Leukemia Granulositik Spontan pada Tikus NOD/Shi-scid IL-2R null

Abstrak:Di sini, kami melaporkan kasus leukemia granulositik spontan pada NOD/Shi- jantan berusia 51-mingguscidIL-2R nol (NOG) tikus. Tikus itu menunjukkananemia progresifDangerakan pernafasan yang kasar. Secara makroskopis, limpa mengalami perubahan warna dan membesar. Secara histologis, sumsum tulangtulang dadadan tulang paha sangat seluler dan hampir seluruhnya terisisel neoplastik. Inti sel neoplastik berukuran besar, lonjong hingga agak tidak beraturan, dan memiliki jumlah sel yang sedikitginjal- atau inti berbentuk cincin.Sel neoplastiksecara luas menyusup ke organ-organ, dan limpa serta hati terlibat secara nyata. Secara imunohistokimia, sejumlah besar sel neoplastik di pulpa merah limpa dan sinusoid hati positif terhadapmyeloperoksidase. Berdasarkan gambaran histologis, kasus ini didiagnosisleukemia granulositik. Informasi baru ini tentangtumor spontanmungkin berguna untuk penggunaan yang tepat dari strain tikus ini dalam penelitian lebih lanjut. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Kata kunci: leukemia granulositik, tikus NOG, tumor spontan

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK ALAMI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI GINJAL

Layanan Pendukung Wecistanche-Ekspor cistanche terbesar di Cina:

Surel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Telp:+86 15292862950

Belanja Untuk Detail Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Leukemia granulositik spontanjarang dilaporkan pada beberapa galur tikus, meskipun bahan kimia dan radiasi pengion dapat meningkatkan kejadian pada beberapa galur tikus1, 2. Tikus NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) sangat parahhewan yang mengalami defisiensi imun, dan menimbulkan kerusakan pada sel T-, B-, dan pembunuh alami, serta makrofag dan sel dendritik yang tidak berfungsi dengan baik karena tersingkirnya rantai reseptor IL-2 (IL2R c) ke dalam strain NOD-scid3. Strain tikus ini digunakan untuk uji non-klinis, seperti uji tumorigenisitas, untuk menilai kualitas dan keamanan produk biologis untuk pengobatan regeneratif menggunakan sel/jaringan yang berasal dari manusia, karena pengikatan sel xenogen yang jauh lebih baik4–6. Meskipun keadaan imunodefisiensi dan implikasinya terhadap xenografts telah dipelajari dengan baik, hanya sedikit informasi yang tersedia mengenai tumor spontan yang terjadi pada strain tikus ini, seperti limfoma timus,payudarakelenjar adenoma/adenokarsinoma, karsinoma bronkioalveolar, rhabdomyosarcoma, dan teratoma7. Di sini, kami melaporkan kasus leukemia granulositik pada tikus NOG jantan berumur 51-minggu.

Hewan tersebut diperoleh dari In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Jepang) pada umur 6 minggu dan tidak diberi perawatan. Hewan tersebut ditempatkan secara individual di dalam kandang plastik dengan sistem kandang berventilasi individual (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokyo, Jepang) di dalam ruangan dengan sistem penghalang yang dikontrol lingkungan, yang dijaga pada suhu 22 ± 2 derajat dengan kelembapan 50 ± 20% dan siklus terang/gelap 12-jam. Tikus diberi makanan pelet yang diautoklaf (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokyo, Jepang) dengan air keran dan libitum yang diautoklaf. Hewan tersebut ditangani sesuai dengan protokol yang disetujui oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional CMIC Pharma Science Co., Ltd., yang diakreditasi oleh AAALAC International.

Tikus ini menunjukkan tanda-tanda klinis melemah, seperti anemia, pernafasan kasar, dan penurunan berat badan antara usia 49 dan 51 minggu. Hewan itu di-eutanasia pada usia 51 minggu. Pada nekropsi, limpa berubah warna dan membesar. Tidak ada temuan kasar abnormal yang terlihat pada organ lain. Timus dan kelenjar getah bening mengalami atrofi, mirip dengan tikus NOG normal.

