkan komponen polisakarida netral dan asam dalam polisakarida dariCistanche tubulosa.

Studi telah menunjukkan bahwatanaman cistanchepolisakarida memiliki efek imunomodulator dan merupakan imunomodulator alami yang dapat mengaktifkan sistem komplemen dan sel imun seperti limfosit T/B, makrofag, sel natural killer (NK), dan juga dapat mendorong berbagai pelepasan sitokin, dan meningkatkan produksi antibodi , dll. [8-11]. Lipopolisakarida (LPS) dapat mengaktifkan jalur sinyal inflamasi makrofag, menginduksi nitric oxide (NO), dan sitokin pro-inflamasi seperti interleukin 6 (IL-6) dan tumor necrosis factor-alpha (TNF- ). Sintesis dan pelepasan, sehingga memicu serangkaian reaksi inflamasi dalam tubuh [12]. Penelitian ini bertujuan untuk membuat model inflamasi makrofag RAW264.7 tikus yang diinduksi LPS, mulai dari efek polisakarida Cistanche Tubula terhadap proliferasi makrofag, sekresi faktor inflamasi, dan produksi NO, serta evaluasi awal pengaruhnya terhadap aktivitas imun tubuh. Ini bertujuan untuk memberikan dasar teoretis untuk studi mendalam tentang dasar zat aktif anti-inflamasiCistanche tubulosapolisakarida dan pengembangan sumber polisakaridanya.

Studi pendahuluan telah menemukan bahwa ketika polisakarida di Cistanche cistanche diekstraksi dengan air, lebih banyak zat yang larut dalam air akan larut bersama, yang mempengaruhi kemurniancistanche polisakarida cistanche. Oleh karena itu, pemisahan dan pemurnian lebih lanjut dari mereka dapat meletakkan dasar untuk studi dasar bahan polisakarida dan aktivitas biologis. Metode resin adsorpsi makropori adalah metode penghilangan warna yang umum digunakan [17-19]. Karena komposisi pigmennya masih belum jelasCistanche tubulosa, sehingga kelompok penelitian menggunakan eksperimen adsorpsi statis untuk menyaring resin adsorpsi makropori AB-8 yang paling cocok dari resin adsorpsi makropori dengan polaritas yang berbeda. Polisakarida dari Cistanche deserticola memiliki kemampuan retensi yang baik. Untuk mencapai efek dekolorisasi yang lebih baik, penelitian ini didasarkan pada penelitian sebelumnya dan menggunakan eksperimen ortogonal untuk menentukan proses dekolorisasi (pencucian Laju alir desorpsi, waktu dekolorisasi, dan konsentrasi massa sampel) telah dioptimalkan. Hasilnya, metode penghilangan warna yang optimal untuk polisakarida Cistanche tubulosa adalah laju alir elusi 1,2 BV/jam, waktu penghilangan warna 9 jam, dan konsentrasi massa sampel 25 mg/mL. Hasil percobaan verifikasi menunjukkan bahwa metode dekolorisasi layak dilakukan.

Kemurnian dan jenis polisakarida alami merupakan faktor penting yang mempengaruhi aktivitasnya. Oleh karena itu, penelitian yang relevan tentang metode isolasi dan pemurnian polisakarida masih menjadi fokus pekerjaan penelitian polisakarida aktif alami. Metode yang umum digunakan untuk pemisahan polisakarida meliputi pengendapan, kromatografi gel, kromatografi pertukaran anion, kromatografi kolom resin berpori, dan ultrafiltrasi [20]. Karena komposisi monosakarida yang berbeda, polisakarida memiliki sifat muatan yang berbeda. Mereka dapat dibagi menjadi polisakarida netral dan polisakarida asam. Polisakarida netral adalah polimer yang terdiri dari dua atau lebih monomer berbasis gula yang berbeda yang tidak mengandung asam organik. Polisakarida asam lebih kompleks daripada polisakarida netral dalam hal komposisi dan struktur, kecuali mengandung lebih dari dua monomer berbasis gula. , Juga mengandung asam uronic mono Body [21]. Kromatografi kolom penukar anion menggunakan perbedaan muatan polisakarida untuk memisahkan polisakarida netral dari polisakarida asam [22]. Untuk alasan ini, penelitian ini menggunakan kolom kromatografi kolom penukar ion DEAE-650M untuk memisahkan polisakarida Cistanche Tubula, dan total 1 polisakarida netral dan 5 polisakarida asam dipisahkan. Makrofag adalah sel imunokompeten yang dapat mengatur kekebalan dengan menelan dan membunuh mikroorganisme patogen. Penelitian telah menunjukkan bahwa ketika tubuh manusia dirangsang oleh kerusakan patologis atau mekanis, intervensi obat dapat mengaktifkan makrofag untuk meningkatkan kapasitas fagositosis makrofag yang diinduksi oleh LPS, sehingga menghambat produksi NO dan serangkaian sel inflamasi seperti IL{{ 9}} dan sekresi TNF- Factor, sehingga melindungi inang dari patogen [23]. Untuk tujuan ini, penelitian ini menguji efek berbagai polisakarida Cistanche tubulosa pada tingkat proliferasi sel RAW264.7, serta efek pada makrofag yang diinduksi LPS untuk melepaskan NO, IL-6, dan TNF- . Akibatnya, dalam kisaran konsentrasi massa 12,5, 25, dan 50 ug/mL, tidak hanya mendorong proliferasi sel RAW264.7 tetapi juga secara signifikan menghambat proliferasi sel RAW264.7.

Itupolisakarida dari Cistanche tubulosadalam sel RAW264.7 yang diinduksi oleh LPS untuk melepaskan NO, IL-6 dan TNF- adalah CT2. Studi yang relevan telah menunjukkan bahwa komposisi monosakarida dan berat molekul polisakarida akan mempengaruhinyaimunomodulatoraktivitas. Monosakarida seperti galaktosa, arabinosa, manosa, dan glukosa berkorelasi positif dengan aktivitas imun polisakarida [24]. Polisakarida dengan berat molekul yang lebih besar mungkin mengandung struktur simpul yang sangat berulang yang lebih tinggi, dapat menghubungkan reseptor permukaan membran plasma secara multi-arah, dan secara khususmeningkatkan imunomodulatorefek [25]. Oleh karena itu, komposisi monosakarida dari polisakarida asam CT2 dalam penelitian ini mungkin mengandung monosakarida khusus atau beberapa monosakarida yang berhubungan positif dengan aktivitas imun, dan berat molekulnya mungkin lebih besar dari polisakarida netral dan polisakarida asam lainnya, namun penelitian lebih lanjut diperlukan untuk memastikannya. . Singkatnya, proses dekolorisasi resin adsorpsi makropori yang dioptimalkan dalam penelitian ini stabil dan layak; 1 polisakarida netral dan 5 polisakarida asam dapat dipisahkan dari ekstrak air Cistanche cistanche cistanche, di antaranya aktivitas imunologis polisakarida asam CT2 Lebih Kuat. Studi ini dapat meletakkan dasar eksperimental untuk pengembangan dan pemanfaatan polisakarida Cistanche Tubula.