Semua sampel organ dan jaringan dikumpulkan secara rutin, difiksasi dalam formalin buffer netral 10%, ditanam dalam parafin, dan dipotong sekitar 3 μm. Untuk pemeriksaan patologis, bagian tersebut diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (HE). Bagian limpa dan hati diwarnai secara imunohistokimia untuk antibodi poliklonal anti-manusia myeloperoxidase (MPO) kelinci (Dako Jepang, Tokyo, Jepang) sebagai penanda sel myeloid, antibodi monoklonal CD3 anti-manusia kelinci (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Jepang ) sebagai penanda sel T, dan antibodi monoklonal Pax-5 anti-manusia kelinci (Abcam Inc., Cambridge, UK) sebagai penanda sel B8. Bagian diinkubasi dengan antibodi pada suhu kamar selama 1 jam, dan deteksi imun dilakukan menggunakan Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) dengan 3,3′-diaminobenzidine/H2O2 sebagai kromogen. Bagian yang diimunisasi kemudiandiimbangi dengan hematoksilin.

Secara histopatologis, sumsum tulang dada dan tulang paha sangat seluler dan hampir seluruhnya diisi dengan sel-sel neoplastik (Gambar 1A). Jaringan lemak telah tergeser seluruhnya. Kadang-kadang terdapat fokus seluler yang terdiri dari elemen eritroid dan megakaryocytic di sumsum, yang dianggap sebagai sisa-sisahematopoiesis normal. Kebanyakan sel neoplastik menunjukkan gambaran blastik, ditandai dengan inti yang besar, berbentuk oval hingga agak tidak beraturan, dan dengan kromatin retikuler yang mengandung satu atau lebih nukleolus yang menonjol. Terdapat sejumlah kecil sel dengan inti berbentuk ginjal atau cincin dan beberapa sel dengan inti lobus juga terdapat (Gambar 1B). Butiran dalam sitoplasma sel neoplastik tidak terlihat jelas pada bagian yang diwarnai dengan HE. Banyak gambaran mitosis ditemukan di sumsum, dan kadang-kadang badan apoptosis juga diamati. Sel-sel neoplastik secara nyata menginvasi periosteum dan otot rangka di sekitarnya. Terdapat infiltrasi ekstensif sel-sel neoplastik ke dalam organ dan jaringan lain, dan limpa serta hati sangat terlibat. Di limpa, sel-sel neoplastik diamati di seluruh pulpa merah (Gbr. 2). Infiltrasi kapsuler sel-sel neoplastik terlihat jelas. Beberapa seri eritroid dan megakariosit yang berkembang diamati. Megakariosit yang mengandung satu atau beberapa sel myeloid di sitoplasma, menunjukkan emperipolesis, kadang-kadang diamati. Di hati, sel-sel neoplastik menginfiltrasi kapsul Glisson dan sinusoid hepatik secara difus (Gbr. 3). Sel-sel neoplastik dengan inti berbentuk ginjal atau cincin juga terlihat jelas di beberapa pembuluh darah. Beberapa hepatosit di daerah periportal, dengan infiltrasi sel neoplastik yang menonjol, menunjukkan degenerasi atau nekrosis, sedangkan struktur normal lobulus hati tetap utuh. Infiltrasi sel neoplastik juga ditemukan pada organ lain, antara lain pada dinding alveolar dan daerah perivaskular paru, antar stadium pada ginjal, sinusoid pada kelenjar adrenal, serta mukosa dan submukosa pada saluran lambung (lambung dan usus). Secara imunohistokimia, sejumlah besar sel neoplastik di pulpa merah limpa (Gambar 4) dan sinusoid hati positif mengandung MPO. Sel positif CD3 dan Pax-5 tidak terdeteksi. Hasil imunostaining CD3 dan Pax-5 serupa dengan limpa tikus NOG normal, yang secara histologis hipoplastik dan tidak menunjukkan sel CD3 atau Pax-5 positif.

Investigasi imunohistokimia mengungkapkan bahwa sel-sel neoplastik berasal dari garis keturunan sel myeloid. Di beberapa area yang terlibat, terutama limpa dan hati, sejumlah kecil sel memiliki bentuk ginjal, cincin, atau lobus yang menunjukkan diferensiasi rangkaian myeloid. Temuan ini menunjukkan bahwa sel-sel neoplastik berasal dari granulosit yang belum matang. Kasus myelopoiesis yang parah dapat dibuktikan dengan adanya semua jenis rangkaian myeloid yang sedang berkembang, berbeda dengan dominasi sel-sel yang belum matang pada leukemia. Selain itu, anemia progresif merupakan tanda klinis umum dari leukemia granulositik, dan peningkatan sel eritroid dan megakariositik sangat sedikit1. Populasi kecil granulosit dengan inti lobus di daerah yang terkena tanpa peradangan yang jelas menunjukkan bahwa temuan pada kasus ini adalah neoplastik dan bukan mielopoiesis reaktif.

Pada leukemia granulositik, sumsum tulang dapat digantikan oleh sel myeloid yang belum matang dan matang. Dalam laporan sebelumnya mengenai strain tikus lain, sel-sel neoplastik ini telah sepenuhnya menyusup ke hati, limpa, kelenjar getah bening, dll.2, dan sel-sel di limpa dan hati ini sebagian besar terletak di pulpa merah dan di sekitar kapsul Glisson1. Dengan demikian, distribusi sel leukemia pada kasus ini identik dengan kasus sebelumnya. Berdasarkan morfologi selnya, leukemia granulositik pada tikus diklasifikasikan menjadi dua jenis: tipe juvenile, yang sebanding dengan leukemia myelogenous akut pada manusia, dan tipe dewasa dengan leukemia myelogenous kronis pada manusia1. Dalam kasus remaja, sel-sel neoplastik di sumsum tulang, limpa, dan hati didominasi oleh sel-sel yang berdiferensiasi buruk, sedangkan elemen myeloid yang mewakili berbagai tingkat maturasi dapat terlihat dan persentase myeloblast rendah pada beberapa kasus dewasa2,9. Dalam kasus ini, sel-sel leukemia didominasi oleh bentuk yang belum matang dengan inti yang besar, lonjong hingga agak tidak beraturan. Selain itu, mengingat temuan klinis bahwa penurunan kesehatan secara umum, termasuk anemia progresif dan pernafasan kasar, berkembang secara akut; oleh karena itu, kasus ini diasumsikan berjenis remaja.

Gambar 1. Gambar histologis sumsum tulang femur. J: Sel-sel neoplastik berproliferasi secara difus, sehingga menggantikan sumsum tulang. B: Inti berukuran besar, lonjong hingga bentuknya agak tidak beraturan. Sejumlah kecil sel mempunyai inti berbentuk ginjal (mata panah kuning), cincin (mata panah hijau), atau lobus (mata panah putih). Gambar mitosis ditandai dengan panah putih. DIA noda. Bilah hitam=50 μm (A), 10 μm (B).

Dalam publikasi sebelumnya tentang tikus NOG, lesi neoplastik umumnya jarang terjadi; namun, limfoma timus telah dilaporkan sebesar 0,82% pada kelompok usia antara 16 hingga 40 minggu7, 10. Sejauh pengetahuan kami, leukemia granulositik spontan belum pernah dilaporkan sebelumnya pada tikus NOG. Pada beberapa strain tikus, termasuk B6C3F1 dan BALB/c, leukemia granulositik jarang terjadi2, 11, dan belum pernah dilaporkan pada kasus tikus tersebut yang berumur 12 bulan atau lebih muda. Kasus ini berkembang menjadi leukemia granulositik pada usia 51 minggu, yang merupakan usia yang relatif muda. Informasi baru tentang tumor spontan ini mungkin berguna untuk penggunaan yang tepat dari strain tikus ini dalam penelitian lebih lanjut.